综合放血法所致血虚证小鼠模型及 四物汤反证的代谢组学研究

目的:通过检测综合放血法所致血虚证及用四物汤干预治疗后小鼠内源性代谢物的变化,确定综合放血法所致血虚证小鼠的血清及组织相关的生物标记物,从代谢组学角度研究血虚证证本质及四物汤的作用机制.方法:C57小鼠30只,按体重随机分为3组:正常对照组、综合放血模型组、四物汤反证组,每组10只.造模10 d后于小鼠股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓,并分别提取血清及组织的脂溶性和水溶性代谢物.用600 MHz超导傅立叶变换核磁共振波谱仪检测,对所得到的氢谱按每段0.01进行分段积分并归一化,用SIMCA-P10.0软件进行主成分分析.结果:与对照组相比,模型组的血清及各组织的内源性代谢物中乳酸、胆碱、牛磺酸、丙氨酸、低密度脂肪酸、甘油、不饱和脂肪酸、肌醉、乙酞乙酸盐、丙氨酸及庄β-羟基丁酸的含量有明显变化,这些变化在四物汤治疗组中有不同程度的回调.上述代谢物可以作为潜在的生物标记物进行相关机制的研究.结论:综合放血法制作的血虚证小鼠的糖有氧氧化受到抑制,无氧酵解减弱,脂肪动员加强,淋巴细胞增殖受到抑制及机体免疫功能受损.四物汤能够对上述血虚证病理结果进行逆转.     

四物汤对辐射致血虚证小鼠作用的代谢组学研究

目的:基于超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)技术进行辐射损伤致血虚证以及四物汤的方证结合研究,发现辐射致血虚证及用四物汤干预后小鼠内源性代谢物的变化,基于代谢组学的方法考察血虚证的发生及四物汤的作用机制。方法:选用C57小鼠36只,按体重随机分为对照组、模型组及四物汤组。造模方法采用3.5Gy60Coγ射线全身照射制作模型,造模7 d后股动脉取血并摘取脾脏和胸腺,进行处理后用UPLC-ESI-Q-TOF-MS检测,应用Mark-erLynx XS软件对总离子流图进行色谱峰识别,利用主成分分析法对数据进行处理,采用正交偏最小二乘法进行组间数据分析。通过模式识别分析,快速确认标志物。结果:辐射损伤所致的血虚证小鼠血清中溶血磷脂、葡糖苷酸、单酰甘油酯、三羟基丁酸、神经酰胺、天冬氨酸磷酸酯、甘油磷脂等代谢物的含量变化明显;脾脏中变化明显的代谢物有单酰甘油酯、神经酰胺、溶血磷脂、羟基丁酸、棕榈酸、3-羟基硬脂酸、二甲基精氨酸、苯丙氨酸、磷脂酰丝氨酸;胸腺中有甲基腺苷、谷甾醇、肉毒碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、甘油二酯、二甲基精氨酸、神经酰胺、溶血磷脂、羟基丁酸、胆固醇等。结论:通过对这些生物标志物的生理功能分析,推测辐射损伤使小鼠机体的脂类代谢、糖类代谢及部分氨基酸的合成代谢发生紊乱,经典补血方剂四物汤治疗可以使之逆转并调整平衡。     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证治疗后的代谢组学研究

目的:通过分析血虚证模型以及给予四物汤反证后小鼠血清和组织提取物的代谢组学变化,结合模式识别的统计分析方法,探讨环磷酰胺所致血虚证及四物汤治疗后的特征性内源代谢谱的改变,为中药经典复方四物汤的作用机制研究提供科学依据。方法:将C57小鼠按体重随机分为3组:正常对照组、环磷酰胺模型组、四物汤给药组(10 g.kg-1.d-1),每组10只,连续给药7 d后股动脉取血,同时取脾脏、胸腺及股骨骨髓。用600 MHz超导傅立叶变化核磁共振波谱仪检测,对所得到的氢谱按每段0.04进行分段积分并归一化后,用SIMCA-P10.0软件进行主成分分析。结果:正常对照组、环磷酰胺模型组和四物汤给药组的血清代谢物组成、胸腺、脾脏、骨髓提取物的成分明显不同。其中环磷酰胺导致血清中的乳酸、3-羟基丁酸、胆碱、葡萄糖的含量下调,低密度脂蛋白、亮氨酸/异亮氨酸含量上调;胸腺提取物中的牛磺酸,胆碱,F:βRCH2CH2CO,epi-coprostanol,乳酸含量下调;脾脏提取物中的乳酸,3-羟基丁酸,胆碱,F:βRCH2CH2CO,epi-coprostanol,牛磺酸的含量下调;骨髓提取物中的乳酸、3-羟基丁酸、胆碱、葡萄糖的含量下调。给予四物汤后,以上各成分在不同程度上得到有效逆转。结论:环磷酰胺所致血虚证的可能机制是导致机体脂肪酸β氧化功能紊乱、细胞内外渗透压平衡破坏以及糖酵解功能失调。经典补血方剂治疗血虚证的机制可能与改善线粒体功能,纠正脂肪酸β氧化功能紊乱;稳定细胞膜,维持细胞内外正常渗透压;调节糖酵解,促进机体正常能量代谢有关。     

不同造模方法所致血虚证及四物汤干预的代谢及蛋白质组学研究

四物汤为经典的补血剂,血虚证为临床多见证候,四物汤及血虚证的现代实验研究常用的动物造模方法分为放血法、溶血法、辐射损伤法、化学损伤法和综合造模法。基于系统生物学的研究,总结不同造模方法所致血虚证模型及四物汤干预的代谢及蛋白质组学的研究,对于四物汤的疗效评价及其方证相关性研究具有重要意义。     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤治疗环磷酰胺所致小鼠血虚证的作用机理。腹腔注射环磷酰胺制成小鼠血虚证模型;测定小鼠外周血象;骨髓细胞集落形成;CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例;小鼠胸腺指数。结果表明四物汤具有明显促进骨髓造血和增强免疫的作用,并可升高血虚证小鼠的外周血象。四物汤增强免疫、促进造血可能是四物汤治疗小鼠血虚证的机理之一。     

四物汤对血虚证患者血清蛋白质的影响

目的:用蛋白质组学技术考察四物汤对血虚证患者血清蛋白的影响,在分子水平上探讨四物汤治疗血虚证的作用机制。方法:收集正常、血虚证患者和四物汤用药患者的血清,用二向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定四物汤对血虚证患者血清中有影响的蛋白质。结果:蛋白质组学研究发现,血虚证患者血清与正常相比有15个蛋白质的水平发生改变,其中有11个上调和4个下调,四物汤可使这些改变的蛋白质水平有所恢复。胶内酶切提取蛋白进行质谱鉴定,其中血虚证患者血清与正常相比升高的蛋白质有结合珠蛋白,聚集素,补体C4B,GTP结合蛋白2,与正常相比降低的蛋白质有转甲状腺素蛋白,血红蛋白β。血虚证患者服用四物汤后可降低结合珠蛋白,聚集素,补体C4B,GTP结合蛋白2,升高转甲状腺素蛋白,血红蛋白β。结论:四物汤可以通过增强免疫,减轻基因损伤,增加血红蛋白等途径治疗血虚证。     

四物汤及两味中药组方对γ射线照射所致血虚证小鼠作用机制的研究

[目的]探讨四物汤及其两味药组方治疗血虚证小鼠的补血作用机制。[方法]采用60^Coγ射线全身照射制成实验性小鼠血虚证模型，测定外周血象、CD34^ 细胞、细胞周期、NFS60细胞增殖以及造血干祖细胞的增殖情况。[结果]1)四物汤在各指标上都优于其两味药组方；(2)两味药组方中，当归相关组对CFU—E，CFU—Mix，CFU—GM的促进作用较好，且有升高白细胞的作用；而地黄相关组对CFU—E有增殖作用；白芍相关组能明显促进NFS60细胞的增殖；川芎相关组增加CD34抗原表达，并促进细胞由G0/1期向S期转化，其作用和所含的川芎嗪有关。[结论]四物汤全方优于两味药组方，各组方的作用靶点和作用强度各有异同。     

四物汤对血虚证小鼠骨髓细胞CD 34抗原表达的影响

目的：探讨四物汤对^60Coγ射线或环磷酰胺诱导的血虚证小鼠骨髓细胞CD34抗原分子表达的影响。方法：用^60Coγ射线全身照射小鼠升腹腔注射环磷酰胺造成小鼠血虚证模型，实验分正常组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，荧光标记小鼠骨髓细胞并用流式细胞仪 测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例，同时做小鼠骨髓细胞 落培养。结果与结论：四物汤可促进血虚小鼠骨髓中干祖细胞增生，增加CD34抗原分子的表达，为四物汤治疗血虚证提供了依据。     

四物汤对环磷酰胺致血虚证小鼠骨髓蛋白质组的影响

目的：研究四物汤对环磷酰胺（CTX）损伤致血虚证小鼠骨髓蛋白质组的影响,旨在分子水平上探讨四物汤促进骨髓造血的作用机制。方法：采用CTX 250 mg·kg^-1腹腔注射制成化学损伤型血虚证小鼠模型,利用蛋白质组学技术研究四物汤治疗后的差异蛋白质组。结果：研究发现CTX使小鼠骨髓中12个蛋白表达上调、3个蛋白表达下调,四物汤可使CTX造模后这些表达改变的蛋白有不同程度恢复。结论：四物汤可能通过影响与细胞凋亡、造血干祖细胞增殖分化有关的蛋白质而促进骨髓造血。     

基于代谢组学技术研究黄芩对小鼠代谢的影响

目的:基于代谢组学技术研究黄芩对正常小鼠血清和肝脏内源性代谢产物的影响。方法:采用基于核磁共振(1H-NMR)代谢组学技术结合多元统计分析及单变量分析手段,比较正常小鼠与黄芩干预小鼠的血清和肝脏内源性代谢物的变化。结果:给予黄芩后小鼠机体内源性代谢物发生了明显变化。与空白组相比,黄芩组小鼠血清中的10种代谢物含量发生变化,如3-羟基丁酸、柠檬酸、胆碱等含量升高,α-葡萄糖和β-葡萄糖含量下降;肝脏中19种代谢物含量发生变化,如谷氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、肝糖原、腺苷等含量升高,黄嘌呤等含量降低,这些内源性代谢物的改变涉及机体的糖代谢、脂肪代谢、氨基酸代谢等途径。结论:黄芩对正常小鼠机体代谢的影响不仅与其寒性有关,而且可能与其抗氧化、保肝、降糖等药理作用密切相关,可为黄芩的药性和药理作用机制的深入研究提供参考。     

柴芪汤治疗肝郁脾虚型代谢综合征患者临床疗效观察

[目的]观察柴芪汤治疗肝郁脾虚型代谢综合征患者的临床疗效.[方法]使用随机数字表法将80例肝郁脾虚型代谢综合征患者分为两组,对照组40例,予基础治疗(控制饮食及适当运动);治疗组40例,予基础治疗的同时口服柴芪汤.治疗3个月后,观察两组患者血压、体重指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗...     

毓宫胶囊对肾阳虚型子宫发育不良大鼠IL2-IFN-NKC免疫调节网影响的研究

【目的】观察毓官胶囊对肾阳虚型子宫发育不良大鼠IL2（自介素-2）-IFN（干扰素）-NKC（自然杀伤细胞）免疫调节网的影响，探讨其治疗子宫发育不良的机制。【方法】通过对幼龄SD雌鼠40只随机分为4组：正常对照组（A组）、模型组（B组）、右归丸组（C组）、毓宫胶囊组（D组），肌注地塞米松复合双侧卵巢切除建立肾阳虚型子宫发育不良模型，对模型动物用毓宫胶囊治疗，右归丸做对照，治疗18d后处死，取胸腺、脾脏、子宫称质量，并测定脾组织IL2、IFN、NKC活性。【结果】肾阳虚子宫发育不良大鼠胸腺、脾脏、子宫质量以及IL2、IFN、NKC活性均较正常组明显下降（P〈0．01），毓宫胶囊能提高胸腺、脾脏、子宫质量及IL2、IFN、NKC活性（P〈0．01）。【结论】肾阳虚型子宫发育不良大鼠的非特异性免疫力下降；毓宫胶囊在促进肾阳虚型子宫发育不良大鼠子宫发育的同时，提高IL2、IFN、NKC活性，正向调节其免疫功能。即毓宫胶囊有调节神经内分泌免疫网的作用。     

红芪口服液增强免疫力的药理作用研究

[目的]考察红芪口服液对环磷酰胺诱导的免疫低下小鼠免疫功能的影响,为其临床用药提供一定实验依据.[方法]实验选用雄性昆明小鼠,采用腹腔注射环磷酰胺(35 mg/kg)方法复制免疫低下动物模型,设置正常组、模型组、红芪口服液低(5.2 mL/kg)、中(20.8 mL/kg)、高(41.6 mL/kg)剂量组,连续灌胃给...     

乌梅丸联合四君子汤治疗放射性肠炎30例（脾胃气虚型）的临床观察

[目的]观察乌梅丸联合四君子汤治疗放射性肠炎的有效性,以期为临床治疗放射性肠炎提供有效治法。[方法]将60例放射性直肠炎(脾胃气虚型)患者随机分为治疗组和对照组,其中对照组给予蒙脱石散口服;治疗组在对照组基础上给予乌梅丸联合四君子汤,观察两组临床症状、放射性损伤(RTOG/EORTC)分级、中医证候量表评分及卡氏评分(KPS)等。[结果]两组治疗后治疗组中医证候量表评分、RTOG分级、KPS生活质量评分、治疗效果总缓解率,两组对比有统计学意义(P0.05)。两组服药后未出现不良反应。[结论]乌梅丸联合四君子汤治疗放射性肠炎(脾胃气虚型)确有良好疗效,值得临床应用推广与研究探讨。     

基于信息熵关联度系数法的证候/证候要素提取研究

[目的]探索运用信息熵关联度系数法对四诊症状的分析,提取中医的证候,证候要素.[方法]对于临床采集的1787例抑郁症、慢性乙型肝炎、慢性肾功能衰竭患者的37个四诊症状,采用信息熵关联度系数法对未经事先辨证的症状数据进行聚类分析.[结果]得到39组四诊症状的组合,经初步诠释,发现存在有肾阳虚、肝气郁结、肝脾不和、肝胃不和、气阴两虚、心气虚等证候.涉及的病位类证候要素主要有心、肝、脾、胃、肾,病性类证候要素主要有气虚、阴虚、阳虚、气滞、血瘀、痰、湿、热.[结论]通过运用信息熵关联度系数分析方法对基于临床调查的数据进行分析,获取的一些症状组合可为中医常见证候及证候要素的研究提供依据.     

2型糖尿病患者中医证素研究

[目的]分析2型糖尿病(T2DM)患者关键中医病位证素,并探索各病位证素的临床流行病学规律,为中医临床辨治提供依据。[方法]将192例T2DM患者中医病位辨证归属为脾、肾、肝,探讨各组之间的差异。[结果]各组在性别比例、年龄构成、BMI指数不存在统计学差异(P0.05);在睡眠时间上肝、肾两组的睡眠时间较脾组睡眠时间明显缩短(P0.05);高血压、冠心病、脂代谢紊乱在各组的发生率没有明显差别(P0.05)。肝组主要虚性证素为:阴虚(P0.01);主要实性证素频数由高到低依次为:阳亢、湿、痰、气滞、血瘀、热(P0.05);脾组主要虚性证素频数由高到低依次为气虚、阳虚(P0.01),主要实性证素为湿(P0.05);肾组主要虚性证素为阳虚(P0.05),主要实性证素为湿(P0.01)。[结论]T2DM患者病位在肝时,容易出现阴虚;病位在脾、肾时容易出现阳虚。临床辨治T2DM时应注重肝阴的滋养,与脾、肾阳气的温补,同时注重祛除各脏腑湿邪。     

茯苓多糖对B16黑色素瘤人工肺转移模型的影响

[目的]探讨茯苓多糖对B16黑色素瘤小鼠人工肺转移的影响,并对其作用机制进行初步研究。[方法]C57BL/6小鼠接种B16黑色素瘤,分为茯苓多糖高、低剂量组、顺铂组、模型组,茯苓多糖高、低剂量组分别给予每只小鼠茯苓多糖0.5 mg、0.33 mg,顺铂组给予顺铂0.04 mg,模型组给予生理盐水,接种瘤细胞后第2天开始尾静脉注射给药,隔天给药1次。观察小鼠一般状态,造模后21 d取肺,计数肺表面转移灶个数、HE染色检测肺微小转移灶个数,并检测外周血白细胞数量及脾质量、脾指数。[结果]顺铂能够抑制肺转移,同时降低小鼠体质量、外周血白细胞数量、脾质量和脾指数。而茯苓多糖高、低剂量组对B16荷瘤鼠的体质量无明显影响,茯苓多糖高剂量可明显降低肺表面转移灶个数,茯苓多糖高、低剂量可减少肺微小转移灶个数,高剂量组外周血白细胞数量明显降低,低剂量组与模型组无统计学差异,低剂量可增加B16荷瘤鼠的脾质量和脾指数,高剂量对B16荷瘤鼠的脾质量和脾指数无明显影响。茯苓多糖高、低剂量组脾质量和脾指数均高于顺铂组。[结论]茯苓多糖能够抑制尾静脉注射B16荷瘤小鼠肺转移,增加其脾质量和脾指数,无明显增加其外周血白细胞数量的作用,推测活化外周血白细胞,增强免疫功能可能参与茯苓多糖抑制肿瘤转移的机制。     

慢性丙肝不同肝纤维化程度中医证候相关分析

[目的]探讨不同肝纤维化程度的慢性丙型肝炎(CHC)患者中医证候表现及中医证素特点。[方法]对452例CHC患者进行中医证候调查,同时行瞬时弹性成像检测获取肝硬度值(LSM),评估患者肝纤维化程度。以LSM7.3～14.6 kPa为界分成3组:LSM7.3 kPa为无或轻微纤维化组;LSM 7.3～14.6 kPa为明显纤维化组;LSM14.6 kPa为严重纤维化组,用SPSS 19.0进行统计学分析。计量资料组间比较采用t检验、χ~2检验;计数资料组间比较采用秩和检验;中医症状、体征采取聚类分析法。[结果]纳入本研究患者390例,其中LSM7.3 kPa 244例;LSM 7.3～14.6 kPa75例;LSM14.6 kPa 71例。LSM7.3 kPa的CHC中医证候主要为肝郁脾虚;LSM 7.3～14.6 kPa的CHC中医证候除肝郁脾虚外,尚有血瘀肾虚;LSM14.6 kPa的CHC中医证候主要为气虚血瘀、肝肾阴虚。[结论]CHC轻度肝纤维化中医证候以肝郁脾虚为主;显著肝纤维化者中医证候以气虚血瘀及肝肾阴虚为主。     

基于IL-7的甘草多糖抗肿瘤机制的研究

[目的]明确甘草多糖抗肿瘤作用及其作用机制。[方法]建立CT-26细胞荷瘤小鼠动物模型,随机分为正常组、模型组、甘草多糖组(甘草多糖灌胃500mg/kg)、香菇多糖组(阳性药组,香菇多糖灌胃195mg/kg)和白细胞介素-7(IL-7)抗体阻断组(甘草多糖灌胃500 mg/kg,IL-7抗体与0、5、10 d腹腔注射0.4 mg/kg)。连续给药14 d,计算小鼠肿瘤质量、抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数;检测小肠黏膜上皮细胞IL-7m RNA表达情况和血清中IL-7含量。[结果]灌胃给予甘草多糖14 d后,甘草多糖可以显著降低荷瘤小鼠肿瘤质量,其抑瘤率为21.56%;显著提高小鼠体质量和胸腺指数,改善其生活质量;提高小肠黏膜上皮细胞IL-7m RNA表达和血清中IL-7含量;IL-7抗体阻断后,其抑瘤率和胸腺指数显著降低,小肠黏膜上皮细胞IL-7m RNA虽高表达,但血清中IL-7含量低于试剂盒检测限。[结论]甘草多糖具有显著的抗肿瘤作用,其抗肿瘤机制可能与提高小肠黏膜上皮细胞分泌IL-7有关。     

痹祺胶囊治疗血栓性浅静脉炎34例临床观察

【目的】研究痹祺胶囊治疗血栓性浅静脉炎的临床效果。【方法】选取病例共计34例，中医辨证分为湿热、血瘀、气虚血瘀3型，均服用痹祺胶囊。【结果】湿热型中痊愈例数较多，占63．6％；血瘀型、气虚血瘀型则起效较慢，痊愈例数较少。【结论】痹祺胶囊治疗血栓性浅静脉炎疗效较高，用药安全，值得进一步观察使用。