鼻咽癌癌前及其高危人群鼻咽上皮组织EB病毒DNA酶基因检测

目的探讨非癌鼻咽上皮细胞发展为鼻咽癌（ＮＰＣ）的过程中,ＥＢ病毒在什么阶段进入鼻咽上皮。方法利用广州中山医科大学肿瘤防治中心四会县防癌基地１９９４年度复查工作及肿瘤医院门诊,收集鼻咽癌及各类“癌前状态”及“癌前病变”患者蜡块４５０余例,应用改进后的多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法进行ＥＢＶＤＮＡ酶基因片段扩增检测。结果ＮＰＣ浸润癌组织ＥＢＶＤＮＡ酶基因片段扩增阳性率为９７．３％（１４５／１４９）,ＮＰＣ原位癌４例中,基因阳性者２例,而防癌基地“癌前状态”人群１５５例中阳性者２例,阳性率为１．３％（２／１５５）。临床癌前病变组阳性率为零（０／４７）。结论ＥＢ病毒在非癌鼻咽组织中出现频率十分低,ＥＢ病毒可能在鼻咽上皮癌变后才进入鼻咽上皮,提示ＥＢ病毒可能不是ＮＰＣ的病因。     

THE EXAMINATION OF AN EBV-DNASE GENE FRAGMENT IN THE PARAFFIN-EMBEDDED NPCI PRECANCEROUS AND FROM HIGHRISK POPULATION NASOPHARYNGEAL TISSUES

ThereisalongterminNPCtumorigenesis,includingthestagesofprecancerosisconditionsandprecancerouslesions.[l-3]InordertoinvestigateinwhichstageoftumorigenesisEpstein-Barsvirusbeginstoappearinthelesions,in1994morethan450specimensofnasopharyngealbiopsiesinclUdingNPCandnoncancerousnasopharyngeallesionspecimenswerecollectedfromtheout-patientclinicoftheTumorHospitalandthecancer-preventionbaseofCancerCenterunderSUMS,wheretheprospectiveten-yearprogram(1986--1995)aboutthenaturepopulationathighAnriskf…     

ESTABLISHMENT OF HIGH RISK POPULATION AND PRECANCEROUS LESION OF NASOPHARYNGEAL CARCINOMA(NPC)

ＥＳＴＡＢＬＩＳＨＭＥＮＴＯＦＨＩＧＨＲＩＳＫＰＯＰＵＬＡＴＩＯＮＡＮＤＰＲＥＣＡＮＣＥＲＯＵＳＬＥＳＩＯＮＯＦＮＡＳＯＰＨＡＲＹＮＧＥＡＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡ（ＮＰＣ）ＨｕａｎｇＴｅｎｇｂｏ１黄腾波ＷａｎｇＨｕｉｍｉｎ２汪慧民ＬｉＪｉｎｇｌｉａｎ３李...     

利用分子生物学方法检测鼻咽癌颈部转移性淋巴结中EB病毒基因研究(二)

目的利用分子生物学方法聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＳＢＨ）为隐性鼻咽癌和原发灶不明的颈部转移癌提供诊断和鉴别诊断的参考依据。材料与方法利用ＰＣＲ基因扩增技术和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交检测经针吸活检取材或活检取材的２０例鼻咽癌（ＮａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌＣａｒｃｉｎｏｍａ，ＮＰＣ）（实验组）３３份标本和２６例非鼻咽癌（对照组）２７份标本中ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）。结果在ＮＰＣ组中ＥＢＶ基因检测，１７／２０例是阳性，１８份针吸活检取材标本中１３／１８呈阳性；对照组中仅３／２０例ＥＢＶ检测呈阳性，其中２例为霍奇金病，１例鼻咽腺样增殖体。结论ＥＢ病毒基因检测结果再次显示本研究能准确地为隐性鼻咽癌提供诊断和鉴别诊断的参考依据，而且针吸活检取材较石腊切片取材更省时，痛苦小而经济。应强调的是分析ＥＢＶ检测结果应与病理，临床检查相结合     

Hypermethylation of epithelial-cadherin gene promoter is associated with Epstein-Barr virus in nasopharyngeal carcinoma

Background: Epstein-Barr virus (EBV) is documented as the important etiologic agent of nasopharyngeal carcinoma (NPC) but the mechanism of development and pathogenesis induced by EBV is presently unclear. Hypermethylation of epithelial-cadherin (E-cadherin) promoter has been shown to be induced in NPC cell line by EBV LMP1 via DNA methyltransferase activation. EBV genomes and hypermethylation of E-cadherin promoter were investigated in NPC tissues to evaluate the role of EBV in the hypermethylation and pathogenesis of NPC. Methods: Methylation-specific polymerase chain reaction (MSP) was performed to detect E-cadherin promoter hypermethylation in paraffin embedded tissues from patients with NPC and normal nasopharyngeal tissues. EBV genomes were detected by PCR in the tissue samples. Results: Hypermethylation of E-cadherin promoter and EBV were predominantly detected in undifferentiated and non-keratinizing NPC compared to those in squamous cell NPC. Hypermethylation of E-cadherin was found in 28 of 38 (73.7%) patient samples. EBV was detected in 22 of the 28 (78.6%) NPC samples demonstrating E-cadherin hypermethylation. EBV genomes and hypermethylation were not detected in normal nasopharyngeal tissues. Significant association was found between E-cadherin hypermethylation and EBV genomes (p < 0.001; Fisher's exact test). Hypermethylation of E-cadherin was more frequently detected in advanced stages compared to those in early stages of NPC (p = 0.036; Fisher's exact test). Conclusions: The high incidence of EBV with the consistency of E-cadherin hypermethylation, particularly in undifferentiated and non-keratinizing NPC suggests the role of EBV in the hypermethylation. EBV exists at early stage of NPC that induces the hypermethylation and contributes to progression of the disease to the advanced stage of NPC.     

鼻咽癌骨转移的发生及预后因素分析

目的分析鼻咽癌骨转移的发生和治疗因素.方法回顾性分析我院1990～1999年间初治的935例鼻咽癌患者骨转移的发生、疗效及对预后的影响.结果本组骨转移的发生率为10%.应用单因素分析发现1992年福州分期Ⅲ～Ⅳ期、T4、N2-3、AKP＞70为影响骨转移增加的因素,多因素分析发现仅N2-3、AKP＞70为影响骨转移增加的独立因素.通过生存率分析治疗手段对预后影响发现放疗 化疗组比单纯放疗组或单纯化疗组的中位生存期延长.结论N分期增高是鼻咽癌骨转移的高危因素,放射治疗加化疗有可能改善鼻咽癌骨转移的预后.     

THE HIGH-LEVEL EXPRESSION OF nm23(NDP)GENE IN NPC

WE have studied the expression of nm23(NDP)in 50cases nasopharyngeal biopsies with anti-nm23(NDP)antibodies. As a result, the NDP positive rate innasopharyngeal carcinoma(NPC)(95.54%) markedlyincreased (P<0.05), as compared with that in the normalnasopharyngeal epithelia (50.00-60.00%) and lympho-cytes (52.00%). There were cytoplasmic type, nucleustype and mixed cytoplasmonucleus type according to NDP,location in a cell Their positive rates were 64.44%,15.56%, and 20.00%, respectively in nasopharyngealcarcinoma. The expression of NDP had no relation withcervical lymphometastases in NPC, and the NDP positiverates had no significance between bilateral cervicallymphometastases and unilateral(P<0.05). But the NDPexpression had most relation with the NPC staging. Theexpression rate and the intensity in Ⅲ or Ⅳ stagepatients were markedly higher than that in Ⅱ stage. Itpoints out that the high-level expression of NDP hadrelation with the rapid cellular proliferation in NPC, andit may indicate the bad prognos     

血浆 EB病毒游离 DNA检测对监测鼻咽癌患者预后的意义

背景与目的:有报道 , 测定血浆中的 EB病毒游离 DNA( EBV-DNA)的拷贝数可作为诊断及监测鼻咽癌患者病情变化的手段之一.本研究旨在评价血浆 EBV-DNA检测在鼻咽癌患者预后监测上的价值, 并进一步与 VCA/IgA、 EA/IgA进行比较.方法:比较鼻咽癌放疗后 30例远处转移患者、 22例局部复发患者、 24例无 瘤生存者血浆中 EBV-DNA、 VCA/IgA、 EA/IgA水平.分别应用荧光定量 PCR方法检测血浆 EBV-DNA水平,免疫酶法检测 VCA/IgA、 EA/IgA;前瞻性观察 20例初诊鼻咽癌患者放疗前、放疗剂量达 40 Gy时及放疗结束时上述指标的变化. 结果:放疗后各组不同预后患者的血浆 EBV-DNA含量的中位数有显著性差异, 远处转移组为 135 100 copies/ml(四分线区域 5 525～ 1 003 750 copies/ml) >局部复发组的 20 500(四分线区域 0～ 58 500 copies/ml) > 无瘤生存组的 0 copy/ml(四分线区域 0～ 0 copy/ml), P均 < 0.05. 远处转移组的血浆 EBV-DNA水平高者较多, 当阳性标准为 1 000 000 copies/ml时,诊断远处转移组的敏感性为 27.3%,而诊断局部复发组的敏感性为 0.0%,特异性均为 100.0%.在初诊患者放疗前、放疗剂量达 40 Gy时及放疗结束时, EBV-DNA水平逐渐降低,平均含量分别为 32 050 copies/ml(四分线区域 3 880～ 317 750 copies/ml)、 0 copy/ml(四分线区域 0～ 14 375 copies/ml)、 0 copy/ml(四分线区域 0～ 2 940 copies/ml), P均 < 0.05, 而 VCA/IgA、 EA/IgA的水平未见明显变化. 结论: 血浆 EBV-DNA检测可用于监测鼻咽癌患者预后,其价值明显优于 VCA/IgA、 EA/IgA.     

鼻咽癌中KLF6基因突变的检测

背景与目的：鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC)高发于中国南方和东南亚地区,其发病是一个多因素,多步骤的过程,与遗传因素,EB病毒感染和环境因子有关,但分子机理仍不清楚,KLF6基因编码一种广泛表达的核转录因子,在某些前列腺癌肿瘤中发现有高频的等位基因的丢失和基因突变,本研究通过对KLF6基因在NPC肿瘤中的突变检测,探讨KLF6基因与NPC发病的关系。方法：采用PCR-直接测序分析方法。在19例散发性NPC组织细胞和3个NPC细胞系（CNE1,CNE2,SUNE1）中对KLF6编码区和拼接位点进行检测。结果：在3你散发性NPC肿瘤组织DNA中检测到KLF6基因的3个不同位置的错义改变,分别为GAG→TG（Glu75Val),AGG→AGG（Ser136Arg)和AGA→AAA（Arg243Lys),在50个随机正常个体（100条染色体）和3个NPC细胞系中没有发现这3个位点的碱基变异,结论：这3个变异可能是KLF6基因的新的突变位点,在某些NPC发病中可能有作用。     

TNFAIP3基因在放射治疗鼻咽癌中的表达及意义

背景与目的：鼻咽癌多对放射治疗敏感,研究鼻咽癌放疗抗拒具有重要意义。本研究旨在探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(tumor necrosis factor alpha induced protein 3,TNFAIP3)在经放射治疗的鼻咽癌中的表达,分析其在放疗敏感及放疗抗拒的鼻咽癌中表达的差异,与放疗抗拒发生、发展的关系。方法：采用TNFAIP3多点标记的地高辛探针原位杂交方法检测TNFAIP3 mRNA在放疗敏感及放疗抗拒的鼻咽癌中的表达。结果：TNFAIP3 mRNA中度及强阳性表达率在放疗敏感及放疗抗拒的鼻咽癌中的表达率分别为15.00%和45.00%,差异有统计学意义(χ2=5.274,P=0.0216)。在放疗抗拒的鼻咽癌中,TNFAIP3 mRNA中度及强阳性表达率与TNM分期呈正相关,Ⅲ~Ⅳ期TNFAIP3 mRNA中度及强阳性表达率为48.28%,I~Ⅱ期表达率为36.36%,差异有统计学意义(χ2=33.240,P＜0.005);在有、无远处转移中的表达率分别为81.81%和31.03%,差异有统计学意义(χ2=6.385,P=0.011 5)。结论：TNFAIP3虽具有抗肿瘤效应,但参与了放疗抗拒的鼻咽癌的发生、发展。     

E-cadherin和p16基因蛋白在鼻咽癌中的表达及意义

目的：探讨Ｅ－钙粘素（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ）和p１６基因与鼻咽癌发生发展的关系。 方法：采用免疫组化方法检测７４例鼻咽癌组织和２０例炎性鼻咽部组织中Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和p１６基因蛋白的表达。结果：炎性组织Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ和p１６显著高于鼻咽癌组织（Ｐ〈０．０５）；Ｅ－ｃａｄｈｅｉｎ和p１６保留表达与临床分期、病灶大小 无关（Ｐ〉０．０５），但在颈淋巴结转移组显著低于无颈淋巴结转移组（Ｐ〈０．０５）     

不对称PCR-SSCP检测鼻咽癌p130基因研究

目的:探讨p130基因改变与鼻咽癌发生、发展的关系。方法:提取鼻咽癌组织DNA,用不对称单链构象多态性(SSCP)PCR技术,分别对20例散发性鼻咽癌患者及3个鼻咽癌高发家系进行性p130基因第11、17和19外显子纯合性缺失及突变研究,以20例慢性鼻咽炎患者的鼻咽部组织做为对照。结果:散发性鼻咽癌患者有相同的p130 E11、E17纯合性缺失2例,未发现p130E19缺失;对照组中检出1例p130E11、E17纯合性缺失,也无p130E19缺失;鼻咽癌家系未发现缺失和突变。结论:鼻咽癌中p130 E11、E17纯合性缺失可能涉及到p130/Rb2基因的改变,在鼻咽癌的发生发展中起一定的作用,而且p130/Rb2基因作为一种抑癌基因可能成为鼻咽癌新的基因治疗手段的候选基因。     

鼻咽癌组织中RASSF1A基因甲基化的研究

目的观察RASSF1A基因在鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎的甲基化情况。方法采用甲基化特异性PCR技术检测16例鼻咽低分化未角化癌和10例鼻咽黏膜慢性炎组织中RASSF1A基因的甲基化。结果RASSF1A基因的高甲基化率在鼻咽癌组织中为93．75％（15／16）,在慢性鼻咽炎组织中为0,两组病例的RASSF1A基因高甲基化率差别显著,P〈0．005。结论RASSF1A基因在鼻咽癌组织中呈高甲基化,可能是影响鼻咽癌发生发展的抑癌基因之一。     

BRD7交互作用蛋白基因BRD2、BRD3在鼻咽癌组织中的表达

背景与目的：BRD7基因是通过cDNA代表性差异分析获得的一个鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）密切相关基因。采用酵母双杂交技术,已从人胎脑的cDNA文库中筛选到了两个与BRD7蛋白存在交互作用且包含溴区结构域（bromodomain)的蛋白BRD2、BRD3。本研究的目的在于进一步证实BRD7蛋白与BRD2、BRD3蛋白之间的交互作用,探讨BRD2、BRD3基因在鼻咽癌中的表达和作用模式。方法：将BRD2、BRD3基因分别与BRD7基因共转化酵母Y187后将菌落影印到尼龙膜,X－Gal检测酵母中报告基因LacZ的表达,推断BRD2、BRD3与BRD7蛋白之间的交互作用。RT－PCR方法检测BRD2、BRD3基因在正常鼻咽上皮组织和鼻咽癌活检组织中的差异表达以及在BRD7基因稳定转染的鼻咽癌细胞株（HNE1）中,BRD7基因的重表达对BRD2、BRD3基因表达水平的影响。结果：通过特异性酵母双杂交技术,发现酵母转化子的颜色呈蓝色,进一步证实BRD2、BRD3蛋白能分别与BRD7蛋白发生交互作用。RT－PCR结果显示,在鼻咽癌组织中,BRD2和BRD3基因表达下调或缺失;在BRD7基因稳定转染的HNE1细胞株中,随着BRD7基因表达的增强,BRD2、BRD3基因的表达存在明显的上调。结论：BRD7蛋白能分别与BRD2、BRD3蛋白发生交互作用,且在mRNA水平存在一定程度的协同表达作用,彼此可能形成二聚体或三聚体,共同参与鼻咽癌的发病过程。     

MORPHOLOGICAL AND QUANTITATIVE STUDY ON STROMAL MICROVASCULATURE OF NASOPHARYNGEAL PRECANCEROUS LESIONS

ＭＯＲＰＨＯＬＯＧＩＣＡＬＡＮＤＱＵＡＮＴＩＴＡＴＩＶＥＳＴＵＤＹＯＮＳＴＲＯＭＡＬＭＩＣＲＯＶＡＳＣＵＬＡＴＵＲＥＯＦＮＡＳＯＰＨＡＲＹＮＧＥＡＬＰＲＥＣＡＮＣＥＲＯＵＳＬＥＳＩＯＮＳＬｉｕＫｅｌａ刘克拉，ＹｕｎＪｉｎｇｐｉｎｇ云径平，ＨｏｕＪｉｎ...     

对比88例鼻咽癌的MRI与CT及研究茎突后间隙受累的组成

目的 :对比MRI与CT在正确揭示鼻咽癌 (NPC)向周围结构的扩展方面孰优 ?并探明茎突后间隙受累的成因。材料与方法 :给病理证实未经治疗的连续的 88例NPC病人同时作优质的MRI和轴位及冠状位CT ,对比两者显示的鼻咽周围各种结构的肿瘤受侵率有何差异。结果 :MRI见颅底骨受累率、椎前肌受累率和咽后淋巴结转移率分别为 73 .9% ,3 2 .9%和 5 9.8% ,而CT的相应值仅 2 8.4% ,6.8%和 1 2 .5 % ,各相应值之间有非常明显的统计学差别。在 1 2 .5 %的NPC病人的矢状位RMI上见斜坡后有辫子样的硬脑膜的肿瘤浸润增厚 ,而在CT上则不能见到。MRI能根据T2 WI上的不同信号强度判别是NPC侵入副鼻窦 ,还是窦内炎症 ,而CT则不能区别之。在CT上难以确定茎突后间隙受累的组成是什么 ,而在MRI上依靠各种结构的固有位置及固有的不同信号得以确定 5 6个受累的茎突后间隙中 ,由咽后淋巴结转移 ,NPC原发灶向后方扩展 ,椎前肌受累和颈动脉鞘淋巴结转移构成者分别占71 .4% ,62 .5 % ,42 .9%和 1 9.5 % ,且约 60 %由其中的两个以上成份构成。结论 :为了使NPC病人的病期的确定更为准确和使其放疗靶区的认定更为正确 ,应考虑以优质的MRI取代CT作为NPC病人的首选影像学检查方法。     

抑癌基因MTS1／p16的缺失与胃癌生物学特性的关系

目的：研究MTS1/p16基因在胃癌中失活的发生率及其临床意义。方法：采用PCR方法对35例胃癌标本MTS/p16基因第2外显子进行扩增研究。结果：胃癌中MTS1/p16基因的缺失率为40.0%,明显高于正常胃粘膜组织MTS1/p16 基因的缺失与胃癌的组织学类型和分化程度无关,但与淋巴结转移以及临床病理分期有密切关系。随着癌转移的发生或疾病向晚期发展,MTS1/p16基因的缺失率明显提高。结论：MTS1/p16基因的缺失是胃癌细胞发生发展中和重要的分子事件。可以作为胃癌恶性进展的一个标志因素。对MTS1/p16基因的检测,将可能有助于临床提高胃癌的基因诊断水平,并且为胃癌恶性程度的判断以及患预后的评估提供有力的参考指标。     

鼻咽癌在不同高发区人群中的发病差异

目的：探索在广东省不同鼻咽癌高发区人群中发病差异，探讨相关病因发病因素。方法：１９８６～１９９５年对广东省四会市、广州市近６万人前瞻性研究，通过对两地人群鼻咽癌检出率，ＥＢＶＶＣＡ／ＩｇＡ阳性率，阳性人群癌前病变，癌变检出率，并以Ｌｏｇｉｓｔｉｃ多元回归分析其差异。结果：发现四会地区人群与广州地区人群相比：①高鼻咽癌检出率；②ＥＢＶＶＣＡ／ＩｇＡ阳性人群高合并鼻咽粘膜癌前病变；③ＥＢＶＶＣＡ／ＩｇＡ阳性人群高鼻咽癌检出率；④鼻咽粘膜癌前病变高癌变率。结论：ＥＢＶ感染与肿瘤遗传易感性在鼻咽癌发病上是否起着协同或加强作用值得进一步研究。     

赫赛汀对HER-2/neu基因高表达鼻咽癌细胞株生长的影响

目的：探讨赫赛汀(Herceptin)对HER-2／neu基因高表达鼻咽癌细胞株生长的影响及机制。方法：分别采用MTT法、^3H-TdR细胞掺入法检测Herceptin对鼻咽癌细胞株CNE-22和CNE-2体外生长的影响;用流式细胞仪检测Herceptin对CNE-2Z细胞生长、细胞周期和凋亡的影响。结果：Herceptin可抑制CNE-2Z细胞的生长,引起细胞凋亡指数的增加。结论：Herceptin可抑制高表达HER-2／neu基因鼻咽癌细胞株的生长,并诱导细胞凋亡的发生。     

鼻咽癌p53蛋白表达与p53基因结构改变及mdm2蛋白表达的关系和意义

探讨影响ＮＰＣｐ５３蛋白表达的因素,Ｐ５３和ｍｄｍ２蛋白在ＮＰＣ发生中的变化和意义。方法采用免疫组化法检测ｐ５３和ｍｄｍ２蛋白、Ｓｏｕｈｅｒｎ杂交法检测Ｐ５３基因结构。