EV71临床分离株BALB/c小鼠致病特点分析

目的 将肠道病毒71型(EV71)临床分离株接种小鼠观察其致病特点.方法 将6株EV71临床株分别腹腔接种1日龄BALB/c小鼠,观察小鼠表现以及脑、肺脏、骨骼肌组织病理变化;采用免疫组化和RT-PCR方法,检测组织中病毒抗原和基因片段.结果 临床分离的6株EV71(C4亚型)接种1日龄小鼠均出现病症,其中JN200804株实验小鼠症状较重,小鼠脑组织和骨骼肌可观察到细胞空泡变性、淋巴细胞浸润等病理变化;JN200804株感染组小鼠脑内检测到EV71抗原和基因片段.结论 6株EV71临床株均可感染小鼠并致病,重者出现松弛型麻痹并死亡,轻者出现震颤、麻痹但可恢复至正常.     

EV71感染SK-N-SH细胞相关基因的鉴定

目的:鉴定肠道病毒EV71型感染SK-N-SH细胞相关基因的改变。方法:EV71感染SK-N-SH细胞后,收集细胞做基因微阵列分析,并对差异表达的基因进行Real-time PCR和ELISA鉴定。结果:共有86个基因mRNA的转录表达改变。上调表达的基因涉及细胞因子、趋化因子、泛素蛋白以及Toll样受体信号途径、P53信号途径、凋亡途径、白细胞穿越内皮细胞、MASP信号途径和Jak-STAT信号途径等相关基因。Real-time PCR和ELISA验证了差异显著基因的高表达。结论:本研究结果提示EV71感染后的高致死率可能与一系列释放细胞因子和趋化因子的免疫反应有关,对更好地理解感染EV71病毒后机体的免疫反应提供了参考,并提供了阻断和控制EV71感染潜在的治疗策略。     

子宫肌瘤致病相关基因的筛选与克隆

【目的】 研究子宫肌瘤与正常子宫肌组织中的基因表达差异,筛选及克隆子宫肌瘤的致病相关基因。【方法】 应用荧光标记的mRNA差异显示技术,比较11例子宫肌瘤及其正常子宫肌组织基因表达的差异,对获得差异片段进行克隆、测序及同源性分析,并对其中5条差异片段在子宫肌瘤及正常子宫肌组织中的表达情况进行RT-PCR分析。【结果】 差异片段NO.3,5,11,12在子宫肌瘤正常及异常组织中的表达均存在差异。其中NO.3差异片段在8例子宫肌瘤组织中有表达,而相应的正常组织中仅2例有表达。NO.5,11,12差异片段在子宫肌瘤中的表达水平高于正常子宫肌组织中的表达水平。【结论】 在子宫肌瘤的发生和发展过程中存在多个基因的表达异常,其中ulap8基因有可能在子宫肌瘤组织中呈特异性的表达,ulap14,ulap25,ulap26基因在子宫肌瘤组织中存在表达差异,推测这些基因有可能与子宫肌瘤的发病有关。     

子宫肌瘤致病相关基因的筛选与克隆

【目的】研究子宫肌瘤与正常子宫肌组织中的基因表达差异，筛选及克隆子宫肌瘤的致病相关基因。【方法】应用荧光标记的mRNA差异显示技术，比较11例子宫肌瘤及其正常子宫肌组织基因表达的差异．对获得差异片段进行克隆、测序及同源性分析，并对其中5条差异片段在子宫肌瘤及正常子宫肌组织中的表达情况进行RT—PCR分析。【结果】差异片段NO．3，5，11，12在子宫肌瘤正常及异常组织中的表达均存在差异。其中NO.3差异片段在8例子宫肌瘤组织中有表达，而相应的正常组织中仅2例有表达。NO．5，11，12差异片段在子宫肌瘤中的表达水平高于正常子宫肌组织中的表达水平。【结论】在子宫肌瘤的发生和发展过程中存在多个基因的表达异常，其中ulap8基因有可能在子宫肌瘤组织中呈特异性的表达，ulapl4，ulap25，ulap26基因在子宫肌瘤组织中存在表达差异，推测这些基因有可能与子宫肌瘤的发病有关。     

大鼠自发性高血压致病相关基因的初步筛选

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压大鼠(WKY)肠系膜动脉和肾脏组织中基因表达的差异.方法:提取成年SHR和WKY的二级肠系膜动脉和肾脏总RNA,利用高通量RNA阵列技术(RNA array)检测SHR和WKY二级肠系膜动脉和肾脏组织基因表达水平不同的基因,再用RT-PCR证实部分基因表达的改变.结果:芯片筛选出38条基因,其中上调基因19条,下调基因19条.经RT-PCR验证胰岛素样生长因子结合蛋白5和原肌凝蛋白6基因上调,锌指蛋白10和硬脂酰辅酶去饱和酶1基因下调.结论:筛选出的差异基因可能是高血压的相关基因,深入研究筛选出的相关基因及其功能,将为进一步探讨高血压病相关的致病基因打下良好的基础.     

肠道病毒71型（EV71）对ICR小鼠的感染

目的 研究肠道病毒71型经不同途径感染不同日龄ICR小鼠后的感染状况,了解肠道病毒71型的感染特点,为了解EV71小鼠感染机制和模型制备提供实验信息和技术支撑.方法 分别通过口腔途径、颅腔途径、肌肉途径及腹腔途径感染1日龄、7日龄及3 ～ 4周龄SPF级ICR小鼠,定期安乐动物,采集各器官组织进行病原学诊断,确定EV71病毒感染情况;同时建立一步RT-PCR、病毒分离、IFA及IEA等方法.结果 经腹腔途径感染成年鼠出现竖毛、弓背、消瘦症状,其他各途径感染小鼠感染后未见竖毛、弓背、觅食减少、体重减轻、精神呆滞及神经系统症状.颅腔注射3 ～ 4周龄ICR小鼠能在脑组织检测到病毒RNA,腹腔注射和肌肉注射1日龄乳鼠能在肌肉组织和肠道检测到病毒RNA,其中,肌肉组织病毒分离可检测到活病毒.本研究同时建立了分子生物学、血清学方法,为今后研究其它适合EV71的动物模型奠定了基础.结论 临床分离的EV71毒株通过口腔接种、颅腔、肌肉、腹腔注射途径感染1日龄、7日龄及3 ～ 4周龄SPF级ICR小鼠的疾病程度和病毒检出不同,ICR乳鼠及成年鼠可作为该病毒感染机制、病毒体内分布等基础研究,但用作EV71动物模型应用,感染程度尚不十分理想.     

EV71相关手足口病合并肺水肿的体液免疫作用

目的探讨体液免疫机制在EV71相关手足口病合并肺水肿中的作用.方法将90例经鉴定为EV71感染患儿分为脑炎合并肺水肿组8例,单纯脑炎组30例,剩余52例为无并发症组.采用免疫比浊法,对90例EV71感染引起的手足口病患儿血清免疫球蛋白(IgG、IgA及IgM)及补体C3、C4含量进行检测.结果脑炎合并肺水肿组及单纯脑炎组患儿血清IgG的平均含量分别为(10.99±1.67)g/L和(8.03±1.27) g/L,差异无统计学意义;但与无并发症组的(5.63±0.12)g/L比较,明显升高,差异有统计学意义(F=6.287,P<0.05).患儿血清IgA及IgM含量三组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).与其他两组相比,脑炎合并肺水肿组患儿血清C3、C4平均含量明显降低,差异有统计学意义(F=3.715,P=0.029).结论在EV71引起的手足口病合并肺水肿的病程中体液免疫反应可能并不参与.     

白细胞介素6在EV71相关手足口病中的作用

肠道病毒71型(EV71)是导致婴幼儿手足口病的主要病原体,EV71感染可以导致重症手足口病和严重的神经系统并发症,脑干脑炎、神经源性肺水肿是EV71感染后最严重的并发症,也是导致死亡的主要原因,全身炎症反应综合征被认为与感染者病情危重相关,大量病毒诱导的炎性因子可能是EV71感染的致病机制。静脉给予人免疫球蛋白可以起到调节免疫反应的作用,并改善EV71导致的肺水肿患者的预后。其中白细胞介素6(IL-6)在EV71感染者体内中浓度水平升高,而在动物模型中给予抗IL-6治疗可以缓解症状,改善动物预后。     

EV71相关手足口病并发肺水肿血清IgM水平的变化

目的探讨EV71相关手足口病并发肺水肿病儿血清IgM水平的变化及其意义。方法将90例EV71感染病儿分为手足口病并发肺水肿组(并发症组)38例,手足口病无并发症组(无并发症组)52例,分别检测入院时、治疗2～3 d及治疗好转时血清IgM水平,以及入院时血清IgGI、gA及补体C3、C4含量,并以健康查体儿童28例作为对照组。结果入院时手足口病组血清IgM水平高于对照组,并发症组高于无并发症组,差异有显著性(F=14.967,q=7.917、5.030,P<0.05);各组之间IgG与IgA差异无显著性(P>0.05);手足口病病儿血清C3及C4含量均明显低于对照组(F=46.079、62.794,q=3.735～14.233,P<0.05)。不同时间手足口病无并发症组病儿血清IgM水平差异无显著性(F=0.068,P>0.05);并发症组病儿治疗2～3 d后IgM水平较入院时明显升高,治疗好转时明显回落,差异有显著性(F=9.189,q=2.802、2.709,P<0.05)。结论血清IgM水平持续升高可能是手足口病并发肺水肿重要的血清学指标之一,其血清水平可以用于判断病情的变化。     

常染色体显性遗传视网膜色素变性致病基因Peripherin/RDS的突变筛选

目的：了解中国视网膜色素变性患者（rtinitis pigmentosa,RP)中peripherin/RDS基因的突变谱及突变率。方法：应用聚合酶链-异源双链-单链构象多态性（polymerase chain reaction heteroduplex-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)及DNA序列分析技术对收集的15个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系和55例散发视网膜色素变性病人peripherin/RDS基因的第一、二外显子进行检测。结果：15个家系及55例散发病人未检测到peripherin/RDS基因突变。结论：本研究所检测的视网膜色素变性病人与RDS基因无关。显示视网膜色素变性的遗传异质性。     

表达谱基因芯片筛选大隐静脉曲张致病相关基因的初步研究

目的:运用基因芯片技术研究曲张大隐静脉基因表达谱的变化.方法:选取原发性大隐静脉曲张病人隐-股交界瓣膜区静脉6条,取6条正常静脉作对照.提取血管组织总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,应用含有4096种人类基因cDNA的表达谱芯片进行差异表达谱分析.结果:在原发性大隐静脉曲张的基因表达谱中差异表达基因共有168条,上调基因96条,下调基因72条,共存性差异表达基因39条,其中上调基因28条,下调基因11条.差异表达基因中有细胞凋亡相关基因、原癌基因和抑癌基因、细胞信号和传递蛋白基因等多种基因.这些基因可能与原发性大隐静脉曲张的发病机制有关.结论:采用基因芯片技术筛选大隐静脉曲张的致病相关基因,可能为其病因和发病机制的研究提供新思路.     

遗传性肾病综合征候选致病基因筛选策略

部分遗传性肾病综合征(NS)与编码足细胞蛋白的单基因突变有关,目前,仍有80%的遗传性NS致病基因不明。大家系单基因遗传病筛选候选致病基因首选定位克隆,而小家系候选致病基因筛选优先选择外显子组测序。对致病基因不明的遗传性NS小家系核心成员进行外显子组测序,挑选出非同义、罕见、位于保守区域、软件预测有致病性、基因型与表型共分离的变异,携带该变异的基因即为候选致病基因。     

肠道病毒71型诱发的重症手足口病患儿中致病基因表达筛选

目的:筛选肠道病毒71型诱发的重症手足口病的相关标志物.方法:酶联免疫吸附实验检测重症手足口病患儿外周血中相关细胞因子的表达水平,RNA-Seq检测重症手足口病患儿外周血中单个核细胞的差异基因,Real-time PCR方法验证差异基因的表达情况.结果:重症手足口患儿外周血中细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4和I...     

NJS小鼠与其亲本小鼠遗传多样性的RAPD分析

目的分析NJS及其亲本小鼠的遗传结构.方法筛选出5条随机引物对NJS及其亲本小鼠的遗传结构进行RAPD分析,并对NJS小鼠个体之间的基因组DNA进行相似性分析.结果两种小鼠均有相同的扩增片段且产生了各自的特异性条带;NJS小鼠不同个体间拥有的RAPD条带也具有差异,但拥有相同条带的个体小鼠比率较高.该群体小鼠的相似系数(F)为0.927(0.880～0.980).结论 RAPD分析获得的多态性可用于NJS与其亲本小鼠之间的遗传分析;而且NJS小鼠个体间具有较好的遗传一致性和遗传稳定性,其群体分化程度处在一个较低的水平.     

CD4+T细胞减低在EV71感染重症手足口病发生中的致病作用

目的 EV71感染不同手足口病(HFMD)患者外周血CD4+T淋巴细胞数量变化与患者年龄及病情严重程度之间的关系。方法收集2014年3月至7月间昆明市儿童医院感染科确诊的儿童HFMD病例外周血标本138例,其中普通型33例,重型45例,危重型60例。患者年龄均处于9月～5岁。采用流式细胞术对EV71感染的不同年龄段、不同病情HFMD儿童外周血CD4+T淋巴细胞表达变化进行检测。结果与正常健康儿童CD4+T细胞参考值相比,不同年龄段、普通型、重型以及危重型HFMD患者外周血CD4+T淋巴细胞亚群所占百分比均明显降低;其中2～5岁重型、危重型患者减低更明显;且该年龄段的普通型与重型、普通型与危重型手足口病患者间CD4+T细胞表达差异均具有统计学意义(P <0.05)。此外,普通型、重型HFMD患者CD4+T细胞表达与患者年龄不具有相关性,但危重型15个月<年龄≤2岁与2～5岁年龄段患者间CD4+T细胞相对百分比却存在显著性差异有统计学意义(P <0.05),且15个月<年龄≤2岁年龄段CD4+T细胞显著高于2～5岁年龄段,提示笔者在定期监测危重型手足口病患儿外周血中... 更多     

幽门螺杆菌致病相关基因的研究

作为人的胃、十二指肠疾病发生发展中重要的致病菌,幽门螺杆菌(Hp)由于其特有的生存方式、多变的基因结构特征、感染结局的多样性、与人类共生和进化的密切关系等等,而成为当前研究的热点。Hp致病机理的研究、特别是Hp感染与胃癌发生相关的分子机制研究,是目前Hp研究的主要方面,也是近年生物学进展较快的领域之一。     

与帕金森病相关的致病基因研究进展

帕金森病是一种神经系统变性疾病,路易小体(LB)是帕金森病典型的病理改变,某些基因的变异将导致帕金森病的发生,目前已经确定的基因有α-synuclein、Parkin和UCHL1。这3种基因均能通过影响泛素-蛋白体系统(UPS)的功能导致帕金森病的发生,本文就3种基因的变异与泛素-蛋白体系统之间的相互关系作一综述。     

与帕金森病相关的致病基因研究进展

帕金森病是一种神经系统变性疾病,路易小体(LB)是帕金森病典型的病理改变,某些基因的变异将会导致帕金森病的发生,目前已经确定的基因有α-synuclein、Parkin、UCHL1。这3种基因均能通过影响泛素-蛋白体系统(UPS)的功能来导致帕金森病的发生。就3种基因的变异与泛素-蛋白体系统之间的相互关系作一综述。