“益气调血、挟本培元”针法对SAMPIO鼠痴呆状况和大脑总胆固醇的影响

目的观察快速老化痴呆鼠SAMP10痴呆状况与大脑总胆固醇异常的相关性，并探讨“益气调血、挟本培元”针法改善痴呆的机制。方法设立正常老化鼠SAMR1对照组，SAMP10对照组、针刺组及非穴组，通过Morris水迷宫测试各组小鼠学习记忆功能，Folch法和比色法测量大脑总胆固醇的含量。结果与SAMR1对照组相比，SAMP10对照组小鼠出现明显的学习记忆障碍，其大脑总胆固醇含量明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05）；而针刺组可降低大脑总胆固醇含量，改善其学习记忆能力与SAMP10对照组比较差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论调节大脑胆固醇的稳态可能是“益气调血、扶本培元”针法改善SAMP10鼠痴呆状况的机制之一。     

利用基因芯片研究针刺对快速老化小鼠海马基因表达的影响

[目的]利用基因芯片技术研究“益气调血,扶本培元”针法对快速老化小鼠(SAMP10)海马基因表达的影响。[方法]选取雄性8月龄快速老化小鼠(SAMP10)(分成针刺腧穴组,针刺非穴组,对照组)和同源正常老化小鼠(SAMR1),采用cDNAmicroarray技术,分析伴随快速老化SAMP10海马基因表达谱的变化以及针刺对其的影响。[结果]芯片结果显示,伴快速老化,P10海马共有7类10个基因的表达发生变化,8个基因表达下调,2个基因表达上调,施予“益气调血,扶本培元”针法后,所有与SAMP10快速老化相关基因的表达均被部分或全部的逆转,显示针刺具有特异性。[结论]“益气调血,扶本培元”针法能够良性调节脑老化相关基因的表达,并可能通过该种作用延缓脑衰老。     

利用基因心芯片研究针刺对快速老化小鼠海马基因表达的影响

[目的]利用基因芯片技术研究“益气调血,扶本培元”针法对快速老化小鼠（SAMP10）海马基因表达的影响.[方法]选取雄性8月龄快速老化小鼠（SAMP10）（分成针刺腧穴组,针刺非穴组,对照组）和同源正常老化小鼠（SAMR1）,采用cDNA microarray技术,分析伴随快速老化SAMP10海马基因表达谱的变化以及针刺对其的影响.[结果]芯片结果显示,伴快速老化,P10海马共有7类10个基因的表达发生变化,8个基因表达下调,2个基因表达上调,施予“益气调血,扶本培元”针法后,所有与SAMP10快速老化相关基因的表达均被部分或全部的逆转,显示针刺具有特异性.[结论]“益气调血,扶本培元”针法能够良性调节脑老化相关基因的表达,并可能通过该种作用延缓脑衰老.     

以生物信息学工具探讨“三焦”针法治疗老年性痴呆的细胞生物学机制

目的:观察"三焦"针法对快速老化痴呆小鼠(SAMP8)痴呆状况的影响,探讨"三焦"针法治疗老年性痴呆的细胞生物学机制。方法:将7月龄SAMP8随机分为对照组、穴位组和非穴组,每组20只。穴位组取"膻中""中脘""气海""血海""足三里"穴针刺治疗,每穴针刺30s,每周针刺6d,连续4周。以Morris水迷宫隐蔽平台实验、空间探索实验检测SAMP8学习记忆能力的变化;提取小鼠海马组织,以基因芯片方法获得针刺相关的差异表达基因,再通过生物信息数据库工具分析差异表达基因的信息,利用等重同位素定量蛋白质组学技术(iTRAQ)和免疫荧光技术观察海马神经细胞及突触形态验证基因芯片分析结果。结果:与对照组和非穴组相比,穴位组小鼠第4、5天的逃避潜伏期显著缩短,停留在原象限平台的时间显著增加(P0.05)。与非穴组比较,穴位组上调差异基因的细胞定位主要集中于神经元突起、细胞骨架。穴位组286个表达上调的蛋白中,与神经突起、细胞骨架相关的蛋白组分共有47个,多于非穴组的11个。免疫荧光结果显示,与对照组和非穴组比较,穴位组海马组织神经元突起结构更完整、更密集。穴位组神经元突起高亮区高度显著大于非穴组和对照组(P0.05)。结论:调节神经元突起和细胞骨架相关基因和蛋白表达及相关功能,可能是"三焦"针法治疗老年性痴呆的细胞学机制之一。     

针刺对快速老化骨质疏松小鼠P6骨代谢因子OPG、BMP-2的影响

目的:探讨针刺治疗骨质疏松的机制。方法:以快速老化骨质疏松小鼠P6(SAMP6)及正常同源抗快速老化小鼠R1(SAMR1)为模型,采用Western Blot等方法,观察SAMP6对照组、SAMP6针刺组、SAMP6非穴位刺激组和SAMR1对照组股骨护骨素(OPG)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)蛋白表达的变化。结果:SAMP6对照组股骨OPG、BMP-2表达显著下调(P<0.05);针刺后两者表达上调并趋于正常(P<0.05)。结论:SAMP6小鼠发生骨质疏松与OPG、BMP-2等骨代谢因子表达异常有关,针刺可通过促进成骨细胞形成并分泌骨代谢因子来刺激骨形成,降低骨转换率,达到改善骨质疏松的作用。     

SAMP10鼠脑衰老相关基因HSP86、HSP84的表达及针刺影响的研究

目的：探讨针刺延缓衰老的作用机制。方法：采用快速老化小鼠SAMP10、SAMR1为模型，运用RT-PCR和地高辛标记的非放射性Northern blot技术，观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马HSP84、HSP86基因表达的变化。结果：SAMP10对照组小鼠热休克蛋白HSP84、HSP86在全脑、皮层、海马中的表达下调，针刺后表达上调并趋向于正常组。结论：SAMP10小鼠脑衰老与热休克蛋白HSP84、HSP86基因表达异常有关，针刺可以通过调节HSP84、HSP86基因表达增强细胞保护、抑制细胞凋亡、抵抗氧化应激，从而起到延缓衰老的作用。     

针刺对SAMP8鼠升血作用的研究

目的观察"三焦针法"对快速老化痴呆模型SAMP8鼠红细胞、白细胞、血红蛋白、血小板等的影响,探讨"三焦针法"的升血作用及意义。方法选取8月龄快速老化痴呆模型小鼠SAMP8,随机分为对照组(P8组)、针刺组和非经非穴组;同源正常老化的SAMR1鼠作为正常老化对照组(R1组)。针刺组运用韩景献教授"三焦针法",R1组和P8组不予针刺。15 d后取血测定小鼠各血球计数,分析针刺对SAMP8鼠血细胞数的影响。结果快速老化SAMP8鼠血细胞数低于正常老化SAMR1鼠,予针刺治疗后,SAMP8鼠血细胞数增加,其中白细胞、红细胞、血小板等均有不同程度升高,血红蛋白、淋巴细胞、单核细胞显著上升(P<0.05或P<0.01)。结论 "三焦针法"可以促进血细胞增加,提高升血能力,可运用于防治贫血。     

“三焦针法”对快速老化痴呆鼠SAMP10血脂代谢的影响

目的:观察针刺对快速老化痴呆鼠SAMP10血脂代谢的影响,并从血脂代谢角度探讨针刺改善痴呆的机制。方法:以快速老化痴呆鼠SAMP10和正常老化鼠SAMR1为模型,随机分为R1对照组和P10针刺组、P10非穴组、P10对照组,通过Morris水迷宫隐蔽平台试验检测小鼠的学习记忆能力,采用全自动生化分析仪检测血脂中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)含量。结果:P10对照组与R1对照组比较,逃避潜伏期明显延长,两者有显著性差异(P0.05);P10针刺组与P10对照组比较,逃避潜伏期明显缩短,有显著性差异(P0.05);P10针刺组与R1对照组比较,第1~3天有显著性差异(P0.05),第4、5天无显著性差异(P0.05);P10非穴组与P10对照组比较,无显著性差异(P0.05)。P10对照组与R1对照组相比,血中TC、HDL-C、LDL-C含量明显降低,有显著性差异(P0.05),TG、VLDL-C含量无显著差异(P0.05);针刺后P10针刺组与P10对照组相比,TC、TG、VLDL-C、HDL-C明显升高,有显著性差异(P0.05);与R1对照组相比亦有显著差异(P0.05),但有接近趋势,与P10非穴组比较,TG、HDL-C有显著性差异(P0.05)。结论:"三焦针法"能调节SAMP10血脂代谢,这可能是该针法改善SAMP10痴呆状况的机制之一。     

电针足三里干预快速老化痴呆鼠大脑APP及Aβ蛋白表达的实验研究

目的：研究电针足三里穴对快速老化痴呆鼠（SAMP8）海马中β-淀粉样肽前体蛋白（APP）及β-淀粉样肽蛋白（Aβ）表达水平的影响,探讨电针足三里防治老年性痴呆（Alzheimer’s disease,AD）的作用机制。方法：将18只SAMP8随机分为三组：模型组、电针组及非穴组,每组各6只,并设正常对照组（SAMR1）。电针足三里干预结束后,应用免疫组化的方法检测各组小鼠海马中APP及Aβ蛋白的表达情况。结果：电针组APP及Aβ蛋白的表达水平下调,明显低于模型组及非穴组（P〈0.05）;而模型组与非穴组间APP及Aβ蛋白的表达水平差异无显著性（P〉0.05）。结论：电针足三里可降低SAMP8脑部APP及Aβ蛋白的表达水平,从而抑制老年斑及神经原纤维缠结形成,改善痴呆鼠的智能状态,这可能是针刺足三里治疗改善AD的重要机制。     

针刺抑制p53mRNA过表达并改善SAMP8小鼠的认知能力

[目的]探讨针刺延缓脑衰老的机制。[方法]将快速老化痴呆小鼠(SAMP8)及其正常同源对照小鼠(SAMR1)分为SAMR1对照组、SAMP8对照组、SAMP8针刺组和SAMP8非穴组。针刺组给予"益气调血,扶本培元"针法治疗;非穴组针刺双胁下两个固定非穴位点;其余两组给予等量的捉抓刺激;每天1次,持续15 d。采用Morris水迷宫测定动物的学习记忆能力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定海马p53mRNA表达。[结果]与SAMR1对照组相比,SAMP8各组的学习能力及记忆保持能力出现明显损伤,表现为思维僵化、学习过程减慢;其海马p53mRNA表达明显升高。针刺明显改善SAMP8的认知能力,并降低海马p53mRNA表达,甚至低于正常组。[结论]SAMP8的认知损害与p53基因表达异常有关,针刺通过调节p53mRNA表达延缓SAMP8脑衰老的进程,是针刺改善衰老后认知能力下降的原因之一。     

Changes of metallothionein 1 and 3 mRNA levels with age in brain of senescence-accelerated mice and the effects of acupuncture

The effects of aging and acupuncture on brain MT1 and MT3 mRNA levels in senescence-accelerated mice (SAMP10) and accelerated senescence resistant mice (SAMR1) were analyzed by Northern blot analysis. Both MT1 and MT3 mRNA levels in SAMR1 were increased significantly from birth to month 4 and decreased gradually thereafter. In SAMP10, the MT3 mRNA level followed the same pattern as in SAMR1 before month 4, then decreased from month 4 to 6, but was over-expressed and exceeded the previous level at month 8. The MT1 mRNA expression in SAMP10 showed a zigzag pattern. Of two groups of SAMP10 mice treated with acupuncture, the xingnao group (PC6 and Du26 as acupoints) and the zibuganshen group (BL18 and BL23 as acupoints), both showed a higher MT1 mRNA level and a lower MT3 mRNA level than the age-matched control group. Meanwhile, in both of the acupuncture groups, the ratios of MT3 to MT1 were down-regulated to the normal range. Overall, these results suggested that over-expression of MT3 mRNA and the increase in MT3 to MT1 ratios in SAMP10 were correlated with aging, and could be an important physiological and pathological event in the aging process. Acupuncture altered the expression levels of MT1 and MT3 mRNA and differences between the effects of the two stimulated acupoints were seen. Therefore, maintenance of the balance between MTs mRNA expression and correct MTs concentrations is crucial for brain-endocrine-immune response and normal aging. Acupuncture could improve zinc ion bioavailability, by maintaining the balance between MT1 and MT3 mRNA expression levels and might explain one of the mechanisms by which acupuncture treatments defer aging and treat some age-related neurodegenerative diseases.     

快速老化痴呆小鼠海马、皮层p130表达的增龄变化及针刺的影响

目的:观察针刺对快速老化痴呆小鼠(SAMP10,简称P10)脑中p130表达的影响,探讨针刺治疗痴呆的可能机制。方法:随机将P10分为对照组、针刺组、非穴组,同源正常老化小鼠(SAMR1,简称R1)为正常对照。针刺组采用"益气调血,扶本培元"针法(简称"气血"针法),选穴"膻中"中脘"气海"、双侧"足三里"、双侧"血海"。"血海"用捻转泻法,余穴施捻转补法,每穴30s,每天1次,第7天暂停,连续13d。运用western blotting技术,观察2、4、6、8、10、12月龄P10海马和皮层中p130表达的增龄变化,以及"气血"针法对8月龄P10海马和皮层p130表达的影响。结果:①p130表达在正常老化R1海马和皮层均随增龄呈平稳上升趋势,6月龄后与2月龄存在明显差异(P<0.05,0.01)。P10则呈波动下降趋势,海马中4月龄后表达即下降,6月龄达谷值(P<0.01),6至8月龄回升,8月龄低于2月龄水平(P<0.05),8至12月龄又下降;皮层中2至4月龄下降,4月龄后开始上升,至6月龄达峰值(P<0.01),6至8月龄下降至低谷,8至12月龄又上升,但仍停留在较低水平。②与8月龄R1相比,p130在P10海马和皮层表达分别呈上调与下调。"气血"针法具有腧穴特异性,可良性调节皮层的蛋白表达,使之接近R1水平。结论:p130表达在R1与P10同脑区间随增龄存在差异,且p130的波动期与报道的P10生物学特征出现的时间段接近。"气血"针法可良性调节8月龄P10皮层p130的表达。     

针刺对快速老化小鼠SAMP10转录调节因子NF-E2、YB-1、LRG47的影响

目的:探讨针刺延缓衰老的机制。方法:采用快速老化小鼠(SAMP10)、正常老化小鼠(SAMR1)为模型,运用地高辛标记的非放射性Northernblot技术,观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马NF-E2、YB-1、LRG47基因表达的变化。结果:SAMP10对照组小鼠NF-E2、YB-1、LRG47在全脑、皮层、海马中的表达下调,针刺后表达上调并趋向于正常组。结论:SAMP10小鼠脑衰老与NF-E2、YB-1、LRG47基因表达异常有关,针刺可以通过调节NF-E2、YB-1、LRG47基因表达增强红细胞系统功能和细胞增殖,提高细胞抗菌免疫,从而起到延缓衰老的作用。     

针刺对快速老化痴呆小白鼠脑组织CA神经递质的影响

目的：探讨针刺治疗痴呆的中枢作用机制。方法：采用快速老化痴呆小白鼠（SAMP8）为模型，以补肾、健脾针刺法作为处理因素，用高效液相色谱电化学检测法测脑组织儿茶酚胺类（CA）神经递质。结果和结论：10月龄SAMP8较正常老化小白鼠（SAMR1）脑组织CA神经递质降低；补肾针法对于改善痴呆和升高降低的CA神经递质的作用优于健脾针法。针刺疗法具有穴位特异性。     

针刺对痴呆小鼠大脑神经元超微结构的影响

[目的]研究三焦针法对痴呆小鼠皮质和海马CA1区神经元线粒体结构的影响。[方法]选取雄性SAMP8小鼠30只(随机分成模型组、非穴组、穴位组)和10只SAMR1小鼠(正常对照组)。持续治疗30日后,采用电子显微镜对小鼠大脑皮质顶叶和海马CA1区进行观察。[结果]R1组皮质顶叶和海马CA1区超微结构正常;SAMP8模型组小鼠神经元部分线粒体肿大、部分变性、部分脂肪化和坏死;SAMP8三焦针刺组线粒体肿大减少,少数线粒体变性,脂肪化和坏死;非经穴针刺组线粒体少数介于两者之间。[结论]三焦针法能有效改善SAMP8小鼠大脑皮质和海马CA1区神经原线粒体病理性损伤。     

SAM P10衰老相关性能量代谢障碍的分子因素及针刺干预作用

目的 :采用mRNA AFLP技术 ,探讨SAMP10衰老相关性脑细胞基因表达的变化及针刺的干预作用。方法 :应用由磁珠分离法纯化mRNA ,SMART PCRcDNA合成和AFLP 银染法结合形成的mRNA AFLP分析技术 ,进行mRNA指纹检测 ,寻找衰老相关性差异表达的基因片段 ,并观察针刺对其表达水平的影响 ,研究衰老相关基因与针刺的关系。结果 :发现规律性变化的一条cDNA带与多品系小鼠的线粒体DNA、编码小鼠ATPase亚基 6和大鼠ATPase亚基 6和亚基 8的mRNA及编码大鼠线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的部分基因序列均有高度同源性。实验表明该cD NA带呈现衰老相关性低表达 ,并可受针刺单穴“水沟”、“内关”和“后三里”的良性干预。结论 :SAMP10的快速衰老与体内能量代谢障碍有关 ,针刺可能从分子水平影响了能量代谢的相关因素 ,这可能是针刺干预衰老进程的机制之一