NAC-1特异的siRNA增强紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞凋亡

目的: 探讨 NAC-1 (nucleus accumbens-1)基因特异的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)联合紫杉醇诱导人卵巢癌HO8910细胞凋亡的协同作用及其可能机制。方法: 测定不同浓度 NAC-1 基因特异的siRNA与紫杉醇单用或者合用对HO8910细胞增殖与凋亡的作用,设立阴性siRNA对照和空白对照。以实时荧光定量RT-PCR 检测NAC-1 mRNA表达水平、Western印迹法检测NAC-1蛋白、表皮生长因子受体(EGFR)下游信号磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK),以MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡。结果: 单用 NAC-1 基因特异的siRNA作用48 h能抑制HO8910细胞NAC-1 mRNA和蛋白的表达,分别下调71.2%和80.5%,细胞周期被阻滞于G₁期,p-Akt和p-ERK蛋白水平分别下降43.7%和49.8%;作用72 h细胞增殖被抑制45.6%,与转染阴性siRNA 及未转染组比较,差异显著(P<0.05)。 NAC-1 siRNA(0.5 μmol/L)与紫杉醇(2 μmol/L)联合作用于卵巢癌HO8910细胞72 h细胞凋亡率为(30.93±4.57)%,显著高于单用紫杉醇时的细胞凋亡率[(23.85±3.65)%],P<0.05。结论: 靶向抑制 NAC-1 基因表达能显著抑制卵巢癌HO8910细胞增殖,增强其对紫杉醇的敏感性,这与部分抑制EGFR下游信号途径有关。     

调节Ubc9基因对卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨调节Ubc9基因对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响,探讨其作用机制。方法应用体外Transwell细胞侵袭实验检测调节Ubc9基因对卵巢癌HO8910细胞侵袭能力影响,以稳定转染Ubc9的HO8910-Ubc9细胞为Ubc9组,对照组为未转染的HO8910细胞(normal)及转染空质粒的HO8910细胞(vector);另以转染Ubc9特异性siRNA的HO8910-Ubc9细胞为siRNA1、siRNA2组,对照组为未被Ubc9特异性siRNA转染HO8910-Ubc9细胞(normal)及转染无关序列RNA的HO8910-Ubc9细胞(negative control)。应用划痕实验观察调节Ubc9基因对卵巢癌HO8910细胞迁移能力的影响。结果 HO8910-Ubc9组穿过Matrigel胶的细胞数量明显高于空白对照组和空质粒组(P0.05),Ubc9-siRNAs转染48h后,HO8910-Ubc9细胞穿过人工基底膜的细胞数目明显低于对照组(P0.05)。HO8910-Ubc9细胞在6、12、24h愈合率明显高于HO8910组(P0.05),转染Ubc9-siRNA的HO8910-Ubc9细胞于划痕后在24h,细胞愈合率明显低于对照组(P0.05)。结论 Ubc9促进HO8910细胞侵袭、迁移,可能成为临床治疗的新靶点。     

特异siRNA下调卵巢癌H08910细胞NAC-1基因表达并抑制生长

 目的：研究小RNA干扰NAC-1 (Nucleus accumbens-1,Nac1 or NAC-1)基因表达对卵巢癌HO8910细胞增殖的影响。方法：设计、合成针对NAC-1基因的特异性小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）及阴性siRNA,并同时设立空白对照,然后用脂质体转染HO8910细胞。通过实时荧光定量RT-PCR 和Western印迹法分别检测转染前后HO8910细胞中NAC-1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖率,FCM法检测细胞周期分布。结果：针对NAC-1基因的特异性siRNA均能抑制NAC-1 mRNA和蛋白的表达,其中NAC-1-siRNA-1的沉默效率最高。转染NAC-1-siRNA-1 48h后,HO8910细胞中NAC-1 mRNA和蛋白表达水平分别下调74%和81%,而且细胞增殖明显受到抑制,细胞周期被阻滞于G1期,与转染阴性siRNA 及未转染组比较,有显著性差异(P?0.05)。结论：NAC-1特异性siRNA能够有效沉默NAC-1基因表达,并显著抑制卵巢癌HO8910细胞增殖。     

过表达人tRNA甲基转移酶9样蛋白KIAA1456抑制HO8910PM细胞增殖

目的研究人tRNA甲基转移酶9样蛋白KIAA1456的高表达对HO8910PM细胞增殖及细胞周期的影响。方法利用PCR扩增KIAA1456编码区片段,克隆插入载体Ubi-MCS-EGFP-IRES-puromycin中,构建Ubi-KIAA1456-EGFP-puromycin(LV-KIAA1456)慢病毒表达载体;将慢病毒表达载体包装生成慢病毒颗粒并感染HO8910PM细胞,72 h后观察绿色荧光蛋白(GFP)在HO8910PM卵巢癌细胞中的表达分布情况;反转录PCR检测HO8910PM细胞中KIAA1456 mRNA水平,Western blot法检测HO8910PM细胞KIAA1456蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期。结果成功构建重组慢病毒表达载体LV-KIAA1456,慢病毒颗粒感染HO8910PM细胞后,细胞中KIAA1456的mRNA和蛋白均高表达。过表达KIAA1456的HO8910 PM细胞增殖能力明显抑制、G1期细胞明显增加。结论过表达KIAA1456显著抑制HO8910 PM卵巢癌细胞增殖,细胞周期阻滞于G1期。     

卵巢癌中SMS1对细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨沉默神经鞘磷脂合成酶1(sphingomyelin synthase 1, SMS1)对卵巢癌细胞HO8910增殖、侵袭和迁移的影响。方法体外培养卵巢癌HO8910细胞株,设计siRNA-SMS1序列,转染细胞,分为阴性对照组(negative control, NC)、空白对照组(blank control, BC)、siRNA组;利用qRT-PCR技术检测各组细胞SMS1 mRNA相对表达量。MTT法检测HO8910细胞增殖情况、划痕实验检测转染后HO8910细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。薄层层析法检测HO8910细胞中SMS1活性、Cer水平。酸性神经鞘磷脂(sphingomyelin, SM)酶试剂盒、卵磷脂(phosphatidylcholine, PC)试剂盒分别检测HO8910细胞中SM、PC水平。结果卵巢癌细胞中SMS1 mRMA及蛋白相对表达量比正常卵巢细胞显著升高(P0.05);转染48 h后,siRNA组细胞中SMS1 mRMA及蛋白相对表达量、SMS1酶活性比NC组与BC组均显著降低(P0.05);siRNA-SMS1组A570比BC组与NC组显著降低(P0.05);迁移指数、侵袭细胞数较BC组与NC组显著降低(P0.05);与NC、BC组相比,siRNA组HO8910细胞中SM水平显著降低(P0.05),Cer水平显著升高(P0.05)。结论 SMS1基因沉默可抑制卵巢癌HO8910细胞增殖、迁移及侵袭能力,可能与下调细胞中SM水平、上调Cer水平有关。     

小干扰RNA沉默hPTTG1基因对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的: 利用RNA干扰技术沉默人垂体瘤转化基因1( hPTTG1 )表达,观察卵巢癌细胞增殖能力和细胞凋亡的改变并探讨分子机制。方法: 化学合成靶定 hPTTG1 的小干扰RNA(siRNA)转染体外培养的A2780细胞,RT-PCR和Western blotting检测 hPTTG1 及c-myc表达水平;MTT法和 -TdR掺入实验检测 hPTTG1 对细胞增殖的影响;annexin V/PI染色流式细胞术和TUNEL法测定各组细胞凋亡情况。结果: hPTTG1 siRNA转染组 hPTTG1 mRNA和蛋白表达下降,抑制率分别为70.5%±3.9%和63.8%±4.5%;转染 hPTTG1 siRNA 24 h细胞吸光度值开始下降,48 h抑制效果最明显,抑制率为42.9%±5.2%;转染 hPTTG1 siRNA后细胞 -TdR放射性计数明显低于空白组和阴性对照组; hPTTG1 siRNA干扰组细胞存活率下降,细胞凋亡率和坏死率均增加;TUNEL染色分析结果可见 hPTTG1 siRNA干扰组凋亡指数明显高于空白组和阴性对照组; hPTTG1 干扰后c-myc mRNA和蛋白表达均下调。结论: hPTTG1 siRNA通过下调c-myc表达抑制A2780细胞增殖,诱导细胞凋亡, hPTTG1 可作为卵巢癌基因治疗的候选靶点。     

靶向干扰GPx1基因对人胶质母细胞瘤细胞生长和迁移的影响

目的:探讨靶向上调和下调谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)对人胶质母细胞瘤细胞株(U87MG、U118MG)增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:合成针对GPx1的siRNA和构建、鉴定pc DNA3.1-GPx1重组质粒,分别用LipofectamineTM2000脂质体瞬时转染人胶质母细胞瘤细胞株U87MG和U118MG。Real-time PCR检测U87MG和U118MG中GPx1 mRNA表达。Western blotting法检测转染后GPx1蛋白表达,用MTS检测法和Transwell实验分别检测转染后细胞的活力、迁移及侵袭能力的变化。结果:siRNA干扰U87MG细胞后在24 h、48 h和72 h对细胞活力的抑制率分别为25.9%、35.7%和34.8%,较对照组明显降低(P0.05);质粒转染U118MG细胞后在24 h、48 h和72 h对细胞活力的促进率分别为22.7%、45.8%和39.8%,较对照组明显增加(P0.05);Transwell结果显示经siRNA干扰,U87MG细胞迁移抑制率为41.6%±8.2%,细胞侵袭抑制率为40.4%±10.1%,经siRNA干扰的细胞迁移和侵袭能力明显下降(P0.05);质粒转染后细胞迁移促进率为55.8%±9.8%,细胞侵袭促进率为60.8%±9.2%,经质粒转染的细胞的迁移和侵袭能力显著增强(P0.05)。结论:siRNA下调GPx1表达可抑制人胶质母细胞瘤细胞株U87MG的生长、迁移和侵袭;相反,质粒上调GPx1表达可促进人胶质母细胞瘤细胞株U118MG的生长、迁移和侵袭。     

siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的:探究siRNA沉默染色质解旋酶DNA结合蛋白1(CHD1L)对卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移及相关分子如核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:将si-CHD1L、si-NC质粒转染至卵巢癌HO-8910PM细胞,命名为si-CHD1L组、si-NC组,以未经转染细胞作为对照组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞CHD1L mRNA表达; CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室系统检测细胞迁移、侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)检测NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:与对照组、si-NC组比较,si-CHD1L组细胞CHD1L mRNA表达降低(P0.05),细胞增殖抑制率升高,细胞迁移能力降低,迁移、侵袭数量降低(P0.05)。与对照组、si-NC组相比,si-CHD1L组NF-κB、MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P0.05)。结论:siRNA沉默CHD1L能够抑制卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、侵袭、迁移,并能抑制NF-κB、MMP蛋白的表达,为卵巢癌的靶向治疗提供一定的理论依据。     

STAT3-siRNA对胃癌细胞株SGC-7901增殖与凋亡的影响

目的： 探讨siRNA沉默STAT3基因表达对胃癌细胞的生长抑制作用。 方法: 用已构建pGCsilencerH1/STAT3 siRNA 重组质粒,转染胃癌细胞SGC-7901,采用Western blotting、RT-PCR技术观察重组质粒对STAT3基因表达的影响;用MTT法观察重组质粒对胃癌细胞的生长抑制作用;用流式细胞术和TUNEL法检测重组质粒诱导的胃癌细胞凋亡。 结果: 用pGCsilencerH1/STAT3-siRNA重组质粒转染人胃癌细胞,Western blotting及RT-PCR 结果证实重组质粒在蛋白及mRNA水平分别显著地抑制STAT3基因表达,STAT3-siRNA抑制率分别为85.43%及80.75%,与对照组相比,有显著差异（P<0.01）。MTT和流式细胞术结果证明上述重组质粒可显著抑制胃癌细胞的生长（抑制率为63%）并诱导胃癌细胞凋亡。 结论: pGCsilencerH1/STAT3-siRNA可抑制STAT3在胃癌细胞中表达,并抑制胃癌细胞生长,促进细胞凋亡。     

黏着斑激酶相关非激酶质粒转染对肝星状细胞凋亡的影响

目的：应用黏着斑激酶相关非激酶（FRNK）表达质粒瞬时转染肝星状细胞（HSCs），探讨FRNK选择性抑制黏着斑激酶(FAK)磷酸化对FN刺激的HSCs凋亡的影响。方法:在体外培养HSCs，以FN刺激HSCs增殖，采用脂质体介导的方法进行FRNK表达质粒转染。应用膜联蛋白（Annexin-V）/碘化丙啶（PI）双标记流式细胞术、DNA凝胶电泳技术和透射电镜技术检测细胞的凋亡，Western blotting及RT-PCR方法检测FRNK、FAK、p-FAK（Tyr397）、caspase-3蛋白及其mRNA表达。结果:FRNK表达质粒成功转染HSCs，在翻译后水平抑制FAK磷酸化；FRNK表达质粒转染HSCs 48 h后，细胞凋亡率增加，与空质粒组之间有显著差异［（25.37±1.92）% vs（9.28±1.05）%］，P<0.01，伴随caspase-3在翻译和转录水平的增高［（264.17±12.60 vs 185.82±9.69），P<0.01；（4.19±0.48 vs 1.07±0.27），P<0.01］。结论:在脂质体介导下瞬时转染FRNK表达质粒，可使外源性的FRNK在HSCs内大量表达，在翻译后水平抑制FAK磷酸化；可以诱导FN刺激的HSCs发生凋亡。     

Human Wharton’s Jelly Stem Cell Conditioned Medium Enhances Freeze-Thaw Survival and Expansion of Cryopreserved CD34+ Cells

Hematopoietic stem cells (HSCs) from umbilical cord blood have been successfully used to treat blood disorders but one major hurdle is the relatively low cell dose available. Double cord blood unit transplantation results in elevated engraftment failure because one unit predominates over the other. Various approaches are thus being undertaken to expand HSCs ex vivo from single cord blood units. We report here a protocol involving slow freezing (?1 °C per minute to ?120 °C) + freezing medium containing DMSO + FBS + 24 h-50 % hWJSC-CM that enhances thaw-survival of CD34+ cells. Post-thawing, the fold, percentage and colony forming unit numbers of CD34+ cells were significantly increased (2.08?±?0.3; 102?±?1.17 %; 1.07?±?0.02 respectively) while the percentages of apoptotic, necrotic, dead and sub-G1 phase cells (91.06?±?3.63 %; 91.80?±?5.01 %; 95.6?±?3.61 %; 86.1?±?16.26 % respectively) were significantly decreased compared to controls. Post-thaw culture in 24 h-50 % hWJSC-CM+FBS for 72 h showed further significant increases in CD34+ cells (fold: 2.28?±?0.17; percentage: 153.3?±?21.99 %, CFU: 1.6?±?0.19) and significant decreases in apoptotic, necrotic, dead and sub-G1 cells (49.2?±?3.59 %; 62.0?±?4.30 %; 56.6?±?5.06 %; 28.6?±?5.74 % respectively) compared to controls. We hypothesize that these improvements are probably related to the high levels of cytokines, cell adhesion molecules and growth factors in hWJSC-CM that help to preserve cell membrane integrity during freezing and stimulate mitosis post-thaw. A 24 h-50 % hJWSC-CM may be a useful supplement for freezing CD34+ cells in cord blood banks.     

Caveolin-1与人卵巢癌转移的相关性及其机制的研究

目的探讨窖蛋白-1(caveolin-1)与卵巢癌转移的相关性及其可能的调节机制。方法采用免疫荧光法、蛋白印迹实验及逆转录聚合酶链反应检测人卵巢浆液性囊腺癌高低转移细胞系(HO-8910PM及HO-8910)中caveolin-1基因的表达差异。表皮生长因子(EGF)处理低转移卵巢癌HO-8910细胞后,经上述方法检测caveolin-1基因表达的改变。同时经Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移能力的改变。结果 caveolin-1在HO-8910细胞中为高表达,在HO-8910PM细胞中为低表达(P0.01)。EGF可明显降低HO-8910细胞中caveolin-1基因的表达(P0.01)并促进细胞侵袭(P0.01)和迁移(P0.05)。结论卵巢癌细胞的侵袭、迁移可能与caveolin-1基因表达下降有关,经由EGF/EGFR的信号很可能是caveolin-1介导的卵巢癌转移抑制的重要调节者。     

木犀草素对卵巢癌细胞株转移能力的影响

目的：研究木犀草素对卵巢癌细胞株HO-891 0PM的体外侵袭能力的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：HO-8910P M细胞经木犀草素处理后用Boyden小室法检测其体外、侵袭和运动能力。并采用明胶酶 谱法检测HO-8910PM细胞分泌的明胶酶活性。RT-PCR检测TIMP-1、NM23基因mRNA的表达情况，蛋白印迹法检测ERK2的蛋白表达变化。结果：HO-8910PM细胞经木犀草 素处理后，体外侵袭、运动能力呈剂量依赖性下降。HO-8910PM细胞MMP-9的分泌下降。ERK2 蛋白表达明显降低，但TIMP-1、NM23基因mRNA的水平无明显变化。结论:木犀草素在体外剂量依赖性地抑制卵巢癌细胞HO-8910PM的转移能力，这可能与木犀草素 抑制MMP-9的分泌及下调ERK2表达有关。     

筛选KIAA1456抑制卵巢癌细胞增殖的靶向lncRNAs

目的筛选KIAA1456抑制卵巢癌细胞增殖的靶向lncRNAs。方法细胞免疫荧光检测KIAA1456在卵巢癌细胞HO8910PM中的表达。用基因芯片技术检测过表达KIAA1456后的卵巢癌细胞HO8910PM,与对照HO8910PM卵巢癌细胞之间差异lncRNA基因表达谱,筛选出有明显差异的lncRNAs,并验证。构建KIAA1456-RNAi慢病毒载体,干扰卵巢癌细胞HO8910/PM中KIAA1456的表达,RT-q PCR和Western blot检测KIAA1456干扰效率。用RT-q PCR再次检测KIAA1456沉默后相关lncRNAs的表达变化。结果KIAA1456主要表达于HO8910PM细胞的细胞核。过表达KIAA1456后,表达相差1.2倍以上的lncRNA有654条,表现最显著的有下调的SSX8,上调的SNORD14D,SNORA26,lncRNA-ENST00000384488,PCR验证结果与芯片趋势一致。KIAA1456-RNAi慢病毒载体成功干扰了卵巢癌细胞HO8910PM中KIAA1456的表达,KIAA1456下调后,SSX8上调,SNORD14D,SNORA26,lncRNA-ENST00000384488下调。结论 KIAA1456可通过调节SSX8,SNORD14D,SNORA26,lncRNA-ENST00000384488等相关lncRNAs的表达,从而抑制卵巢癌细胞的增殖,为提高卵巢癌的诊断和治疗提供了一个新的靶点。     

HLA-G mRNA差异表达对细胞膜表面HLA-G异构体分子表达的影响

目的 探讨HLA-G异构体(HLA-G1～6)mRNA差异表达对HLA-G分子在细胞表面表达的影响.方法 通过RT-PCR方法分析卵巢癌细胞株HO-8910、H0-8910PM、OVCAR-3,白血病细胞株Jurkat、K562、HL60、MUTZ-1,绒癌细胞株JEG-3、JAR内HLA-G异构体mRNA的表达种类,采用流式细胞术分析上述细胞株细胞表面及细胞内HLA-G分子的分布及表达水平.结果 阳性对照JEG-3细胞内表达HLA-G1～6 mRNA,阴性对照JAR不表达HLA-G1～6 mRNA.HLA-G1 mRNA在HO-8910、HO-8910PM、OVCAR-3、MUTZ-1、Jurkat细胞内表达.除阳性对照JEG-3外,其他细胞均不表达HLA-G2 mRNA;表达HLA-G3 mRNA的细胞有HO-8910、HO-8910PM、K562、HL60、MUTZ-1、OVCAR-3、Jurkat;表达HLA-G4 mRNA的细胞有HO-8910、HO-8910PM、HL60、Jurkat;表达HLA-G5mRNA的细胞为Jurkat.FACS分析显示在JEG-3、HO-8910PM、Jurkat细胞膜表面表达HLA-G分子,而除JAR细胞外,其他细胞内均表达HLA-G分子.结论 HLA-G2、-G3、-G4、-G5、-G6均不能在细胞表面表达,而HIJA-G1分子则能在特定的细胞表面表达.     

抗人CD40 mAb 5H6的125I标记及其与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性

目的:研究抗人CD40单克隆抗体(mAb)5H6的125I标记及与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性.方法:氯氨-T法125I标记mAb 5H6(125I-5H6),纸层析法测定125I-5H6的标记率和放射化学纯度,三氯醋酸沉淀法分析125I-5H6体外稳定性,细胞结合饱和实验进行Scatchard分析,lindmo法及其改良方法计算125I-5H6的免疫活性分数,细胞结合实验分析125I-5H6同HO8910细胞的内化和滞留.结果:(1)mAb5H6的125I标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%.(2)125I-5H6存放于4℃磷酸缓冲液中7 d后其放射化学纯度为(80.3±4.7)%,在37℃血浆中存放24h后其放射化学纯度为(95.3±0.8)%.(3)125I-5H6与HO8910细胞亲和力Kd=(0.711±0.06)nmol/L,最大结合位点数(Bmasx)=(2.17±0.08)×105个/细胞.(4)125I-5H6免疫活性分数达(38.6±5.4)%.(5)4℃2 h125I-5H6同HO8910细胞滞留率为(89.8±6.0)%,37℃2 h125I-5H6同HO8910细胞内化率达(54.9±2.6)%.结论:氯氨-T法进行125I-5H6标记具有良好的标记率和放射化学纯度,以及良好的体外稳定性和较高的免疫活性分数,且125I-5H6与HO8910细胞具有很高的亲和力,可用于动物体内实验.     

siRNA沉默胃癌SGC-7901细胞HO1基因的细胞系的建立及其生物学行为

目的 构建HO1基因的真核干扰表达载体,评估其转染人胃癌细胞系SGC-7901细胞后对HO1基因的干扰效果及其功能.方法 将外源性重组真核干扰表达载体HO1基因(pS/HO1)转染到人胃癌细胞系SGC-7901内,经G418筛选并建立siRNA表达载体稳定沉默胃癌SGC-7901细胞HO1基因的细胞系,分为SGC-7901-pS/HO1组,转染空质粒细胞(SGC-7901-pS)组和未处理细胞(SGC-7901)组;用实时荧光定量PCR和蛋白印迹验证HO1基因在各组细胞中的表达,并通过CCK-8和克隆形成实验分别观察HO1基因被干扰后细胞的生物学行为.结果 与SGC-7901-pS组相比,SGC-7901-pS/HO1细胞中HO1基因蛋白表达明显减少,降低了5.58倍(0.321±0.051 vs 1.675±0.153,P＜0.05);与对照组相比较,SGC-7901-pS/HO1实验组较SGC-7901-pS对照组细胞增殖数量明显减少(P＜0.001);与转染pS空载体的SGC-7901-pS细胞对照组相比,SGC-7901-pS/HO1细胞的克隆形成明显减少,降低了3.45倍(8.32±1.142 vs 2.32 ±0.362,P＜0.05).结论 HO1基因真核siRNA表达载体筛选成功,为继续深入的研究HO1基因在胃癌中的功能提供了依据.     

Survivin-siRNA对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的:探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株DU145的促凋亡作用。方法:构建针对survivin的siRNA表达载体pSi-sur,与脂质体和scramble-siRNA(pSi-scrambled)对照组分别转染前列腺癌细胞DU145后,利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平;吖啶橙染色、Annexin V-FITC流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:转染72 h后,实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的0.28±0.07(n=3),蛋白表达水平是脂质体组的0.34±0.05(n=3),与对照组比较,差异显著(P0.05);吖啶橙染色、Annexin V-FITC和TUNEL法均观察到实验组细胞呈现明显的凋亡现象。结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌细胞DU145 survivin基因和蛋白表达,并诱导细胞凋亡,结果为进一步进行动物体内研究奠定了基础。