－80℃低温冷冻保存人外周血造血干细胞

采用６％羟乙基淀粉（ＨＥＳ）和５％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）为冷冻保护剂，不用程控降温装置和液氨，直接于一８０℃冰箱中冻存外周血造血干细胞（ＰＢＳＣ）。于冻存前和冻存后１周、１个月、２个月和３个月分别取样分析。冻存３个月后，外周血单核细胞（ＭＮＣ）回收率为８９．８±６．６％；胎盼蓝拒染存活率为８０．２±５．４％；粒一单系造血祖细胞（ＣＦＵ一ＧＭ）回收率为７１．１±８．２％。说明冻存效果好，ＤＭＳＯ用量减少，为ＰＢＳＣ的冷冻提供了一种简单而有效的方法。     

红细胞-80℃冷冻保存的实验观察

观察红细胞(RBC)冷冻保存后形态、结构和功能的变化.采用慢速冷冻法.冷冻前后分别检测红细胞平均体积(MCV)、红细胞脆性(RFT)、全血粘度(WBV)、红细胞变形性(RBCD)、膜的流动性(LFU)、血氧饱和度(SO2at)、红细胞压积(HCT)、红细胞回收率(RBCRR)和红细胞免疫功能.结果发现红细胞解冻复苏后仍然对低渗盐溶液有较强的抵抗力;MCV、RBCD和LFU无显著性差异(P>0.05);WBV和HCT下降,RBCRR达84.1%(P<0.01);SO2at2由30.5%上升到98.2%;免疫功能各项指标检测均无显著性差异(P>0.05).提示红细胞冷冻保存后其质量不变并可长期进行冷冻保存.     

红细胞—80℃冷冻保存的实验观察

观察红细胞（RBC）冷冻保存后形态,结构和功能的变化,采用慢速冷冻法,冷冻前后分别检测红细胞平均体积（MCV）,红细胞脆性（RFT0,全血粘度（WBV）,红细胞变形性（RBCD）,膜的流动性（LFU）,箅氧饱和度（SO2at),红细胞压积（HCT）,红细胞回收率（RBCRR）和红细胞免疫功能,结是要发现;红细胞解冻复苏后仍然对低渗盐溶液有较强的抵抗力,MCV,RBCD和LFU无显著性差异（P＞0．05）,WBV和HCT下降,RBCRR达84．4％（P＜0．01）,SO2at2由30．5％下升到98．2％,免疫功能各项指标检测均无显著性差异（P＞0．05）,提示：红细胞冷冻保存后其质量不变并可长期进行冷冻保存。     

人胎胰岛细胞冷冻保存的研究

探讨冷冻保存器官和组织的方法，以求移植择期进行，方法：胎儿胰岛组织经培养后用缓慢冷冻和快速复温的方法，保存３０ｄ，检查胰岛组织的形态和合成释放胰岛素的功能。结果：胰岛细胞仍保持其生物等特性。结论：胎儿胰岛细胞经冷冻后仍保持其生物学特性，为胰岛移植治疗Ｉ型糖尿病开阔了光明前景。     

非程控降温-80℃冷冻保存外周血干细胞的活性观察

目的 :观察非程控降温 - 80℃冷冻保存外周血造血干 /祖细胞的活性 ,为临床自体外周血造血干细胞移植提供方便、有效的冻存方法。方法 :常规方法动员外周血干细胞 ,CS - 30 0 0PLUS血细胞分离机采集干细胞 ,以 10 %二甲亚砜、10 %人AB型血清、RPM116 4 0培养基为冷冻保护剂 ,2ml/管冻存干细胞 ,按第 1、2、4周和第 2、3月顺序复苏细胞并测定GM -CFU集落数、台盼兰拒染率和CD34 细胞百分率。结果 :用该方法冷冻保存的外周血干细胞 ,在 4周内其细胞活性与采集时的细胞活性无明显差别 (P >0 .0 5 ) ,冻存至 2～ 3个月时细胞活性则明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 :应用血清和DMSO等作为冷冻保护剂、- 80℃直接冻存的外周血干细胞 ,在 4周内复苏后其细胞活性无明显降低。     

生长抑素受体特异性激动剂对人肝癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨生长抑素受体特异性激动剂对体外培养的人肝癌细胞HepG2生长的影响。方法分别采用MTS、TUNEL、Transwell法检测生长抑素受体亚型特异性激动剂对体外培养的人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡、迁移的影响。结果与对照组相比,SSTR2~4亚型特异性激动剂对人肝癌细胞的增殖、凋亡、迁移没有明显影响,SSTR5亚型特异性激动剂L-817、818在剂量为1μg·mL-1时可以出现较明显的迁移抑制作用,剂量达到5μg·mL-1时,差异有统计学意义(P<0.05)。其他不同浓度激动剂对HepG2的迁移抑制作用不明显。结论 SSTR亚型特异性激动剂对肝癌细胞的增殖、凋亡、侵袭没有明显的影响,L-817、818在高剂量时可以抑制HepG2的迁移。     

生长抑素受体特异性激动剂对人肝癌细胞生长影响的实验研究

目的探讨生长抑素受体特异性激动剂对体外培养的人肝癌细胞HepG2生长的影响。方法分别采用MTS、TUNEL、Transwell法检测生长抑素受体亚型特异性激动剂对体外培养的人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡、迁移的影响。结果与对照组相比,SSTR2~4亚型特异性激动剂对人肝癌细胞的增殖、凋亡、迁移没有明显影响,SSTR5亚型特异性激动剂L-817、818在剂量为1μg·mL-1时可以出现较明显的迁移抑制作用,剂量达到5μg·mL-1时,差异有统计学意义（P〈0.05）。其他不同浓度激动剂对HepG2的迁移抑制作用不明显。结论 SSTR亚型特异性激动剂对肝癌细胞的增殖、凋亡、侵袭没有明显的影响,L-817、818在高剂量时可以抑制HepG2的迁移。     

人胎黑质细胞的冷冻保存

采用台盼蓝染色法，观察了第３￣６月人胎黑质细胞冷冻保存的细胞存活率，结果：①胎龄３￣６月人胎黑质细胞冷冻保存后均可存活，但以胎龄３和４月细胞存活率较高。②液氮保存的细胞存活率不受保存时间的影响，而４℃保存的细胞存活率随保存时间的延长而逐渐降低。结果提示，液氮保存人胎黑质细胞的保存条件以胎龄３和４月为宜。     

人生殖细胞的冷冻保存

随着低温生物学技术和体外受精-胚胎移植术(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)的不断发展,人精子及胚胎已被成功的冷冻保存并应用于临床实践中.目前,卵母细胞的冷冻保存虽然仍处于实验阶段[1,2],但已有数例关于冷冻保存卵子成功受孕并分娩出健康胎儿的报道.     

冷冻保存人同种主动脉瓣生物力学研究

用生物力学实验方法，研究冷冻保存对人同种主动脉瓣力学的影响以及与保存时间的相关性。结果显示：冷冷保存不影响应力松驰速度，保存１５月内对应力－应变关系和破坏参数无影响。它提示冷冻保存对人同种主动脉瓣力学性质影响较小，其机理与冷冻保存可防止胶原纤维、弹性纤维和基质的损害有关。临床上应用冷冻保存１５月内的同种瓣是合适的。     

冷冻保存骨骺软骨组织的实验研究

目的：通过对兔骨骺软组织的冷冻保存和进行同种异体移植模拟研究，为临床骨骺软骨的保存和应用提供理论依据。方法：选用1个月龄的新西兰大白兔的髂骨骨骺24份。用10％二甲亚砜（DMSO）冷冻保护液保护后，用温度速 降仪使骨骺软骨的环境温度逐渐降至－80℃，然后迅速放入液氮中保存1、3、6周。取出后在室温下置入等渗盐水中复温。其中12份进行组织学和组织化学检查；另12份作为供体，植入同种成年兔股骨头部分缺损中，分别观察4、12和24周。然后取出股骨头进行大体、 组织学和组织化学检查。结果：实验显示，在上述冷冻条件下，大部分骨骼可存活并保存骨骺组织生长塑形，逐渐骨化和替代关节软骨的功能。结论：只要冷冻条件合适，骨骺软骨组织保存一定时间后仍具有生理功能，这为临床上修复骨骺损伤和关节软骨缺损提供了一条新的途径。     

冷冻保存异体神经移植实验研究

目的：寻求异体神经移植修复周围神经缺损的可能性。方法：用－３０℃保存６０天的同种异体神经桥接大鼠坐骨神经１５ｍｍ缺损；术后进行神经传导速度检测，神经功能恢复检查及组织学观察。结果：异体神经移植与自体神经移植比较，在早期有非常显著的差异性，随着恢复期延长，其差异性逐渐缩小，到６个月时已无明显差别。结论：认为用冷冻保存的异体神经移植修复周围神经缺损是有效的方法。     

冷冻保存软骨移植的实验研究

本实验采用低温冷冻异体兔胎软骨移植，实验组和新鲜软骨移植对照组。每组各移植软骨１２０块，于植入后１５、３０、６０、９０、１２０ｄ取出软骨标本，进行肉眼观察，光镜和电镜检查，免疫组化检查，结果冻存软骨无吸收和再生，亦无坏死，排异反应轻，对照组有不同程度的增长，部分出现钙化，边缘灶性坏死，本实验对软骨的冻存在临床应用上有着重要的意义。     

骨髓细胞-80℃保存及其程序移植的实验研究

目的：提供简便有效的骨髓细胞（ＢＭＣ）保存方法,以便进一步提高骨髓移植效果。方法 以昆明种小鼠急性放射病为模型,进行了－８０℃冷冻保存ＢＭＣ及其程序移植的研究。结果 －８０℃保存的ＢＭＣ其有核细胞回收率为（８９．０±３．５）％,锥虫蓝拒染率为（８５．０±３．６）％;产率（每１０＾５个ＢＭＣ）;单巨噬细胞克隆形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）为１０８±１０,脾细胞克隆形成单位（ＣＦＵ－Ｓ）为１２±３。昆明种小     

丹参酮ⅡA抑制人肝癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的　研究丹参酮ⅡA对人肝癌细胞系BEL 740 2的生长抑制及凋亡诱导作用。方法　 0～ 10 μg/ml丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞 72h后 ,用MTT比色法观察其细胞毒性 ,荧光显微镜、透射电镜检测细胞凋亡 ;流式细胞术 (Flowcy tometry ,FCM )定量检测 5 μg/ml丹参酮作用不同时间后的细胞凋亡率。 结果　丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制肝癌细胞的生长 ,其IC50 值为 6.2 8μg/ml。 1～ 10 μg/ml丹参酮ⅡA作用 72h后 ,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂、细胞出芽以及凋亡小体形成等凋亡特征性的形态学改变。流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰 ,5 μg/ml浓度作用12、2 4、3 6、48、72h后的细胞凋亡率分别为 ( 2 .3 2± 0 .16) %、( 3 .0 1± 0 .3 5 ) %、( 3 .87± 0 .43 ) %、( 6.73± 0 .5 8) %和 ( 2 0 .85±1 74) % ,与对照组 ( 1.0 7± 0 .13 ) %比较均有显著性差异。结论　在体外丹参酮ⅡA能诱导人肝癌细胞系BEL 740 2凋亡 ,这可能为丹参酮ⅡA抑制其生长的机制     

重组人穿孔素肽段的体外杀伤肝癌细胞活性

目的 :以肝癌细胞系SMMC 772 1作为靶细胞 ,观察重组人穿孔素 (PFP)N端肽段 (rhPFP N)及C端肽段 (rh PFP C)体外杀伤肿瘤细胞的活性。　方法 :用大肠杆菌表达PFP N和PFP C与谷胱甘肽转移酶 (GST)的融合蛋白 ,对表达产物进行纯化 ,将不同浓度的GST rhPFP C或GST rhPFP N加入体外培养的人肝癌细胞SMMC 772 1,2 4h后用镜检和MTT法检测细胞存活情况。　结果 :用GST rhPFP N或GST rhPFP C处理后 ,可见SMMC 772 1细胞膜溶解和细胞破裂。用MTT法检测 ,实验组A值显著低于对照组 (P <0 .0 0 1)。GST rhPFP C和GST rhPFP N浓度为 2 .5ml L时 ,其杀伤活性分别为 33.38%和 5 .90 %。　结论 :rhPFP C和rhPFP N对人肝癌细胞SMMC 772 1均有明显的杀伤活性 ,rhPFP C对SMMC 772 1的杀伤活性显著高于rhPFP N。     

HCV基因转染的肝癌细胞体内外生长的实验研究

目的 研究丙型病毒性肝炎病毒(HCV)感染对宿主肝细胞体外生长速度和体内肝癌生长特性的意义. 方法体外培养HCV基因转染的肝癌细胞(HepG2-HCV)和对照细胞(HepG2-vector),以MTT比色法测定两种细胞的生长速度.19只裸鼠分为三组:MEM培养液组(n=6)、HepG2-HCV组(n=7)和HepG2-vector组(n=6),分别于皮下注射无血清MEM培养液、HepG2-HCV、HepG2-vector细胞各0.2 mL,细胞密度为5×107/mL,观察皮下肿瘤的形成情况,并对小鼠肿瘤和肝、脾、肾、肺、心等脏器作病理学分析.结果 HepG2-HCV的生长速度较对照细胞明显加快,在无血清培养条件下其生长优势更显著.体内成瘤实验结果显示,HepG2-HCV和HepG2-vector两种细胞使实验鼠形成皮下肿瘤的比例分别为71.43%和83.33%,两组间差异无统计学意义(P＞0.05).病理学分析表明,HepG2-HCV组形成的5例实验肿瘤生长良好,片状坏死的发生率为0;HepG2-vector组5例肿瘤组织中均存在片状坏死,发生率为100%,两组间差异有统计学意义(P<0.05).两组肝、脾、肾、肺、心等脏器的病理学分析均未见明显异常.结论 HCV促进肝癌细胞加速生长,并使组织中肿瘤细胞处于良好生长状态.     

HCV基因转染的肝癌细胞体内外生长的实验研究

目的 研究丙型病毒性肝炎病毒(HCV)感染对宿主肝细胞体外生长速度和体内肝癌生长特性的意义. 方法体外培养HCV基因转染的肝癌细胞(HepG2-HCV)和对照细胞(HepG2-vector),以MTT比色法测定两种细胞的生长速度.19只裸鼠分为三组:MEM培养液组(n=6)、HepG2-HCV组(n=7)和HepG2-vector组(n=6),分别于皮下注射无血清MEM培养液、HepG2-HCV、HepG2-vector细胞各0.2 mL,细胞密度为5×107/mL,观察皮下肿瘤的形成情况,并对小鼠肿瘤和肝、脾、肾、肺、心等脏器作病理学分析.结果 HepG2-HCV的生长速度较对照细胞明显加快,在无血清培养条件下其生长优势更显著.体内成瘤实验结果显示,HepG2-HCV和HepG2-vector两种细胞使实验鼠形成皮下肿瘤的比例分别为71.43%和83.33%,两组间差异无统计学意义(P＞0.05).病理学分析表明,HepG2-HCV组形成的5例实验肿瘤生长良好,片状坏死的发生率为0;HepG2-vector组5例肿瘤组织中均存在片状坏死,发生率为100%,两组间差异有统计学意义(P<0.05).两组肝、脾、肾、肺、心等脏器的病理学分析均未见明显异常.结论 HCV促进肝癌细胞加速生长,并使组织中肿瘤细胞处于良好生长状态.