HtrA1基因敲除对小鼠葡萄糖代谢及胰岛功能的影响

目的 探讨HtrA1基因敲除对小鼠糖代谢及胰岛功能的影响。方法 选取6周龄雄性野生型C57BL/6J小鼠(WT小鼠)和HtrA1基因敲除小鼠(KO小鼠)按照同窝随机对照原则分组,分别给予高脂饮食(脂肪占总热量的60%)或普脂饮食(脂肪占总热量的5%),记录喂养16周时两组WT小鼠、KO小鼠的体重及喂养期间摄食量。对18周龄(普脂或高脂喂养12周)小鼠行葡萄糖耐量试验(IPGTT),并测定空腹胰岛素水平,进一步对21周龄(高脂喂养15周)小鼠行葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)试验,观察糖代谢及胰岛素分泌情况。分离小鼠胰岛在细胞水平行GSIS试验,测定胰岛素水平。取22周龄(高脂喂养16周)小鼠胰腺组织行组织切片,进行胰岛素(绿色)和胰高血糖素(红色)免疫荧光双染,以及胰岛素(绿色)和CD31(红色)免疫荧光双染。应用ZEN 2.0软件对胰岛中CD31水平进行定量,比较WT小鼠与KO小鼠胰岛中CD31的平均荧光强度。结果 高脂饮食组或普脂饮食组的KO与WT小鼠的体重和摄食量的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。普脂饮食组KO小鼠糖负荷10、20、120 min时的血糖水平均显著高...     

高糖环境诱导胰岛表达p25引起胰岛细胞损伤的研究

目的探讨在高糖环境中p25的表达及其对胰岛细胞损伤及胰岛素分泌的影响。方法实验分为db/db小鼠组(糖尿病组,n=5)和C57/BL小鼠组(正常对照组,n=5),进一步将从C57/BL小鼠胰岛分离的胰岛细胞组分为正常糖浓度糖刺组(5m M)和高浓度糖刺激组(30m M)。研究对象均为雄性小鼠,鼠龄13周,进行胰岛(islets)分离,培养及胰腺组织病理切片。用免疫印迹测定蛋白表达,酶联免疫法测定胰岛素分泌水平,免疫组化染色测定胰岛细胞凋亡。结果 p25在C57/BL组和C57/BL正常糖浓度刺激组的胰岛细胞均无表达,与之比较,p25在db/db组和C57/BL高糖刺激组的胰岛细胞均有明显的表达(P<0.05);与C57/BL组相比较,cleaved caspase3在db/db组胰岛细胞中的表达明显增加(P<0.05);与C57/BL组和C57/BL正常糖浓度组相比较,胰岛素分泌在db/db组和C57/BL高糖刺激组均明显减少(P<0.05)。结论高糖环境可刺激胰岛表达p25,引起胰岛细胞凋亡,减少胰岛素分泌。     

雌激素对CETP转基因小鼠糖代谢及胰岛功能影响的初步研究

目的:观察CETP转基因小鼠在卵巢切除和雌激素替代情况下糖耐量和胰岛功能的改变?方法:15只雌性CETP转基因小鼠随机分为3组,假手术组?卵巢切除组和雌激素替代组?除假手术组外,其余均行卵巢切除术?术后第2周开始,雌激素替代组给予雌激素治疗,而假手术组和卵巢切除组则给予同等剂量的橄榄油,4周后检测各组小鼠空腹血糖,8周后进行腹腔注射葡萄糖耐量(IPGTT)试验,提取小鼠胰岛做葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)实验?结果:术后8周,卵巢切除组小鼠空腹血糖较假手术组鼠明显升高(P < 0.05),IPGTT各时点血糖均较假手术组小鼠明显升高(P < 0.05),GSIS显示胰岛素分泌功能有减退的趋势;而雌激素替代组上述变化有明显改善,IPGTT的0?15?30 min的血糖水平显著下降(P < 0.05),GSIS的胰岛素分泌功能也有改善的趋势?结论:CETP转基因小鼠卵巢切除后胰岛功能下降,表现为空腹血糖升高?糖耐量受损?葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平下降?雌激素替代能够对卵巢切除所带来的对于胰岛β细胞的有害影响起到一定的保护作用?     

雷帕霉素对小鼠葡萄糖代谢水平的影响

目的探讨雷帕霉素对葡萄糖代谢水平影响的特点、机制。方法选择4周龄、雄性C57BL/6小鼠,高热量、高脂饮食喂养8周后为肥胖组(HF,n=18),普通饲料喂养为正常组(NC, n =18)。两组小鼠分别给予安慰剂(n=6)、腹腔注射雷帕霉素(2 mg/kg,隔日1次, n=6)、喂饮2.37%亮氨酸水 (n =6),2周后分别行灌胃葡萄糖耐量试验(glucose tolerance test, GTT)、胰岛素耐受性试验(insulin tolerance test, ITT)以及胰岛组织病理学检查。结果正常组小鼠腹腔注射雷帕霉素后葡萄糖负荷30min血糖水平显著升高(与安慰剂组比P=0.038,与亮氨酸组比P=0.035)。肥胖组小鼠腹腔注射雷帕霉素后空腹血糖水平显著高于安慰剂组(P=0.031),葡萄糖负荷30 min血糖显著高于安慰剂组(P=0.013)、亮氨酸组(P=0.041)。仅正常组小鼠胰岛素敏感性与安慰剂组相比显著降低(P=0.039)。雷帕霉素干预后腹腔脂肪量显著减少(正常组与安慰剂组比P <0.001,肥胖组与安慰剂组比P=0.013)。 结论雷帕霉素对哺乳动物糖代谢水平有显著影响,正常小鼠与机体胰岛素敏感性下降有关;肥胖小鼠与胰岛素分泌功能受损、胰岛素抵抗相关。     

Exendin-4对高脂大鼠脂代谢及胰岛β细胞功能的影响

目的 探讨Exendin-4对高脂喂养的肥胖人鼠胰岛β细胞功能及糖脂代谢的影响.方法 SD大鼠40只用简单随机分组法分为2组,分别给予普通饲料(NC组,10只)及高脂饲料(30只).喂养10蒯后,高脂喂养大鼠分为高脂(HF)组,0.5、2μg/kg Exendin-4治疗高脂组(HFL、HFH组),每组10只.治疗6周后,崩静脉葡萄糖耐量实验(IVGT)和胰岛索耐量实验(ITT)来评价机体的胰岛β细胞功能及机体对胰岛素的敏感性,同时检测基础血脂水平.结果 高脂诱导肥胖大鼠经Exendin-4处理后,lee's指数、空腹血浆游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)明显降低(P＜0.01);IVGTT和ITT指标明显改善(P＜0.05),胰岛素分泌水平增高(P＜0.01),胰岛β细胞功能改善(P＜0.05),HFH组较HFL组上述指标改善更为明显.结论 Exendin-4可改善肥胖大鼠的胰岛β细胞功能和糖脂代谢,并可能呈剂量-效应关系.     

水飞蓟宾对高脂饮食小鼠胰岛β 细胞的保护作用

目的：研究水飞蓟宾对高脂饮食喂养的C57BL/6J小鼠胰岛β细胞的保护作用及其可能的机制。方法：18 只3周龄雄性C57BL/6J小鼠分为普通饮食组(n=6)、高脂饮食组(n=6)及水飞蓟宾干预高脂饮食组(n=6),干预10周后观 察各组小鼠空腹血糖、胰岛素、血脂、谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮变化及胰岛β细胞的脂质含量、抗氧化水平及凋 亡情况,并检测胰腺组织胰岛素诱导基因-1(insulin-induced gene-1,Insig-1)、固醇调节原件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)和脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)的mRNA,以及Insig-1和SREBP-1c蛋 白的表达水平。结果：与高脂饮食组相比,水飞蓟宾干预高脂饮食组小鼠胰岛分泌功能明显改善,血糖水平降低 (P<0.05),胰岛组织脂质含量、氧化应激水平及凋亡水平均降低(均P<0.05);水飞蓟宾能促进胰岛组织Insig-1的表达, 抑制SREBP-1c和FAS的表达(均P<0.05)。三组间谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮功能差异无统计学意义(均P>0.05)。结论： 水飞蓟宾对高脂饮食小鼠的胰岛β细胞具有保护作用,其机制可能与调节Insig-1/SREBP-1c途径及增加抗氧化活性有 关,且长期口服水飞蓟宾安全性良好。     

高脂饲料诱发C57BL/6小鼠肥胖性Ⅱ型糖尿病

目的 通过饲喂高脂饲料诱发C57BL/6小鼠Ⅱ型糖尿病(T2DM),探讨不良饮食对T2DM以及肥胖症的影响.方法 以C57BL/6小鼠为模型,饲喂脂肪供热60％的高脂饲料12周,检测小鼠高脂饲料饲喂前后空腹血糖(FBG)及体质量,并通过口服糖耐量试验(OGTT)反应胰岛β细胞功能受损情况和机体对血糖调节能力的改变.结果 与对照组比较,从第4周开始C57BL/6小鼠的空腹血糖显著上调(P＜0.001),同时体质量稳步增长直至第12周形成肥胖症(P＜0.001),分析显示空腹血糖与体质量的变化存在显著相关性(P＜0.001).口服糖耐量试验结果表明,高脂饲料饲喂12周后C57BL/6小鼠血糖调节能力严重受损(P＜0.001).结论 C57BL/6小鼠高脂饲料饲喂12周后可成功建立肥胖型T2DM模型.该模型可良好再现因不良饮食习惯所引起T2DM的发生,为糖尿病的研究提供有力工具.     

IRS-1的表达和泛素化在KKAy及C57BL/6J小鼠糖尿病发展过程中的意义

目的:探讨胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达和泛素化水平在糖尿病发展过程中的作用。方法:20只8周龄C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(正常饲料喂养,n=10)和胰岛素抵抗组(高脂饲料喂养,n=10)。8周龄KKAy小鼠8只,高脂饲料喂养,为2型糖尿病组。检测各组小鼠体重、血糖和血胰岛素水平。12周后免疫印迹检测各组动物肝组织IRS-1的表达量,同时采用剥离免疫印迹法检测肝组织IRS-1的泛素化水平。结果:高脂喂养12周后C57BL/6J小鼠出现胰岛素抵抗,KKAy小鼠出现肥胖和糖尿病。2型糖尿病组IRS-1的表达显著低于正常对照组和胰岛素抵抗组(P<0.05),而IRS-1的泛素化水平则显著高于胰岛素抵抗组(P<0.05),与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论:2型糖尿病时IRS-1的表达下调,IRS-1泛素化水平增加是导致胰岛素信号转导障碍的重要原因。     

尼克酰胺核糖对2型糖尿病小鼠血糖调节的影响

目的探讨尼克酰胺核糖(NR)对2型糖尿病(T2DM)小鼠模型的血糖调节能力的影响。方法 29只雄性C57BL/6J小鼠分为对照组(n=8)、模型组(n=6)、低剂量NR组[400 mg/(kg·d)](n=8)、高剂量NR组[800 mg/(kg·d)](n=7)。对照组全程饲喂对照饲料,后三组利用高脂喂养和多次低剂量腹腔注射链脲佐菌素共同诱导2型糖尿病模型,在造模成功后,NR/生理盐水每日通过灌胃的方式给予。采用糖耐量实验(IPGTT)、胰岛素抵抗实验(IPITT)、空腹血糖和空腹胰岛素水平反映小鼠的血糖调节能力。结果 NR组小鼠体重低于模型组,但差异无统计学意义(P0.05);模型组小鼠与低剂量NR组和高剂量NR组小鼠的空腹血糖差异无统计学意义(P0.05)。糖耐量实验的数据显示,低剂量NR组和高剂量NR组小鼠糖耐量实验血糖曲线下面积(AUC)均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。在胰岛素抵抗实验中,低剂量NR组和高剂量NR组与模型组的血糖AUC比较,差异无统计学意义(P0.05)。空腹胰岛素检测结果显示,低剂量NR组和高剂量NR组的空腹胰岛素水平与模型组比较有升高趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论 NR对T2DM小鼠的糖耐量受损有一定改善作用,可能是通过修复胰岛β细胞的分泌功能,在某种程度上提高空腹胰岛素的水平发挥其保护效应所致。     

3T3L1脂肪细胞对大鼠胰岛β细胞功能障碍的影响

目的 通过3T3L1脂肪细胞与大鼠原代胰岛细胞共培养,从细胞整体水平探讨脂肪细胞对胰岛β细胞功能的影响.方法 研究分为两组:(1)对照组:SD大鼠原代胰岛细胞组;(2)共培养组:SD大鼠原代胰岛细胞与3T3L1脂肪细胞共培养.对各组胰岛细胞观察以下指标:(1)胰岛素释放试验和细胞内胰岛素含量;(2)用RT-PCR检测葡萄糖转体2(GLUT2)、葡萄糖激酶(GCK)及内向整流钾离子通道6.2(Kit6.2)的mRNA表达水平;(3)用免疫沉淀和Western印迹检测胰岛素受体β(IR-β)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其酪氨酸磷酸化程度.结果 (1)共培养组在低糖水平胰岛素分泌明显增多[(0.79±0.35)ng·h-1·ml-1胰岛比(0.38±0.09)ng·h-1·ml-1胰岛,P=0.028],而高糖刺激时两组胰岛素分泌差异无统计学意义(P=0.760),共培养组刺激指数较对照组降低[(1.57±0.61)比(2.84±0.92),P=0.04].两组的胞内胰岛素含量差异无统计学意义(P=0.102).(2)共培养组胰岛细胞GLUT2、GCK、Kil6.2的mRNA表达下调为0.27 ±0.11,(P=0.01)、0.32±0.24,(P=0.009)、0.41±0.09,(P=0.003).(3)共培养组胰岛细胞IR-β、IRS-1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化程度均下降.结论 3T3L1脂肪细胞通过下调胰岛细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)的相关基因,及通过抑制其自身胰岛素信号通路,从而影响GSIS.脂肪细胞可能参与了2型糖尿病胰岛细胞功能障碍的发生.     

口服胰岛素抑制胰岛β细胞凋亡预防NOD鼠糖尿病

目的: 观察口服胰岛素免疫干预对非肥胖糖尿病(non-obese diabetic, NOD)鼠胰岛炎、β细胞凋亡和糖尿病的影响,并探讨其诱导免疫耐受的机制.方法: 86只NOD雌鼠随机分为胰岛素处理组(n=43)和磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)对照组(n=43),从4周龄始每周灌胃人普通胰岛素1mg(70μL)2次,12周后改为每周灌胃1次至30周,对照组予等体积的PBS;于12周龄观察胰岛炎和胰岛β细胞凋亡;检测胰岛Fas和FasL的表达;测定血清IL-4和IFN-γ浓度,以及胰岛内I-Aβg7,IL-1β,IFN-γ,Fas,IL-4,TGF-β mRNA和小肠PP(Peyer's Patch)淋巴结IL-4,IFN-γ,TGF-β mRNA的表达水平.结果: NOD鼠口服胰岛素组30周龄和52周龄时发病率为55.6%和70.4%,分别比PBS对照组(85.7%和96.4%)低(P＜0.05).胰岛素组胰岛炎积分比对照组低,但差异无统计学意义(P＞0.05).胰岛素组胰岛Fas抗原表达和β细胞凋亡率均比PBS对照组低(均P＜0.05).胰岛素组胰岛内I-Aβg7,IFN-γ,IL-1β,Fas mRNA和PP淋巴结IFN-γ mRNA表达均较PBS对照组低(均P＜0.05),而IL-4,TGF-β mRNA表达较对照组高(均P＜0.05);胰岛素组血清IL-4比PBS组高,IFN-γ比PBS组低(均P＜0.05).结论:口服胰岛素能诱导NOD鼠的免疫耐受而预防糖尿病的发生,但不能阻断胰岛炎的进展.口服胰岛素能诱导调节性T细胞产生,使全身和胰岛局部T细胞由Th1向Th2转型,从而抑制Fas介导的β细胞凋亡而预防糖尿病.     

高脂膳食对C57小鼠肝脏内质网应激及PAI-1表达的影响

目的研究高脂膳食致C57小鼠脂肪肝内质网应激及其纤溶酶原激活物抑制物1(plasminogen activator in-hibitor-1,PAI-1)的变化。方法采用高脂膳食诱导代谢综合征(胰岛素抵抗、脂肪肝、肥胖)小鼠模型(HF组,n=10),以正常普食喂养的小鼠为对照组(NF组,n=12),喂养25周,检测各组小鼠血清中空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINs)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、PAI-1、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测各组小鼠肝组织中C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)、PAI-1mRNA的表达。苏木精-伊红染色观察肝组织的形态学改变。结果 HF组肝脏病理检测提示中度脂肪肝,血清中FBG、FINs、TC、TG、PAI-1、ALT、AST均较NF组呈不同水平增高(均P<0.05),同时,肝组织中CHOP、PAI-1mRNA表达水平也明显上调(均P<0.01)。结论高脂膳食喂养可诱发C57小鼠脂肪肝内质网应激;PAI-1mRNA表达增高且活性增强,可能参与了脂肪肝内质网应激。     

不同干预治疗对C57BL/6J雄性肥胖小鼠肿瘤坏死因子-α的影响

目的 探讨不同干预治疗对高脂饮食诱导的C57BL/6J雄性肥胖小鼠脂肪组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 4周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为普食组(以普通饲料喂养,脂肪占总热量的12%)、高脂组(以高脂饲料喂养,脂肪占总热量的12%)喂养,再将40只高脂饮食诱导的c57BL/6J雄性肥胖小鼠随机分为饮食控制组、高脂饮食组(高脂饮食)、二甲双胍组(高脂饮食+二甲双胍)及罗格列酮组(高脂饮食+罗格列酮).干预治疗4周后,分别测定体重、内脏脂肪重量、空腹血糖(FBG),空腹胰岛素水平(FIns).评价小鼠糖代谢和胰岛素抵抗情况,采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)方法及Western印迹法检测脂肪组织内TNF-α mRNA、TNF-α的表达.结果 ①高脂组小鼠的体重、内脏脂肪重量、FBG、FIns水平和脂肪组织TNF-α、TNF-α mRNA的表达均显著高于普食组(P值分N<0.05、0.01).②干预治疗1周后,饮食控制组、罗格列酮组的FBG、内脏脂肪重量和脂肪组织内TNF-α、TNF-α mRNA均显著低于高脂饮食组(P值分别均<0.05、0.01).结论 罗格列酮及饮食控制均能一定程度地降低肥胖小鼠的内脏脂肪重量、血糖,降低脂肪组织TNF-α的表达水平.     

细胞凋亡和线粒体凋亡途径在糖脂毒性导致胰岛β细胞功能衰竭中的作用

目的 探讨糖脂毒性引起高脂肥胖大鼠胰岛β细胞功能障碍的可能机制.方法 将高脂肥胖雄性Wistar大鼠18只分为3组.对照组6只经颈静脉插管输入生理盐水;高游离脂肪酸组(FFA组)6只输入脂肪乳+肝素:高糖高FFA组(GS-FFA组)6只输入葡萄糖液及脂肪乳+肝素.输注持续时间48 h.于输液前及输液结束时经颈动脉采血测定血β-羟丁酸(β-HBA)水平.输液结束后,采用静脉葡萄糖耐量试验(PCGTT)评价3组动物胰岛B细胞分泌功能.IVGTT后处死动物,留取胰尾组织病理标本,采用TLFNEL技术检测胰岛细胞凋亡水平,采用免疫组化技术测定胰岛细胞Cvt C、凋亡诱导因子、caspase-9和caspase-3表达水平.结果 (1)静脉输液结束时,3组大鼠血β-HBA水平均较基础值升高,其中GS-FFA组血p-HBA生成显著增加(P<0.05).(2)GS-FFA组大鼠ⅣGTT时胰岛素分泌指数(AI/AG)较对照组、FFA组明显减低(P<0.05).(3)3组大鼠中,GS.FFA组胰岛细胞凋亡比例显著增加(P<0.05),同时GS-FFA组胰岛细胞CytC、凋亡诱导因子、caspase-9及caspase-3表达水平显著增高(P相似文献   

知母醇提物对INS-1胰岛β细胞功能的影响

目的 研究知母醇提物对正常和抵抗INS-1胰岛β细胞的增殖及分泌功能的影响,探讨知母醇提物对正常细胞的毒性影响以及对胰岛素抵抗细胞的改善作用.方法 采用MTT法测定知母醇提物对正常INS-1胰岛B细胞的增殖作用;知母醇提物干预正常细胞及胰岛素抵抗INS-l胰岛β细胞,分为溶媒组(ME)、胰岛素分泌模型组(MC)、胰岛素抵抗组(IR)、阳性药格列本脲组(Gli)和罗格列酮组(ROZ)及知母醇提物组,测定各组基础胰岛素分泌(BIS)和葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)值.结果 知母醇提物质量浓度在0.3～ 30 μg/mL时对正常细胞有明显的增殖作用,与MC组的GSIS比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);与IR组的BIS和GSIS比较,知母醇提物浓度在3～ 30 μg/mL能显著促进细胞的BIS能力,同时其质量浓度在0.3 ～ 30 μg/mL能显著性促进GSIS功能.结论 知母醇提物在一定浓度范围内对正常INS-1胰岛β细胞的毒性较低,同时能通过促进正常细胞的增殖,增强其胰岛素分泌能力,改善细胞自身的胰岛素抵抗.     

肥大细胞活化在高脂饲养大鼠胰岛纤维化形成中的作用

目的:探讨胰腺肥大细胞(MC)活化在高脂饲养大鼠胰岛纤维化发生中的作用。方法:8周龄雄性SD大鼠40只随机分为2组,正常饲养组(NC,n=20)、高脂饲养组(HF,n=20),每组各20只。每组大鼠饲养20周后检测空腹血糖、血胰岛素(Ins)、胰高糖素(Glc)、游离脂肪酸(FFA);正常血糖高胰岛素钳夹评价外周胰岛素抵抗程度;胰岛细胞表面灌注评价β及α细胞分泌功能;检测外周血炎症指标:TNF-α、IL-6,取胰腺组织制片,甲苯胺蓝染色显示肥大细胞并计数定量,免疫组织化学标记胰岛IL-6、TNF-α、苦味酸-天狼星红胶染色鉴别胰岛内沉积的胶原纤维类型。结果:(1)HF组大鼠葡萄糖输注率(GIR)明显低于NC组,血Ins、Glc、FFA水平显著高于NC组;(2)HF组大鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)功能明显下降(P<0.01);HF组大鼠基础Glc的分泌是NC组的3倍(P<0.01),16.7mmol/L葡萄糖灌注后Glc分泌未受抑制;(3)HF组大鼠胰岛纤维化,肥大细胞数量明显增多,部分细胞呈脱颗粒状。肥大细胞IL-6呈阳性表达。苦味酸-天狼星红胶染色结果:根据胰岛内纤维化的范围,将胰岛纤维化程度分为轻、中、重三度:轻度纤维化范围<30%;中度纤维化范围在>30%<60%之间;重度纤维化范围>60%胰岛纤维化,偏振光显微镜观察胰岛内沉积的纤维,主要为I型及III型胶原纤维,炎细胞浸润。结论:长期高脂饲养脂毒性使肥大细胞增生、活化脱颗粒释放致炎因子IL-6、TNF-α从而促进了胰岛内胶原纤维沉积。     

日本血吸虫感染对C57BL/6J小鼠脂肪肝及胰岛素抵抗的影响

目的 观察血吸虫感染对高脂饮食诱导的脂肪肝小鼠肝组织结构与功能、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)及Ym-1 mRNA表达的影响,探讨巨噬细胞选择性活化对肥胖鼠肝脏及胰岛素抵抗的影响及可能机制.方法 建立日本血吸虫感染复合高脂饲养C57BL/6J小鼠模型,测定空腹血糖(FBG)、血浆胰岛素水平(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);测定肝匀浆液谷丙转氨酶(ALT)、三酰甘油(TG)及胆固醇(TC)水平;HE染色观察肝组织病理改变,RT-PCR检测肝组织TNF-α、NF-κB及Ym-1转录水平等.结果 ①感染后第6周,高脂(HF)组及高脂感染(HSj)组小鼠体重均较对照(NC)组增加＞20％,肥胖模型造模成功.结合肝组织病理,脂肪肝造模成功.②感染后第6周及第12周,HSj组小鼠肝细胞脂肪变性及炎性细胞浸润较同期HF组轻,HSj组HOMA-IR较同期HF组下降(P＜0.05).③感染后第6周和第12周时,HF组TNF-α mRNA及NF-κB mRNA表达高于HSj组和NC组(P＜0.05);第6周末时,HF组Ym-1 mRNA的表达高于NC组和HSj组(P＜0.05),第12周末时HSj组表达强度高于HF组和NC组(P＜0.05),且较6周时表达增强(P＜0.05).④HF组小鼠HOMA-IR与肝组织TNF-α mRNA光密度相对值呈正相关(r=0.680,P=0.018);HSj组小鼠HOMA-IR与肝组织Ym-1mRNA光密度相对值呈负相关(r=-0.724,P=0.015).结论 肥胖鼠脂肪肝组织中炎症因子TNF-α及调控因子NF-κB的表达水平与胰岛素抵抗的形成有一定关系,日本血吸虫感染通过诱导肥胖鼠巨噬细胞选择性活化Ym-1转录水平增高及TNF-α和NF-κB转录水平的降低,改善胰岛素抵抗,为糖尿病防治研究提供新思路.     

解偶联蛋白2基因表达与胰岛β细胞分泌功能的关系及机制

目的 观察长期高脂饮食对大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌功能的影响,探讨解偶联蛋白2(UCP2)及相关的氧化应激在其中的作用及机制.方法 8周龄SD大鼠随机分为正常饲料组(NC组,20只)和高脂饲料组(HF组,20只).饲养20周检测以下指标:(1)血浆硝基酪氨酸,丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平;(2)正常血糖高胰岛素钳夹试验,评价外周组织胰岛素抵抗程度;(3)胰岛细胞表面灌注试验,评价离体胰岛β细胞动态分泌功能;(4)实时荧光定量PCR方法比较两组大鼠胰岛细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)以及UCP2mRNA表达的变化.(5)免疫组织化学染色及图像分析检测IRS-1,IRS-2在两组大鼠胰岛中的表达.结果 (1)HF组血浆硝基酪氨酸(0.17±0.01)μmol/L和MDA(22±5)nmol/L水平高于NC组(0.14±0.02)μmol/L,(13±3)nmol/L,(P均＜0.05),GSH水平(103±9)mg/ml明显低于NC组(142±9)mg/l,(P＜0.01);(2)HF组葡萄糖输注率(GIR)较Nc组明显降低(P＜0.01);HF组葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)功能明显下降(P＜0.01);(3)HF组胰岛细胞IRS-1及IRS-2mRNA表达分别降低42.3%、28.1%,UCP2表达增高32.5%(P均＜0.05).(4)HF组胰岛IRS-1和IRS-2的表达较对照组分别降低26.3%(P＜0.05)和11.2%(P＞0.05).(5)UCP2与胰岛细胞IRS-1 mRNA表达呈负相关(r=-0.621,P＜0.05);且与IRS-2mRNA表达也呈负相关(r=-0.416,P＜0.05).结论 长期高脂饲养能导致大鼠胰岛细胞胰岛素信号分子表达下降,β细胞胰岛素分泌功能受损,具体机制推测与UCP2相关的氧化应激增强有关.     

高脂饮食肥胖大鼠胰岛细胞胰岛素抵抗机理的探讨

目的探讨高脂饮食诱导的肥胖大鼠在具有外周胰岛素抵抗(IR)的情况下,胰岛胰岛素、胰高血糖素的分泌和合成功能,高糖刺激下胰高血糖素和胰岛素的分泌以及胰岛内胰岛素信号转导分子的改变。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为高脂饲料喂养的肥胖组和普通饲料喂养的对照组,每组各15只,共喂养20周。采用胰腺组织匀浆,检测胰岛素和胰高血糖素的含量;胰岛细胞表面灌注检测高糖状态胰岛素和胰高血糖素的动态分泌变化;免疫组织化学染色及图像分析检测胰岛素受体(IRc)及胰岛素受体底物1、2(IRS1、IRS2)在两组大鼠胰岛的表达。结果(1)肥胖组胰岛素敏感指数(ISI)明显低于对照组,肥胖组血胰高血糖素水平和胰岛内的胰高血糖素水平均显著高于对照组(362pg/ml±58pg/mlvs291pg/ml±35pg/ml,P<0.05;442pg/ml±56pg/mlvs287pg/ml±48pg/ml,均P<0.05)。(2)肥胖组葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)受损,16.7mmol/L葡萄糖可显著抑制对照组胰岛α细胞胰高血糖素的分泌,而在肥胖组这种抑制作用消失。(3)胰岛存在IRc、IRS1和IRS2的表达。肥胖组胰岛IRc、IRS2的表达较对照组胰岛分别低28%和22%(均P<0.01)。结论高脂饮食诱导的肥胖大鼠胰岛细胞的胰岛素信号转导通路受损,即在有外周IR的同时也具有胰岛内的IR,这可能是肥胖状态下胰岛细胞功能障碍的内在机制之一。     

高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠肥胖及减重手术模型的建立

目的 建立饮食诱导的肥胖小鼠模型,研究建立肥胖小鼠胃袖状切除术模型的可行性及有效性.方法 将40只4周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠随机分为普通饮食组(n=20)和高脂饮食组(n=20),均喂养20周.20周后随机分为4个亚组:普通饮食假手术组,普通饮食手术组,高脂饮食假手术组,高脂饮食手术组.定期测量体重及空腹血...