新制抗癌方对AFB1染毒的HBV转基因小鼠肝癌前病变组织PCNA等表达的影响

我们已从形态学角度观察了自拟中药复方:新制抗癌方对AFB1染毒的HBV转基因小鼠肝癌前病变的阻断作用[1],本研究旨在运用免疫组化法从分子生物学角度探讨其作用机理,为新制抗癌方的进一步研究奠定部分实验依据.     

新制抗癌方对AFB1染毒的HBV转基因小鼠肝组织形态学的影响

目的:研究新制抗癌方对AFB1染毒的HBV转基因小鼠肝组织形态学的影响.方法:运用光镜和电镜观察各组小鼠肝组织形态学变化,并进行比较.结果:模型组小鼠肝组织可见多处肝细胞炎性变化和胶原纤维增生、肝小叶变窄、肝细胞内瘀胆等慢性肝炎和早期轻度肝硬化征象,并可见诸多肝细胞失去正常排列,肝小叶结构消失,被大量不典型增生灶及增生结节取代,出现了大量异形细胞,异形细胞形态基本接近癌细胞,中药组小鼠上述肝组织病变明显减轻,肝小叶结构存在,可见少量肝细胞不典型增生灶和增生结节,异形细胞显著减少,并可见较多的肝细胞凋亡.结论:新制抗癌方具有抗肝细胞炎症,防止肝硬化和肝细胞癌变等作用.     

抗癌方对HepG2人肝癌细胞株P53蛋白表达的影响

目的观察抗癌方对ＨｅｐＧ２人肝癌细胞株Ｐ５３蛋白表达的影响，以探讨其抗癌作用机理。方法采用ＭＴＴ法分析抗癌方对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２细胞生长的影响。结果抗癌方能明显抑制ＨｅｐＧ２的生长，对ＨｅｐＧ２细胞的半数生长的抑制剂量（ＩＣ５０）为１ｍｇ／ｍｌ。ＬＳＡＢ方法观察发现抗癌方能诱导ＨｅｐＧ２细胞株从相当弱到非常强的比较致密的细胞核染色，且低浓度（０．１ｍｇ／ｍｌ）Ｐ５３蛋白表达诱导作用强于高浓度（１ｍｇ／ｍｌ），几乎将近５０％的细胞出现Ｐ５３蛋白高表达。提示：抗癌方诱导ＨｅｐＧ２Ｐ５３蛋白高达表，可能为其杀伤ＨｅｐＧ２细胞株、诱导其凋亡的机制之一。     

基于P38 MAPK信号通路探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌LNCaP细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞增殖、凋亡及p38 MAPK通路的作用。方法：应用CCK-8法观察扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪分析扶正利湿抗癌方含药血清对LNCaP细胞凋亡的影响,Western Blot法检测LNCaP细胞p38 MAPK、p-p38MAPK、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53等蛋白的表达。结果：扶正利湿抗癌方含药血清能够以剂量依赖性地抑制LNCaP细胞增殖并诱导其凋亡,上调p-p38 MAPK、Bax、Caspase-3及p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平。结论：扶正利湿抗癌方含药血清可能通过激活p38 MAPK信号传导通路抑制LNCaP细胞增殖并促进其凋亡。     

抗癌扶正方及含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用

目的:探讨抗癌扶正方的抗肝癌作用。方法:提取抗癌扶正方,使用药物及含药血清,针对人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养,分光光度计检测抗癌扶正方对肝癌细胞生长抑制率的影响。结果:抗癌扶正方及药物血清,具有良好的抑肝癌细胞生长作用,尤以1、10mg/mL剂量组效果最佳,作用程度与化疗药物类似。结论:抗癌扶正方能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性。其机制有必要进一步深入探讨。     

增效抗癌汤诱导裸鼠种植性胃癌细胞凋亡和对P53、Bcl-2表达的影响

笔者应用增效抗癌汤治疗胃癌患者取得满意疗效，为了明确其作用机理，笔者制作裸鼠种植性胃癌动物模型进行实验研究。     

扶正抗癌方对人肝癌细胞增殖作用影响的实验研究

通过大鼠灌胃给药后,分离药物血清,作用于体外培养细胞的方法,观察扶正抗癌方对人肝癌细胞SMMC7721对增殖的影响;用两个循环聚合——解聚的方法,提取大鼠脑组织中微管蛋白,利用微管蛋白随温度变化而出现的聚合——解聚特点,观察扶正抗癌方对微管蛋白活性的影响,研究扶正抗癌方抑制肿瘤细胞增殖作用的机理。结果表明扶正抗癌方药物血清具有明显抑制人肝癌细胞3~H-TdR掺入和MTT还原作用;扶正抗癌方显著抑制微管蛋白聚合。说明扶正抗癌方具有较好的抑制人肝癌细胞增殖作用。其机理可能在于影响微管构建,破坏纺缍丝形成,使有丝分裂中止,从而抑制肿瘤细胞增殖。     

抗癌中药配伍研究

抗癌中药的使用已成为中医肿瘤临床重要的治疗手段,不同抗癌中药配伍可能具有协同或拮抗作用,开展抗癌中药配伍研究具有重要意义。当前抗癌中药配伍研究主要集中在下述几个方面:传统中医药理论指导下的配伍研究,中药药理研究为基础的配伍研究,经验方为基础的拆方配伍研究,以及中西药联用的抗癌配伍研究等。积极探索抗癌中药的配伍规律,可为中药抗癌临床疗效的提高提供新思路。     

新制六安煎方联合舒利迭治疗咳嗽变异性哮喘60例

目的:观察新制六安煎方和舒利迭联合对咳嗽变异性哮喘的治疗。方法:选用符合咳嗽变异性哮喘标准患者随机分为两组,治疗组采用中药新制六安煎方口服加舒利迭吸入;对照组采用舒利迭加用甲泼尼龙片口服8mg1日3次,每3日减4mg;两组疗程均为14天。结果:治疗组有效率为95%,对照组为75%,相比P<0.05。结论:中药汤剂新制六安煎方具有清肺化痰止咳作用,联合舒利迭抗炎解痉平喘具有明显的止咳作用,比单纯西医治疗有着明显的优势。     

RT-PCR检测抗癌扶正协定方对C57/BL6J小鼠Lewis肺癌肿块细胞中bax/bcl-2以及Th1/Th2基因表达的影响

目的：抗癌扶正协定方是我医院的协定方,自1977年开始使用以来,在肺癌的辅助治疗方面取得了理想的效果。本研究旨在探讨肿瘤组织中bax/bcl-2及Th1/Th2基因与抗癌扶正协定方作用机理的关系。方法：用RT—PCR法检测bax/bcl-2及Th1/Th2基因mRNA相对表达比率,分析抗癌扶正协定方与机体免疫应答相关基因的关系。结果：抗癌扶正协定方能使小鼠肿瘤组织中IL-2基因的表达增高（高浓度组：2-ΔΔCt=4.347±3.623）,有显著性差异（P=0.047）。其他肿瘤组织的相关基因表达与对照组相比,均无显著性差异。结论：抗癌扶正协定方的主要作用可能是通过提高IL-2的表达,促进Th1型细胞因子占主导,发挥其减毒增效以及提高免疫能力的效果。而在细胞凋亡方面的作用机理还有待证实。     

半边旗二萜类化合物5F对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PMNF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响

目的研究半边旗二萜类化合物5F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝克杉烷-19酸)对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞内核转录因子κBP65亚基[NF-κB(P65)]、Smad3蛋白及NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法MTT法检测5F对HO-8910PM细胞增殖的影响;Westernblot分析NF-κB(P65)及Smad3蛋白的表达;RT-PCR分析NF-κB(P65)及ETS-1mRNA的表达。结果5F能抑制HO-8910PM细胞的增殖,抑制率随剂量的增加而增加,具有剂量依赖性;25～100μmol/L5F作用HO-8910PM细胞24h后,NF-κB(P65)、Smad3蛋白表达水平明显下降,并呈剂量效应关系;5F明显下调NF-κB(P65)mRNA的表达,轻微下调ETS-1mRNA的表达。结论5F抗肿瘤活性与NF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA的表达有关。     

“萎胃安”对慢性萎缩性胃炎PCNA、P21~(ras)表达的影响

目的观察调气活血中药萎胃安治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效及其对患者胃黏膜PCNA、P21ras表达的影响。方法慢性萎缩性胃炎伴肠化生患者60例,随机分为两组,分别应用萎胃安颗粒及相应基本方加减煎剂治疗。观察两组患者治疗前后症状和病理变化以及PCNA及P21ras表达情况。结果成药组症状总有效率为86.67%、病理总有效率为83.3%;汤剂组症状总有效率93.3%,病理总有效率为73.3%,两组疗效无显著性差异(P>0.05)。治疗后,两组PCNA、P21ras表达均有明显下调(P<0.05),但组间差异不明显(P>0.05)。结论萎胃安颗粒及相应煎剂均能有效改善萎缩性胃炎患者的症状和病理情况,其作用机制可能是通过下调PCNA、P21ras表达而实现。     

补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠子宫内膜P21表达的影响

目的：观察补肾益气和血方对胚泡着床障碍小鼠着床部位子宫内膜中周期素依赖的蛋白激酶抑制物P21和增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。方法：采用免疫印迹法观察胚泡植入 ［即妊娠第6天(pregnancy day 6,Pd6),Pd7和Pd8］时P21在整个子宫中的表达,采用免疫组化法进一步定位观察着床部位子宫内膜中PCNA和P21的表达。结果：与对照组相比,模型组子宫内膜PCNA和P21的出现和消失在时间和空间上均明显滞后；补肾益气和血方能促进PCNA和P21及时有序地表达或消失,从而改善胚泡着床障碍小鼠子宫内膜的蜕膜反应。结论：补肾益气和血方可通过促进子宫内膜的蜕膜反应来改善胚泡着床,其作用机制与其促进子宫内膜PCNA和P21时空有序地表达和消失密切相关。     

胃癌前病变大鼠中抑癌基因APC、P16表达与浊毒的相关性研究

目的：观察化浊解毒中药对胃癌前病变模型大鼠胃黏膜APC、P16蛋白表达的影响,探讨胃癌前病变大鼠中抑癌基因APC、P16的表达与浊毒之间所存在的相关性。方法：采用结合致癌物的综合造模方法复制胃癌前病变大鼠模型,将造模大鼠随机分为化浊解毒中药组（以下简称＂中药组＂）、模型对照组、空白对照组3组。造模成功后中药组给予化浊解毒中药灌服,模型对照组和空白对照组均给予生理盐水灌胃。连续给药4周后将大鼠断头处死,解剖取胃,石蜡包埋连续切片,用免疫组化方法检测胃黏膜APC和P16蛋白的表达。结果：与空白对照组相比,模型组大鼠胃黏膜APC和P16蛋白的表达明显降低（P〈0.05）。与模型对照组比较,中药组大鼠胃黏膜APC和P16蛋白的表达明显升高（P〈0.05）。结论：化浊解毒中药能上调胃癌前病变大鼠抑癌基因APC、P16的水平,增加APC、P16蛋白的表达,从而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,说明胃癌前病变大鼠中抑癌基因APC、P16表达与浊毒之间存在相关性。     

四神丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中核转录因子KBp65基因和蛋白表达的影响

目的观察四神丸对渍疡性结肠炎（UC）模型大鼠结肠组织中核转录因子KBp65（NF—KBp65）基因和蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法将实验大鼠分为空白组、模型组、四神丸组和柳氮磺胺嘧啶（SASP）组,采用TNBS／乙醇溶液灌肠法造模,四神丸组给予四神丸浸膏剂5g／kg灌胃,SASP组给予0．3g／kgSASP灌胃,空白组和模型组灌服等体积生理盐水。肉眼观察各组大鼠结肠大体形态损伤并评分,采用免疫组化和反转录法检测NF—KBp65蛋白和基因表达水平。结果肉眼观察,模型组大鼠结肠组织黏膜层可见炎症和渍疡形成,与空白组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。模型组大鼠结肠组织NF—KBp65基因和蛋白表达均高于空白组,差异有统计学意义（P〈0．01）：四神丸组NF—KBp65基因和蛋白表达均较模型组降低,差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论四神丸对UC具有治疗作用,其机制可能与激活NF—KB信号通路有关。     

桂枝茯苓丸对荷瘤鼠肿瘤细胞PCNA P21waf/cip的影响

目的：探讨桂枝茯苓丸的抑瘤机制,为桂枝茯苓丸（GFW）开发应用提供实验依据。方法：计算抑瘤率,SP免疫组化法测定增殖细胞核抗原PCNA、抑癌基因P21^waf/cip蛋白表达。结果：GFW抑瘤率为38.93%,GFW抑制肿瘤细胞PCNA蛋白表达,GFW组与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。GFW上调肿瘤细胞P21^waf/cip蛋白表达,GFW组与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：桂枝茯苓丸的抑瘤作用可能与上调P21^waf/cip及下调PCNA表达密切相关。     

VEGF、PCNA、P21、P53在翼状胬肉中的表达

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）、增殖细胞核抗原（PCNA）、P21蛋白和P53蛋白在翼状胬肉中表达的。方法免疫组化法检测50例进行期翼状胬肉标本（翼状胬肉组）和50例正常结膜标本（正常对照组）中VEGF、PCNA、P21蛋白、P53蛋白的染色强度及染色阳性率,以免疫组化评分（IHS）表示免疫组化表达的强弱。对结果进行比较及统计学分析。结果VEGFIHS数值：翼状胬肉组4．71±1．74,正常对照组1．91±0．71（P=0．001）。PCNAIHS数值：翼状胬肉组6．24±1．32,正常对照组2．11±0．83（P=0．001）。P53蛋白IHS数值：翼状胬肉组5．21±1．02,正常对照组2．01±0．63（P=0．001）。P21蛋白IHS数值：翼状胬肉组2．14＋0．72,正常对照组6．01±1．11（P=0．001）。结论VEGF、PCNA、P21蛋白和P53蛋白均在翼状胬肉中有异常表达,VEGF、PCNA和P53蛋白为高表达,P21为低表达。     

莪术油对小鼠肝癌细胞抑制作用的分子机理

目的 :研究莪术油抑制小鼠HepA肝癌细胞的分子机制。方法 :建立小鼠HepA肝癌模型 ,进行莪术油抑癌试验 ,并用免疫组化法检测细胞增殖核抗原 (PCNA)、细胞周期素D1(cyclinD1)的表达 ,探讨莪术油抑制小鼠肝癌的分子机理。结果 :莪术油治疗组的瘤重、PCNA标记指数、cyclinD1标记指数均低于生理盐水组 (P <0 .0 1)。结论 :莪术油可能是通过下调cyclinD1的表达 ,抑制PCNA的阳性表达率 ,进而抑制肿瘤的生长。     

叶下珠提取物对急性乙型肝炎小鼠乙型肝炎病毒复制及其抗原表达的影响

目的：观察叶下珠提取物在小鼠急性乙型肝炎病毒（HBV）感染模型中对HBV复制及其抗原表达的影响。方法 C57b/6小鼠尾静脉注射1.3倍HBV真核表达质粒（pHBV1.3）,20μg/只,建立小鼠急性HBV感染模型。实验小鼠随机分为正常组、病毒组及中药高、中、低剂量组,感染后第1日起,给药组分别给予相应剂量药物灌胃,连续3 d。感染后第4日,化学发光法检测血清乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）水平,PCR检测血清HBV-DNA含量;免疫组化法检测肝组织乙型肝炎核心抗原（HBcAg）、HBsAg表达。结果中药各剂量组均能明显降低感染小鼠血清中HBsAg、HBeAg含量,与病毒组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;中药高剂量组显著降低血清中HBV-DNA水平,与病毒组比较差异有统计学意义（P＜0.01）,中药中、低剂量组血清HBV-DNA含量降低,但与病毒组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;中药高剂量组明显抑制了肝组织了 HBcAg 及 HBsAg的表达（P＜0.05）。结论叶下珠提取物明显抑制小鼠急性HBV感染模型小鼠HBV的复制与表达,具有直接抗病毒作用。     

艾迪注射液对DEN诱导型肝癌大鼠体内细胞色素P450酶表达的影响

目的:观察艾迪注射液(AD)对二乙基亚硝胺(DEN)化学诱导的原发性肝癌(HCC)大鼠体内细胞色素P450(CYP450)4种亚型酶CYP1A2,CYP2E1,CYP3A2,CYP2C11 mRNA和蛋白表达的影响.方法:健康SD雄大鼠随机选取3只作为空白组,余下大鼠采用DEN间断性诱导原发性肝癌大鼠模型,模型成功后随...