大鼠实验性脑损伤血浆中NO及NOS的动态变化研究

目的 测定实验性脑损伤后血浆中一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性,研究其与脑水肿之间的关系.方法 大鼠随机分组,用硝酸还原酶法测定血清中NO含量、NOS活性,及测定脑组织含水量.并行还原型辅酶Ⅱ依赖性黄递酶(NADPⅡ-d)组化染色检测皮层及脑底NOS阳性细胞.结果 (1)TBI后血浆内NO含量、NOS活力即有升高,与对照组比较有明显差异(P＜0.05).(2)脑组织含水量在外伤后升高,与对照组比较有明显差异(P＜0.05).与血浆中NO含量、NOS活力变化趋势一致.(3) NADPⅡ-d组化染色显示TBI皮层NOS阳性细胞明显多于正常对照组,伤灶脑底也出现了染色块及浓染的细胞群与阳性纤维束.结论 大鼠TBI后NO含量、NOS活性的升高,与脑水肿的发生有关.     

一氧化氮在新生鼠缺氧缺血性脑损伤中的变化及高压氧的治疗机制

目的 探讨围产期缺氧缺血引起新生鼠脑损伤后脑组织一氧化氮(NO)含量的变化,以及高压氧(HBO)干预治疗的机制.方法 结扎孕鼠双侧子宫动脉复制围产期缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的动物模型,并于生后6h、24h、72h、7d断头取脑,测定NO含量变化及一氧化氮合酶(NOS)的表达,应用TUNEL染色观察细胞凋亡的变化,设立对照组及HBO干预组.结果 HIBD后NO水平有明显上升,NOS表达增强,随缺氧时间的延长而增强,并伴有凋亡细胞显著增加.HBO治疗后可降低脑组织NOS的表达及NO的水平,明显减轻了脑细胞的凋亡.结论 在HIBD时存在NO的过量生成,NO参与HIBD的病理过程,HBO保护损伤脑组织的治疗机制可能与抑制NO生成有关.

Abstract：

Objective To examine the dynamic variation of plasma nitric oxide (NO) level in newborn rats with hypoxic isehemie brain damage (HIBD) and their relation with hyperbaric oxygen (HBO) treatment. Methods To produce HIBD animal model by ligating the uterine arteries of pregnant rats. We detected the plasma NO level and nitric oxide synthetase (NOS) expression by radioimmunoassay and immunohistochemistry before operation and 6h, 24h, 72h,7d after HIBD and treatment with HBO. The pattern of neuronal cell death after HIBD was examined using TUNEL staining. Results Plasma NO level markedly elevated at 24h after HIBD, and NOS expression reached peak at 72h. The two parameters were significantly fell in the same groups treated with HBO. HBO also minimized eminently apoptosis of cerebral cells.Conclusions HIBD may be associated with the abnormal excretion of NO, and the mechanism of HBO treatment of newborn rats with HIBD may be associated with the reduction of plasma NO.     

大鼠液压脑损伤后皮层微血管改变与脑水肿的关系

目的探讨大鼠液压脑损伤后皮层微血管损伤情况及其与伤后脑水肿的关系。方法成年SD大鼠30只,随机分为正常组（n=6）、假手术组（n：6）、损伤组（n=18）,其中损伤组分为伤后6h、24h、72h三亚组,每亚组6只。利用液压冲击法建立大鼠颅脑损伤模型,显微镜下观察直接损伤侧和非直接损伤侧皮层微血管损伤隋况,CD34标记血管内皮细胞评价血管密度改变,干湿重法检测脑组织含水量的变化。结果大鼠皮层微血管损伤后6h可见血管支行迂曲、扩张、充血,伤后24h可见少量血栓形成,损伤后72h可见有较多血栓形成。损伤组CD34阳性细胞数明显低于假手术组和对照组（P〈0．05）,而脑组织含水量明显高于假手术组和对照组（P〈0．05）,而后两组无统计学差异（P〉O．05）。损伤组直接损伤侧皮层微血管损伤较非直接损伤组严重,而且伤后24h较伤后6、72h严重。结论颅脑损伤后脑微血管损伤为全脑性血管损伤,这可能是伤后脑水肿形成的机制之一。     

人工合成E-选择素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨人工合成E-选择素对大鼠局灶性脑缺血/再灌注（I/R）损伤后脑组织一氧化氮合酶（NOS）及血清一氧化氮（NO）含量的影响.方法 采用改良的Zea Longa法建立脑I/R损伤模型.66只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和人工合成E-选择素治疗组（治疗组）.治疗组大鼠采用股静脉注射人工合成E-选择素10 mg·kg-1.应用硝酸盐还原法测定血清中NO含量和免疫组化法检测缺血区脑组织神经型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性细胞数.结果 ①NO：以对照组NO含量为正常生理数据,模型组脑缺血2h/再灌注2～24h NO含量呈上升趋势,24 h时达高峰,72 h有所降低但仍高于对照组,各时间点与对照组比较明显增高（P＜0.01）;治疗组NO变化趋势同模型组,NO含量较模型组减少（P＜0.05）,较对照组增多（P＜0.01）.②NOS：以对照组nNOS、iNOS阳性细胞数为正常生理数据,模型组nNOS阳性细胞在脑缺血2h/再灌注2h后开始表达,12h达高峰,至24h开始降低,各时间点与对照组比较明显增高（P＜0.01）;模型组iNOS阳性细胞在脑缺血2h/再灌注2h开始出现,并持续增多,随时间延长呈上升趋势,24h达高峰,至72 h出现下降,各时间点与对照组比较明显增多（P＜0.01）;治疗组各时间点nNOS、iNOS阳性细胞变化趋势同模型组,但较模型组减少（P＜0.05）,较对照组增多（P＜0.01）.结论 大鼠脑I/R损伤后脑组织NOS活性表达增多,NO浓度升高导致脑组织损伤;人工合成E-选择素通过降低NOS表达,减少NO释放、减轻炎症反应和脑I/R损伤,起脑保护作用.     

甲基强的松龙对大鼠颅脑损伤后一氧化氮合成酶活性的影响

目的观察甲基强的松龙对大鼠颅脑损伤后血、脑组织中NOS含量的影响,并探讨其作用机制。方法将45只SD大鼠随机分为3组:实验组(20只)、对照组(20只)、正常组(5只),均采用骨窗形成后硬膜外打击法造成鼠脑挫裂伤。正常组麻醉后,只行开颅手术,不作头颅打击,治疗组大鼠致伤后即刻腹腔内注射30mg/kg甲基强的松龙,对照组则注射30mg/kg生理盐水。对照组和治疗组大鼠分别在伤后1h、6h、12h、24h断头取脑,对大鼠脑外伤后脑组织中一氧化碳合成酶(NOS)含量进行检测。结果大鼠脑皮质中的NOS活性在伤后1h较正常组显著性升高(P <0.01),6h开始下降,12～24h降至基础水平。甲基强的松龙治疗组在伤后1h(P <0.01)、6h(P <0.05)NOS活性较损伤组显著性降低。结论颅脑损伤后,受损脑组织中NOS活性升高,甲基强的松龙可通过抑制损伤后NOS活性起到保护创伤神经元的作用。     

尼莫地平对脑缺血早期神经元型一氧化氮合酶的影响

目的观察局灶性脑缺血大鼠早期缺血部位神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)的变化,以及钙拮抗剂尼莫地平对其的影响。方法以线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型为基础,选取雄性SD大鼠共75只,随机分成假手术组(n=25)、模型对照组(n=25)和尼莫地平处理组(n=25)。以NDAPH-d组织化学方法观测各组大鼠脑缺血后30min、2h和6h纹状体中nNOS阳性细胞的变化;利用生物化学法和Hoechst凋亡染色分别检测各组大鼠脑缺血30min纹状体nNOS活性和6h半暗区细胞凋亡。结果脑缺血30min,与假手术组相比,模型对照组大鼠缺血侧纹状体中nNOS活性和nNOS阳性细胞数均升高(P<0.01),而尼莫地平组无明显变化(P>0.05);随脑缺血时间延长,模型对照组和尼莫地平组nNOS阳性细胞数都下降(P<0.05);脑缺血6h,尼莫地平组半暗区的凋亡细胞少于模型对照组(P<0.01)。结论钙拮抗剂尼莫地平可抑制脑缺血早期的nNOS上升,并减轻随后的脑组织损伤。     

依达拉奉对慢性脑缺血大鼠一氧化氮及一氧化氮合酶阳性神经元数量的影响

目的观察依达拉奉对脑缺血大鼠脑组织NO含量及NOS阳性神经元数量的影响,为临床上防治慢性脑缺血引发的疾病提供指导。方法 54只Wistar大鼠,分为NO含量组和NOS阳性神经元组,每组再分为模型组、治疗组、假手术组,利用结扎大鼠两侧颈总动脉制作大鼠慢性脑缺血模型,硝酸还原酶法测NO含量,NADPH-d组织化学方法染色NOS阳性神经元,光镜下观察。结果治疗组各时间点NO含量和NOS阳性神经元数量较模型组减少。结论依达拉奉对慢性脑缺血大鼠脑组织具有保护作用。     

一氧化氮和一氧化氮合酶在大鼠局灶性脑缺血中的表达特点

目的建立脑缺血SD大鼠模型,探讨一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)在脑缺血模型中的表达特点。方法应用线栓法制作大脑中动脉阻塞(MCAO)局灶性脑缺血模型,根据缺血不同时间分为8组,设立假手术组和正常对照组,每组各有6只大鼠。应用硝酸还原酶法测定脑组织NO的含量,流式细胞术(FCM)定量检测硝基酪氨酸(NT)表达,化学比色法测定脑组织NOS的活性,免疫组织化学方法定位检测eNOS、nNOS和iNOS表达位置,逆转录反应系统(RT-PCR)半定量分析eNOS、nNOS和iNOS的 mRNA在脑缺血区域的表达。结果神经功能缺失评分发现缺血时间越长,神经功能缺失越明显;脑组织中NO含量与缺血时间正相关;缺血1h后NT阳性细胞百分比开始明显升高(9.50%);缺血0.5h时NOS的活性开始升高,缺血3d达到高峰[0.94nmol/(g.min)];免疫组织化学提示eNOS在神经细胞和血管内皮细胞胞浆均有表达,nNOS和iNOS抗体主要在神经细胞胞浆中表达;RT-PCR半定量分析在缺血早期(0.5h~6h),随着缺血时间延长,eNOS和nNOS表达增加,iNOS未见表达或低表达;缺血中晚期(6h~5d),iNOS高表达,并与缺血时间呈正相关,eNOS和nNOS表达明显减少。结论脑缺血时间延长,NOS的活性升高,NO在体内特异性代谢产物NT量增加,神经功能缺失越明显;NOS在缺血早期以eNOS和nNOS为主,在缺血晚期以iNOS为主。     

颅脑损伤后一氧化氮、一氧化氮合酶和内皮素变化

颅脑损伤后继发性脑损害已越来越受到重视,造成继发性损害的因素很多,其中内皮素(endothelin,ET)和一氧化氮(nitric oxide,NO)在继发性损害中所起的作用成为近年研究的热点,并存在很多争论.通过对63例颅脑损伤患者ET、NO和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的测定,观察伤后ET、NO及NOS的变化情况,探讨该变化对外伤患者伤情判断的意义.     

缺氧预处理对颅脑损伤大鼠脑组织MMP-9表达及含水量的影响

目的观察缺氧预处理对颅脑损伤(TBI)大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达和含水量变化。方法 SD雄性大鼠108只,随机分为对照组(n=6)、缺氧预处理组(HPC组,n=6)、TBI组(n=48)、缺氧预处理+外损组(HPCT组,n=48)。采用干湿重法测定脑组织含水量,RT-q PCR、Western blotting分别测定MMP-9 m RNA及蛋白表达水平。结果 TBI组和HPCT组MMP-9 m RNA在伤后3h、6h、12h、1d、3d明显升高(P0.05),MMP-9蛋白表达和脑组织含水量均在伤后3h、6h、12h、1d、3d、7d明显增加(P0.05)。HPCT组中MMP-9 m RNA在伤后3h、6h、12 h、1d、3d,MMP-9蛋白和脑组织含水量在伤后6h、12h、1d、3d、7 d明显低于TBI组(P0.05)。结论缺氧预处理能抑制颅脑损伤脑组织MMP-9表达从而减轻脑水肿,可能是缺氧预处理对颅脑损伤大鼠发挥脑保护作用的机制之一。     

急性创伤性脑损伤大鼠血脑屏障通透性变化与Claudin-5的相关性研究

目的 研究大鼠急性创伤性颅脑损伤(TBI)后血脑屏障(BBB)通透性的变化和机制.方法 雄性Wistar大鼠96只按随机数字表法分为假手术组和TBI组,TBI模型参照Feeney自由落体致伤法制作,假手术组仅行开颅术不行打击致伤.每组按伤后处死时间的不同分为3h、6h、12h 、24 h、48 h、72h6个亚组,每亚组4只.采用干湿重比法测定脑组织含水量,Western blotting检测脑皮质紧密连接蛋白Claudin-5的表达,伊文思蓝(EB)法检测脑组织BBB通透性变化. 结果 与假手术组比较,TBI组大鼠创伤后不同时间点脑组织含水量、EB含量均增多.组内比较显示二者创伤后3h开始增多,24 h达高峰,随后下降,差异有统计学意义(P＜0 05);与假手术组比较,TBI组大鼠创伤后6h、12h、24 h、48 h、72 h紧密连接蛋白Claudin-5表达降低.组内比较显示其创伤后6h表达降低,24 h达最低值,随后回升,差异有统计学意义(P＜0.05);大鼠脑Claudin-5蛋白的相对表达水平和脑组织水含量、脑组织EB含量呈负相关关系(r=-0.994,P=0.000;r=-0.846,P=0.036).脑组织含水量和EB含量呈正相关关系(=0.863,P=0.027). 结论 TBI后大鼠BBB通透性变化和脑损伤程度具时间依赖性,紧密连接蛋白Claudin-5与BBB变化具有一定程度的相关性.     

FK506在颅脑损伤中作用的实验研究

目的 研究创伤性脑损伤(TBI)后，FK506对血浆一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、脑组织炎症介质、自由基生成、兴奋性氨基酸(EAAs)水平的影响。方法 雄性SD大鼠采用液压损伤法制备脑损伤模型，随机分为损伤组、治疗组和对照组。治疗组于伤后5min开始，一次性腹腔注射FK506(3mg/kg)。伤后30min、6h、24h测量血浆NO、NOS和伤灶及周围脑组织的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)、兴奋性氨基酸(EAAs)水平。结果 与损伤组相比，治疗组中NOS活性和NO水平显著降低，IL-6、TNFα完全被清除，SOD损耗减少，MPO活性减低，伤后30min组EAAs释放明显减少。结论 FK506能抑制伤后NO升高，减少EAAs释放，清除炎症介质，减少自由基生成，对减轻TBI后继发性脑损伤有较大应用价值。     

急性脑缺血后NO与ET代谢的相互关系

在兔大脑中动脉阻断(MCAo)型局灶脑缺血前后分别应用外源性-氧化氮合成酶(NOS)抑制剂L-NNA和一氧化氮(NO)合成底物L-Arginine,观察缺血4h后脑组织内皮素(ET)含量的变化。结果发现L-NNA组较缺血对照组脑组织ET含量明显增加(1262.9±387.6 vs789.3±188.4pg/mg·pro,P<0.01),脑水肿显著;而L-Arginine用药组脑组织ET含量较缺血对照组明显减少(P<0.05),且脑水肿减轻。本研究提示促进NO代谢能抑制缺血脑组织ET的产生。NO影响早期脑缺血可能与此途径有关。     

香芹酚通过抑制脑水肿与氧化应激反应保护大鼠 颅脑损伤

目的 探讨香芹酚对大鼠颅脑损伤（TBI）的保护作用及其机制。方法 SD大鼠50只,随机分为5组:假手术组、模型组、低剂量香芹酚（10 mg/kg）组、中剂量香芹酚（20 mg/kg）组、高剂量香芹酚（40 mg/kg）组,每组10只。Feeney氏自由落体法制备TBI模型,造模后1、3、7 d采用改良神经功能损害程度评分（mNSS）评估神经功能,干湿法测定脑组织含水量;ELISA法检测氧化应激因子丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、过氧化氢酶（CAT）以及化学定量法检测一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合酶（NOS）活性。结果 香芹酚能显著改善大鼠TBI后神经功能,显著减轻TBI后脑水肿,显著降低损伤脑组织MDA、NO和NOS含量,显著增加损伤脑组织SOD、CAT和GSH含量。结论 香芹酚可通过减轻大鼠TBI后脑水肿、抑制氧化应激从而发挥神经保护作用。     

大鼠颅脑损伤后一氧化氮合酶和内皮素的变化及依达拉奉对其的影响

目的观察大鼠颅脑损伤后脑组织中一氧化氮合酶（NOS）和内皮素（ET）含量的变化及依达拉奉对其的影响，并探讨其作用机制。方法将45只SD大鼠随机分为3组，其中正常组5只，麻醉后只行开颅手术，不作头颅打击；治疗组和对照组各20只，采用骨窗形成后硬膜外打击法造成鼠脑挫裂伤模型，治疗组致伤后即刻腹腔内注射5mg／kg依达拉奉，对照组则即刻腹腔内注射等量生理盐水。正常组在伤后1h，对照组和治疗组大鼠分别在伤后1h、6h、12h、24h断头取脑，对大鼠脑外伤后脑组织中NOS和ET含量进行检测。结果（1）治疗组和对照组大鼠脑皮质中的NOS活性在伤后1h较正常组显著升高（P〈0．01），6h开始下降，12～24h降至基础水平。治疗组在伤后1h、6hNOS活性较对照组显著降低（均P〈0.05）。（2）治疗组和对照组大鼠脑皮质中的ET在伤后1-24h较正常组显著升高（P〈0．01）。治疗组在伤后1～24hET较对照组显著降低（ P〈0．05）。结论颅脑损伤后受损脑组织中NOS和ET升高，依达拉奉可通过抑制损伤后NOS和ET起到保护创伤神经元的作用。     

一氧化氮对沙土鼠缺血性脑损伤的影响

目的:研究一氧化氮(NO)在缺血性脑损伤中的作用。方法:沙土鼠前脑缺血性脑损伤模型,分组、分剂量进行。结果:小剂量N~G-硝基-L-精氨酸(LNNA)能明显减轻缺血性损伤后脑含水量。脑损伤后一氧化氮合酶(NOS)活力明显升高,LNNA能抑制NOS活力,抑制程度与剂量相关。缺血性损伤后海马神经元严重缺失。中、小剂量LNNA能减轻海马神经元缺失,而大剂量LNNA能加重神经元缺失。结论:脑缺血后NOS活性明显增加,加重缺血性脑损伤。适当降低脑组织NOS活性能明显减轻脑水肿和海马细胞坏死。提示NO对脑损伤毒性作用和保护作用与NO浓度相关。     

白介素6在脂多糖致大鼠脑水肿中的表达

目的 探讨白介素6(IL-6)在脂多糖(LPS)致大鼠脑水肿发病过程中的表达及纳洛酮对其干预作用.方法 SD大鼠84只,对照组(NS组)28只,0.2ml生理盐水颈内动脉注射;内毒素组(LPS组)28只,颈内动脉注射LPS 200μg;纳洛酮治疗组(NAL组)28只,颈内动脉注射LPS后10min、1h、2h、6h、12h及处死前2h腹腔注射纳洛酮1mg/kg.于不同时间点测定脑组织匀浆IL-6的含量.干湿法测定脑组织含水量,甲酰胺法测定伊文思兰(EB)含量.结果 LPS组脑组织含水量和EB含量显著高于NS组(P＜0.01).NAL组脑组织含水量和EB含量显著低于LPS组(P＜0.01),但仍较NS组高(P＜0.01).注射LPS后4h,LPS组脑组织IL-6含量即增加,于6h达高峰,与NS组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).NAL组IL-6含量低于LPS组(P＜0.05或P≤0.01),但高于NS组(P＜0.01).LPS组脑组织含水量和EB含量呈正相关(r=0.743,P＜0.01),IL-6含量与含水量呈正相关(r=0.459,P＜0.05),IL-6含量与EB含量呈正相关(r=0.568,P＜0.05).结论 IL-6参与脑水肿的发生发展,纳洛酮可以抑制IL-6的生成,减轻脑水肿.     

选择性一氧化氮合成酶抑制剂对脑组织保护作用研究

目的：探讨创伤性脑损伤后脑组织中一氧化氮（NO）含量变化与脑组织病理及超微结构变化之间的关系，及选择性一氧化氮合成酶抑制剂（iNOS）1400W(N-[3-(aminomethyl)benzyl]acetamidine)对脑组织的保护作用。方法：114只大鼠随机分成正常组、假手术组、生理盐水治疗组和1400W治疗组，建立大鼠自由落体脑外伤模型，伤后18h开始分别给予生理盐水和1400W腹腔内注射，每8h一次。测定各组不同时期脑组织NO含量，同时观察脑组织病理及超微结构的改变，将结果进行比较。结果：生理盐水治疗组NO含量于伤后6h开始升高，48h达到高峰，以后逐渐下降。1400W治疗组NO含量降低，与生理盐水治疗组结果比较有统计学意义，72h后逐步恢复正常。生理盐水治疗组组织病理学检查和超微结构检查结果与NO改变同步，1400W治疗组较生理盐水治疗组明显改善。结论：NO对脑外伤后继发性损伤起着重要作用，1400W对脑外伤后脑组织有显的保护作用。     

高低频硬膜外电刺激治疗创伤后脑水肿的对比研究

目的 研究硬膜外高频电刺激和低频电刺激对创伤后脑水肿的作用.方法 108只SPF级SD大鼠采用液压打击制作创伤脑水肿模型并给予硬膜外电刺激,随机分成六组:正常对照组(A组),液压打击组(B组),高频刺激治疗组(C组),低频刺激治疗组(D组),高频刺激对照组(E组),低频刺激对照组(F组).各组依时间点24h,48 h,72 h分别设立亚组.电刺激次数随时间增加而增加.所有大鼠均在末次刺激结束4h断头处死,取打击前区脑组织测脑组织含水量,打击后区作HE 观察.结果 与A组相比,B组脑组织含水量明显增多(P＜0.05),C、D、E、F组脑组织含水量未见显著差别(P＞0.05);与B组相比,C组、D组脑组织含水量明显减少(P＜0.05);D组与C组相比,脑组织含水量未见显著差别(P＞0.05),HE染色结果与水肿程度相一致.结论 硬膜外高频和低频电刺激不会引起正常大鼠脑组织脑水肿,两种刺激对创伤后脑水肿均有治疗作用,治疗效果并未随着刺激次数增加而存在差异.     

局灶脑缺血后早,晚期一氧化氮合成酶的活性变化

一氧化氮(NO)在脑缺血中起重要作用,一氧化氮合成酶(NOS)作为NO合成的关键酶,其活性变化直接调节NO的生成量及生物学效应。本文在建立兔MCAO局灶脑缺血模型基础上,测定缺血后不同时间缺血区和正常脑组织的NOS活性。结果显示,脑缺血早期(1h内)NOS活性突然升高,随之下降;脑缺血后24h NOS活性又升高,至48h、96h明显升高。