CBX8过表达或沉默对人神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究染色质结构域蛋白8(chromodomain protein 8,CBX8)对人神经胶质瘤细胞增殖与凋亡的作用。方法:Western blot和RT-qPCR检测组织及细胞系中CBX8的表达。构建过表达CBX8和沉默CBX8载体,转染神经胶质瘤细胞T98G和U87MG,分别用MTT法和BrdU实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与正常脑组织和星形胶质细胞相比,神经胶质瘤组织及细胞中的CBX8蛋白和mRNA水平明显上升。在T98G和U87MG细胞中,过表达CBX8均促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,并上调Rb/E2F1的表达水平,而沉默CBX8则作用相反。sh-E2F1转染细胞之后,cyclin D1的表达以及Bcl-2/Bax的比值降低。结论:CBX8可能通过Rb/E2F1通路调节胶质瘤细胞的增殖和凋亡。     

洛伐他汀对胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响

BACKGROUND:Increasing evidence has shown that lovastatin with less toxicity to normal cells has crucial effects on proliferation, apoptosis and differentiation of various cancer cells. However, its roles in glioma stem cells remain unclear. OBJECTIVE:To explore the effect of lovastatin on proliferation and apoptosis of glioma stem cells. METHODS:Flow cytometric sorting was used to separate glioma stem cells from human glioblastoma cell line U87. Effects of lovastatin on the proliferation and apoptosis of glioma stem cells were determined by MTT and flow cytometry, respectively. Furthermore, expression levels of Ki67, Bax and Bcl-2 in glioma stem cells treated with lovastatin were detected using western blot analysis. RESULTS AND CONCLUSION:The CD133-positive glioma stem cells were sorted from human glioblastoma cell line U87 with a positive percentage of 85%. MTT assay showed that lovastatin inhibited the proliferation of glioma stem cells in dose (5, 10, 20 μmol/L)- and time (24, 48, 72, 96 hours)-dependent manners. Flow cytometry analysis showed that 10 μmol/L lovastatin (48 hours) induced apoptosis in glioma stem cells. In addition, the expression level of Ki67 was decreased by lovastatin treatment in a dose-dependent manner, and the Bcl-2 and Bax expression levels were reduced and increased by 10 μmol/L lovastatin treatment, respectively. In conclusion, lovastatin can inhibit cell proliferation and induce apoptosis of glioma stem cells, and lovastatin may be a potential drug for treatment of brain tumors.     

骨形成蛋白4对人胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)对人胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响.方法 在体外以重组人BMP4蛋白干预人胶质瘤U87细胞系来源的胶质瘤干细胞,免疫荧光鉴定胶质瘤干细胞,通过软琼脂克隆实验、流式细胞仪检测,观察BMP4对胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响.结果 BMP4能显著抑制胶质瘤干细胞的增殖能力,并诱导其凋亡.BMP4组增殖相关蛋白Cyclin D1 表达降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达显著增多.结论 BMP4可显著抑制胶质瘤U87细胞系来源的胶质瘤干细胞的增殖能力,并诱导其凋亡.     

三七总皂苷对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对神经胶质瘤U251和U87细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法:将U251和U87细胞各分为两组:对照(control)组和三七总皂苷(PNS)组。CCK-8检测细胞增殖水平;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot检测Caspase-3、Bax、Bcl-2、p-AKT、AKT、p-mTOR和mTOR的蛋白表达水平。结果:U251和U87细胞中的检测结果一致。与control组相比,PNS组的细胞增殖能力和迁移能力均显著下降(P0.05);细胞凋亡率显著升高(P0.05);Bcl-2的蛋白表达水平显著下调(P0.05),而Bax和Caspase-3的表达水平显著上调(P0.05);p-Akt和p-mTOR的蛋白表达水平下降,且差异具有显著性(P0.05)。结论:PNS能够抑制U251和U87细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,这可能与PI3K-Akt-mTOR信号通路的抑制有关。     

Wnt信号通路抑制剂对人神经胶质瘤细胞增殖活力和生长迁移的影响

目的:探讨Wnt信号通路在胶质瘤细胞增殖和生长迁移中的可能作用。方法:建立U251胶质瘤细胞培养体系、并给予不同浓度Wnt信号通路的抑制剂(IWR-1 0,2.5,5.0,10μmol/L)处理后,MTT测定增殖活力、划痕实验测定生长迁移、Western Blot测定Wnt5a、β-catenin蛋白表达水平,分析IWR-1的生物作用与效应途径。结果:MTT表明胶质瘤细胞的IWR-1 5.0、10μmol/L处理24 h、48 h组,细胞增殖活力显著低于对照组(P0.05~0.01)。划痕检测表明IWR-1 5.0、10μmol/L处理48 h组胶质瘤细胞的生长迁移能力低于对照组(P0.05~0.01)。Western Blot表明IWR-1处理48 h组胶质瘤细胞的β-catenin蛋白表达水平低于对照组(P0.05~0.01)。结论:Wnt信号抑制剂IWR-1能够明显抑制人胶质瘤细胞增殖和生长迁移,提示Wnt/β-catenin信号途径可能具有胶质瘤干预治疗靶点的潜在价值。     

LncRNA LINC00663对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)-LINC00663对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法实时荧光定量PCR检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和胶质瘤细胞系A172中LINC00663的表达水平。用siRNA沉默A172细胞中LINC00663的表达,分为siRNA-NC组和siRNA-LINC组,采用CCK-8法和EDU法检测细胞增殖,流式细胞术AnnexinV-FITC/7-AAD双染法检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平,Western blot检测细胞内Wnt3a表达水平。结果 A172细胞中LINC00663的表达水平明显高于HUVEC(P<0.01)。与siRNA-NC组相比,siRNA-LINC组细胞增殖能力降低,凋亡率增加,Wnt3a表达水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LINC00663可能通过调控Wnt3a表达影响A172细胞的增殖和凋亡。     

bFGF对人关节软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外单层培养的人负重关节软骨细胞的增殖和凋亡的影响。方法：对8例来自人负重关节软骨细胞系进行体外单层传代培养，从第2代起试验组培养液中加入bFGF，观察细胞的倍增时间(DT)、流式细胞分析细胞增殖周期和凋亡指数，并与无bFGF组相比较。结果：与未加bFGF相比较，加用10μg／ml bFGF后，DT缩短，S期细胞数升高，细胞凋亡无变化。结论：bFGF能促进培养的人关节软骨细胞生长，不引起细胞凋亡。     

PPARγ介导薯蓣皂苷元对人胶质瘤U87MG细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究薯蓣皂苷元(diosgenin, Dio)对人胶质瘤U87MG细胞增殖、凋亡及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ, PPARγ)表达的影响,并探讨其分子机制。方法:常规培养正常人星形胶质细胞(human astrocytes, HA)和U87MG细胞,给予不同浓度(0、 10、 20、 30、 40和50μmol/L)Dio和GW9662(5μmol/L)处理48 h,采用CCK-8法检测细胞活力,平板集落形成实验检测集落形成率,流式细胞术分析细胞周期和凋亡的变化,RT-PCR法检测PPARγmRNA表达水平,Western blot法检测Bcl-2、Bax、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E1和PPARγ的蛋白表达水平。结果:各浓度Dio对HA的活力无显著影响(P0.05),但Dio可剂量依赖性地抑制U87MG细胞活力(P0.05),IC_(50)为24.31μmol/L;Dio还可剂量依赖性地降低集落形成率(P0.05),诱导G_0/G_1期细胞阻滞和细胞凋亡(P0.05),上调PPARγ的mRNA和蛋白表达水平以及Bax蛋白表达水平(P0.05),并下调cyclin D1、cyclin E1和Bcl-2蛋白表达水平(P0.05),这些效应可被PPARγ抑制剂GW9662阻断(P0.05)。结论:Dio可在体外抑制U87MG细胞增殖并诱导其凋亡,这可能与Dio上调PPARγ表达,继而下调cyclin D1、cyclin E1和Bcl-2蛋白表达以及上调Bax蛋白表达有关。     

胶质瘤细胞增殖与凋亡的研究

对未经其他治疗的手术摘除的胶质瘤标本,采用免疫组化和原位标记方法研究了胶质瘤及其瘤旁组织中细胞增殖以及凋亡的状况。结果表明,增殖细胞核抗原在世界卫生组织（ＷＨＯ）制定的不同级别的胶质瘤中其阳性率具有显著性差异（Ｐ＝ ０．０００５）,而在胶质瘤与其瘤旁组织之间则无显著性差异。恶性程度不同的胶质瘤中细胞发生凋亡的比率具有显著性的差异（Ｐ＝ ０．０１７０）,而在胶质瘤与其瘤旁组织间无显著性差异。增殖细胞核抗原是划分胶质瘤恶性程度的一个较好的指标,与Ｗ ＨＯ 胶质瘤恶性程度分级具有较好的相关性（ｒ＝ ０．４０８９）。Ｗ ＨＯ Ⅱ级星形胶质瘤细胞凋亡明显增多,可能是保留了恶性程度较高的胶质瘤细胞而清除了恶性程度相对较低的胶质瘤细胞,从而可能促进了胶质瘤的恶性进展。胶质瘤邻近的瘤旁组织可能已具有了胶质瘤的某些特性,胶质瘤呈浸润性生长可能与此有密切的关系。     

吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响及可能的机制.方法 以含0.1、1、10、100、1000mg/L吗啡的培养液作用于体外培养的鼻咽癌CNE-2细胞,等体积培养基作为对照组.MTT法检测吗啡作用24、48和72 h的细胞增殖抑制率,并在不同浓度吗啡作用细胞48 h后,用Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Western免疫印迹检测Bc1-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达.结果 相同作用时间点0.1～100 mg/L吗啡并不影响CNE-2细胞的增殖.而在1000 mg/L吗啡作用下细胞增殖受到明显的抑制,在24、48、72 h CNE-2细胞增殖抑制率随作用时间延长而增加,分别达到(15.0±4.4)%、(30.7±4.9)%和(50.0±4.4)%.48 h后,荧光显微镜下对照组CNE-2细胞未见明显凋亡,0.1～100mg/L吗啡组仅见少量凋亡,而在1000mg/L吗啡组,可见到大量细胞出现典型的凋亡形态学改变.流式细胞仪检测结果显示0.1～100 mg/L吗啡组细胞凋亡率与对照组差异并无统计学意义(P>0.05),而1000mg/L吗啡组细胞凋亡率则明显增加[(39.33±6.03)%比(9.36±1.57)%,P<0.05].Western免疫印迹检测显示在1000 mg/L吗啡作用CNE-2细胞48 h后,Bcl-2蛋白的表达量较对照组明显下降,Bax表达增多,caspase-3活性升高,cleaved-caspase-3表达增多.而其他浓度作用下CNE-2细胞Bcl-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达未见明显变化.结论 大剂量吗啡可诱导鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡,其机制可能与吗啡上调CNE-2细胞Bax蛋白表达,下调其Bcl-2蛋白表达,引起caspase-3活化有关.     

notch1基因对人胶质瘤U251细胞增殖和周期的影响

目的：探讨notch1基因对人胶质瘤U251细胞增殖和周期的影响。方法: 体外构建notch1-shRNA和pNL-NICD/EGFP慢病毒表达载体,采用RT-PCR和Western blotting方法行notch1沉默和高表达notch1胞内段的效果检测,MTT法和PI单染流式细胞术分析notch1对细胞增殖和细胞周期的影响。结果：notch1-shRNA慢病毒表达载体能有效下调notch1表达,而pNL-NICD/EGFP慢病毒表达载体能有效增加NICD的表达。notch1基因表达下调的细胞其细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.01),并引起细胞G1期阻滞(P<0.01), S期减少(P<0.01);在NICD表达增加的细胞其增殖能力明显增强(P<0.01),且引起细胞G1期减少(P<0.05),S期增加(P<0.01)。结论: notch1基因与人胶质瘤U251细胞的增殖能力和周期密切相关,有望成为治疗胶质瘤的靶点。     

miR-342对胶质瘤细胞增殖,迁移侵袭及凋亡的影响

目的研究miR-342的表达变化对胶质瘤细胞生物学行为的影响。方法应用real-time PCR方法检测miR-342的内源性表达。CCK-8检测细胞增殖,Transwell法检测细胞的迁移侵袭,流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果miR-342在胶质瘤细胞中表达水平较正常脑组织低;过表达miR-342能够抑制U87胶质瘤细胞的增殖、迁移侵袭,促进凋亡;相反,表达沉默miR-342能够促进U251胶质瘤细胞增殖、迁移侵袭,并抑制细胞凋亡(P0.05)。结论miR-342能够调控胶质瘤细胞的增殖、迁移侵袭,起抑癌基因的作用。     

石蒜碱对人肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨石蒜碱对人肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响。方法人肺癌NCI-H460细胞株于DMEM培养基进行培养,采用1.25、2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L的石蒜碱对其进行处理,并以0.9%NaCl溶液为对照组。倒置显微镜下观察NCI-H460细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2、Bax、Caspase-2、Caspase-3的蛋白表达水平。结果经石蒜碱处理后,NCI-H460细胞外形不规则、细胞皱缩、大小不一致,且细胞破碎程度随给药剂量增加而上升,细胞数量有减少趋势。石蒜碱处理24 h、48 h后,NCI-H460细胞增殖活性显著降低,且下降趋势呈剂量与时间依赖性。石蒜碱处理24 h后,NCI-H460细胞凋亡率显著增高,NCI-H460细胞p53、Bax、Caspase-2、Caspase-3蛋白表达水平显著上调,而Bcl-2表达水平显著下调。结论石蒜碱抑制NCI-H460细胞增殖,促进凋亡,且呈时间与剂量依赖性,与调控凋亡相关蛋白有关。     

Livin反义寡核苷酸对人HL60细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨Livin mRNA反义寡核苷酸（ASODN）对人白血病细胞（HL60）增殖及凋亡的影响。方法 用免疫组织化学检测Livin蛋白表达,设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸（MSODN）,脂质体转染HL60细胞。用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞增殖,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Livin mRNA的表达,原位末端标记技术（TUNEL）、电镜检测细胞凋亡率和形态学改变。结果Livin ASODN在终浓度为600nmol／L作用HL60细胞48h时,能明显地抑制其增殖,降低Livin mRNA的表达,HL60细胞在形态学上出现明显的凋亡改变,细胞凋亡率显著增加 (P<0.01)。结论Livin ASODN可有效抑制HL60细胞的增殖,下调Livin基因表达,并促进HL60细胞凋亡,在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖中发挥重要作用。     

3-溴丙酮酸对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察3-溴丙酮酸对人卵巢癌SK-OV-3细胞株增殖和凋亡的影响,探讨3-溴丙酮酸对人卵巢癌细胞的体外抗肿瘤效应.方法 MTT比色法和集落形成试验检测3-溴丙酮酸对SK-OV-3细胞的增殖抑制作用;采用投射电镜观察3-溴丙酮酸作用后的SK-OV-3细胞形态学改变;流式细胞术检测3-溴丙酮酸作用后SK-OV-3细胞的凋亡,并对细胞周期的变化进行分析.结果 3-溴丙酮酸对SK-OV-3细胞的增殖有明显的抑制作用,具有时间（一段时间内）和剂量依赖性（P＜0.05）.3-溴丙酮酸主要将细胞阻滞于G0/G1,S期细胞明显减少.结论 3-溴丙酮酸对SK-OV-3细胞增殖的抑制效应具有时间依赖性（一段时间内）和剂量依赖性,并可诱导其凋亡.     

低氧微环境对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的观察低氧微环境对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响,并进一步探讨其可能机制。方法将胶质瘤细胞A172和U251分别置于普通细胞培养箱(常氧组:21%氧气含量)和低氧工作站(低氧组:2%氧气含量)中培养,采用CCK-8(Cell Counting Kit,CCK8)法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)和Sox2表达水平。结果低氧组胶质瘤细胞增殖和侵袭水平明显高于常氧组,且HIF-1α和Sox2表达水平也高于常氧组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论低氧微环境可能通过上调Sox2表达促进胶质瘤细胞A172和U251的增殖和侵袭。     

MiR-429通过CRKL靶向作用对U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法培养人U87胶质瘤细胞,应用LipofectamineLTX试剂将pre-miR-429质粒载体以及anti-miR-429质粒载体分别稳定转染人U87胶质瘤细胞;应用Real-time-PCR验证转染效率;应用CCK-8试剂盒检测miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖能力的影响;应用Real-time PCR和Western blot检测人U87胶质瘤细胞中接头蛋白CRKL(v-crk avian sarcoma virus CT10oncogene homolog-like,CRKL)的mRNA和蛋白表达含量变化;将CRKL分别转染至U87胶质瘤细胞和miR-429过表达的U87胶质瘤细胞,应用CCK-8试剂盒检测人U87胶质瘤细胞增殖,应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,应用Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2的蛋白表达变化。结果与对照组相比,miR-429过表达显著抑制了人U87胶质瘤细胞增殖,明显诱导了凋亡发生,显著降低了CRKLmRNA和蛋白在人U87胶质瘤细胞的表达水平,caspase-3的表达水平显著上调,Bcl-2的表达水平显著降低。CRKL过表达显著增强了人U87胶质瘤细胞增殖能力并且抑制了细胞凋亡,caspase-3的表达水平显著下调,Bcl-2的表达水平显著增强;CRKL过表达有效阻断了miR-429上调caspase-3、降低Bcl-2的作用,有效阻断了miR-429抑制U87胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用。结论 MiR-429抑制CRKL从而降低人U87胶质瘤细胞的增殖能力,诱导细胞凋亡。     

siRNA下调astrocyteelevatedgene-1对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的: 探讨siRNA下调astrocyte elevated gene-1( AEG-1 )表达对神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法: 用设计合成的AEG-1 siRNA转染神经母细胞瘤细胞株M17和SK-N-SH,采用荧光定量RT-PCR技术观察AEG-1 siRNA对 AEG-1 基因表达的影响;用MTT法和克隆形成实验观察AEG-1 siRNA对神经母细胞瘤细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测下调 AEG-1 表达对神经母细胞瘤细胞凋亡及细胞周期的影响。结果: 用AEG-1 siRNA转染人神经母细胞瘤细胞,RT-PCR结果证实AEG-1 siRNA能显著基因下调 AEG-1 表达,与对照组相比有显著差异(P<0.01);MTT法和克隆形成实验结果证明下调 AEG-1 表达可显著抑制神经母细胞瘤细胞的增殖;流式细胞术检测结果表明下调 AEG-1 表达可促进神经母细胞瘤细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G₀/G₁期。结论: AEG-1 siRNA可下调基因在神经母细胞瘤细胞中表达,并抑制神经母细胞瘤细胞增殖,促进细胞凋亡。     

RNA干扰沉默Aurora A基因表达对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制人胶质瘤U251细胞中Aurora A基因的表达,研究其对U251细胞增殖及凋亡的影响。 方法 设计并合成特异性针对Aurora A基因的siRNA,转染至U251细胞中,采用RT-PCR和Western blotting检测Aurora A mRNA和蛋白的表达情况,同时利用四甲基偶氮唑盐(MTT)实验和流式细胞仪观察转染后U251细胞增殖抑制率和细胞凋亡,透射电镜观察细胞凋亡超微结构改变。 结果 转染Aurora A siRNA后,U251细胞Aurora A mRNA表达受到抑制(P<0.01),蛋白表达水平降低;U251细胞增殖的抑制率和细胞凋亡率显著增高 (P<0.01),且U251细胞发生了显著的凋亡形态改变。 结论 体外合成的针对Aurora A基因的特异性siRNA成功地抑制了U251细胞中Aurora A基因的表达,并能抑制胶质瘤细胞增殖、促进凋亡,提示Aurora A可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。