蝎毒素IV对血管内皮细胞介导纤溶作用的影响

目的　研究蝎毒素IV纤溶作用的内皮细胞介导机制。方法　培养的人脐静脉血管内皮细胞分别与剂量为 0 ,1,2 ,4 ,8mg/L的蝎毒素IV孵育后 ,测定蝎毒素IV对内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)、组织型纤溶酶原激活剂抑制物(PAI 1)的影响。结果　蝎毒素IV在低剂量能降低t PA和PAI 1活性 ,但t PA/PAI 1比值较对照组相比明显升高。结论　蝎毒素IV能够通过影响内皮细胞功能 ,发挥纤溶作用 ,提示其为纤溶促进剂。     

蝎毒素IV对血管内皮细胞介导纤溶作用的影响

目的　研究蝎毒素IV纤溶作用的内皮细胞介导机制。方法　培养的人脐静脉血管内皮细胞分别与剂量为0 ,1,2 ,4 ,8mg/L的蝎毒素IV孵育后,测定蝎毒素IV对内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、组织型纤溶酶原激活剂抑制物(PAI 1)的影响。结果　蝎毒素IV在低剂量能降低t-PA和PAI-1活性,但t-PA/PAI-1比值较对照组相比明显升高。结论　蝎毒素IV能够通过影响内皮细胞功能,发挥纤溶作用,提示其为纤溶促进剂。     

重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体对家兔纤溶和凝血系统活性的影响

目的 :观察重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体 (reteplase ,Ret)对家兔纤溶和凝血系统活性的影响。方法 :采用常规方法测定家兔血液纤溶和凝血系统相关参数指标。结果 :Ret(3.75、7.5 0、15 .0MIU·kg-1)可明显降低纤溶酶原含量 ,使血浆纤维蛋白降解产物转呈阳性反应 ,缩短优球蛋白溶解时间 ,同时延长血浆凝血酶时间 ,凝血酶原时间及活化部分凝血活酶时间。结论 :Ret可促进血液纤溶系统活性和抑制凝血系统活性     

南山楂对牛主动脉内皮细胞纤溶系统的影响

目的 观察南山楂水煎提取液喂饲高脂大鼠后的血清对牛内皮细胞纤溶系统的作用。方法 以牛主动脉内皮细胞为研究对象，测定纤溶酶原激活物(t-PA)的含量与活性，纤溶酶原激活枷的抑制物(PAI)的活性及胆固醇含量，结果 南山碴对内皮细胞有保护作用，能抑制纤溶酶原激活物抑制物(PAI)的活性，高脂组为：12．563±0.637IU／ml，高脂 南山楂(小)组为：10．397±0．341IU／ml(P<0.01)；促进纤溶酶原激活物(t-PA)的分泌，增加其活性，高脂组为：1.032±0．412IU／ml，高脂 南山楂(小)组为：1．461±0．117IU／ml(P<0．05)，高脂 南山楂(大)组为1．539±0．304IU／ml(P<0.05)；还能降低内皮细胞的胆固醇含量。结论 南山楂促进纤溶系统活性的作用在动脉粥样硬化的防治中发挥重要作用。     

肺血栓栓塞后组织型纤溶酶原激活物及其抑制物-1在肺动脉中的表达

目的通过研究兔实验性肺血栓栓塞（PTE）后组织型纤溶酶原激活物（t—PA）及其抑制物1（PAI-1）在肺动脉中表达的动态变化,了解急性肺栓塞后机体纤溶能力的变化。方法将48只日本健康大耳白兔,随机分为栓塞组和对照组。栓塞组利用自体血栓经股静脉输入建立PTE模型,对照组输入生理盐水。用免疫组织化学及Western blot方法检测对照组及栓塞后即刻、4、8、24h栓塞部位肺动脉组织中t—PA及PAI-1蛋白表达水平。结果tPA在栓塞后即刻和4h未见明显表达,8h和24h表达明显增强;半定量蛋白结果显示t—PA在栓塞后4h表达开始增高。8h进一步增强,24h达高峰。与各对照组比较,有显著性差异（P〈0．05）。PAI-1在栓塞后即刻及24h均见明显表达,而在栓塞后4h和8h表达明显减少;半定量蛋白结果显示PAI-1在栓塞后4h开始降低,8h降至低峰,与各对照组比较,有显著性差异（P（0．05）。PAI-1在栓塞后24h表达有所恢复。结论兔急性肺栓塞后．t-PA表达水平随时间而逐渐增高,PAI-1表达呈现-过性降低。表明了在肺动脉栓塞早期,机体的纤溶功能明显增强,这与肺血管的tPA和PAI-1表达平衡变化有关。     

组织型纤溶酶原激活物重组腺病毒载体的构建及其转染ECV304细胞后对血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的 评估外源性组织型纤溶酶原激活物(t-PA)对ECV304细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用细菌内同源重组技术快速构建Adt-PA腺病毒重组质粒,转染不同病毒滴度Adt-PA至ECV304细胞,转染比率(MOI)分别为1∶10、1∶50、1∶100,选取合适MOI值;病毒转染后检测ECV304细胞内t-PA蛋白的表达.然后将培养的ECV304细胞分为二组,在培养液中加入Adt-PA混合培养24 h和48 h分别作为实验组1和实验组2,加入空病毒Ad混合培养48 h作为对照组,比较各组细胞中VEGF mRNA的转录和蛋白表达水平.结果 成功构建了重组腺病毒Adt-PA.当MOI为1∶50时,细胞转染效率为(69.6±21.2)%,且对ECV304细胞增殖具有一定的促进作用;Adt-PA转染ECV304细胞后在72 h内随着时间的延长其蛋白表达量逐渐升高(P<0.01);细胞内VEGFmRNA的转录水平和蛋白表达量在实验组1和2中较对照组均有明显升高(P<0.01).结论 构建的t-PA腺病毒表达载体可有效感染ECV304细胞并可显著增加其VEGF的表达水平.     

血管紧张素Ⅱ对培养人脐静脉内皮细胞PAI-1 tPA蛋白表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)、组织型纤溶酶原激活剂(tPA)蛋白的释放及活性的影响。方法将不同浓度的AngⅡ(1×10-9~1×10-6mmol/L)与HUVECs共同孵育24h,以及将1×10-6mol/LAngⅡ与HUVECs作用不同时间(0、4、8、12、24h)后,用细胞酶联免疫法和发色底物法分别检测细胞培养液中PAI-1、tPA的含量及活性。结果1×10-6mol/LAngⅡ作用HUVECs24h后,可使细胞分泌的PAI-1含量与对照组相比明显增高[(280±16)ng/mlvs(83±11)ng/ml,P<0.01],PAI-1活性明显增高[(10.35±1.47)U/mlvs(5.65±0.44)U/ml,P<0.01],AngⅡ虽也可刺激tPA含量增加[(102±4)ng/mlvs(70±6)ng/ml,P<0.01],但PAI-1的增量是tPA增量的6~7倍[Δ(197±21)ng/mlvsΔ(31±6)ng/ml,P<0.01],AngⅡ对tPA活性无影响[(0.97±0.05)U/mlvs(0.95±0.08)U/ml,P>0.05];1×10-9~1×10-6mol/L不同浓度的AngⅡ分别作用HUVECs24h,PAI-1含量增加、活性增加与AngⅡ呈浓度依赖性相关;1×10-6mol/LAngⅡ与HUVECs分别作用4~24h,PAI-1含量及活性增加与AngⅡ作用于HUVECs的时间呈正相关。结论AngⅡ可促使HUVECs分泌PAI-1,并使其活性增加,AngⅡ虽亦可刺激tPA分泌,但作用弱于PAI-1,且对其活性无明显影响。     

转tPA基因血管内皮细胞的功能表达

目的 观察组织型纤溶酶原激活剂（tPA）基因转导血管内皮细胞后的功能表达。方法 利用携带tPA基因的假型逆转录病毒转导血管内皮细胞株ECV304,用G418筛选法观察基因是否成功转导,采用发色底物显色法检测转基因ECV304细胞培养上清液中tPA纤溶活性变化。结果 转tPA基因后的血管内皮细胞经G418筛选后2周左右见大量克隆形成;转tPA基因ECV304细胞培养上清液中tPA纤溶活性在转导24h后增高,48h后增高更明显,72-96h浓度达高峰。结论 假型逆转录病毒载体成功介导tPA基因转导血管内皮细胞,并呈有效功能表达,为心血管手术后预防血栓形成的基因治疗提供实验依据。     

卡托普利对原发性高血压患者纤溶功能的影响

目的：观察血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）类药物对原发性高血压患者纤溶功能的影响.方法：对31例高血压患者应用ACEI类药物卡托普利治疗前后情况进行比较,检测收缩压（SBP）、舒张压（DBP）,观察超声心动图.检测血肾素（PRA）、血管紧张素Ⅱ（ATⅡ）、醛固酮（ALD）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）、内皮细胞型纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）活性和含量.结果：治疗后SBP、DBP较治疗前均下降,差异有统计学意义（均P＜0.01）,左室射血分数、ALD及PRA治疗前后比较差异无统计学意义（均P＞0.05）,治疗后ATⅡ下降,PAI-1含量降低,tPA/PAI-1（活性）比值升高,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.PAI活性与ATⅡ正相关（r=0.576,P＜0.01）,与ALD、DBP正相关（r=0.451,r=0.430,均P＜0.05）.tPA与各项指标均无关.结论：ACEI对纤溶功能的影响是有利的,能改善高血压患者存在的内源性纤溶功能紊乱.     

南山楂对牛主动脉内皮细胞纤溶系统的影响

目的 观察南山楂水煎提取液喂饲高脂大鼠后的血清对牛肉皮细胞纤溶系统的作用.方法 以牛主动脉内皮细胞为研究对象,测定纤溶酶原激活物(t-PA)的含量与活性,纤溶酶原激活物的抑制物(PAI)的活性及胆固醇含量,结果 南山楂对内皮细胞有保护作用,能抑制纤溶酶原激活物抑制物(PAI)的活性,高脂组为:12.563±0.637IU/ml,高脂 南山楂(小)组为:10.397±0.341IU/ml(P<0.01);促进纤溶酶原激活物(t-PA)的分泌,增加其活性,高脂组为:1.032±0.412IU/ml,高脂 南山楂(小)组为:1461±0.117IU/ml(P<0.05),高脂 南山楂(大)组为l.539±0.304IU/ml(P<0.05);还能降低内皮细胞的胆固醇含量.结论 南山楂促进纤溶系统活性的作用在动脉粥样硬化的防治中发挥重要作用.     

不同处理方法对血浆组织型纤溶酶原激活剂活性的影响

目的比较不同处理方法对血浆组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活性的影响。方法检测3种不同的滤纸条(Whatman#1、Periopaper、国产滤纸)对血浆中t-PA酶活性的洗脱率,及观察收集血浆样本的Periopaper滤纸条在两种不同处理方法 (洗脱、非洗脱)、不同温度(-20℃、-80℃)、不同时间(1、2、4、12周)t-PA酶活性的保持情况。结果 3种滤纸条中,Periopaper对t-PA活性的洗脱率最高,Whatman#1次之,国产滤纸最差;在未洗脱状态下,-20℃和-80℃保存12周,t-PA活性几乎不受影响,而洗脱状态对t-PA活性影响较大。结论 Perio paper是理想的收集t-PA活性的滤纸条,未经洗脱并在-80℃状态下保存时t-PA活性能稳定保持3个月。     

化学修饰对组织型纤溶酶原激活剂的纤溶活性和体内半衰期的影响

用肝素、右旋糖酐和聚乙二醇对重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)进行化学修饰。不同的化学修饰物对rt-PA体外纤维蛋白溶解活性的影响不同。肝素修饰小PA的纤维蛋白溶解活性提高63％;右旋糖酐和聚乙二醇修饰rt-PA的纤维蛋白溶解活性则分别降低了36％和63％。rt-PA经化学修饰后半衰期均有所延长,其中聚乙二醇修饰的小PA的半衰期由修饰前的3．4min延长至6．3mim。     

脑血栓患者组织型纤溶酶激活物及纤溶酶原激活物抑制物活性研究

目的观察脑血栓患者急性期、恢复期组织型纤溶酶原激活物及其快速抑制物的变化规律.方法用发色底物法对73例脑血栓患者血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其快速抑制物(PAI-1)进行测查,并与43例健康对照组进行比较.结果急性期、恢复期脑血栓患者t-PA低于对照组,而PAI-1高于对照组.结论急性期脑血栓患者血浆纤溶活性明显下降,说明血浆t-PA及PAI-1参与了血栓形成的病理过程,恢复期血浆纤溶活性处于低水平,这种状态可能病前已经存在.     

脑血栓形成患者血浆纤溶活性指标的动态观察

为了解脑血栓形成患者血浆纤溶系统活性变化,对71例脑血栓形成患者急性期(发病第3天)、亚急性期(第15天)及恢复期(第30天)的血浆组织型纤溶酶原激活物(t-pA)、组织型纤溶酶原激活物抑制物(PAI)的活性水平进行动态观察,并与正常对照组比较。结果表明,脑血栓形成患者与对照组相比,急性期t-pA和PAI活性水平差异无显著意义(P&gt;0.05);亚急性期t-pA明显升高,PAI明显降低;恢复期t-pA明显降低,PAI明显升高(P&lt;0.01)。结论:测定恢复期血浆t-pA及PAI水平,有助于对血栓前状态的了解,并对预测脑血栓形成的复发有一定的意义。     

慢性肾功能不全病人纤溶活性、内皮素及D-二聚体的临床观察

为探讨慢性肾功能不全病人心血管病发生危险性增加的原因，根据血压的高低将43例分为轻度高血压组22例(舒张压＜100mmHg)和中度高血压组21例(舒张压≥100mmHg)，分别检测血纤溶酶原活性抑制物(PAI)、组织型纤溶酶原激活剂(t—PA)、D-二聚体(DDi)及内皮素(ET)的水平。结果表明，与正常对照组比较，轻度和中度高血压组t—PA明显下降(P均＜0．05)；PAI、DDi及ET水平显升高(轻度组P均＜0．05，中度组P均＜0．01)。中度组与轻度组比较，PAI、DDi和ET水平显升高(PAI、DDiP均＜0．05，ETP＜0．01)；t—PA水平略降低(P＞0．05)。43例慢性肾衰病人平均动脉压与ET之间呈正相关(P＜0．01)；与PAI及DDi之间呈正相关(P均＜0．05)。结论：慢性肾衰肾实质性高血压与血管收缩、血液高凝状态和纤溶活性降低有关，推测慢性肾衰血管内皮损伤致血液高凝状态和纤溶活性降低可能增加心血管疾病发生的危险性。     

重组人组织型纤溶酶原激活剂及其突变体的溶血栓研究

目的 比较重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)及其突变体FsGGI和FrGGI的溶血栓作用,验证突变体的构建思想。方法 采用兔颈静脉溶栓模型和体外溶栓试验对纯化的rht-PA及其突变体FsGGI和FrGGI进行家兔体内外溶栓研究。结果 rht-PA、FsGGI及FrGGI三者均有体内外溶栓作用,体外溶栓能力基本相似;体内溶栓活力突变体FsGGI与FrGGI类似,均显著高于rht-PA,溶栓度分别为20.1％、49.1％和46.6％。在体内溶栓作用的同时均未引起血浆纤维蛋白原滴度下降。结论 溶栓作用是血栓特异性的,两种突变体是优于野生型t-PA的溶栓剂,上游的构建思想是正确的。     

养阴与益气活血方药对培养人脐静脉内皮细胞抗凝和纤溶等功能影响的对比研究

目的：研究养阴，益气活血方药及其组合抗凝，纤溶及抗自由基损伤的作用。方法：采用血清药理学方法研究养阴，益气活血方药及其组合对培养人脐静脉内皮细胞抗凝，纤溶及抗自由基损伤的作用，并对其作用进行对比分析。结果：养阴方具有显著提高前列环素（6-keto-PGF1α）含量；提高组织型纤溶酶原激活物（t-PA)活性，抑制组织型纤溶酶原激活抑制物（PAI）活性；提高超氧化物歧化酶（SOD）活力，降低丙二醛（MDA）含量。降低内皮素（ET）含量。提高一氧化氮（NO）含量等作用。结论：养阴方药与益气活血方药相伍在抗栓，溶栓，抗自由基损伤等方面具有协同作用。认为养阴生津是治疗血瘀证的重要法则。     

产组织型纤溶酶原激活剂CHO工程细胞无血清培基的研究

在对ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１：１）进行优化的基础上,以细胞生长和组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）表达为评价指标,筛选无血清培养基添加成分,建立了由优化ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１：１）,胰岛素,ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ－６８维生素Ｃ,乙醇胺和微量元素混合液组成的适于产ｔ－ＰＡＣＨＯ工程细胞４Ｂ３生长和ｔ－ＰＡ表达效果均优于相同条件下用含血清培基培养的效果。     

重组人组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)的质量控制

随着重组ＤＮＡ技术的发展,生产的工业要求对象ｒｔ－ＰＡ这样的生物产品进行严格的质量控制,这种起源于传统的质量控制系统运用了许多现代化生物学的理论和先进技术,本文就ｒｔ－ＰＡ生产中有关细胞培养,纯化及终产品的质量控制等几方面进行了阐述,并对ｒｔ－ＰＡ纯度,一致性,效价的某些细节进行了分析。     

蕲蛇酶对血管内皮细胞纤维蛋白溶解功能的影响

目的　研究蕲蛇酶对体外培养人脐静脉内皮细胞纤溶活性的影响 ,探讨其抗栓作用机制。方法　采用人脐带来源的脐静脉内皮细胞进行原代及传代培养 ,以光镜、电镜、第Ⅷ因子相关抗原免疫组化等方法鉴定内皮细胞 ,采用发色底物法 (S2 2 51 )测定内皮细胞培养液中组织型纤溶酶原激活剂(t PA)及组织型纤溶酶原激活剂抑制物 (PAI)的活性 ,ELISA法测定培养液中纤维蛋白降解产物的含量。结果　所培养的细胞具有特征性Weibel palade小体 ,第Ⅷ因子特异性抗原阳性。蕲蛇酶使细胞培养液中t PA活性升高 ,t PA/PAI比值升高 ,纤维蛋白降解产物明显增加。结论　蕲蛇酶具有促进血管内皮细胞释放t PA ,提高其纤溶活性的作用。