p38 MAPK在周期性机械牵张诱导肺泡巨噬细胞表达HMGB1中的作用

目的： 研究p38 MAPK在周期性机械牵张诱导肺泡巨噬细胞(AM)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用。方法：大鼠AM随机分为A、B、C 3组,A组为对照组;B组细胞施加20%牵张应变,牵张时间为4 h;C组细胞的牵张模式与B组相同,在牵张前用p38 MAPK特异性抑制剂SB203580(40 μmol/L)预处理2 h。利用RT-PCR法检测HMGB1 mRNA的表达,Western blotting检测HMGB1蛋白表达和p38 MAPK的活性。结果：与对照组相比,AM施加20%牵张应变可诱导HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加、p38 MAPK活性明显增高(均P<0.05),SB203580可显著抑制牵张应变的这种诱导作用(均P<0.05)。结论：周期性机械牵张可能通过p38 MAPK信号通路,调节肺泡巨噬细胞HMGB1 mRNA和蛋白的表达。     

p38 MAPK在大鼠梗阻性肾病肾组织中的表达及可能作用

目的：探讨p38 MAPK在大鼠梗阻性肾病模型肾组织中的表达及其在肾脏纤维化发病机制中的作用。方法：采用单侧输尿管结扎制造梗阻性肾病模型，分别于造模后1 h、3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、21 d、28 d取肾组织，应用免疫沉淀结合特异性底物磷酸化法测定肾组织p38 MAPK活性，用免疫组织化学法检测磷酸化p38 MAPK在肾组织中的表达；用免疫组织化学及原位杂交方法检测肾组织TGFβ₁ mRNA和蛋白水平的表达。结果：正常对照组大鼠肾组织有一定的p38 MAPK基础活性（吸光度A值）(0.22±0.06)。UUO术后1 h，p38 MAPK即被激活（0.45±0.14 vs 对照组，P<0.05），12 h时达第一个高峰（0.91±0.07 vs 对照组，P<0.01），此后活性逐渐下降，3 d后又进行性升高，7 d达到第二个高峰（0.93±0.06 vs 对照组，P<0.01），此后又缓慢下降，28 d降至最低水平(0.12±0.02)。而TGFβ₁的表达在UUO术后1 h、3 h、6 h、12 h及24 h无明显增加，第3 d有明显增加（13.55%±6.33% vs 对照组，P＜0.05），第7 d达高峰（26.78%±8.77% vs 对照组，P<0.01），第28 d表达最少。梗阻肾肾组织p38 MAPK的激活明显早于TGFβ₁表达且p38 MAPK早期活性水平与TGFβ₁的表达水平呈正相关；梗阻肾高表达的TGFβ₁与肾组织p38MAPK的后期活性的高低显著相关（r=0.84, P<0.01）。结论：p38 MAPK在大鼠梗阻性肾病肾组织中的活性明显增高，可能介导梗阻肾肾组织TGFβ₁的表达，并可能参与TGFβ₁诱导的肾间质纤维化的过程。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小管间质p38MAPK和TGF-β1表达的影响

目的：研究血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂（AT1RA）氯沙坦对糖尿病大鼠肾小管间质p38激活丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法:建立STZ诱导的糖尿病(DM)大鼠模型，设正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)和氯沙坦治疗组(DT)。用免疫组化和RT-PCR方法观察肾小管间质p38MAPK和TGF-β1蛋白及其mRNA表达。结果:p38MAPK和TGF-β1在DM大鼠肾小管间质的表达较正常对照组显著升高（P<0.05），氯沙坦治疗组与同期糖尿病组相比明显降低（P<0.05）。结论:氯沙坦降低糖尿病大鼠肾小管间质p38MAPK和TGF-β1的表达，缓解肾小管间质病理改变。     

糖尿病大鼠肾小管骨调素和p38MAPK表达的动态研究

目的:动态观察骨调素（OPN）在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠肾小管的表达，探讨它与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、核转录因子-κB（NF-κB）及肾损害之间的关系。方法：雄性SD大鼠，注射STZ诱导糖尿病（DM），随机分成5组，每组分别设鼠龄匹配的正常对照组。免疫组化方法检测肾小管OPN、p38MAPK、NF-κB及纤连蛋白（FN）的表达；Western印迹法检测肾皮质OPN和p38MAPK蛋白质水平；生化方法测定血糖、血肌酐及24 h尿蛋白量；光镜检查肾组织的形态改变。结果： Western印迹和免疫组化检测发现糖尿病3 d大鼠肾组织p38MAPK和DM 7 d OPN的表达增多，并随病程发展而增加，与正常对照组比较有显著差异（P<0.01）。DM 4周，肾小管OPN的表达与p38MAPK、NF-κB、FN表达及蛋白尿呈显著正相关。结论： 糖尿病大鼠肾小管OPN表达增加参与了糖尿病肾小管间质损害的发病机制；肾小管p38MAPK可能介导了DM状态时NF-κB的表达，进而调节OPN的表达增多。     

三七总皂苷对低氧大鼠肺动脉压和肺组织p38 MAPK表达的影响

目的:探讨三七总皂苷(PNS)对低氧大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)表达的影响,及预防低氧性肺动脉高压(HPH)的作用和机制。方法:将30只SD大鼠随机分为3组:正常对照组、低氧组和低氧+PNS组。观察各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、平均颈动脉压(mCAP)和右心室/(左心室+室间隔重量)比[RV/(LV+S)],免疫组化法和RT-PCR法分别检测肺小血管壁磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白和肺组织中mRNA的含量。结果:与对照组相比,低氧组大鼠mPAP、RV/(LV+S)明显升高,肺小动脉p-p38 MAPK及肺组织p38 MAPK mRNA含量显著升高(P0.05)。低氧+PNS组mPAP、RV/(LV+S)、肺小动脉p-p38 MAPK及肺组织p38 MAPK mRNA含量明显低于低氧组(P0.05)。结论:PNS具有显著预防HPH的作用,其机制可能与其降低p38 MAPK mRNA的表达有关。     

p38MAPK信号通路在钙调磷酸酶促心肌凋亡中的作用

目的：探讨钙调磷酸酶（CaN）在缺氧/复氧和肾上腺素能刺激诱导心肌凋亡中的作用及p38 MAPK在CaN调节心肌凋亡中的作用。方法:采用体外培养新生Wistar大鼠心肌缺氧/复氧（H/R）模型，模拟在体缺血再灌注损伤，将心肌细胞随机分为3组：正常对照组（N组）、H/R+异丙基肾上腺素组（Ao组）、H/R+异丙基肾上腺素+环孢菌素A组（A1组）。采用流式细胞仪检测细胞凋亡，RT-PCR 检测CaN mRNA的表达， Western 免疫印迹法检测CaN及p38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果:H/R和异丙基肾上腺素（Iso）共同作用心肌后，心肌细胞凋亡率明显增加，给予CaN抑制剂环孢菌素（CsA）后，细胞凋亡率显著少于干预前(P<0.05)。H/R和Iso共同作用下，心肌CaN mRNA及蛋白表达水平均明显上调，同时p38 MAPK的活化状态p-p38 MAPK蛋白表达也显著增加，CsA干预后，CaN表达并无明显变化，但p-p38 MAPK蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论:CaN 促进缺氧/复氧和肾上腺素能刺激诱导心肌细胞凋亡，可通过活化p38 MAPK而发挥促凋亡的作用。     

p38 MAPK及基质金属蛋白酶在心力衰竭病人心肌重构中的意义

目的: 探讨不同程度心力衰竭病人心肌组织丝裂素活化蛋白激酶（p38 MAPK）、基质金属蛋白酶家族（MMP-2、3、9）、细胞外基质（ECM）纤连蛋白（FN）表达与心肌重构的关系。方法: 选择因二尖瓣关闭不全心脏病接受二尖瓣置换术的心力衰竭病人39例，正常对照8例来自意外伤亡的器官捐献者。光镜检查心肌组织病理变化;免疫沉淀法检测心肌组织p38 MAPK磷酸化，及p38 MAPK、MMP-2、3、9蛋白表达; 免疫荧光法检查心肌组织FN的分布。结果: 瓣膜病所致心力衰竭病人心肌组织呈典型的心肌重构病理改变。心力衰竭组心肌 p38 MAPK 磷酸化明显强于对照组（P<0.05），随心功能恶化，其表达逐渐增加（P<0.05或P<0.01）。 心力衰竭组心肌组织MMP-2、3、9蛋白表达明显强于正常对照组，各心力衰竭组与正常对照组相比差异显著（P<0.05或P<0.01）; 相反，心力衰竭组心肌组织FN蛋白表达明显弱于正常组，各心力衰竭组与正常对照组相比差异显著（P<0.05或P<0.01）。结论: 心力衰竭病人通过激活p38 MAPK诱导心肌细胞肥大、坏死，通过MMP-2、3、9表达量的增高降解心肌细胞外基质FN，共同参与心肌重构的病理过程而恶化心功能。     

黄芪注射液对哮喘大鼠p38 MAPK和Th1/Th2类细胞因子变化的影响

目的： 探讨黄芪注射液对哮喘大鼠气道炎症和Th1/Th2类细胞因子（IFN-γ/IL-4）变化的影响及其可能机制。方法：雄性SD大鼠40只随机分成5组，即正常对照组、哮喘模型组和黄芪低、中、高剂量干预组。分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、 IFN-γ含量、肺组织中IL-4 mRNA、 IFN-γ mRNA表达和磷酸化p38 MAPK的变化，并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变。结果：哮喘模型组大鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4含量和肺组织中IL-4 mRNA、磷酸化p38 MAPK表达水平升高，IFN-γ、IFN-γ mRNA水平降低，与正常对照组比较，显著差异（P<0.01）。黄芪低、中、高剂量干预组大鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4含量和肺组织中IL-4 mRNA、磷酸化p38 MAPK表达水平均明显降低，IFN-γ、IFN-γ mRNA水平明显上升，与哮喘模型组比较，均具有显著差异（P<0.01）。黄芪处理能明显减轻哮喘大鼠肺组织病理学改变，但黄芪低、中、高剂量干预组之间比较，无显著差异（P>0.05）。肺组织磷酸化p38 MAPK的表达与EOS计数、IL-4、IL-4mRNA之间分别呈显著正相关（r=0.63，r=0.69，r=0.71，P<0.01），与IFN-γ和IFN-γ mRNA之间分别呈显著负相关（r=-0.65，r=-0.68，P<0.01）。结论：p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程。黄芪注射液对哮喘大鼠具有保护作用，其机制可能与抑制p38 MAPK磷酸化、纠正IFN-γ/IL-4平衡失调、减轻炎症细胞浸润有关。     

TGF-β2,p38MAPK在哮喘气道重塑模型中的表达

目的:建立哮喘气道重塑模型并检测IL-13、TGF-β₂在气道重塑中的表达。方法: 建立气道重塑模型,光镜、电镜下观察形态学改变;应用原位杂交技术检测IL-13、TGF-β₂ mRNA表达,Western blot 检测p38MAPK蛋白表达。结果: 气道重塑模型表现为明显的上皮增生,粘液产生增加,平滑肌细胞增生、上皮下大量胶原沉积,同时伴显著的炎症细胞浸润,显著表达IL-13,TGF-β₂ mRNA及p38MAPK蛋白。结论: 气道重塑肺组织显著表达IL-13、TGF-β₂ mRNA、p38MAPK,表明Th2细胞因子、TGF-β在气道重塑中可能起一定作用,提示p38MAPK可能与哮喘的发病过程并与气道重塑相关。     

单侧输尿管梗阻大鼠模型中p38MAPK表达与细胞凋亡

目的： 探讨p38MAPK在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾组织中的表达及其在肾小管间质细胞凋亡和纤维化过程中可能发挥的作用。方法: 将25只Wistar大鼠中的18只行左侧输尿管结扎术，另外7只行假手术。分别于术后第3、7和14 d处死各组大鼠，行HE和Masson染色，观察肾脏病理变化；免疫组织化学方法测定增殖细胞核抗原（PCNA）表达；原位末端标记法（TUNEL）与DNA电泳观察肾小管间质细胞凋亡情况；Western blotting检测肾组织半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和p38丝裂素激活蛋白激酶（p38MAPK）及其磷酸化产物（p-p38MAPK）的表达。结果: 与假手术组比较，UUO模型组肾脏病理改变加重，TUNEL染色及DNA琼脂糖凝胶电泳可见大量的肾小管间质细胞凋亡，肾间质细胞PCNA表达明显增加，肾组织caspase-3的表达也显著增加（P<0.05）。p38MAPK蛋白水平在各组之间比较没有明显差别（P>0.05）。p-p38MAPK蛋白在正常肾脏有低水平表达，UUO模型组随着梗阻时间延长表达逐渐增多；第7 d达高峰，第14 d开始下降（P<0.05）。结论: p38MAPK信号通路可能参与了UUO致肾小管间质细胞凋亡和肾间质纤维化过程。     

p38蛋白激酶对支气管哮喘大鼠Th2类细胞因子表达的调控

目的：探讨p38蛋白激酶（p38 MAPK）对支气管哮喘大鼠Th2类细胞因子IL-4、IL-5表达的调控作用。 方法： 分离培养正常和哮喘大鼠外周血T淋巴细胞。采用蛋白质印迹方法检测细胞核蛋白p38蛋白激酶，采用原位分子杂交方法检测IL-4、IL-5的mRNA，采用ELISA方法检测上清液中IL-4、IL-5的蛋白质浓度。 结果： 哮喘对照组T淋巴细胞核蛋白p38蛋白激酶、IL-4、IL-5的mRNA表达阳性细胞数百分比以及上清液中IL-4、IL-5的蛋白质浓度均显著高于正常对照组（P<0.01）。加入递增浓度的SB203580处理后，上述指标均较哮喘对照组显著降低（P<0.05）。T淋巴细胞核蛋白p38蛋白激酶含量与IL-4、IL-5 mRNA原位分子杂交染色阳性细胞的百分比均呈显著正相关（r=0.71、0.63，P<0.01），与培养上清液中IL-4、IL-5蛋白质含量之间亦均呈显著正相关（r=0.68、0.57，P<0.01）。 结论： p38蛋白激酶在转录和翻译水平调控支气管哮喘IL-4和IL-5的表达。p38蛋白激酶抑制剂可望成为临床治疗哮喘的新途径。     

盐酸戊乙奎醚抑制脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶的活化

目的:观察盐酸戊乙奎醚(PHC)对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)活化的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、LPS模型组（5 mg/kg LPS,iv）和LPS+PHC高、中、低(3.0、1.0和0.3 mg/kg)3个剂量组,每组6只,进行PHC对肺组织p38MAPK、JNK表达的量效性分析;另取大鼠在注入NS后即刻0（对照组）和注射LPS后2 h、4 h、6 h和12 h共5个时点,每时点6只,进行肺组织p38MAPK、JNK表达的时效性分析。蛋白免疫印迹法检测肺组织p38MAPK、JNK的表达。结果:LPS模型组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK、JNK的表达显著高于对照组（P＜0.05);PHC高剂量组显著抑制LPS诱导的大鼠肺组织磷酸化p38MAPK表达（P＜0.05);PHC在造模后6 h时最能有效抑制磷酸化p38MAPK上调。与LPS模型组相比,PHC高、中、低剂量组磷酸化JNK的表达均无显著差异(均P＞0.05);造模后不同时点,PHC对磷酸化JNK的表达均无抑制作用。结论:PHC抑制LPS诱导的ALI大鼠肺组织p38MAPK活化,但不能抑制JNK活化,PHC对LPS诱导大鼠ALI的拮抗作用可能与其抑制p38MAPK的活化有关。     

11,12-EET和缺血预处置对在体大鼠正常及再灌注心肌磷酸化ERK和p38MAPK表达的影响

目的:观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-EET)和缺血预处置对大鼠再灌注心肌组织磷酸化ERK1/ERK2和p38 MAPK表达的影响,了解大鼠心肌磷酸化ERK1/ERK2和p38 MAPK表达与预处置有否关系。方法: 使用雄性Wistar大鼠,通过结扎(60 min)和松开(30 min)冠状动脉左前降支,复制缺血/再灌注模型;采用缺血5 min,再灌注5 min两次造成缺血预处置。大鼠经手术并静脉给予6.24×10^-8mol/L 11,12-EET,稳定20 min,结扎冠脉复制缺血/再灌注模型。实验分5组:①正常组(norm);②假手术组(sham);③缺血再灌注组(I/R);④短阵缺血预处置组(SI+I/R);⑤11,12-EET预处置缺血/再灌注组(EET+I/R)。采用Western blot法测定心肌细胞外调节的蛋白激酶(ERK1/2)和p38 MAPK的表达程度,并观察再灌注过程中心功能的变化。结果: 再灌注30 min时,I/R组+dp/dt_max%、-dp/dt_max%和LVDP均显著低于sham组、SI+I/R组和EET+I/R组(P＜0.05);而I/R组大鼠心肌ERK1/2磷酸化表达明显高于sham组(P＜0.05),明显低于SI+I/R组和EET+I/R组(P＜0.05);I/R组大鼠心肌p38 MAPK磷酸化表达I/R组显著高于sham组、norm组、SI+I/R及EET+I/R组(P＜0.05)。结论:6.24×10^-8 11,12-EET mol/L具有保护心功能的作用,这种保护作用可能与大量激活磷酸化ERK1/2和抑制p38 MAPK有关。