大鼠门静脉分支结扎后肝再生的实验研究

目的 采用手术方法结扎门静脉分支，观察对侧肝脏的再生状态。方法 健康Wistar雄性大鼠60只，随机均分成结扎组和假结扎组，在乙醚麻醉下行门静脉左支结扎和假结扎手术，分别在术后第1、2、3、7及14d用乙醚麻醉动物，心脏采血检测血清ALT值，取出肝脏后称重量；在光镜下观察肝组织的病理变化，并计数肝细胞核分裂指数；采用免疫组化的方法计数增殖细胞核抗原（PCNA）指数；在电镜下观察肝细胞超微结构变化。结果 ①血清ALT值结扎组与假结扎组比较在术后第1d升高（P〈0．01），但在第2d开始恢复正常；②肝脏重量两组间差异无统计学意义（P〉0．05）；③肝细胞核分裂指数结扎组与假结扎组比较，术后第1～3d明显升高，第2d达高峰，第3d有所下降，但仍高于假结扎组（P〈0．01），以后逐渐恢复正常；④PCNA阳性细胞计数结扎组与假结扎组比较，术后第1～3d明显增多，第2d达高峰，第3d有所减少，但仍高于假结扎组（P〈0．01），以后逐渐恢复正常。结论 ①大鼠门静脉左支结扎后，引起未结扎侧肝细胞的活跃再生，再生后的肝脏可恢复原来的重量；②大鼠75％肝叶的门静脉分支结扎不影响肝功能，是安全可行的；③大鼠门静脉分支结扎可以作为研究肝脏再生动物模型的方法。     

门静脉分支结扎后门静脉压力变化与肝再生的关系

目的 探讨90%门静脉分支结扎后大鼠门静脉压力变化与肝再生的关系.方法 45只雄性SD大鼠行90%门静脉分支结扎术,其中5只进行假手术作为对照.观察不同时相点门静脉压力和非结扎侧肝脏质量变化,光学显微镜下观察非结扎侧肝细胞的形态学变化,免疫组织化学方法检测未结扎侧肝细胞的增殖细胞核抗原(PCNA),TUNEL法检测未结扎侧肝细胞的凋亡情况,并进行定最分析.采用Pearson相关分析和t检验分析数据.结果 95%(38/40)的大鼠存活.结扎侧肝叶进行性萎缩,非结扎侧肝叶占全肝质量的比例随时问推移而增加,12 h内增加较缓慢,仅为10.75%;而1～5 d则增加速度明显加快,达到27.57%;7～28 d达到平台期,缓慢增加到32.37%.术前门静脉压力为(9.1±1.8)cm H_2O(1 cm H_2O=0.098 kPa);结扎后立即升高,12 h达到高峰(15.8±2.7)cm H_2O,与术前比较差异有统计学意义(t=6.847,P<0.05);1～28 d由(13.6±2.3)cm H_2O逐渐下降为(9.3±2.0)cm H_2O.术前大鼠PCNA阳性细胞计数为7%±3%,术后12 h至3 d由14%±5%上升至21%±6%,第5天达到高峰为26%±7%,与术前比较差异有统计学意义(t=9.129,P<0.05),随后逐渐恢复正常.TUNEL法检测结果显示,术前大鼠肝脏和术后各时相点大鼠未结扎侧肝脏仅见极少量凋亡细胞.大鼠门静脉压力与非结扎侧肝叶肝细胞PCNA的表达在术后1、3、5 d呈正相关(r=0.913,0.896,0.908,P<0.05),在术后14 d时相点呈负相关(r=-0.926,P<0.05).结论 大鼠90%门静脉分支结扎术后,引起未结扎侧肝细胞的活跃再生,再生后的肝脏可恢复原来的质量;肝再生以肝细胞增殖加速为主,而非肝细胞凋亡减少;门静脉压力变化在肝再生过程中可能发挥重要作用.     

联合肝脏分割和门静脉结扎二步肝切除术大鼠模型的建立

目的:建立联合肝脏分割和门静脉结扎(PVL)二步肝切除术(ALPPS)大鼠模型。方法:将健康60只SD雄性大鼠随机均分为PVL组、ALPPS组、假手术组。PVL组行肝左外叶、左中叶、右叶门静脉分支结扎及尾状叶切除,保留肝右中叶分支;ALPPS组在PVL组手术的基础上,将肝左中叶与右中叶在缺血带处离断;假手术组仅游离出门静脉各分支,不结扎。检测大鼠术后肝再生率(HRR)、肝功能情况,以及肝左中叶病理损伤程度与肝右中叶Ki-67的表达。结果:与假手术组比较,ALPPS组、PVL组术后各时间点肝右中叶HRR均明显升高(均P0.05),且第4、7天ALPPS组肝右中叶HRR明显高于PVL组(155.96%vs.118.15%;174.86%vs.133.55%,均P0.05)。PVL组术后早期肝功能指标好于ALPPS组(均P0.05),但后期无统计学差异(均P0.05)。组织病理学检查显示,ALPPS组术后第1天肝左中叶坏死明显多于PVL组;ALPPS组肝右中叶Ki-67表达第2、4天明显高于PVL组(85.36%vs.61.84%;43.40%vs.29.06%,均P0.05)。结论:ALPPS与PVL均能促进肝再生,并且ALPPS比PVL能更快的促进肝再生;成功建立大鼠ALPPS模型,为研究ALPPS肝再生机制及相关并发症奠定了基础。     

近70%门静脉分支高位结扎对大鼠肝脏结构和功能的影响

目的 观察近70％门静脉分支高位结扎对大鼠肝脏结构和功能的影响。方法 Wistar大鼠60只，随机分成假手术对照组和门静脉结扎组。观察术后0．5、1、2、3、7和14d肝脏大体结构和血浆转氨酶的变化。用TUNEL法对结扎侧肝细胞凋亡进行定量分析，光学显微镜下观察对侧肝细胞的增殖情况，透射电子显微镜下观察结扎侧肝脏的超微结构改变。结果 70％门静脉分支高位结扎后，结扎侧肝叶呈进行性萎缩变小，对侧则成比例的代偿性增生。在整个观察过程中，全肝的总重量维持恒定，肝脏功能基本保持正常。TUNEL显示结扎侧肝细胞在术后凋亡明显增加，于第2天达高峰，同时对侧肝细胞却明显增殖。电子显微镜显示结扎侧肝脏早期出现典型的凋亡改变，晚期明显纤维化。结论 近70％门静脉分支高位结扎后，结扎侧由于肝细胞大量凋亡呈进行性萎缩，对侧则成比例的代偿性增生，全肝的总重量和肝脏功能保持正常。     

大鼠门静脉系统血栓形成模型的建立和观察

目的:评价间断结扎阻断门静脉的方法建立大鼠门静脉系统血栓(PVT)形成模型的可行性。方法:将90只SD大鼠随机均分为实验组和对照组,实验组采用间断结扎阻断门静脉的方法诱导PVT,对照组仅开腹后行门静脉系统的游离。于术前、术后30 min以及术后3、6、12、24 h用血管超声多普勒观察两组PVT形成情况,测定两组大鼠静脉血P-选择素、D-二聚体及纤维蛋白原含量,并于24 h后处死所有大鼠,肉眼观察两组大鼠PVT形成情况同时行病理学检查。结果:术后实验组大鼠死亡5只,未形成血栓大鼠6只,形成稳定的PVT大鼠34只(75.56%);对照组大鼠死亡2只,形成少量附壁血栓大鼠3只,未形成血栓大鼠40只,两组PVT形成率差异有统计学意义(P0.05)。实验组大鼠血栓长度随时间推移逐渐增大。两组大鼠血栓形成相关指标在术前、术后30 min及术后3 h差异无统计学意义(均P0.05),但在术后6 h后各时间点实验组均明显高于对照组(均P0.05)。结论:采用间断结扎阻断门静脉的方法可以建立稳定、符合临床实际的PVT大鼠模型,P-选择素、D-二聚体及纤维蛋白原含量可作为参考指标。     

门静脉主干缩窄法制备SD大鼠门静脉高压症模型时最佳口径的探讨

目的 探讨缩窄门静脉主干法制备SD大鼠门静脉高压症模型时的最佳缩窄口径.方法 SD大鼠70只,随机分为正常组和6个实验组,每组各10只.正常组行假手术.各实验组分别按照5、6、7、8、9、12号针头的缩窄口径行门静脉主干缩窄术.观察各组大鼠术后累积死亡率,术后状态,术前、术后即刻及术后2周时的门静脉压力,术后2周时的食管组织学变化和脾指数.结果 5、6、7、8、9、12号针头缩窄组术后3 d时大鼠的累积死亡率分别为100%、80%、70%、20%、10%、0%,与缩窄程度正相关.8、9、12号组的大鼠存活状态明显好于5、6、7号组.5、6、7、8、9、12号组术后即刻门静脉压力分别为:(5.836±0.275)、(4.557±0.419)、(3.856±0.576)、(3.343±0.433)、(2.708±0.309)、(1.957±0.358)kPa,7、8、9、12号组术后2周时门静脉压力分别为:(2.163±0.424)、(1.956±0.172)、(1.841±0.202)、(1.232±0.154)kPa,均较正常(0.881±0.165)kPa显著升高(P＜0.05).术后2周,7、8、9、12号组大鼠食管下段黏膜下层平均血管数目分别为:(3.94±0.83)、(3.58±0.63)、(3.14±0.64)、(2.02±0.62)个,与正常组(1.65±0.62)个比较,除12号组外均有增多(P＜0.01);固有层平均血管数目分别为:(2.24±0.64)、(2.05±0.29)、(1.52±0.28)、(0.93±0.19)个,与正常组(0.82±0.18)比较,除第12组外均增多(P＜0.01);黏膜下层血管口径分别为:(4.52±1.51)、(4.05±1.23)、(3.75±1.11)、(2.03±0.86)μm,除第12组外均增大(P＜0.01);脾指数分别为:(4.21±0.93)、(4.06±0.68)、(3.84 4±0.71)、(3.31±0.69)除12号组外也较正常增加(P＜0.01).结论 缩窄门静脉主干可成功制成大鼠门静脉高压症模型;其最佳缩窄口径应该是:大鼠体重200 g左右时用8号针头(直径0.8mm),大鼠体重300 g左右时用9号针头(直径0.9 mm).     

一种大鼠门静脉高压脾功能亢进模型的建立

目的通过门静脉缩窄联合脾静脉结扎的方法,建立大鼠门静脉高压脾功能亢进模型。方法 60只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(n=20)、门静脉缩窄组(缩窄组,n=20)和门静脉缩窄联合脾静脉结扎组(联合组,n=20),其中假手术组仅予以开、关腹术,缩窄组予以单纯门静脉主干缩窄术,联合组予以门静脉缩窄联合脾静脉结扎术。造模开始前和造模后7周每周采各组动物外周血行红细胞、白细胞及血小板计数动态观察;于造模开始前和造模后第7周测量各组动物门静脉压力及脾横、长径,于造模后第7周处死动物后计算各组脾指数并观察脾脏组织的病理学变化。结果联合组大鼠外周血血小板及红细胞计数于第3周起明显低于假手术组及缩窄组(P<0.05);而3组白细胞计数各时相间差异均无统计学意义(P>0.05)。第7周时缩窄组及联合组门静脉压力均较术前明显升高(P<0.05),并且明显高于假手术组(P<0.05)。第7周时联合组的脾横径及脾长径较术前明显增大(P<0.05),并且明显大于假手术组及缩窄组(P<0.05),其脾指数亦高于假手术组及缩窄组(P<0.05)。第7周时联合组脾脏有典型的脾功能亢进的病理改变,而另2组未见明显病理改变。结论通过门静脉缩窄联合脾静脉结扎的方法,成功建立了大鼠继发性门静脉高压脾功能亢进模型,该方法手术操作简便、效果稳定,具有良好的科研应用价值。     

核因子-κB在大鼠门静脉分支结扎后肝细胞凋亡中的作用

目的：探讨核因子-κB(NF-κB)在大鼠门静脉分支结扎后结扎侧肝细胞凋亡中的作用。方法：Wistar大鼠60只，随机分成对照组和门静脉分支结扎组。观察术后第12，24，48，72小时以及第168小时(第7天)和第336小时(第14天)肝脏大体结构和血浆转氨酶的变化。运用凝胶阻滞分析(EMSA)检测术后结扎侧肝脏NF-κB的活性，用TUNEL法对结扎侧肝细胞凋亡进行定量分析，电镜下观察结扎侧肝脏的超微结构改变。结果：70％门静脉分支高位结扎后，结扎侧肝叶呈进行性萎缩变小，对侧则成比例的代偿性增生。在整个观察过程中，全肝的总质量维持恒定，肝脏功能基本保持正常。结扎侧肝脏NF-κB的活性在术后明显升高，于第48小时达高峰，1w后基本恢复正常。TUNEL显示结扎侧肝细胞在术后凋亡明显增加，于第48小时达高峰。电镜显示结扎侧肝脏早期出现典型的凋亡改变，晚期明显纤维化。结论：70％门静脉分支高位结扎后，结扎侧肝脏NF-κB的活性明显升高，其可能在肝细胞凋亡中具有重要意义。     

一种可恢复性门静脉高压症大鼠模型

目的:探讨建立可恢复性门静脉高压症大鼠模型的可行性。方法:Wistar大鼠60只,分为实验组 A、实验组B和对照组。实验组A、组B通过手术将20-gauge钝头注射针头及外径1.5mm标志管与门静脉主干平行适度结扎以缩窄门静脉,然后抽出针头,对照组开腹后只游离门静脉主干。3周后,实验组A开腹拔除门静脉旁标志管前后分别行门体静脉测压并门静脉系统造影;对照组行门静脉压力测定和造影。实验组B开腹拔除门静脉旁标志管,4周后测量门静脉压力。各组检测血清ALT,AST,BIL, 处死后肝脏常规病理检查。结果:3周后实验组A、B大鼠食管胃底静脉迂曲扩张,门体间侧支开放;实验组A大鼠拔管前、后门静脉压分别为(15.6±3.1)mmHg、(13．4±2．3)mmHg,与对照组门静脉压(7．7± 1．7)mmHg差别有统计学意义(P<0．05)。实验组B拔管4周后门静脉压为(8.4±2.7)mmHg,与对照组差别无统计学意义(P>0．05),与实验组A差别有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠肝细胞形态结构正常,血清ALT,AST,BIL值各组无显著性差异。结论:可复性肝前性门静脉高压症大鼠模型是成功的,可用于肝硬化肝移植后血流动力学研究。     

转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型的建立

目的 建立稳定有效的转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型.方法 采用56只BALB/C-nu/nu裸小鼠,建立转移性人肝癌裸小鼠原位种植模型;随机分为2组,移植瘤术后2周进行肝动脉结扎(HAL)组和仅开腹为假手术组.两组中各随机抽出6只裸鼠,在2次手术后2 d利用哌莫硝唑(PimoIlidazole)作为乏氧探针行肝脏移植瘤标本免疫组织化学显色和Western blot检测移植瘤组织中乏氧诱导因子(HIF)-1α蛋白的表达.结果 人肝癌裸小鼠原位种植成瘤率为100.0%(56/56);HAL手术成功率达93.3%(28/30);与假手术组比较,HAL组移植瘤内乏氧细胞(Pimonidazole阳性细胞)显著增加(P＜0.05),移植瘤组织HIF-1α蛋白表达升高(P＜0.05).结论 转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型手术成功率高,能够导致肝脏移植瘤有效乏氧,是一种较理想的研究肝动脉断流对人肝癌生物学特性影响的实验模型.     

大鼠肝脏胆管及门静脉铸型扫描图像分析

目的 建立大鼠去胆管肝叶和去门静脉肝叶自身对照模型,观察两肝叶之间胆管及门静脉是否存在交通支及其大体形态变化.方法 SD大鼠40只,分为S、BL、PL和BPL共4组,分别应用氰基丙烯酸酯对肝右叶胆管进行栓塞结扎制备去胆管肝叶;对肝方叶行门静脉结扎制备去门静脉肝叶.通过测量肝重/体重和方叶重/右叶重及对各组大鼠胆管和门静脉分别灌注硫酸钡明胶混悬液制备铸型标本,并运用Micro-CT扫描来观察两叶肝脏胆道和门静脉形态变化.结果 (1)大鼠手术后在本观察期内存活率达到100%,无黄疸表现.肝叶大体形态观察和两叶肝重量比指标显示,S、BL、PL组肝重/体重为3.5%,与BPL组比较差异有统计学意义(P<0.01).S、BL组方叶/右叶重量比为60%～70%,PL及BPL组则为20%左右,提示去胆管和去门脉肝叶之间的重量比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).(2)Micro-CT铸型扫描可以直观地显示胆管和门静脉形态变化,未发现两个肝叶之间存在交通支或侧枝循环.结论 去胆管肝叶无明显萎缩.胆管及门静脉灌注造影显示两叶胆管及门静脉无明显的侧枝循环.Micro-CT扫描可以直观地显示胆管及门静脉形态变化,硫酸钡明胶灌注铸型为小动物肝脏Glissons系统形态学研究提供了一种借鉴方法.

Abstract：

Objective To establish a rat self-control model with the bile duct deprived (BDD) and the portal vein deprived (PVD) hepatic lobe and to observe whether there were communicated branches between the two lobes.Methods Forty SD rats were divided into four groups: group S with sham operation as an undisposed blank control, group BL with the right lobe bile duct embolized and ligated, group PL with the quadrate lobe portal vein ligated, and group BPL with the right lobe bile duct embolized and ligated and meanwhile the quadrate lobe portal vein ligated. The right hepatic bile ducts were embolized with cyanoacrylate and then ligated to prepare the BDD lobe. The portal vein of quadrate hepatic lobes was ligated as the PVD lobes. The observation period was 1 month after the bile duct or portal vein ligated. The values of liver weight/body weight and the quadrate lobe weight/the right lobe weight were recorded. The bile duct and portal vein casting specimens of these four groups were prepared by a perfusion with barium and gelatin solution. Three-dimensional micro-computerized tomography (Micro-CT) data sets were acquired to observe the morphological changes of bile duct and portal vein of the livers and whether there were communicated branches between the right and quadrate lobes in order to estimate the feasibility of the model.Results (1) The survival rate of rats after operation was 100%. No jaundice was observed. The ratio of liver/body weight in groups S, BL and PL was about 3.5%, significantly lower than that in group BPL (P<0.01). The ratio of quadrate/right lobe weight in groups S and BL was about 60%-70%, while that was about 20% in groups PL and BPL (P<0.05, or P<0.01); (2) Micro-CT images exhibited directly the morphological changes of the hepatic bile duct and portal vein, and no communicated branches or side circulation situation were observed between the two lobes.Conclusion No collateral branches were found between the two lobes and the model was successfully established. The barium casting liver specimen scanned by micro-CT provided a useful method for the morphological observation of rat liver Glissons system.     

联合肝脏离断和门静脉结扎两阶段肝切除术在治疗中晚期肝癌中的应用

联合肝脏离断和门静脉结扎的两阶段肝切除术(associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy,ALPPS)是近几年提出的一种全新手术方式,因其能显著促进肝组织增生,明显缩短两次手术时间间隔,所以可用于剩余正常肝脏体积不足,不能接受大范围切除的中晚期肝癌病人。目前该术式仍存在风险和难点,有着较高的并发症发生率和病死率,短期效果尚可,但其所带来的长期存活获益尚无定论,故其发展一直伴随着诸多的争议。本文就ALPPS的相关应用进展等作一综述。     

Liver regeneration after portal vein plus hepatic artery ligation performed heterochronously in rats

Abstract. Background/Purpose: Portal vein ligation (PVL) has been used clinically to decrease the amount of liver before surgical resection, consequently, minimizing postoperative dysfunction in the remaining hypertrophied liver lobes. To date, few reports in the literature have demonstrated the regenerative capacity of unaffected lobes following PVL plus hepatic artery ligation (HAL). This study was conducted in rats to determine a safe and efficacious method of PVL plus HAL, focusing on liver function, the MIB-5 labeling index, and the ratio of the weight of the nonligated lobes to the body weight. Methods: Group I rats were subjected to PVL of the left lateral and median branches alone (corresponding to approximately 70% total liver volume). In group II, we performed PVL and HAL of the same branches simultaneously, while in group III, HAL was performed 48 h after PVL. A laparotomy without ligature was performed in the control group. Rats from each group were killed at 24, 48, 72, 96, and 168 h after surgery. Standard serum liver functions were tested. Proliferative activity in the nonligated liver was expressed using the Ki-67 antigen (MIB-5) labeling index. Body and nonligated lobe weights were measured. Results: At 96 h post-surgery, the ratio of the weight of the nonligated lobe to body weight was significantly higher in group III than in group I and group II, and induction of the MIB-5 labeling index showed maximum levels in group III. However, quantitative determination of serum glutamic-oxaloacetate transaminase (GOT) showed peak levels in group II at 24 h after surgery. Conclusions: From these results, we conclude that the PVL plus HAL heterochronous procedure is safer and more efficacious than PVL only, or simultaneous PVL plus HAL. A better knowledge of the events following such heterochronous ligation should improve the clinical outcome of hepatic resection for liver diseases. Received: January 29, 2001 / Accepted: November 16, 2001     

联合肝脏离断和门静脉结扎的二步肝切除术在肝脏肿瘤治疗中的应用

联合肝脏离断和门静脉结扎的二步肝切除术（ALPPS）是近年提出的一种手术方式,分两次完成,第1次手术包括门静脉结扎、在待切除肝和需保留肝之间离断肝实质,待剩余肝脏体积增大后再行第2次手术切除病肝。ALPPS主要目的是使剩余肝脏体积快速增长,为那些原来不能切除的肝脏恶性肿瘤的患者提供可根治性切除的机会。本文综述了近几年ALPPS方面的研究,从演变过程、手术方法、适用范围、存在争论的问题和近几年的研究现状等方面进行了总结和分析,并对以后的发展方向提出了展望。     

经皮穿脾选择性门静脉栓塞术在中晚期肝癌 综合治疗中的应用

目的探讨经皮穿脾选择性门静脉栓塞术(PTSPVCE)在中晚期肝癌综合治疗中的应用价值.方法在TACE术后,对8例有门静脉供血的肝癌患者,在X线引导下采用经皮穿脾方法行选择性门静脉化疗栓塞.与单纯TACE组比较疗效和并发症.结果实验组术后肿块缩小率明显优于对照组(P<0.05).无严重并发症.结论 PTSPVCE术是一种安全、可靠的疗法,为肝癌的综合治疗提供了更多的选择.     

门静脉动脉化对大鼠肝脏再生的影响

目的探讨门静脉动脉化重建肝血流后对肝脏再生的影响。方法建立门静脉动脉化重建肝脏血流加半肝切除(43%)的大鼠实验模型,分别在术后3 d和10 d取出肝脏烘干称重、光镜下计数进入有丝分裂期的肝细胞和分离肝细胞进行流式细胞仪分析,以观察肝脏再生的情况。结果实验组术后3 d和10 d测定的肝脏干重分别为(67.56±3.70)%(、78.76±5.68)%,与对照组(71.66±3.24)%(、82.38±4.86)%相比无显著性差异(P>0.05);进入有丝分裂期的肝细胞计数(708.4±68.21、239.6±24.50)与对照组(724.8±69.99、216.2±23.81)相比无显著性差异(P>0.05);流式细胞仪测得的进入G2和M期的肝细胞的DNA含量[(25.72±4.78)%、(15.60±2.52)%]与对照组[(28.78±3.37)%、(13.34±2.88)%]相比无显著性差异(P>0.05)。结论行门静脉动脉化重建肝血流不影响肝脏的再生。     

对“联合肝脏离断和门静脉结扎的二步肝切除术”的述评

联合肝脏离断和门静脉结扎的二步肝切除术(ALPPS)是一个非常新的外科手术.该手术主要针对因未来剩余肝脏体积较小而不能接受大范围肝切除术的T分期较晚的肝癌患者而设计的.ALPPS第1步手术后,患者剩余肝脏对手术的反应非常强烈,使得肝脏体积急剧增生.因而可在第1步手术后1周左右施行第2步手术以切除所有肝内肿瘤(R0切除).本文追溯ALPPS的发展历史,描述该手术的传统步骤和手术的偏离等情况,分析该手术的短期疗效.尽管ALPPS后零死亡已有报道,但初步的研究结果表明:ALPPS的手术死亡率和并发症发生率仍然较高.ALPPS后尚没有明确的长远治疗肿瘤效果的报道.该手术在肝硬化肝癌患者中能否安全施行尚有疑问.