细胞凋亡在小鼠病毒性心肌炎中的作用

目的 :探讨柯萨奇病毒 B3(CVB3)所致小鼠病毒性心肌炎 (VM)心肌细胞损伤的变化 ,观察细胞凋亡在心肌损伤中的作用。方法 :采用 CVB3制备小鼠病毒性心肌炎动物模型 ,分别于腹腔接种 CVB3后第 5、7、10、14、2 1、2 8d,取心肌组织切片 HE染色了解心肌损伤 (坏死 )情况 ;电镜和流式细胞仪检测 ,观察心肌中的细胞凋亡。结果 :心肌坏死方面 :光镜观察见对照组小鼠心肌组织无异常改变 ,实验组病鼠可见心肌细胞坏死和单核、淋巴细胞浸润 ,后期可见纤维化 ;心肌细胞凋亡方面 :电镜观察对照组心肌中未检出凋亡细胞 ,而病鼠心肌凋亡细胞检出率较高 5 8.33% (7/12例 ) ,且细胞凋亡多存在于炎症病灶周围的心肌细胞及病灶处炎性浸润细胞 ;各期病鼠心肌组织中的细胞凋亡比率较对照组明显增加 ,流式细胞仪检测平均心肌细胞凋亡百分率为 2 6 .74± 15 .2 2 % ,感染后第 7～ 14 d心肌细胞凋亡百分率明显高于其余时间 (P<0 .0 0 1)。结论 :小鼠病毒性心肌炎中心肌损伤坏死与凋亡共存 ,其中异常的心肌细胞凋亡与病毒性心肌炎的发病过程有关     

肾上腺皮质激素对病毒性心肌炎小鼠免疫状态的调控作用

目的：研究病毒性心肌炎时应用肾上腺皮质激素治疗对机体免疫指标的调控作用。方法：随机将240只4周龄BALB／c小鼠等分为正常对照组、激素对照组、病毒对照组、早期激素治疗组、中期激素治疗组和晚期激素治疗组,每组40只。正常对照组每只小鼠腹腔接种0．1ml不含病毒的Eagle’s液,其他组每只小鼠均腹腔接种0．1ml 107．5TCID 50/ml的柯萨奇B3（CVB3）病毒液。正常及病毒对照组小鼠均予以生理盐水0．2ml灌胃,激素治疗组小鼠分别在感染病毒后不同时期给予泼尼松1mg／kg,灌胃给药10d。采用膜联蛋白V（Annexin V）联合碘化丙啶（PI）染色双参数技术,通过流式细胞术定量检测各组小鼠外周血、胸腺、脾脏淋巴细胞的凋亡,应用流式细胞仪自动细胞记数法测定外周血及脾脏T淋巴细胞亚群CD^3＋、CD^4＋、CD^8＋。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗心磷脂抗体（ACA）。结果：正常小鼠外周血、胸腺、脾脏有少量淋巴细胞凋亡,短期服用激素不增加淋巴细胞凋亡率;病毒性心肌炎小鼠淋巴细胞凋亡增多,应用激素治疗可诱导活化淋巴细胞凋亡．减少其对心肌细胞的浸润。与应用激素治疗的心肌炎小鼠相比,病毒性心肌炎小鼠外周血CD^3＋、CD^4＋、CD^8＋下降差异无显著性。正常小鼠抗心磷脂抗体阳性率较低,病毒性心肌炎小鼠ACA阳性率增加,早期及中期应用激素可降低ACA阳性率。结论：应用激素治疗病毒性心肌炎对细胞免疫功能无严重不良影响,并可明显抑制细胞毒T淋巴细胞对心肌的损害作用．降低自身免疫应答.     

抗KCl盐水可提取多肽抗体测定在动物模型柯萨奇病毒性心肌炎诊断中意义

从Ｂ组柯萨奇病毒（ＣｏｘＢ）性心肌炎小鼠之心肌组织中提取ＫＣＩ盐水可溶性蛋白质抗原，用于测定鼠血清中相应抗体，探讨其在病毒性心肌炎诊断中的意义。发现该抗体在感染ＣｏｘＢ伴心肌炎组鼠的阳性率远高于有ＣｏｘＢ感染而不伴有心肌炎组，揭示该抗体测定可能是一种很有前途的柯萨奇病毒性心肌炎实验诊断方法。     

病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡与外周血淋巴细胞凋亡的研究

目的:研究心肌炎小鼠柯萨奇B3(CVB3)病毒性心肌炎模型外周血淋巴细胞凋亡与心肌细胞凋亡的关系。方法:采用AnnexinV/PI双参数法在流式细胞仪上定量检测CVB3心肌炎小鼠外周血淋巴细胞凋亡及心肌细胞凋亡百分率。结果:CVB3感染所致心肌炎小鼠外周血淋巴细胞凋亡以及心肌细胞凋亡均显著高于正常对照小鼠(P<0.001),且两者呈显著正相关(r=0.80,P<0.01);外周血淋巴细胞及心肌细胞凋亡百分率与心肌病理积分亦呈明显正相关(r=0.72,P<0.01;r=0.85,P<0.01)。结论:病毒性心肌炎外周血淋巴细胞凋亡可以反映心肌细胞凋亡情况,而且两者均与心肌炎病理损害程度密切相关。     

抗心肌肌球蛋白抗体在慢性病毒性心肌炎小鼠中的表达及卡托普利、氧化苦参碱的干预效果

目的 观察抗心肌肌球蛋白抗体(AMA)在慢性病毒性心肌炎(VMC)小鼠中的表达,比较卡托普利和氧化苦参碱的干预效果.方法 以柯萨奇病毒B_3株(CVB_3)重复增量感染(第0、14、28天,剂量分别为0.20、0.25、0.30mL)BALB/c小鼠建立慢性VMC(n=60)模型,正常对照组(n=8)同期腹腔注射等体积生理盐水.42d将慢性VMC模型组存活小鼠随机分为慢性VMC对照组(n=8)、卡托普利干预组(n=8)及氧化苦参碱干预组(n=8),干预28d后,即实验第70天杀死各组小鼠.称取小鼠心脏质量,计算心脏与体质量比值;分别以苏木素-伊红(HE)、苦味酸天狼猩红行心肌组织及心肌胶原组织特异性染色,运用图像分析软件计算心肌组织中胶原容积积分(CVF,%);酶联免疫法(ELISA)检测实验小鼠血清中AMA的表达,以光密度值(OD值)>(x-)+2s为阳性组,<(x-)+2s为阴性组.结果 慢性VMC组小鼠在实验第70天心脏与体质量比值、CVF及血清中AMA OD值均较正常对照组增高(P均<0.01).卡托普利及氧化苦参碱干预后心脏与体质量比值、CVF较慢性VMC组降低(P均<0.01),血清中AMA OD值较慢性VMC组降低(P<0.05).AMA阳性组心脏与体质量比值、CVF及OD值均较阴性组增高(P均<0.01).结论 慢性VMC小鼠血清中AMA表达增高,卡托普利及氧化苦参碱可下调AMA的表达,抑制慢性VMC小鼠的心肌重构.     

抗心肌抗体在病毒性心肌炎诊断中的贡献

近年来病毒性心肌炎发病率有逐年增加的趋势。但由于缺乏特异性诊断指标,其诊断和鉴别诊断令许多心脏科医师困扰。研究证明,病毒性心肌炎患者中可测出多种抗心肌自身抗体。特异性抗心肌抗体是一类针对心肌某一特定抗原决定簇的自身免疫性抗体,具有器官特异性和疾病特异性。我们在临床研究中发现其参与了病毒性心肌炎中心肌自身免疫损伤的过程。本文论述抗心肌线粒体ADP／ATP载体蛋白抗体（ANT）、抗β1-受体抗体（β1）、抗胆碱能受体抗体（M2）、抗肌球蛋白重链抗体（MHC）四种抗心肌抗体对病毒性心肌炎诊断的贡献价值。     

CD28单克隆抗体对病毒性心肌炎小鼠的治疗作用

目的探讨CD28单克隆抗体（CD28 mAb）对柯萨奇病毒B3（CVB3）病毒性心肌炎（VMC）小鼠的死亡率、心肌病理改变及病毒滴度的影响。方法随机将106只BALB/c小鼠分为CD28 mAb组16只、病毒组40只、IgG组40只及正常对照组10只,腹腔注射半数组织感染量(TCID50 )为10-6/mL的柯萨奇B3病毒0.15?mL,正常对照组接种0.15?mL?的Eagle氏液。CD28 mAb组、IgG组接种病毒后6、72?h分别接种CD28 mAb(0.1?mg/kg)和IgG(0.1mg/kg)。于接种病毒后第7天处死所有小鼠,取心脏,在光镜下观察心肌病理变化,采用实时荧光定量PCR（RQ-PCR）检测心肌组织中CVB3mRNA的表达。结果CD28单克隆抗体组小鼠死亡率、心肌病理积分、心肌CVB3mRNA均低于病毒对照组(P均＜0.05)。结论CD28单克隆抗体可降低心肌病毒滴度,减轻VMC小鼠心肌炎症,降低VMC小鼠死亡率。     

小鼠病毒性心肌炎与血管内皮细胞凋亡的关系

柯萨奇Ｂ－３ｍ病毒可诱发ＢＡＬＢ／ｃ小鼠急性病毒性心肌炎，本实验通过ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔接种ＣＶＢ３ｍ，感染后８天ＶＭＣ检出率为９３．３３％，应用原位末端标记法及电镜检查发现：ＶＭＣ伴随有心脏血管内皮细胞及心肌细胞凋亡，其阳性率为７０．００％，实验结果提示：血管内皮细胞凋亡可能参与ＶＭＣ的发生与发展。     

病毒性心肌炎患者抗心磷脂抗体的测定

病毒性心肌炎患者抗心磷脂抗体的测定王继征，方秉华，曾昭瑞（枣庄矿务局枣庄医院，枣庄市２７７１００上海市第六医院）病毒性心肌炎是由柯萨奇病毒、埃可病毒、流感病毒等嗜心肌性病毒感染引起，以心肌间质性炎症为主要病变伴不同程度心肌细胞变性坏死的心肌炎。其发病...     

细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎的实验研究

目的 :探讨细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用。方法 :采用光镜、电镜、原位末端标记法 (TUNEL)观察病毒性心肌炎 (viralmyocarditis ,VM)鼠不同时期病理改变及细胞凋亡情况。结果 :小鼠感染后 7d即见炎性细胞浸润及心肌坏死 ,10～ 14d病变最严重 ,2 1d以后心肌炎性细胞浸润及心肌坏死逐渐减轻 ,代之心肌纤维化 ,对照组无病变。实验组 7、10、14、2 1、2 8d均可见到凋亡细胞 ,且感染后 7～ 14d细胞凋亡数明显高于 2 1～ 2 8d(P <0 .0 5 ) ,对照组未见凋亡细胞。结论 :细胞凋亡在病毒性心肌炎中起着重要作用 ,它参与了病毒性心肌炎的发生、发展。     

静注免疫球蛋白对病毒性心肌炎小鼠的疗效及机理研究

目的:探讨静注免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)对病毒性心肌炎的疗效及其机理。方法:320只5周龄雄性BALB/c小鼠随机分为8组,感染组腹腔接种柯萨奇B3病毒(CVB3)制成心肌炎动物模型,在接种病毒后3、7 d分别腹腔注射IVIG(500 mg/kg.d-1)5 d和10 d,流式细胞仪定量检测心肌细胞凋亡率和坏死率,与心肌病理组织学积分和病毒滴度进行相关分析,并与中药黄芪疗效对比。结果:静注免疫球蛋白治疗组小鼠心肌内病毒滴度、心肌病理积分和心肌细胞凋亡率与坏死率明显低于病毒对照组和黄芪治疗组,以早期(感染后3 d)长程(10 d)治疗组效果最好。结论:静注免疫球蛋白通过抑制柯萨奇B3病毒,降低心肌细胞凋亡率和坏死率对病毒性心肌炎发挥疗效,其疗效高于传统中药黄芪。     

干扰素和黄芪对心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的影响

方法：BALB/c小鼠腹腔接种半数组织感染量（TCID50）为108/ml的柯萨奇B3病毒0.1?ml。干扰素治疗组于接种病毒后24?h起腹腔注射α1b 干扰素104IU/g体重，1次/d，连用5?d。黄芪治疗组于接种病毒后24?h起灌喂黄芪颗粒30?mg/g体重，1次/d，共5?d。接种病毒后第7、14、21天分别处死小鼠，原位TUNEL法检测心肌细胞凋亡，ELISA法测定血清肿瘤坏死因子 α含量。结果：病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡百分率明显增高，血清肿瘤坏死因子 α含量增加，干扰素和黄芪治疗可降低心肌细胞凋亡百分率及血清肿瘤坏死因子 α含量。结论：α 干扰素和黄芪有抑制心肌细胞凋亡作用。     

肾上腺皮质激素对心肌炎小鼠肌钙蛋白Ⅰ的影响

目的:研究肾上腺皮质激素治疗病毒性心肌炎时血清肌钙蛋白I(cTnI)的变化。方法:对不同时期应用激素治疗的心肌炎小鼠采用化学发光法检测血清cTnI水平,并同正常对照组及病毒对照组比较,同时与心肌病理积分进行相关分析。结果:病毒性心肌炎小鼠血清cTnI显著升高,并与病理变化呈直线正相关(r=0.70)。病毒性心肌炎早期和中期使用肾上腺皮质激素可明显降低cTnI水平,中期使用肾上腺皮质激素疗效尤为明显。结论:中期应用激素治疗CVB3心肌炎小鼠可明显阻止炎细胞浸润心脏组织,降低血清cTnI水平,保护心肌细胞,控制心肌炎病情发展,改善预后。     

汉坦病毒感染BALB／c小鼠组织中特异性抗原及病毒RNA的检测

目的检测汉坦病毒感染BALB／c小鼠组织中特异性抗原及病毒RNA,建立汉坦病毒感染动物的评价体系。方法将1000LD50的汉坦病毒悬液经肌肉注射感染BALB／c小鼠,在感染后的第3天,分别取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等组织研磨后制成病毒悬液,以ELISA法和qRT—PCR法分别检测各组织中的汉坦病毒特异性抗原及病毒RNA。结果BALB／c小鼠感染汉坦病毒后短期内在脑和肝组织中可以检测到大量汉坦病毒特异性抗原以及病毒RNA,而心、脾、肺、肾组织中未检测到特异性抗原及病毒RNA。结论实验结果为建立汉坦病毒感染动物模型的评价体系提供了参考依据。     

祛毒养心冲剂对病毒性心肌炎的疗效及机制

目的探讨祛毒养心冲剂对病毒性心肌炎（VMC）的疗效及作用机制。方法将60只小鼠随机分为正常对照组、病毒组、药物组,每组20只。后两组小鼠每只腹腔注射柯萨奇病毒（CVB3）液,正常对照组腹腔注射不含病毒的Eagle′s液。药物组于接种病毒后24h灌胃给予祛毒养心冲剂。21d后,处死所有小鼠并取其心脏。进行心肌病理检查,采用实时荧光定量PCR法和免疫组化技术检测心肌组织中白细胞介素-6（IL-6）mRAN和蛋白的表达。结果与病毒组相比,应用祛毒养心冲剂治疗后,小鼠心肌组织病变积分显著下降（P＜0.05）,心肌组织中IL-6的表达明显降低（P＜0.05）。结论祛毒养心冲剂对VMC具有明显治疗作用,其作用机制是通过抑制IL-6在心脏中的表达而实现的。     

尘螨Ⅱ类改组变应原对哮喘小鼠免疫治疗的效果

目的 探讨以改组尘螨Ⅱ类变应原基因Der f2和Der p2后表达的蛋白为变应原,对小鼠哮喘模型的特异性免疫治疗效果。方法 随机将160只清洁级BALB/c小鼠分为PBS组（阴性对照组）,Der f2和Der p2免疫治疗组（阳性对照组）,哮喘组,改组变应原免疫治疗M01、M03、M08、M10蛋白治疗组。用尘螨提取液于0、7、14d腹腔注射致敏激发BALB/c小鼠,第21天雾化吸入激发,连续7d,其中各免疫治疗组于第25～27天雾化前30min分别用Der f2、Der p2和改组变应原进行特异性免疫治疗,PBS组则用PBS进行腹腔注射和雾化吸入。最后1次雾化24h后,引颈处死。分别观察肺组织病理变化、支气管肺泡灌洗液（BLAF）白细胞计数,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定BLAF和脾细胞培养上清液细胞因子IL-4、IL-17和IFN γ的含量及血清中特异性IgG1、IgE抗体水平变化。结果 与哮喘组比较,改组变应原免疫治疗组和阳性治疗组肺部炎症显著减轻, BALF中的总细胞数及嗜酸性粒细胞数,血清中抗原特异性IgG1、IgE抗体均显著降低;免疫治疗组（包括阳性对照）的BALF和脾细胞培养上清液中的细胞因子IL-4、IL-17均明显降低,IFN-γ含量显著升高。结论 通过基因改组获得的尘螨Ⅱ类变应原改组疫苗免疫治疗小鼠哮喘,可有效降低尘螨引起的小鼠肺部炎症。     

甘草酸对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能的影响

目的:探讨甘草酸对免疫诱导再生障碍性贫血(再障)小鼠骨髓造血功能的影响,寻求治疗免疫诱导再障的方法。方法:BALB/c小鼠72只,适应性喂养1周后,随机分为实验组(64只)及正常对照组(8只)。实验组小鼠首先制造再障模型。将制模后小鼠再分为模型对照组(40只)及甘草酸组(24只)。将甘草酸组再分为低、中、高剂量组,每组8只,低、中、高剂量组小鼠每天经灌胃分别给予10、20、30mg/(kg.d)甘草酸,连续14 d,于第15天脱臼处死小鼠,分别检测血象、骨髓单个核细胞(BMNC)、CFU-GM、BFU-E,用原位末端标记法(TUNEL)测定胸腺淋巴结混合细胞、骨髓单个核细胞、外周血单个核细胞凋亡率。其余40只模型对照组小鼠每天经灌胃给予等体积生理盐水,并分别于第3、5、7、10、15天各处死一批次小鼠。8只正常对照组小鼠只给予等体积生理盐水。检测指标同上。结果:甘草酸组WBC、Hb、BMNC、CFU-GM、BFU-E明显高于模型对照组(P<0.05,P<0.01),且具有剂量-效应关系。模型对照组骨髓单个核细胞凋亡率、胸腺淋巴结混合细胞凋亡率、外周血单个核细胞凋亡率均高于正常对照组(P<0.01)。甘草酸组骨髓单个核细胞凋亡率高于正常对照组(P<0.01)而低于模型对照组(P<0.01),外周血单个核细胞凋亡率高于正常对照组及模型对照组(P<0.05,P<0.01),胸腺淋巴结混合细胞凋亡率高于正常对照组(P<0.01)。结论:甘草酸通过促进成熟淋巴细胞凋亡而有助于免疫诱导再障小鼠骨髓造血功能的恢复。