嗜肺巴斯德杆菌基因分型及在分子流行病学中的意义

目的　探讨我国部分地区嗜肺巴斯德杆菌分子流行病学特征。方法　随机多态扩增PCR(RAPD -PCR) ,两条单一随机引物S1和S3 ,对分离来自北京和南京不同实验动物饲养单位的大鼠、小鼠、野鼠的 1 5株嗜肺巴斯德杆菌及参考株共 1 6株菌基因组随机扩增 ,比较DNA多态性图谱。结果　 1 5个流行株可分成 4种基因型 :来自相同饲养单位的小鼠株、大鼠株及野鼠株基因型亦不相同 ;野鼠株与部分小鼠分离株基因型相同。结论　同一地区嗜肺巴斯德杆菌流行株呈明显的多态性 ;野鼠有可能成为实验动物嗜肺巴斯德杆菌的传染源     

北京地区实验动物中嗜肺巴斯德杆菌的表型分析

目的对北京地区实验动物中的嗜肺巴斯德杆菌分离株进行表型分析,提高检测的准确性。方法通过生化鉴定和16S rDNA测序,对306株嗜肺巴斯德杆菌可疑菌株进行鉴定。结合分离株在血琼脂平皿上的菌落特征和生化特性,组成53个特征数据谱,进行表型特征的聚类分析。结果 306株分离株中,BD自动细菌鉴定系统和16S rDNA测序鉴定出嗜肺巴斯德杆菌的阳性率分别为164/306和227/306。227株嗜肺巴斯德杆菌真阳性的表型特征共有140种,Heyl型106种,Jawetz型23种。结论北京地区实验动物中嗜肺巴斯德杆菌主要为Heyl型感染,Jawetz型较少,表型特征多样,分布广泛。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测实验动物病原菌效果初探

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测实验动物病原菌的效果。方法使用德国Bruker Biotyper系统对40株标准菌株及384株实验动物分离菌进行鉴定。结果 Bruker Biotyper检测标准菌株和分离株的准确率分别为90. 0%和80. 0%。对鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)、志贺菌(Shigella spp.)、肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae)、嗜肺巴斯德杆菌Heyl生物型(Rodentibacter heylii)和支气管鲍特杆菌(Bordetella bronchiseptica)的鉴定存在偏差。结论MALDI-TOF MS方法高效、准确率高,可用于实验动物病原菌的快速鉴定。     

嗜肺巴氏杆菌在实验大鼠和小鼠中的传染性研究

目的观察不同来源的嗜肺巴氏杆菌在实验大鼠和小鼠中的传染性.方法取源于野鼠、实验大鼠和小鼠的嗜肺巴氏杆菌3株,对30只受试大鼠和小鼠进行交叉人工感染,并于感染后不同时期取咽拭子分离培养,对感染前后菌株,应用RAPD-PCR、SDS-PAGE和Western blot进行基因型、蛋白和抗原成份比较,以及生物学特性的比较.结果受试实验动物对3株嗜肺巴氏杆菌均易感,被接种的动物能稳定携带嗜肺巴氏杆菌直到试验结束,重新分离的嗜肺巴氏杆菌在生物学特性、蛋白成份、抗原性和基因型方面无明显改变.结论同一株嗜肺巴氏杆菌能在实验大鼠和小鼠中相互传染.     

巴斯德杆菌属CODEHOP PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立巴斯德杆菌的CODEHOP PCR快速检测方法,为实验动物的呼吸道细菌的控制提供参考。方法应用CODEHOP在线简并引物设计工具,比对Genbank中13株巴斯德杆菌的RNA聚合酶β亚基(rpo B)氨基酸序列设计简并引物。对建立CODEHOP PCR方法用21株参考菌株进行特异性和敏感性评价,并应用于实验动物中的巴斯德杆菌检测。结果简并引物Past F6/PastR5扩增标准菌株的目的片段为200 bp左右。能够区分受试的巴斯德杆菌和主要的实验动物呼吸道病原菌。敏感性为0.2 pg/μL~2 pg/μL。在受试的609只实验动物中呼吸道样品中检测出巴斯德杆菌阳性率为19.1%。样品阳性片段经测序验证,准确率为100%。结论所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,可用于动物样品中巴斯德杆菌的检测。     

清洁级实验动物细菌学检测用主要培养基的筛选

目的 为解决实验动物细菌检测用培养基标准化的问题,选择目前国内几个比较大的培养基生产厂家和一个国外知名培养基生产厂家的DHL、SS、营养琼脂3种培养基,利用已知标准菌株进行对比、优选,从而形成标准产品,最终确定适合于实验动物细菌检测用的培养基。方法 用标准沙门菌、嗜肺巴斯德杆菌、鼠棒状杆菌对培养基进行定性(生长实验)和定量(平板菌落计数实验)筛选。结果 6个厂家的3种培养基除SS琼脂有差异外,其余均无显著差异,Merck公司的血琼脂上嗜肺巴斯德杆菌未能生长。结论 在实际检测应用中Merck公司的血琼脂不能选用。而Merck公司和中国药品生物制品检定所生产的SS琼脂对细菌有较强的抑制能力,在实际检测中有可能造成漏检,也不宜选用;而对其他产品均可选用。     

深圳市中央空调冷却塔水军团菌AFLP分型研究

目的 了解深圳市中央空调冷却塔水中军团菌的多态性，分析优势种群和菌型分布，为建立军团菌分子型别库提供资料。方法 运用The European Working Group for Legionella Infections（E．W．G．L．I）组织制定的扩增片断长度多态性分型（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）方法，对深圳市中央空调冷却塔水中军团菌进行分子分型。结果 按照血清分型方法，将冷却塔水中军团菌分为Lp1、Lp2-14以及非嗜肺型，运用AFLP技术对50株军团菌菌株分型，结果将22株Lpl血清型分为7种AFLP型，分别记为AFLP1—7，以AFLP2型与AFLP5型为主要型别；20株Lp2-14血清型分为7种AFLP型，分别记为AFLPⅠ—AFLPⅦ，以AFLPⅠ、Ⅱ为主要型别；9株非嗜肺军团菌血清型分为5种AFLP图谱。结论 AFLP分型技术能初步分析深圳市军团菌优势种群，为对军团菌监测及致病性军团菌型别的分析提供基本资料。     

北京地区实验动物绿脓杆菌分离株MLVA分型

目的 通过多位点可变数目串联重复序列分析(multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA)分型方法,研究北京地区实验动物绿脓杆菌分离株基因型和分布情况.方法 选择13个可变数目重复序列(variable-number tandem-repeat,VNTR)位点,对实验动物及设施中检测出的141株绿脓杆菌的基因组DNA进行重复序列扩增,所得指纹图谱使用BioNumerics软件进行聚类分析,绘制系统发育树和最小生成树(minimum spanning tree,MST).结果 所采用的13个VNTR位点能够对全部分离株进行有效分型.141株绿脓杆菌主要被分为了3个基因群,56个基因型.各群所占比例分别为A群82.3％,B群占12.8％,C群占5.0％,辛普森多样性指数为0.763.同一区域内相邻实验动物单位的绿脓杆菌分离株同源关系较远.结论 MLVA方法对绿脓杆菌具有很好的分型能力,能够有效的追踪绿脓杆菌的来源.北京地区实验动物中绿脓杆菌分离株基因型多态性丰富,但无地域性同源关系.     

嗜肺巴斯德杆菌研究进展

嗜肺巴斯德杆菌(Pasteurella pneumotropica)是一种条件致病菌,人兽共患。主要危害啮齿类动物,特别是免疫缺陷或抑制的动物,可引起炎症和脓肿等症状。该菌是实验动物中感染率最高的病原菌之一,多呈隐性感染,给动物实验带来了极大的干扰。本文针对嗜肺巴斯德杆菌的流行病学、检测和鉴定、分子分型和防治等方面进行综述。     

228株结核分枝杆菌MLVA分型研究

目的：通过多位点可变数目串联重复序列（MLVA）分型,了解甘肃省临床分离结核分枝杆菌菌株基因型情况。方法：选择标化的15个VNTR位点,对临床分离菌株DNA进行检测,DNA指纹图谱使用BioNumerics4.5软件进行统计分析,得出聚类分析结果。结果：228株结核分枝杆菌被分为4大基因群,7个主要基因型,分别包含13（5.7%）、3（1.3%）、7（3.1%）、1（0.4%）、171（75.0%）、31（13.6%）、2（0.9%）个菌株;在株水平基因分型上,93（40.8%）株为独立基因型;其余菌株基因型分别包含2～10株结核分枝杆菌,共构成132个基因簇。结论：甘肃省临床分离结核分枝杆菌菌株存在丰富的基因多态性,MLVA方法具有较高的基因分型能力,可以满足结核分枝杆菌株水平DNA分型的需要。甘肃省临床分离结核分枝杆菌菌株主要为北京家族基因型菌株。     

一株新分离巴氏杆菌的初步鉴定

对清洁级昆明小鼠常规监测中分离的一株可疑嗜肺巴氏杆菌进行了有关遗传学和生物表型特征的检定。该菌形态学及一般培养特性与嗜肺巴氏杆菌相似 ,与嗜肺巴氏杆菌参考血清发生凝集反应 ,生化试验不符合嗜肺巴氏杆菌典型特征 ,染色体DNA的G -Cmol%测定不能排除巴斯德氏菌属细菌的可能 ,进一步生化检定不符合国外报道的嗜肺巴氏杆菌Jawetz和Hey 1 .2个生物型 ,但与国外报道的Pasteurella .sp组细菌相似。     

嗜肺巴斯德杆菌选择性培养基研制及应用

目的　研制一种对嗜肺巴斯德杆菌表现出强选择作用的选择性培养基,用于该菌的常规检测。方法　药敏试验及抗生素最小抑菌浓度测定。结果　研制了嗜肺巴氏杆菌选择性培养基(PPSM培养基)及嗜肺巴斯德杆菌增菌液(PP肉汤)。嗜肺巴斯德杆菌在PPSM培养基上,37℃48h培养,形成1mm左右,凸起、湿润、灰黑色并有金属光泽的特殊菌落;对表皮葡萄球菌和大肠埃氏菌的抑制率为100%,对变形杆菌的抑制率为76%,并能抑制其迁徙生长;通过PP肉汤增菌培养,PPSM培养基使SPF小鼠粪便中嗜肺巴斯德杆菌检出率从0增至67.2%;用小鼠咽拭子接种该培养基,其初代培养物几乎为纯培养物。结论　该培养基对嗜肺巴氏杆菌具有较强的选择作用,使用该培养基对嗜肺巴氏杆菌进行检测可以简化检测程序、防止漏检、在不处死动物的情况下对嗜肺巴斯德杆菌进行常规监测。     

兔源多杀巴斯德杆菌基因分型研究

目的对实验动物设施普通级新西兰兔分离的多杀巴斯德杆菌分离菌株进行基因分型研究。方法2000-2018年期间,基于分离培养和生化鉴定获得兔源多杀巴斯德杆菌14株,采用荚膜多重PCR方法和多位点序列分型方法对其进行荚膜血清型和基因型鉴定。结果荚膜多重PCR分型结果显示,兔源多杀巴斯德杆菌存在荚膜血清型A型,占比71. 4%(10/14),B型占比28. 6%(4/14);多位点序列分型分为ST12、ST35、ST72、ST73、ST76和ST77共6种ST型,且首次发现了新ST76型和ST77型。结论兔源多杀巴斯德杆菌基因分型存在复杂多样性,荚膜血清型以A型为主,与呼吸道疾病相关,在生产繁育过程中应做好质量控制。     

扩增片段长度多态性技术对淋球菌的基因分型

目的：评价扩增片段长度多态性技术(AFLP)分析对淋球菌分离株进行基因分型的能力。方法：26株淋球菌分离株基因以EcoRI和MesⅠ酶切及AFLP分析。结果：同一地区的淋球菌分离株之间存在相当大的DNA多态性。结论：AFLP是鉴别淋球菌临床分离株有用而敏感的分子技术，有助于了解菌株来源、菌株间的克隆相关性及抗生素耐药性的传播。     

IVF-20培养液用于大鼠体外受精的实验研究

目的调查分析小鼠嗜肺巴氏杆菌感染情况。方法对某实验动物设施的空气、排风口、门把手、小鼠咽、饮水、饲料、垫料、粪便采样,进行嗜肺巴氏杆菌检测。结果所采集的201份样品,经细菌分离培养和菌落形态、革兰氏染色、生化试验、血清玻片凝集试验的进一步鉴定,从小鼠咽、饮水、饲料中检出了嗜肺巴氏杆菌。结论该设施饲养的小鼠携带嗜肺巴氏杆菌,饮水和饲料也有嗜肺巴氏杆菌污染,该污染可能与动物饲养密度过高有关。     

喹诺酮耐药鲍曼不动杆菌的AFLP基因分型研究

目的通过对喹诺酮耐药鲍曼不动杆菌(AB)的扩增片段长度多态性分析(AFLP),了解鲍曼不动杆菌的同源性,并探讨其耐药基因分型与AFLP分型之间的联系。方法 Primer Premier 5软件设计11对喹诺酮耐药基因,利用PCR技术对52株喹诺酮耐药鲍曼不动杆菌进行分析,同时使用扩增片段长度多态性分析(AFLP)技术研究基因型,Cross Checker和ntsys软件分析耐药基因和UPGMA方法分析AFLP基因的树型聚类情况。结果 52株鲍曼不动杆菌均对喹诺酮类药物耐药。由聚类分析的结果显示,该52株AB可分2个基因群,其中A群包括A1、A2和A3三个亲缘关系相近的基因型,B群则包括B1和B2两个亲缘关系相近的基因型,A1型为优势菌群。同型的A27、28、30、32、37、47、56均分离自ICU,ICU可能存在过耐药AB的暴发流行。通过与前期研究比较,耐药基因的多基因聚类分析与AFLP树型聚类分析具有一致性也存在不同之处。结论 ICU或许已成为耐药AB菌传播的一个重要枢纽。两种细菌分类方法各有优势,AFLP法是针对全细菌基因组的限制性酶切,在调查细菌流行病学和监控医院整体感染情况方面更权威。     

中国灰仓鼠气管和回盲部细菌分离鉴定及药敏试验

目的 对新疆灰仓鼠气管和回盲部携带的细菌种群分布情况及耐药性进行调查分析.方法 对新疆灰仓鼠采样进行细菌学分离和生化鉴定,并选择主要细菌进行药敏试验.结果 共分离到22株细菌.结果 表明,中国灰仓鼠气管和回盲部携带的细菌种群主要有埃希菌属(大肠埃希氏菌)、假单胞菌属(铜绿假单胞菌)、葡萄球菌属(松鼠葡萄球菌)、巴斯德氏菌属(嗜肺巴斯德氏菌、产气巴斯德氏菌、多杀巴斯德氏菌)和芽孢杆菌属(短小芽孢杆菌、蜂房芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌)等,这些菌株对四环素、左氧沙星等药物有很高的敏感性,而对氨苄西林、青霉素G等药物不敏感.结论 中国灰仓鼠携带的细菌种群具有多样性,研究结果为中国灰仓鼠的细菌学检测以及质量标准的制定提供了科学依据.     

集中空调系统水中嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳指纹图谱分析

目的研究某市2014年公共场所集中空调系统水中嗜肺军团菌的分子指纹图谱,初步建立某市嗜肺军团菌的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型数据库。方法对某市2014年公共场所集中空调系统水分离的34株嗜肺军团菌,采用PFGE技术进行电泳,并经Bio Numerics 6.6软件进行聚类分析。结果34株嗜肺军团菌的PFGE图谱共分为24种PFGE带型,不同地区嗜肺军团菌存在同样的酶切图谱,同一采样场所不同冷却塔检出菌株的PFGE带型相同,聚类分析结果显示菌株间相似性系数为23.80%~100.00%。结论某市2014年公共场所集中空调系统水嗜肺军团菌菌株基因型散在分布,呈多态性和复杂性,同时具有克隆化特征。     

2013年~2015年广东地区实验小鼠和大鼠微生物学及寄生虫学调查

目的 调查2013~2015年广东地区实验小鼠和大鼠的病原携带情况。方法 本文涉及的样品主要来源于监督检测的抽样样品和委托检测的送样样品,共收集到广东省12家监督单位和32家委托单位样品。按照国家标准要求的项目及标准外的螺杆菌和小鼠诺如病毒进行检测。结果 监督检测和委托检测结果存在较大差异。3年中监督检测的小鼠检出4种病原,包括绿脓杆菌（0.7%）、嗜肺巴斯德杆菌（0.3%）、肺炎克雷伯杆菌（0.7%）和鞭毛虫（1.7%）,未检出病毒;大鼠检出1种病原即嗜肺巴斯德杆菌（1.1%）,未检出病毒和寄生虫。委托检测的小鼠检出15种病原,包括绿脓杆菌（3.7%）、嗜肺巴斯德杆菌（5.2%）、支原体（1.9%）、金黄色葡萄球菌（0.7%）、肺炎克雷伯杆菌（0.8%）、螺杆菌（45.3%）,小鼠肝炎病毒（8.5%）、小鼠脑脊髓炎病毒（7.0%）、小鼠诺如病毒（16.2%）、鼠痘病毒（0.3%）、小鼠细小病毒（0.5%）、仙台病毒（0.1%）、鞭毛虫（11.7%）、蠕虫（1.0%）、体外寄生虫（0.1%）。大鼠检出8种病原,包括绿脓杆菌（3.4%）、嗜肺巴斯德杆菌（8.6%）、支原体（0.9%）、金黄色葡萄球菌（2.9%）、泰泽病原体（4.8%）、大肠杆菌（1.0%）、大鼠细小病毒H-1株（3.0%）、大鼠冠状病毒（1.0%）,未检出寄生虫。其中,实验小鼠7种病原,包括绿脓杆菌、嗜肺巴斯德杆菌、螺杆菌、鞭毛虫、小鼠肝炎病毒、小鼠脑脊髓炎病毒和小鼠诺如病毒,大鼠2种病原,包括金黄色葡萄球菌和泰泽病原体,检出范围广、检出率较高,而且存在区域分布特点,即设施污染后能在多次送检的动物中检出这些病原。结论 本研究获得广东省实验大小鼠病原流行情况和分布,这些数据的统计为我国实验动物质量标准的制订提供基础数据,同时也为各动物实验设施的质量控制方案制订提供依据。     

鲍曼不动杆菌耐药性和AFLP基因分型的研究

目的 了解鲍曼不动杆菌(AB)AFLP分型和耐药性之间的联系.方法 27株临床分离的AB,作采用NCCLS 2004年版抗菌药物敏感试验,采用扩增片段长度多态性分析(AFLP)技术研究基因型,分析耐药性和AFLP基因的树型聚合情况.结果 AB的耐药性树型聚合与AFLP树型聚合分析具有较高的一致性.结论 AB菌耐药性的散播以细菌的扩散和抗菌药物对耐药菌选择性压力为主要途径.