非结核分枝杆菌快速药敏试验研究

目的研究结核分枝杆菌BACTEC MGIT 960系统液体培养法和美国临床实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSIM)24-A微量肉汤稀释法的快速药敏试验与对非结核分枝杆菌的意义。方法分别采用BACTEC MGIT 960液体培养法联合微量肉汤稀释法的快速药敏试验与L-J固体培养法和绝对浓度药敏法分别对48份非结核分支杆菌(nontubeerculous mycobacteria,NTM)培养时间和药敏报告时间进行比较研究。结果 48份NTM在BACTEC MGIT 960培养仪的平均阳性报告时间(7.0±1.1)d,L-J培养基平均阳性报告时间(17.6±3.9)d,两者比较差异有统计学意义(t=-18,P0.01);微量肉汤稀释法结果报告时间为(7.2±1.2)d,L-J固体药敏试验报告时间为(27.3±2.4)d,两者比较差异有统计学意义(t=-52.2,P0.01),两种药敏试验方法对相同种类药物的耐药率均为90%以上,微量肉汤稀释法比L-J法可以检测的药物种类更多。结论 BACTEC MGIT 960液体培养法联合微量肉汤稀释法的快速药敏试验比L-J固体培养法和绝对浓度药敏法在培养时间和药敏结果种类及报告时间上有着明显优势。     

BACTEC MGIT 960培养及分子菌种鉴定技术在脊柱结核诊断中的应用

目的 探讨 BACTEC MGIT 960系统、分子菌种鉴定技术在脊柱结核诊断中的应用价值。方法 对31例脊柱结核标本分别应用 BACTEC MGIT 960及罗氏培养基培养,对所得分离株行IS986扩增及16S rRNA PCR-SSCP分析进行菌种鉴定,并与常规方法对照。结果 BACTEC MGIT 960系统、罗氏培养法分支杆菌培养阳性率分别为83.87％、61.29％,两者平均报告时间分别为11.3d、26.7d;分子菌种鉴定结果与常规方法一致。结论BACTEC MGIT960系统是临床脊柱结核病原菌分离培养的较好方法,快速培养与分子菌种鉴定联合应用可能是目前结核病临床细菌学诊断的较佳策略。     

MGITTM 960快速培养系统在结核病诊断中的应用价值

目的评价Bac TTM/MGITTM 960快速培养系统在确诊和治疗结核病中的应用价值。方法采用MGITTM 960液体培养技术和L-J固体培养法分别对病例标本培养,比较二者的检测效能。结果 MGITTM 960培养阳性率为57.2%,高于L-J固体法的46.3%;BACTEC MGIT 960技术涂阳标本的MGITTM 960阳性检出时间为(8.75±1.53)d,低于L-J法的阳性检出时间(26.83±4.62)d,差异均有统计学意义(P0.05)。结论与传统改良罗氏固体培养法相比,MGITTM 960液体培养技术阳性检出时间明显缩短,并能提高涂阴患者的阳性检出率。     

Xpert MTB/RIF在疑似淋巴结结核患者中诊断价值的研究

目的：探讨Xpert MTB/RIF技术在疑似淋巴结结核患者中的诊断价值。方法：连续收集2016.4-2018.4在我院就诊的100例初诊疑似淋巴结结核患者的淋巴结标本,分别应用Xpert MTB/RIF、病理检查及BACTEC MGIT 960液体快速培养对样本标本进行检测,以临床综合诊断为金标准,计算Xpert MTB/RIF方法检测结核分枝杆菌的敏感度和特异度。评估Xpert MTB/RIF与病理检查及BACTEC MGIT 960液体快速培养诊断效能。以药敏试验为金标准,计算Xpert MTB/RIF检出利福平耐药的敏感度。结果：100例疑似病例中最后临床确诊88例淋巴结结核。以最后临床确诊的88例淋巴结结核病例为金标准,Xpert检测、病理及960液体培养检出结核分支杆菌的敏感度分别为95.45%（84/88）,69.32%(61/88)和 23.86%(21/88),特异度为100%（12/12）,100%(12/12)及91.67%（11/12）。Xpert检测的敏感度明显高于病理（χ2=20.711,P＜0.01）和960快速培养（χ2=93.701,P＜0.01）。在药敏试验证实的5例利福平耐药中,Xpert全部检测出rpoB基因突变,检测敏感度为100%（5/5）。结论：Xpert MTB/RIF方法在诊断淋巴结结核中具有较高的诊断效能,尤其是在病理疑似和菌阴性淋巴结结核的诊断中具有特殊优势。     

MGIT 960和比例法对结核分枝杆菌药物敏感性试验的对比研究

目的评价BACTEC MGIT960检测8种抗结核药物耐药性的效果。方法用MGIT960对结核杆分枝杆菌临床分离菌株进行抗结核药物异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的药敏检测,并将结果与L-J比例法结果进行比较分析。结果用MGIT960法与L-J比例法对118株结核分枝杆菌临床分离株进行异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺的耐药性检测,两种方法的符合率分别为97.5%(115/118)、92.4%(109/118)、96.6%(114/118)、84.7%(100/118)、94.9%(112/118)、94.1%(111/118)、97.5%(115/118)、85.6%(101/118)。MGIT960完成一线/二线药物药敏试验的时间平均为8.9和8.3天,L-J法则分别为26.7天和26.1天,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 MGIT960所得的药敏结果与传统比例法有较高的一致性,但检测时间较短,有利于耐药结核病人的早期诊断和治疗。     

微孔板变色硅胶显色法检测结核分枝杆菌利福平耐药性

目的 探讨微孔板变色硅胶显色法快速检测利福平(RIF)耐药结核分枝杆菌(MTB)的临床应用价值.方法 对江苏省南通市第六人民医院结核病实验室保存的50株MTB临床分离株用微孔板变色硅胶显色法检测RIF耐药性,并与Bactec MGIT960作比较.再对40份临床涂阳痰标本使用微孔板变色硅胶显色法与Bactec MGIT960同时进行RIF药敏检测,并比较检测结果的灵敏度、特异度、准确度.结果 微孔板变色硅胶显色法最佳接种菌量为10-3 mg/mL、检测最佳时间为7～10 d、RIF的最低抑菌浓度(MIC)判断界值为1.00μg/mL.以Bactec MGIT960检测法为金标准,微孔板变色硅胶显色法对涂阳痰标本RIF药敏检测灵敏度达94.12％,特异度为100％,准确度为97.37％.结论 微孔板变色硅胶显色法可直接检测痰标本中MTB对RIF的药物敏感性.     

五种检测方法在艾滋病合并结核双重感染诊断中的价值

目的探讨抗酸染色涂片法(AFS)、MGIT960液体培养法、结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测体系[(GeneXpert MTB/RIF)X检测法(Xpert MTB/RIF)]、结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)及结核抗体(TB-Ab)方法在艾滋病合并结核诊断中的价值。方法对67例艾滋病合并结核患者分别进行AFS、MGIT960液体培养、Xpert MTB/RIF检测、T-SPOT.TB及TB-Ab检测。结果 AFS、MGIT960液体培养、Xpert MTB/RIF、T-SPOT.TB和TB-Ab 5种检测方法的阳性检出率分别为34.5%、59.7%、65.7%、74.6%和25.4%。以MGIT960液体培养为标准,Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值以及Kappa值分别为95.0%、81.5%、88.4%、91.7%、0.78和87.5%、44.4%、70.0%、70.6%、0.34。以液体药敏为标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度为88.9%,特异度为100%,阳性预测值为100%,阴性预测值为96.7%,Kappa值为0.92。结论 Xpert MTB/RIF与其他4种方法相比具有简便快速、敏感性高、特异性强等优势,是临床艾滋病合并结核双重感染快速诊断的有效方法。     

环介导等温扩增技术联合结核分枝杆菌快速培养在涂阴肺结核中的诊断价值

目的探讨环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification metliod,LAMP,新型的核酸扩增技术)联合结核分枝杆菌快速培养(BACTEC MGIT 960,结核分枝杆菌检测仪)在痰涂片阴性肺结核中的诊断价值。方法收集疑似肺结核患者90例,随机分成A、B、C组,A组通过指南推荐涂阴肺结核诊断,B组通过LAMP确诊,C组通过LAMP联合BACTEC MGIT 960确诊,并给予抗结核治疗2个月后随访所有入组患者胸部CT变化情况,分别比较涂阴肺结核诊断方法、LAMP及LAMP联合BACTEC MGIT 960的诊断可靠性。结果涂阴肺结核指南推荐诊断阳性率40.0%,LAMP阳性率53.3%、联合检测阳性率60.0%,差异无统计学意义。联合检测敏感性88.9%,特异性91.7%均明显升高。结论在实际临床中,环介导等温扩增技术联合结核分枝杆菌快速培养(BACTEC MGIT 960)在痰涂片阴性肺结核诊断中特异性及敏感性高。     

阻断巨噬细胞介导的PD1/PD-L1通路对小鼠结核复发的抑制作用

目的利用功能性PD-L1(programmed cell death ligand-1,PD-L1)单抗阻断巨噬细胞介导的PD1/PD-L1通路,研究其对小鼠结核治疗后复发的免疫干预作用和机制。方法 10~6CFU H37Rv经尾静脉感染C57BL/6雌性小鼠获得结核的急性感染,两周之后分别给予异烟肼(10 mg/kg)和异烟肼联合PD-L1单抗(每只50μg)连续治疗四周,获得潜伏感染,在潜伏期用TNF-α抗体(每只50μg)诱导四周使其复发。通过对各时间点的肺、脾和肝组织病理及荷菌量的定量分析,探讨PD-L1单抗对小鼠活动性结核及结核复发的干预作用。利用体外实验,进一步阐明敲低PD-L1对结核菌感染的巨噬细胞凋亡的影响。结果小鼠感染后,前两周肺、脾和肝荷菌量较高(3~4 Lg CFU/mL)、肉芽肿病变较重,表现为活动性结核,异烟肼和异烟肼联合PD-L1单抗分别治疗四周之后,肺、脾和肝荷菌量均较模型对照组显著性地降低,肉芽肿样病变也显著减轻,但是两个治疗组之间没有显著性的差异。而在复发期,相比较于异烟肼治疗组,异烟肼联合PD-L1单抗治疗组能够显著降低复发期组织荷菌量,减轻病理病变。体外实验证实:用PD-L1抗体或siRNA敲低巨噬细胞上PD-L1,结果发现二者都能能促进结核感染的巨噬细胞凋亡。结论功能性的PD-L1抗体可以抑制结核复发,敲低巨噬细胞上PD-L1或阻断PD1/PD-L1通路能促进巨噬细胞凋亡,提示阻断PD-L1能够有效的协助异烟肼治疗结核病,并且显著地抑制结核的复发。     

结核/非结核分枝杆菌核酸检测对结核性脑膜炎的诊断价值

目的 探讨脑脊液中结核/非结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis/nontuberculous mycobacteria,MTB/NTM)核酸检测诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的临床价值。方法 收集120例TBM患者的临床资料,采用随机数字表法将患者分为TBM A组(n=67,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测)和TBM B组(n=53,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测),另收集其他中枢神经系统感染患者脑脊液18例为对照组(C组,进行脑脊液常规、生化、罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测、GeneXpert MTB/RIF检测)。结果 TBM A组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测阳性率分别为13.43%(9/67)、10.45%(7/67)、46.27%(31/67);TBM B组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、GeneXpert MTB/RIF检测阳性率分别为15.09%(8/53)、11.32%(6/53)、47.17%(25/53),GeneXpert MTB/RIF检测阳性病例中利福平耐药基因检测阳性2例。C组脑脊液罗氏培养、涂片查抗酸菌、MTB/NTM核酸检测和GeneXpert MTB/RIF检测均为阴性。结论 MTB/NTM核酸检测与GeneXpert MTB/RIF检测均可辅助早期诊断TBM,相较于后者更经济,并能鉴别非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria, NTM)感染,及时减少NTM病误诊、误治,值得临床推广。     

分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)的临床应用价值

目的 分析探讨培养分枝杆菌时同步筛检依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)临床意义及价值. 方法 2011年3月—2015年3月所采集530例临床标本进行培养使用利福平浓度100μg/mL罗氏(L-J)培养基建立依R菌筛查系统,将待分离培养分枝杆菌平行接种于罗氏对照空白培养基(L-J)与L-J R100培养基中分别培养,依照培养基选用种类分别分成L-J R100、L-J、BD960 3组, 并对结果 进行分析统计. 结果 L-J R100培养基检出76例阳性结核分枝杆菌,且皆为依R菌,菌株粗大,生长良好,L-J R100阳性菌株所占比例为14.34%,L-J阳性菌株所占比例23.21%, BD960阳性菌株所占比例为52.83%. 结论 培养分枝杆菌时同步筛查依R菌能得到绝对依赖菌株,可提高分枝杆菌阳性检出率,可最快速度判断阳性菌株耐药性及是否对利福平具依赖性,该方法 可靠易行,具有临床推广价值.     

GeneXpert MTB/RIF试验对结核性腹膜炎的诊断价值

选取疑似结核性腹膜炎(TBP)的患者90例,经开放或腹腔镜手术活体组织检查确诊为TBP 33例,留取患者活体组织,采用GeneXpert MTB/RIF试验、BACTEC MGIT 960液体培养法和抗酸染色法对结核分枝杆菌及相关药物耐药性进行检测.GeneXpert MTB/RIF试验方便简单,效率高,灵敏度和特异度...     

结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药分析

目的对结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药性进行分析探讨,为今后的临床工作,提供可参考依据。方法选择2015年1月至2017年6月间,我院收治的疑似结核病患者1221例的标本3663份作为研究对象,对其展开涂片镜检、罗氏固体培养、MGIT960液体培养等3种实验室检测,并对检测结果进行统计分析,同时展开药敏分析。结果通过对比发现,涂片镜检所需时间最短(P0.05),但是其检测阳性率最低(P0.05);罗氏固体培养阳性检测时间最长,阳性率高于涂片镜检法(P0.05),低于MGIT960液体培养(P0.05);MGIT960液体培养阳性所需时间较涂片镜检法长(P0.05),较罗氏固体培养法短(P0.05),阳性率最高(P0.05)。结核分支杆菌对吡嗪酰胺具有较高的耐药性。结论在对结核分支杆菌进行实验室检测的过程中,MGIT960液体培养所需时间相对较短,阳性率最高,在今后的实验室检测中,值得对其给予足够重视。结核分支杆菌对常用抗结核药物存在一定耐药性,值得关注。     

小鼠结核分枝杆菌耐药模型的建立与评价

目的建立小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染小鼠模型。方法 30只BALB/c雌性小鼠经尾静脉感染结核分枝杆菌耐利福平株每只106CFU,观察小鼠一般状况,并分别在感染后6周、10周、14周处死小鼠,进行脾、肺组织病理切片、抗酸染色、计脏器荷菌数。结果感染后小鼠体重呈逐渐上升趋势,脏器病理变化随时间推移由急性炎症逐渐转为慢性炎症反应,抗酸染色均为阳性,脏器荷菌数与感染剂量相对应,并至少可持续14周。结论成功建立了小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染动物模型,为其进一步用于结核病防治研究奠定了一定的基础。     

结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌3种鉴定方法的比较

目的评估MPB64免疫胶体金法、PNB试验和Xpert MTB/RIF在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)和非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacterium,NTM)鉴定中的应用价值。方法收集2017年5～11月在重庆市公共卫生医疗救治中心就诊经分枝杆菌菌种鉴定(PCR-反向点杂交法)诊断的肺结核或疑似肺结核病人BACTEC MGIT960培养阳性标本178份,分别用MPB64胶体金法、PNB试验和Xpert MTB/RIF鉴定MTB和NTM,以PCR-反向点杂交法的鉴定结果为金标准,比较3种方法的敏感度和特异度。结果 PCR-反向点杂交法鉴定结果为154株MTB,6株MTB与NTM混合感染,18株NTM。PNB试验、Xpert MTB/RIF试验、胶体金试验鉴定MTB的敏感度分别为96. 1%、100. 0%、96. 7%,3种方法的敏感度差异有统计学意义(P <0. 05); PNB试验、Xpert MTB/RIF试验、胶体金试验鉴定MTB的特异度分别为88. 8%、100. 0%、100. 0%,检测结果特...     

黄葵素对结核分枝杆菌的抑杀作用研究

目的评价黄葵素(huangkuisu,HKS)抗结核分枝杆菌的活性。方法①采用人型结核分枝杆菌标准菌株(H37RV)、多药耐药结核菌株,分别接种于含有不同浓度黄葵素、空白对照和阳性药物的结核菌培养基,观察结核分枝杆菌的生长情况,评价其体外抗菌活性。②尾静脉注射一定数量的结核分枝杆菌标准株H37Rv和耐药株菌液,建立小鼠结核分枝杆菌感染模型。随机将模型小鼠分成利福平治疗组、黄葵素治疗组,持续治疗6周,对照组给予生理盐水治疗。以各组小鼠的肺组织和脾组织病理变化、组织荷菌量,比较各组治疗效果,评价其体内抗菌活性。结果①模型组菌落生长情况正常,黄葵素(100 mg/mL)、利福平(5 mg/mL)组结核分枝杆菌(H37RV)培养终止期未见菌落生长;恢复培养40 d仍无结核菌生长。黄葵素在100 mg/mL时显示出对临床多耐药株的较好的抑杀作用,与利福平组比较,各时间点均显示出统计学意义(P<0.05)。②结核杆菌H37Rv感染小鼠,各治疗组肺组织和脾组织的病理变化较轻,肺和脾组织荷菌量明显降低,与模型对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结核杆菌耐药株感染小鼠黄葵素治疗组小鼠组织器官的病理变化较轻,肺组织和脾组织的荷菌量明显减少,与利福平组、模型对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结论黄葵素在体内外对结核杆菌有抑杀作用,可以作为治疗耐药株感染的候选药物进一步研究。     

不同方法检测体液标本结核分枝杆菌的临床价值比较

目的探讨胞内菌抗酸染色法、MGIT960培养法、聚合酶链反应(PCR)法检测对诊断体液标本结核分枝杆菌的临床价值。方法选取2017年1月至2019年8月我院接收600例结核病患者的体液标本(500份胸腹腔积液+100份脑脊液),分别用胞内菌抗酸染色法、MGIT960培养法、PCR法对600份体液标本进行结核分枝杆菌的检测,对比3种检测方法的阳性检出率。结果在对500份胸腹腔积液检测结核分枝杆菌时,MGIT960培养法的阳性检出率为65.8%,高于胞内菌抗酸染色法的阳性检出率59.2%、PCR法检测的阳性检出率42.4%,差异有统计学意义(P<0.05);在对100份脑脊液检测结核分枝杆菌时,胞内菌抗酸染色法的阳性检出率为69.0%,高于MGIT960培养法的阳性检出率55.0%、PCR法的阳性检出率32.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胞内菌抗酸染色法检测体液标本中结核分枝杆菌的临床价值较高,阳性检出率高,尤其表现在对少量标本的检测。     

BACTEC MGIT 960系统与改良罗氏培养基抗酸分枝杆菌药敏结果的评估

目的为了检测BACTEC MGIT960系统对抗酸性分枝杆菌药敏试验的可靠性，选择一线抗痨药（链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇）与传统改良罗氏（Liiwenstein-Jensen）培养基药敏试验进行比较。方法该系统药敏试验分枝杆菌生长指示管为底部包埋对培基内氧浓度高度敏感的荧光指示剂的改良Middle Brook 7H9增菌肉汤培养基。该系统药敏试验使用检测分枝杆菌药敏试剂盒．结果179株临床标本960系统与L-J法链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏符合率为93．86％、97．77％、91．62％、94．97％，总符合率94．55％。结论BACTEC MGIT960是全自动非放射检测系统．分枝杆菌药敏试验平均6．7d（4～13d），较L-J方法早21．3d，是一种快速准确的方法。     

尿液脂阿拉伯甘露聚糖在HIV阴性肺结核患者中的诊断效能评价

<正>据统计，2021年全球约有1060万例结核病新感染病例，其中141.3万人死于结核^[1]。中国的新发病例数为78万，形势非常严峻^[2]。传统的病原学检测方法如抗酸染色涂片镜检、BACTEC MGIT 960培养(MGIT 960)、Gene Xpert MTB/RIF(Xpert)虽是肺结核(pulmonary tuberculosis,PTB)病原学诊断的“金标准”，但存在灵敏度低，培养周期长等缺点^[3]。核酸扩增技术明显提高病原学检测敏感度、特异性且耗时短，     

四种检测方法在结核病诊断中的比较

目的 比较分析MGIT960液体培养法、结核/非结核分枝杆菌核酸检测(PCR-荧光探针法)、Xpert MTB/RIF和直接涂片镜检在结核病诊断中的应用。方法 收集我院2019年5～12月临床上疑似为结核病患者的各类标本。将疑似结核病患者2天内所有的标本混匀后进行直接涂片镜检,然后平均分装为3份,进行MGIT960液体培养、PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF。结果 2019年5～12月间总共收集了我院710份疑似结核病患者的各类标本。直接涂片镜检、PCR-荧光探针法、MGIT960液体培养和Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的阳性率分别为12.0%、18.7%、21.4%和24.8%。以临床诊断作为参考标准时,直接涂片法、PCR-荧光探针法、MGIT960液体培养和Xpert MTB/RIF检出结核分枝杆菌的灵敏度分别为40.2%、60.3%、78.4%和70.1%,而特异度分别为98.6%、96.9%、100.0%和92.2%,且四种方法组间比较均具有统计学差异。结论 四种临床检测方法在结核病诊断中各有优缺点,联合应用可以更好的诊断、治疗和监测结核病。