Akt2-Bad信号通路参与NSCLC凋亡

【摘要】目的 探讨Akt2/Bad信号通路在非小细胞肺癌（NSCLC）凋亡中的作用机制。方法 构建稳定过表达Bad同时稳定干扰Akt2的双病毒载体,将未感染慢病毒载体的H1299、H292、SPC A1、H460及SK MES 1细胞为NSCLC组,阴性对照病毒转染NSCLC细胞为NC组;稳定干扰Akt2的NSCLC细胞为shAkt2组;稳定过表达Bad的NSCLC细胞为Bad组;稳定干扰Akt2表达的同时稳定过表达Bad基因的NSCLC细胞为shAkt2+Bad组。通过体外实验,观察共感染组细胞凋亡及侵袭能力的变化。应用Western blot技术检测各组NSCLC细胞株Bad、Akt2以及凋亡相关信号蛋白BCL 2、BCL XL、caspase 9、Cyto c蛋白的表达水平。体内构建H1299及SPC A1荷瘤裸鼠模型,观测瘤体重量,利用TUNEL染色比较Akt2/Bad信号通路对肺癌细胞凋亡的作用。 结果 与NSCLC组比较,shAkt2+Bad组细胞和移植瘤体中Akt2蛋白水平明显减少(P＜005),Bad蛋白水平显著增加(P＜005)。shAkt2+Bad组细胞凋亡率明显高于shAkt2组及Bad组(P＜005), H1299/SPC A1体内荷瘤实验表明, shAkt2+Bad组瘤体重量明显低于Bad组、NSCLC组及NC组(均P＜005),细胞凋亡率均高于其他3组(均P＜005)。shAkt2和shAkt2+Bad组caspase 9表达显著降低;Bad组、shAkt2组和shAkt2+Bad组cyto C表达显著增加,而BCL 2、BCL XL在各组细胞中表达比较差异无统计学意义（P＞005）。结论 Akt2 Bad信号通路参与NSCLC的凋亡。     

Akt信号通路与缺血性脑卒中

本文对Akt的生物学以及在缺血性脑卒中的病理生理作用进行了讨论,并介绍了最新的相关研究进展。Akt在脑缺血再灌损伤中呈现高磷酸化表达,对脑组织损伤有保护作用。最新研究提示,Akt具有应激反应的特征,其对脑保护的作用与其它通路的协同启动有关。对Akt的深入研究将有助于对其在脑卒中作用的深入理解,有助于相应药物的研发。     

外源性H_2S通过PI3K/Akt信号通路促进大肠癌细胞的凋亡

目的探讨外源性H_2S对大肠癌细胞增殖及凋亡的影响并研究其机制。方法用NaHS作为H_2S的供体,大肠癌LOVO细胞株作为细胞模型,采用MTT比色法法及流式细胞仪分别检测大肠癌细胞增殖抑制率和凋亡情况,Western blot检测Akt蛋白的表达情况。结果 0.1及1.0m MNaHS时间和浓度依耐性的增加大肠癌细胞的增殖抑制率和凋亡,并能下调Akt蛋白的表达。而Akt激动剂IGF-1能逆转Na HS诱导大肠癌细胞增殖抑制率和凋亡的增加。结论 H_2S通过抑制Akt蛋白的表达,下调PI3K/Akt信号通路,从而抑制大肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对食管癌细胞EC109中FR和hnRNP-E1表达的影响

目的研究PI3K/Akt信号通路靶向抑制剂LY294002对人食管癌细胞EC109中叶酸受体(FR)和核内不均一核糖核蛋白E1(hnRNP-E1)表达的影响。方法不同浓度LY294002作用于人食管癌细胞株EC109不同时间段后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,免疫印迹法(Westorn blot)检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(P-Akt)、FR和hnRNP-E1的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关趋势,P-Akt和FR蛋白表达明显下降,hnRNP-E1蛋白表达无显著变化。结论阻断PI3K/Akt信号通路可以改变人食管癌细胞EC109中FR的表达,并明显抑制细胞增殖,其机制可能与抑制Akt磷酸化有关。     

下调PI3K/Akt信号通路对抑制喉癌细胞生长的影响

目的 探讨钾通道阻断剂四乙胺(TEA)通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对人喉癌上皮细胞(Hep-2)增殖与凋亡的影响.方法 将TEA作用于Hep-2,用噻唑蓝(MTT)法测定Hep-2细胞活性,计算出TEA对Hep-2的增殖抑制率;采用Hoechest33258染色检测细胞凋亡,用流式细胞仪(FCM)法测定Hep-2凋亡率.结果 5、10、20 mmol/L TEA接种后,Hep-2细胞增殖抑制率分别达到12.573%、31.385%和56.132%,Hep-2作用96 h后细胞凋亡率分别为(41.64±2.67)%、(58.76±4.32)%和(72.65±6.54)%,TEA处理组抑制率和凋亡率都高于未用TEA处理的对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 TEA可抑制Hep-2的增殖及体内生长,促进Hep-2的凋亡.     

Akt/mTOR信号通路与恶性肿瘤

目前,信号传导系统的缺陷和异常活化与肿瘤发生、发展及预后的关系已成为肿瘤分子生物学的研究热点,同时通过千预信号传导途径治疗肿瘤也成为生物治疗的新兴领域。Akt/mTOR信号通路是关键的细胞增殖相关信号通道之一,其活性的明显增强与许多恶性肿瘤的发生、发展密切相关,因此抑制该信号通路成为肿瘤靶向治疗的热点。     

川芎嗪通过Akt信号通路影响前列腺癌PC3细胞的增殖和凋亡

目的 研究盐酸川芎嗪对前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mg/mL盐酸川芎嗪处理雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞,MTT法检测各组细胞的增殖能力,荧光显微镜观察细胞核形态学改变,Western blot检测Akt以及下游相关蛋白mTOR、p70S6蛋白及蛋白磷酸化的表达,以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 盐酸川芎嗪能有效抑制前列腺癌PC3细胞增殖,且显示浓度时间依赖性(P＜0.05).1.5、2.5 mg/mL的盐酸川芎嗪能够降低Akt和p-Akt的表达,进而下调mTOR、p-mTOR、p70S6及p-p70S6的表达(P＜0.05);同时下调Bcl-2、上调Bax蛋白的表达(P＜0.05).结论 Akt及其下游信号通路介导了盐酸川芎嗪抑制前列腺癌PC3细胞增殖及促凋亡作用.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与顺铂联用激活线粒体信号通路诱导口腔鳞癌细胞的凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACIs)与顺铂联合应用对口腔鳞癌细胞的凋亡诱导作用及相关分子机制。方法 (1)采用MTS法首先检测不同浓度的SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)和顺铂单独作用于口腔鳞癌细胞后,对其生长增生的影响,获得口腔鳞癌细胞对两种药物单独使用的剂量反应。(2)结合前面所得结果,采用流式细胞术及TUNEL分别检测低剂量SAHA(2μmol/L)及顺铂(4μg/ml)单独和联合用药后,对口腔鳞癌细胞的凋亡诱导情况。(3)采用western blotting的方法观察单独及联合用药情况下Tca8113及κB两株口腔鳞癌细胞线粒体和胞质内细胞色素C(cyto-chrome C)的表达变化。结果随单独用药剂量的增加,两株口腔鳞癌细胞都对SAHA及顺铂呈现出较好的敏感性。低剂量SA-HA用药组Tca8113及κB的凋亡率分别为0.9%和3.9%,低剂量顺铂组Tca8113及κB的凋亡率分别为17.4%和12.6%,而在联合用药组凋亡率可以达到34.6%和40.4%;较低剂量SAHA及顺铂的单独用药组,联合用药组TUNEL染色阳性的细胞明显增多,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。联合应用低剂量的SAHA及顺铂,可以诱导cytochrome C从线粒体中释放到胞质。结论与单独使用两种药物相比较,低剂量的SAHA与顺铂的联合用药方式能诱导口腔鳞癌细胞通过线粒体相关通路发生凋亡。     

SH2B1对肝癌细胞增殖、凋亡及Akt/mTOR通路的影响

目的观察Src同源性2b衔接蛋白1(SH2B1)在肝癌细胞中表达情况,以及对肝癌细胞增殖、凋亡及蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/m TOR)信号通路的影响。方法通过荧光实时定量聚合酶链反应法检测人正常肝细胞株QSG-7701及肝癌细胞株Hep G2中SH2B1 mRNA的表达情况,采用免疫印迹法(Western blot法)检测SH2B1蛋白表达,采用短发夹RNA(shRNA)慢病毒干扰技术构建沉默SH2B1基因的人肝癌细胞Hep G2稳定转染细胞株,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测Hep G2细胞增殖能力,采用磷脂酰丝氨酸蛋白抗体/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染流式细胞术检测Hep G2细胞凋亡,采用Western blot法测定凋亡细胞相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3以及Akt/m TOR通路蛋白表达变化。结果与正常细胞相比,肝癌细胞中SH2B1 mRNA、SH2B1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05);与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组SH2B1 mRNA、SH2B1蛋白表达显著降低(P <0. 05); CCK-8试验显示,与NC shRNA组和空白组相比,SH2B1 shRNA组转染48 h后OD值显著降低(P <0. 05);与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组细胞凋亡率显著升高(P <0. 05);与空白组、NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组细胞中Bax、caspase-3蛋白水平显著上升(P <0. 05),Bcl-2蛋白水平下降(P <0. 05);与空白组和NC shRNA组相比,SH2B1 shRNA组p-AKT、m TOR蛋白水平明显降低(P <0. 05)。结论 SH2B1在肝癌细胞株Hep G2中高表达,沉默SH2B1表达可能通过抑制Akt/m TOR信号通路活化,抑制肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

镉诱导肾细胞凋亡及其对P13K／Akt和ERK1／2信号通路的影响

目的镉（cd）诱导猪肾近曲小管上皮细胞（LLC-PK）凋亡及其对胞内蛋白激酶B（P13K／Akt）和胞外信号调节激酶（ERKI／2）表达的影响。方法应用不同浓度Cd（0、10、20、40、50μmol／L）作用LLC-PK：12h和40μmol／Lcd作用LLC-PK。不同时间（0、3、6、12、24h）,采用蛋白免疫印迹法检测细胞内蛋白激酶B（P13K／Akt）和胞外信号调节激酶（ERKl／2）及其磷酸化蛋白表达水平。结果镉可上调P13K／Akt和ERKl／2的表达：当加入N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理后对镉引起的ERKl／2上调具有抑制作用,但对镉引起的P13K／Akt上调的抑制作用不明显。结论镉诱导肾细胞凋亡可能与活化P13K／Akt和ERKI／2通路有关。NAC拮抗镉性肾细胞凋亡的机制可能与抑制镉引起的ERKl／2表达上调有关。     

PI3K/Akt信号通路介导的细胞凋亡机制研究进展

PI3K/Akt信号通路是参与细胞增殖调控的重要 通路之一[1],既有抗凋亡作用又有促凋亡作用 ,以抗 细胞凋亡为主。研究证实AKT的活化与许多人类疾 病如癌症、白血病、糖尿病、精神分裂等密切相关[2]。 现在就PI3K/Akt信号通路对凋亡作用综述如下。     

抑制PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞转移和侵袭影响的研究

目的:探讨PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞转移和侵袭的影响.方法:选用PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002体外作用于胃癌细胞株SGC-7901,Western blot检查总Akt和p-Aktser473蛋白表达,细胞粘附实验观察细胞与基质的粘附力,Transwell法检查细胞侵袭能力,RT-PCR及免疫细...     

JNK信号通路与细胞凋亡

肿瘤耐药的分子机制很复杂,包括染色体和基因表达的异常,细胞内药物蓄积减少,DNA损伤修复功能增强,细胞解毒功能增强,凋亡信号传导异常、凋亡抑制因子表达异常等。其中凋亡及生存相关的细胞信号通路是目前研究的热点。丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated-protein kinase,MAPK）信号通路是其中一条引人注目的通路。本文综述了MAPK信号通路中的一条重要通路c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinases,JNK）信号通路,JNK信号通路与细胞凋亡的关系,以及其与肿瘤耐药相关的研究。     

沉默CENP－N基因表达对胃癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探究着丝粒蛋白-N(CENP-N)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能机制。方法 利用基因表达谱交互式分析网站(GEPIA)中的癌症基因组图谱(TCGA)数据分析CENP-N基因在503例胃癌组织和125例癌旁组织中的表达水平;以收集的143例胃癌患者癌组织、癌旁组织以及人胃癌细胞株SNU-1、HS-746T、AGS、MGC-803及人胃黏膜细胞GES1为研究对象,qRT-PCR法检测CENP-N mRNA水平,Western blot检测CENP-N蛋白表达;体外培养胃癌SNU-1细胞株,分为空白对照组、siRNA-NC组(阴性对照组)、CENP-N-siRNA组(沉默CENP-N表达组)、通路激活剂组(CENP-N-siRNA+740Y-P组)。qRT-PCR法检测CENP-N mRNA水平;CCK-8法、流式细胞仪分别检测细胞增殖、凋亡情况;免疫印迹法检测细胞增殖相关核抗原(PCNA)、凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]及磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路相关蛋白表达情况。结果 ...     

毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞凋亡和 PI3K/Akt 信号通路的影响

目的：探讨毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞增殖、凋亡及 PI3K／Akt 信号通路的影响。方法采用0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮处理膀胱癌 T24、T739细胞,采用 MTT 法检测此两种细胞接受上述浓度处理0、24、48和72 h 后的细胞增殖情况,流式细胞术检测此两种细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡情况,Real －time PCR 检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Bax 的 mRNA 表达水平,Western blot 法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Akt 及其磷酸化形式 p －Akt 的蛋白水平和 Bax 蛋白水平。结果毛蕊异黄酮抑制膀胱癌 T24、T739细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性（P ＜0.05）,对 T24细胞的抑制增殖效应比 T739明显（P ＜0.05）;0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮作用48 h 后 T24细胞凋亡率分别为（2.89±1.11）％、（4.11±1.05）％、（16.92±2.67）％、（27.54±2.43）％,而 T739细胞凋亡率分别为（3.05±1.42）％、（3.99±1.52）％、（13.01±2.68）％、（19.99±3.31）％,与0μmol／L 浓度处理比较,60、120μmol／L 处理后明显升高,差异有统计学意义（P ＜0.05）,而且毛蕊异黄酮对 T24细胞的促凋亡效应比 T739细胞明显（P ＜0.05）;Ho－echst 33258荧光染色法显示随药物浓度增高,T24细胞凋亡明显增多;Real －time PCR 结果显示 T24细胞中 Bax的 mRNA 表达水平在60、120μmol ／L 处理后均明显高于0μmol／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）。 Western blot 法检测的 Bax 蛋白表达水平则在30、60、120μmol ／L 处理后高于0μmol ／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）,p －Akt／Akt 值则降低（P ＜0.05）。结论毛蕊异黄酮能抑制膀胱癌 T24细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能通过抑制PI3K／Akt 通路激活进而促进 Bax 表达实现。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对胃癌细胞SGC7901中Skp2和NAG-1表达的影响及其效应

目的 研究PI3K/Akt信号转导通路靶向抑制剂LY294002对胃癌细胞SGC7901中S期激酶相关蛋白2(Skp2)和非甾体抗炎药诱导基因-1(NAG-1)表达的影响.方法 将LY294002作用于胃癌细胞株SGC7901,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术AnnexinV2FITC/PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NAG-1、Skp2 mRNA的表达情况,Western blot检测p-Akt(Ser473)和总Akt(t-Akt)的表达情况.结果 LY294002可明显抑制SGC7901的生长,呈时间-剂量依赖性,并出现典型的细胞形态学改变;10、30、50 μmol/L的LY294002作用12 h后细胞凋亡率分别为(12.7±0.42)%、(36.5±0.45)%和(64.1±0.79)%,显著高于空白对照组的(2.3±0.36)%,差异均有统计学意义(P<0.01);LY294002可下调p-Akt的蛋白表达,而t-Akt的表达未发生改变;LY294002可上调NAG-1 mRNA的表达,并下调Skp2 mRNA的表达.结论 阻断PI3K/Akt信号转导通路可改变胃癌细胞株SGC7901中Skp2和NAG-1的表达,并能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制Akt磷酸化及调控NAG-1、Skp2 mRNA表达水平有关.     

靶向抑制PI3K／Akt信号通路对Smac基因表达与胃癌细胞凋亡的影响

目的 研究LY294002靶向抑制PI3K/Akt信号通路对线粒体激活因子(Smac)基因的表达及胃癌细胞凋亡的影响.方法将PI3K/Akt信号通路的靶向抑制剂LY294002加入胃癌细胞株SGC7901,四甲基偶氮唑蓝法测定细胞增殖,DNA ladder检测细胞凋亡,原位细胞凋亡检测技术检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,免疫组织化学检测Smac的表达.结果LY294002致细胞存活率下降,且与时间、浓度呈正相关.在DNA电泳图上,对照组呈规则的基因组断裂条带,其亮度与药物作用时间呈正相关.流式细胞结果显示LY2940002处理后在细胞周期G1期前出现明显的凋亡峰,作用12 h时,细胞凋亡达58.7%.Smac在胃癌细胞中仅在胞质中呈阴性或弱阳性表达;LY294002作用后,细胞质中出现棕黄色颗粒状浓染.结论PI3K/Akt信号通路、Smac基因与胃癌细胞的凋亡关系密切.     

Wnt/β-catenin信号通路中Wnt基因对肾癌细胞的生物学影响

目的探讨Wnt基因对肾透明细胞癌Caki-2细胞的生物学影响。方法细胞分3组:Caki-2组(空白对照)、shRNA+Wnt+Caki-2组(慢病毒沉默Caki-2细胞中的Wnt基因)、空载体组(实验对照),CCK-8法观察不同时间各组细胞的增殖情况;透射电镜观察沉默Wnt基因对Caki-2细胞凋亡的影响;Transwell小室方法检测各组细胞侵袭能力的变化;实时PCR观察Wnt/β-catenin信号通路中下游基因的变化和凋亡相关基因的变化。结果 shRNA+Wnt+Caki-2组出现了细胞增殖抑制,其增殖能力与其他2组相比差异有统计学意义(P<0.05)。sh RNA+Wnt+Caki-2组表现出明显的细胞凋亡变化,出现凋亡小体。侵袭实验显示,shRNA+Wnt+Caki-2组迁出的细胞数明显低于其他2组(P<0.05);shRNA+Wnt+Caki-2组中Wnt mRNA、β-catenin mRNA和Bcl-2 mRNA的表达水平均低于其他2组(P<0.05)。结论慢病毒沉默Wnt基因,影响了肾透明细胞癌Caki-2细胞的增殖,促进了细胞的凋亡,抑制了Caki-2细胞的侵袭。