RhoA/Rho激酶在2型糖尿病大鼠肝脏纤维化中的作用

目的阐明RhoA/Rho激酶在糖尿病大鼠肝纤维化中的作用。方法通过高脂饮食和小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。实验分为对照组、糖尿病组和法舒地尔干预组(法舒地尔10 mg/(kg·d),分两次腹腔注射)24周末。测定血糖、血脂、谷草转氨酶和谷丙转氨酶;Masson染色和羟脯氨酸测定评估肝胶原沉积;RT-PCR测定转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达;免疫组化测定TGF-β1蛋白表达;Western blot测定肝组织肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1磷酸化(p-MYPT1)水平。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠血糖、血脂和转氨酶显著增高,肝组织大量胶原沉积,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著上调(P0.01)。与糖尿病组比较,法舒地尔干预组大鼠转氨酶降低,肝胶原沉积明显减轻,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著下降(P0.01)。结论高血糖激活了肝组织RhoA/Rho激酶,通过调控TGF-β1/CTGF表达,在糖尿病肝纤维化中起着重要作用。     

miR-30a在心肌梗死大鼠心肌纤维化中的作用机制及对心功能的影响

目的探讨miR-30a在大鼠心肌梗死后对心肌纤维化的作用机制及对心功能的影响。方法构建携带大鼠miR-30a基因的载体,在HEK293细胞中包装病毒载体r AAV9-miR-30a及阴性对照r AAV9-miR-30a-NC,提取纯化后通过冠脉注射方法分别传导PBS缓冲液、r AAV9-miR-30-NC和r AAV9-miR-30a至大鼠心脏,再建立大鼠心肌梗死模型,分别设为PBS组、miR-30-NC组和miR-30a组,同时设立假手术组(sham组)。用心脏彩色多普勒超声检测心功能指标,包括短轴缩短率(FS)及左室射血分数(LVEF);Masson染色观察心肌胶原容积分数(CVF);免疫组化法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测心肌miR-30a及TGF-β1和CTGF mRNA表达;蛋白印迹法(Western blot)检测TGF-β1及CTGF蛋白的表达。结果 miR-30a组心功能较PBS组及miR-30-NC组显著改善(P0.05)。miR-30a组的心肌CVF及Ⅰ、Ⅲ胶原表达水平、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值较PBS组及miR-30-NC组显著降低(P0.01);miR-30a组心肌TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平与PBS组及miR-30-NC组比较显著下降(P0.001);CTGF mRNA及蛋白表达水平较PBS组及miR-30-NC组显著降低(P0.001)。结论 miR-30a过表达能下调心肌梗死后心肌TGF-β1、CTGF mRNA及蛋白水平,从而减少心肌胶原产生,抑制心肌纤维化,进而改善心功能。     

转化生长因子-β1和结缔组织生长因子在慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化中的动态表达

目的:探讨慢性心力衰竭心肌内转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)的表达及意义.方法:采用肾上腹主动脉缩窄法制作雄性Wisstar大鼠慢性心衰模型,随机分为心衰1、7、14d组,另取假手术组作为对照.观察和比较成模后心衰各组和假手术组血流动力学参数及左心室肌质量指数,用Masson染色法和透射电镜观察左室心肌组织形态的改变.用免疫组织化学方法检测各组大鼠左室心肌组织中TGF-β1、CTGF的表达水平.结果:心衰模型各组TGF-β1、CTGF的蛋白表达高于假手术组,且随着心力衰竭程度的加重而表达增高.结论:TGF-β1、CTGF可能参与了大鼠压力负荷性心肌纤维化的发生和发展,其水平的高低与慢性心力衰竭的严重程度密切相关.     

上调miR-133a表达水平对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察上调微小RNA-133a(miR-133a)的表达水平对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响。方法:以同源正常血压Wistar-Kyoto(WKY)大鼠为正常对照组,另将SHR随机分为SHR组、SHR+腺相关病毒(AAV)组和SHR+携带miR-133a的腺相关病毒(miR-133a-AAV)组。通过冠脉灌注法将miR-133a-AAV转染至SHR大鼠的心脏,监测大鼠的尾动脉压,Masson染色观察心肌胶原沉积情况,real-time PCR检测心肌组织中miR-133a的表达水平,免疫组化法和Western blot法检测心肌组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白表达水平。结果:与WKY大鼠相比,SHR的尾动脉压明显升高,心肌组织中miR133a表达水平降低,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平升高,出现心肌纤维化;上调SHR心肌miR-133a的表达水平后,心肌纤维化程度明显减轻,TGF-β1和CTGF蛋白表达水平降低。结论:上调心肌组织中miR-133a的表达水平,对高血压导致的大鼠心肌纤维化有改善作用,其机制可能与抑制心肌组织中TGF-β1和CTGF蛋白表达有关。     

法舒地尔抑制氧化应激反应减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化简

 目的 探讨RhoA/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用。方法 高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型。实验分为对照（NC）组,糖尿病（DM）组和法舒地尔干预（DF）组（每天腹腔注射10mg/kg,分两次注射）。24周末,应用HE染色观察大鼠心脏组织形态;电子显微镜观察心肌的超微结构;Masson染色观察心肌胶原沉积情况;羟脯氨酸(HYP)检测心肌胶原含量;测定超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量;免疫组化法检测一氧化氮合酶（eNOS）表达;Western blot法检测心肌中磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1（MYPT1）表达,代表ROCK活性。 结果 糖尿病组大鼠较对照组大鼠心肌组织ROCK活性明显增强（P<0.01）,MDA含量增高(P<0.01),SOD活力降低(P<0.01),eNOS表达明显下调(P<0.01),心肌胶原明显增多(P<0.01)。法舒地尔干预组大鼠较糖尿病组心肌组织ROCK活性显著降低（P<0.01）,MDA含量降低(P<0.05),SOD活力增加(P<0.01), eNOS表达上调(P<0.05),心肌胶原明显减少(P<0.01)。结论 ROCK抑制剂法舒地尔抑制心肌组织氧化应激反应并上调eNOS表达,有效地减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化。     

四逆汤对异丙肾上腺素引起的大鼠心肌纤维化和TGF-β_1表达的影响

目的:观察四逆汤对异丙肾上腺素引起的大鼠心肌纤维化的干预作用并探讨其相关机制。方法:Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和四逆汤组。模型组及四逆汤组给予注射异丙肾上腺素,而对照组注射生理盐水。四逆汤组给予四逆汤灌胃,对照组和模型组均给予生理盐水灌胃。4周后,各组测定左室心功能、心肌羟脯氨酸水平;测定血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;通过免疫组化方法检测心肌TGF-β1蛋白的表达;RT-PCR法检测TGF-β1mRNA表达。结果:(1)模型组羟脯氨酸水平明显高于对照组和四逆汤组,而四逆汤组明显高于对照组(P0.05);(2)四逆汤组与模型组比较,明显改善心肌舒张功能(P0.05);(3)模型组血浆AngⅡ及TGF-β1水平明显高于四逆汤组和对照组(P0.05);(4)模型组心肌TGF-β1蛋白和mR-NA表达明显高于四逆汤组和对照组(P0.05)。结论:四逆汤可以有效抑制异丙肾上腺素所致的大鼠心肌纤维化,其机制可能与减少AngⅡ生成,抑制大鼠心肌TGF-β1的表达有关。     

腹腔注射人免疫球蛋白对压力超负荷心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响北大核心CSCD

心肌纤维化是高血压病、冠心病、心肌炎等多种心脏疾病最终走向心力衰竭的病理改变,它还可引起心律失常、心源性猝死等严重并发症,因此如何减缓或逆转心肌纤维化已日益成为临床治疗中的关键。心肌纤维化形成的机制与多种因素有关,其中慢性炎症被认为是心肌纤维化进程中重要的因素之一,炎性因子的释放及炎性细胞的聚集可以导致组织损伤、血管再生以及胶原沉积,参与了慢性心力衰竭的病理过程。而免疫球蛋白是临床常用的免疫调节剂,它可能通过调节炎性细胞因子、抑制炎症反应等作用干预心肌纤维化的形成。因此,本研究旨在探讨免疫球蛋白是否能延缓在压力超负荷心力衰竭情况下心肌纤维化的进程,为今后临床工作中开展应用免疫球蛋白治疗心肌纤维化提供依据。     

丹参酮ⅡA对压力负荷增加大鼠心肌纤维化的改善作用

目的:观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对压力负荷增加大鼠心肌纤维化的改善作用。方法:60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=8)和手术组(n=52),手术组均行腹主动脉缩窄术制备压力负荷增加心肌纤维化模型,术后4周,存活的32只成模大鼠中8只留作模型组(Model组),余24只分为TanⅡA低剂量组(L-TanⅡA组,10mg/Kg/天)、TanⅡA高剂量组(H-TanⅡA组,20mg/Kg/天)及阳性对照药物卡托普利组(Captopril组,100mg/Kg/天),每组8例。给药4周后,检测5组大鼠心肌肥厚指数和心肌组织形态、心肌羟脯氨酸(HYP)含量、心肌组织Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和核转录因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白含量。结果:与Sham组比较,Model组大鼠的心肌肥厚指数、心肌HYP含量及心肌组织中ROCK1、TGF-β1和NF-κBp65蛋白含量均显著升高(P均<0.01),组织病理学改变明显;与Model组比较,L-TanⅡA和H-TanⅡA组心肌肥厚指数、心肌HYP含量及心肌组织中ROCK1、TGF-β1和NF-κBp65蛋白含量均降低(P<0.05或P<0.01),组织病理学改变明显。结论:TanⅡA能改善压力负荷增加大鼠心肌纤维化,此作用可能与其抑制ROCK1表达,下调TGF-β1和NF-κBp65水平有关。     

TGF—β1和AngⅡ的相互作用在心肌纤维化中的意义

心肌纤维化(MF)是高血压左室重构的主要表现之一,TGF-β1和AngⅡ是这一过程中的重要生物活性因子,AngⅡ通过血管紧张素Ⅱ-1型(ATi)受体对TGF-β1合成和释放的刺激,增加TGF-β1的表达和促进纤维的发生;TGF-β1也上调Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成并抑制胶原酶的释放;两者相互作用,共同促进MF的发生.多种药物可对TGF-β1的表达产生抑制,AT1受体拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂和TGF-β拮抗剂在降低TG-β1表达和减轻MF方面显示良好作用.     

肝素对RhoA/Rho激酶信号通路激活致心肌肥厚的影响

目的 探讨激活心肌细胞三磷酸肌醇受体(IP3R)是否能触发RhoA/Rho激酶介导的心肌肥厚信号通路及肝素的干预作用,阐明除经典信号传导通路之外的作用途径及干预方式. 方法 培养Wistar乳鼠心肌细胞,RT-PCR法检测应用三磷酸肌醇(IP3)刺激后RhoA、Rho激酶基因表达,Western blotting法检测IP3刺激后胚胎基因α-肌动蛋白(α-actin)、β主要组织相容性复合体(β-MHC)及即早基因(c-fos、c-myc)蛋白表达及肝素的干预作用. 结果 给予IP3(10-7mmol/L)刺激心肌细胞IP3R,能明显激活心肌细胞RhoA/Rho激酶信号通路,促使心肌细胞的即早基因和胚胎基因表达(P＜0.05),且随时间延长而作用明显,肝素可抑制上述作用(P＜0.05). 结论 激活IP3R介导的RhoA/Rho激酶信号通路能显著地促使心肌细胞肥大,此信号通路不同于已知的G蛋白耦联受体介导的心肌肥厚信号转导途径,且肝素有望成为抑制心肌细胞生长的药物之一.     

Treatment with a Rho Kinase Inhibitor Improves Survival from Graft-Versus-Host Disease in Mice after MHC-Haploidentical Hematopoietic Cell Transplantation

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a major complication of allogeneic hematopoietic cell transplantation (HCT) and the main cause of nonrelapse mortality during the first 100 days post-transplant. Although GVHD can be prevented by extensive removal of mature donor T cells from the donor hematopoietic stem cell population, doing so eliminates any potential allogeneic graft-versus-tumor (GVT) effect also mediated by donor T cells and results in unacceptable rates of cancer relapse. One potential solution to this problem of separating GVHD development from a GVT response is to prevent T cell–mediated GVHD in the intestinal tract (IT) while preserving systemic antihost alloreactivity of donor T cells that target residual tumor cells expressing host alloantigens. We examined the ability of the anti-inflammatory rho kinase inhibitor, fasudil, given orally and intraperitoneally, to prevent GVHD in a C3H → B6C3F₁ mouse model of MHC-haploidentical bone marrow transplantation. Fasudil-treated recipients of anti-thy-1 mAb + C′ treated bone marrow (ATBM) cells plus T cells had a 73% 90-day survival compared with 25% among untreated ATBM + T cell recipients (P < .0001). Severe initial weight loss was similar in the 2 groups, but less diarrhea was observed among treated animals, and fasudil-treated survivors recovered more weight than untreated survivors. Skin inflammation occurred and resolved between weeks 2 and 8 with similar severity and kinetics in both treated and untreated surviving animals, indicating persistent alloreactivity. Day 10 post-transplantation splenocytes from fasudil-treated mice, containing mature donor T cells, and day 98 splenocytes, containing mature donor and de novo thymus-derived T cells, exhibited alloreactivity against host parental antigens, as assessed by in vitro IFN-γ production and rounds of allostimulated proliferation, respectively. These data support the idea that targeted treatment of the IT with rho kinase inhibitors can ameliorate lethal GVHD while preserving systemic alloreactivity. The results also suggest that similar mechanisms of IT-specific tolerance or resistance to GVHD operate in fasudil-treated and untreated long-term survivors of allogeneic ATBM + T cells.     

卡维地洛与压力负荷心衰大鼠心室重塑和Rho激酶表达的关系

目的研究卡维地洛(α1肾上腺素受体阻断剂、β肾上腺素受体非选择性阻断剂)对升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠心室重塑、RhoA、Rho激酶表达的影响,探讨卡维地洛改善心力衰竭的新机制。方法将升主动脉缩窄术后心力衰竭Wistar雌性大鼠随机分为2组,一组为心力衰竭组,给予生理盐水灌胃,每日2次(n=10);一组为卡维地洛组,12.5mg/Kg卡维地洛灌胃,每日2次(n=10),治疗12周。同时制备模型设置假手术组作为对照(n=10),不予处置。观察各组大鼠各项指标变化。结果与假手术组相比,心力衰竭大鼠心肌肥厚指数增加,HE染色心肌排列紊乱,血液动力学指标明显异常,心肌细胞RhoA、Rho激酶表达显著升高(P<0.05);药物治疗12w后,与心力衰竭组对比,卡维地洛治疗组心肌肥厚指数降低,HE染色示心肌重塑不明显,血液动力学参数改善,RhoA、Rho激酶表达显著降低。结论卡维地洛可通过对心肌细胞α-Gq-RhoA/Rho激酶通路表达干预,明显缓解心力衰竭症状、改善心室重塑,卡维地洛这种α1肾上腺素受体阻断剂可能对心力衰竭更有利。     

前列腺素E1对肾缺血再灌注损伤大鼠内皮的Rho/Rho激酶信号通路的影响

探讨前列腺素E1对肾缺血再灌注损伤大鼠内皮细胞Rho/Rho激酶信号通路的影响.建立大鼠IRI模型,将健康Wistar大鼠75只随机平均分为假手术组、模型组、治疗组,每组各25只;并按术后观察时间分为6、12、24、48、72 h5个不同时段亚组,每组各5只.检测各组血清肌酐(Scr)、血管内皮生长因子(Vascula...     

心肌细胞结缔组织生长因子的表达及TGF-β1对其表达的影响

目的： 研究纯化的心肌细胞中结缔组织生长因子（CTGF）基因及蛋白的表达，并探讨转化生长因子β1（TGF-β₁）对其表达的影响。方法: 分离培养乳鼠心肌细胞，48 h后用流式分选方法（FACS）分选纯化心肌细胞，纯化的心肌细胞继续培养48 h。分为对照组（空白纯化心肌细胞组）和TGF-β₁刺激组，用RT-PCR方法测定两组细胞中TGF-β₁、CTGF、纤维连接蛋白（FN） mRNA的含量， 用Western blotting法检测两组细胞胞浆蛋白中CTGF、FN含量。结果: 心肌细胞中有较低水平的CTGF表达，在予以 TGF-β₁刺激后细胞内CTGF mRNA与蛋白含量分别提高 2.49 倍(P<0.01) 和3.63 倍（P<0.01），FN mRNA与蛋白含量分别提高 1倍(P<0.01)和4.18倍（P<0.01），而TGF-β1mRNA水平减少34%（P<0.01）。结论: 纯化的心肌细胞有CTGF的基础表达，并且TGF-β1可以明显上调其表达，提示心肌细胞主动参与了心肌纤维化过程。     

PI3K/CTGF信号通路在TGF-β1诱导A549细胞表达collagen I过程中的作用

 目的： 研究磷脂酰肌醇3-激酶/结缔组织生长因子（PI3K/CTGF）信号通路在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人肺腺癌A549细胞表达I型胶原蛋白（collagen I）过程中的分子机制。方法： 体外培养A549细胞,予TGF-β1刺激,观察CTGF和collagen I的mRNA和蛋白表达及PI3K信号通路的活化;PI3K抑制剂LY294002预先处理A549细胞后,观察TGF-β1刺激下CTGF和collagen I mRNA和蛋白表达的变化;CTGF特异性siRNA干扰A549细胞中CTGF的表达后,观察TGF-β1刺激下collagen I mRNA和蛋白表达的变化和PI3K信号通路的活化。结果： TGF-β1可以诱导A549细胞中CTGF和collagen I的mRNA和蛋白表达以及PI3K信号通路的活化;PI3K特异性抑制剂LY294002可以部分逆转TGF-β1诱导的A549细胞中CTGF和Collagen I mRNA和蛋白表达的升高。干扰CTGF可以降低TGF-β1诱导的A549细胞collagen I mRNA和蛋白表达,而不影响PI3K信号通路的活化。结论： CTGF是TGF-β1/PI3K信号通路调控的即刻早期反应效应蛋白,参与了TGF-β1诱导的A549细胞中collagen I表达。     

结缔组织生长因子在肾间质纤维化中的表达及其调控

CTGF, a member of the CCN family of immediate early genes, is a recently discovered profibrotic growth factor, which is involved in many pathophysiologic procedures. CTGF acts as a downstreame ffector of TGF-β acting on interstitial ceils to enhance the progression of fibrotic renal diseases. It has been shown that CTGF gene expression can be induced or blocked by some kinds of cytokine and drugs. It is an interesting candidate target for future intervention strategies of renal interstitial fibrosis.     

结缔组织生长因子促纤维化作用及其表达调节的研究进展

Connective tissue growth factor (CTGF) has recently received much attention as a possible key determinant of progressive fibrosis. It promotes tissue fibrosis through different pathways, such as cell proliferation, extracellular matrix accumulation and cell transdifferentiation. A number of regulators of CTGF expression have been identified, including transformiing growth factor β, vascular endothelial growth factor, tumor necrosis factor α, etc. The mechanism of profibrotic effect by CI‘GF was reviewed.     

Darapladib,a Lipoprotein-Associated Phospholipase A2 Inhibitor,Reduces Rho Kinase Activity in Atherosclerosis

PurposeIncreased lipoprotein-associated phospholipase A2 (Lp-PLA2) activity and Rho kinase activity may be associated with atherosclerosis. The principal aim of this study was to examine whether darapladib (a selective Lp-PLA2 inhibitor) could reduce the elevated Lp-PLA2 and Rho kinase activity in atherosclerosis.ResultsThe serum levels of triglycerides, total cholesterol (TC), low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C), high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C), high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP), and Lp-PLA2, significantly increased in atherosclerosis model groups, as did Rho kinase activity and cardiomyocyte apoptosis (p<0.05 vs. sham group), whereas nitric oxide (NO) production was reduced. Levels of TC, LDL-C, CRP, Lp-PLA2, and Rho kinase activity were respectively reduced in darapladib groups, whereas NO production was enhanced. When compared to the low-dose darapladib group, the reduction of the levels of TC, LDL-C, CRP, and Lp-PLA2 was more prominent in the high-dose darapladib group (p<0.05), and the increase of NO production was more prominent (p<0.05). Cardiomyocyte apoptosis of the high-dose darapladib group was also significantly reduced compared to the low-dose darapladib group (p<0.05). However, there was no significant difference in Rho kinase activity between the low-dose darapladib group and the high-dose darapladib group (p>0.05).ConclusionDarapladib, a Lp-PLA2 inhibitor, leads to cardiovascular protection that might be mediated by its inhibition of both Rho kinase and Lp-PLA2 in atherosclerosis.     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及其意义

目的： 观察结缔组织生长因子（CTGF）在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中的动态表达，探讨CTGF在肾小管间质纤维化中的作用机制。方法： 将48 只Wistar大鼠随机分为UUO组和假手术（SO）组，采用左输尿管结扎术复制UUO模型，于术后1、3、7、14 d分别处死2组大鼠取左肾。采用Masson染色评定肾小管间质损伤程度；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 方法检测肾组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、CTGF、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）mRNA表达；免疫组织化学方法测定TGF-β₁、CTGF、ColⅠ、PAI-1表达；Western blotting方法检测CTGF蛋白表达量的变化。结果: UUO术后1d，梗阻肾TGF-β₁ mRNA表达开始升高，第3-14d时升高更显著（P<0.01），CTGF、ColⅠ、PAI-1 mRNA水平随之逐渐升高。免疫组织化学染色发现，UUO大鼠肾小管和间质区域CTGF表达随病程进展逐渐增强；相关分析显示，UUO术后第7d，CTGF表达量与肾小管间质损伤指数、肾小管间质TGF-β₁、ColⅠ、PAI-1表达强度均呈正相关，相关系数（r）分别为0.62、0.85、0.78和0.76（均P<0.01）。Western blotting结果显示，CTGF蛋白水平在术后第3d开始上升，随病程进展更显著。结论: CTGF可通过促进细胞外基质产生和抑制细胞外基质降解双重途径诱导肾小管间质纤维化的发生和进展。