异丙酚对大鼠小肠缺血再灌注时粘膜上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠小肠缺血再灌注时粘膜上皮细胞凋亡的影响及其机制.方法 健康Wistar大鼠24只,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和异丙酚+缺血再灌注组(P+I/R组).夹闭肠系膜上动脉,缺血1 h,再灌注2 h,制备小肠缺血再灌注损伤模型.S组和I/R组缺血前10 min开始经股静脉持续输注生理盐水10 ml·kg-1·h-1,P+I/R组静脉注射异丙酚10 mg/kg,以后持续输注异丙酚10 mg·kg-1·h-1.取空肠组织3 cm,常规制备全层石蜡切片,行HE染色,光镜下观察小肠组织病理学;免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达;TUNEL法检测小肠粘膜上皮细胞凋亡,计数凋亡细胞及总细胞,计算小肠粘膜上皮细胞凋亡指数.结果 与S组比较,I/R组和P+I/R组Bcl-2和Bax蛋白表达上调,Bcl-2/Bax增加,小肠组织损伤程度增强,小肠粘膜上皮细胞凋亡指数增高(P＜0.01或0.05);与I/R组比较,P+I/R组Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,小肠组织损伤程度减轻,小肠粘膜上皮细胞凋亡指数降低(P＜0.01).结论 异丙酚可减轻大鼠小肠缺血再灌注损伤时粘膜上皮细胞凋亡,其机制与上调Bcl-2基因的表达和下调Bax基因的表达有关.     

异丙酚对大鼠肠缺血再灌注时肠粘膜细胞凋亡的影响

目的评价异丙酚对大鼠肠缺血再灌注（I／R）时肠粘膜细胞凋亡的影响。方法24只SD大鼠随机分为3组（n=8），假手术组（S组）仅分离肠系膜上动脉（SMA）；肠缺血再灌注组（I／R组）阻断SMA1h；异丙酚组（P组）阻断SMA前30min腹腔注射异丙酚100mg／kg。于再灌注3h处死大鼠，取回肠末端组织，电镜及TUNEL法观察肠粘膜上皮细胞凋亡情况，并计算肠粘膜上皮细胞凋亡指数；测定肠粘膜超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及神经酰胺（CER）含量，RT-PCR法测定肠粘膜鞘磷脂酶（SMase）mRNA表达。结果与S组比较，I／R组肠粘膜SOD活性降低，MDA含量、CER含量、肠粘膜上皮细胞凋亡指数及SMasemRNA表达升高（P〈0．05或0．01）；与I／R组比较，P组MDA含量、CER含量、肠粘膜上皮细胞凋亡指数及SMasemRNA表达降低，S01）活性升高（P〈0．05或O．01）。I／R组肠粘膜SOD活性与CER含量呈负相关（r＝-0．775，P〈0．01），肠粘膜上皮细胞凋亡指数与CER含量呈正相关（r=0．852，P〈0．01）；P组肠粘膜上皮细胞凋亡指数与CER含量呈正相关（r=0．782，P〈0．01）。结论异丙酚可抑制大鼠肠缺血再灌注时肠粘膜上皮细胞凋亡，可能与清除氧自由基、下调SMasemRNA表达、减少CER生成有关。     

参附注射液对大鼠肠缺血再灌注损伤后肠黏膜细胞凋亡的影响

目的：研究参附注射液对大鼠肠缺血再灌注期间黏膜上皮细胞凋亡的影响，并探讨其可能机制。方法：采用大鼠肠缺血再灌注模型。24只大鼠随机分为假手术对照组（C组）、缺血再灌注组（I／R组）和参附治疗组（SF组），在规定时间检测小肠黏膜上皮细胞caspase-3、Bcl-2蛋白的表达，凋亡细胞数目，同时观察小肠黏膜病理形态学改变。结果：IR组肠黏膜上皮细胞凋亡指数（apoptosisindex,AI）、caspase-3、Bcl-2蛋白显著高于C组（P〈0．01）。SF组AI、caspase-3蛋白低于IR组（P〈0.01或P〈0．05），而Bcl-2蛋白较IR组上调（P〈0．01）。caspase-3表达与AI呈正相关（r=0，914，P〈0，01）；Bel-2的表达与AI、caspase-3呈直线负相关（r分别=-0．375，-0．367，P〈001）。SF组小肠黏膜病理损伤程度较I／R组明显减轻（P〈0.01）。结论：参附注射液通过抑制caspase-3表达和促进Bcl-2基因表达减少缺血再灌注期间肠黏膜上皮细胞的凋亡。从而一定程度上减轻肠黏膜缺血再灌注损伤。     

缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤保护作用机制的研究

目的　探讨缺血预处理 (IPC)保护作用的发生机制。方法　建立大鼠部分肝脏热缺血再灌注模型。IPC采用肝脏缺血 10min ,再灌注 10min。结果　IPC后肝组织中腺苷和NO水平明显升高 ,与对照组相比差异显著 (P <0 0 1) ,但IPC前应用腺苷A2 受体拮抗剂后NO的升高被抑制 (P<0 0 1)。缺血再灌注 (I/R) 2h后血清中TNF α、AST、ALT、LDH及W/D水平和假手术组相比明显增加 ,而IL 10含量降低 (P <0 0 1) ;IPC、I/R前加入腺苷、IPC前应用腺苷A1受体拮抗剂显著地降低TNF α释放和AST、ALT、LDH及W /D水平 ,提高IL 10含量 ,与I/R组相比差异显著 (P <0 0 1) ;但IPC前应用腺苷A2 受体拮抗剂 (IPC +A2 antag)和NO合成酶抑制剂NAME并没有能像IPC组那样有效降低TNF α、AST、ALT、LDH及W /D的水平 ,提高IL 10的含量 (P <0 0 1) ;而IPC前给IPC+A2 antag组提供NO前体精氨酸又获得和IPC组同样的结果 (P >0 0 5 )。结论　IPC引起细胞外腺苷水平升高 ,腺苷A2 受体活化 ,介导了NO合成增加 ,最终通过抑制效应器TNF α的释放、增加IL 10的合成来实现对缺血组织的保护作用。     

MiR-21介导丹参多酚酸B在肾脏缺血/再灌注损伤中的保护作用

目的:探讨微小RNA 21(miR-21)介导丹参多酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)在肾脏缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的保护作用。方法:构建肾脏I/R模型,术前1 h给予小鼠尾静脉注射Sal B,分为四组:(1)假手术组(Sham组)、(2)缺血再灌注组(I/R组)、(3)丹参多酚酸B干预组(SB+I/R组)和(4)生理盐水对照组(NS+I/R组)。四组均在再灌注后24 h处死小鼠,观察Sal B预处理对再灌注后24 h肾功能、肾组织病理评分、细胞凋亡、肾脏miR-21和程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)表达变化的影响。体外给予人肾小管上皮细胞低氧/复氧和Sal B干预。锁核苷酸(LNA)修饰的anti-miR-21抑制miR-21表达(体外细胞转染),观察miR-21、PDCD4 mRNA和蛋白和细胞凋亡的变化。结果:在体外研究中,Sal B减轻肾小管上皮细胞低氧/复氧损伤,上调低氧/复氧细胞miR-21表达,降低PDCD4蛋白表达(P 0. 05)。抑制细胞miR-21表达则显著削弱Sal B的细胞保护作用,anti-miR-21明显上调细胞PDCD4蛋白的表达水平(P 0. 01),同时凋亡的细胞比例显著增加(P 0. 01)。肾脏I/R小鼠模型中,与I/R组、NS+I/R组相比,SB+I/R组小鼠肾功能和组织病理损伤显著减轻(P 0. 01); Sal B诱导再灌注后肾脏miR-21高表达,同时PDCD4蛋白表达有所下降(P 0. 01),伴有细胞凋亡显著减少(P 0. 05)。结论:Sal B诱导的miR-21通过抑制靶基因PDCD4的表达,减轻肾小管上皮细胞凋亡,从而对肾脏I/R损伤起到保护作用。     

霉酚酸酯抑制大鼠肾脏缺血再灌注损伤诱导的肾小管上皮细胞凋亡

目的研究霉酚酸酯(MMF)对大鼠肾脏缺血再灌注(I／R)损伤诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制。方法Wistar大鼠随机分为假手术组、I／R组、I／R MMF组。双侧肾动脉夹闭30min再灌注18h制作动物模型。观察肾功能及肾脏病理改变。以原位末端标记(TUNEL)及DNA电泳方法检测肾小管上皮细胞凋亡情况。RT—PCR法测定肾组织肿瘤坏死因子α(TNF—α)mRNA表达。Western印迹法测定肾组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3、8蛋白表达。结果肾脏缺血30min再灌注18h后，大鼠肾功能明显减退，肾脏病理改变明显，大量肾小管上皮细胞凋亡，肾组织中TNF—α mRNA表达及caspase-3、-8蛋白表达显著增加。MMF能显著改善肾功能和肾脏组织病理学改变，减轻肾小管上皮细胞凋亡，显著下调TNF—α mRNA表达及caspaae-3、-8蛋白表达。结论MMF能抑制肾脏I／R损伤诱导的肾小管上皮细胞凋亡．保护肾功能，其作用至少部分是通过减少肾组织局部TNF-α含量，从而影响了caspase依赖的外源性凋亡途径实现的。     

参附注射液对肠缺血-再灌注大鼠肿瘤坏死因子α的影响

目的观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)在大鼠肠缺血-再灌注损伤过程中的作用及参附注射液对TNF-α的影响,探讨参附注射液防治肠缺血-再灌注损伤机制。方法 SD大鼠随机分为肠缺血-再灌注组(IR组)、参附注射液预处理组(SF组)和假手术组(C组)。采用阻断肠系膜上动脉(SMA)的方法制造肠缺血-再灌注模型。分别测定各组动物血浆、肠组织TNF-α含量及血液动力学变化;光镜观察肠粘膜损伤情况。结果IR组再灌注后MAP下降,与C组和SF组比有显著性差异(P<0.01);SF组肠粘膜损伤程度减轻,与IR组比有显著性差异(P<0.01);SF组血浆及肠组织TNF-α水平降低,与IR组比有显著性差异(P<0.01)。结论参附注射液可明显防治大鼠肠缺血-再灌注导致的肠粘膜损伤,这种作用可能是通过抑制TNF-α的释放实现的。     

异丙酚对大鼠肠缺血再灌注后肺损伤的影响

目的探讨异丙酚对大鼠肠缺血再灌注后肺损伤的影响。方法32只成年SD大鼠,随机分为4组（n=8）,缺血再灌注组（I/R组）缺血1 h,再灌注2 h;异丙酚1组（P1组）在缺血前10 min、异丙酚2组（P2组）在再灌注前10min静脉注射异丙酚10mg,kg,然后以10mg·kg^-1·h^-1持续输注,余处理同I/R组;假手术组（C组）不行缺血再灌注及异丙酚输注。所有大鼠在再灌注120 min时处死。光镜下观察肺组织形态学及细胞凋亡;测定肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量及含水量。结果I/R组光镜下可见大量肺泡塌陷、实变,肺实质水肿及中性粒细胞浸润聚集。与C组比较,I/R组及P2组肺组织细胞凋亡计数增加,I/R组肺组织SOD活性降低,MDA含量升高,含水量升高（P＜0．05或0．01）;与I/R组比较,P1组SOD活性升高,MDA含量降低（P＜0．01）。结论细胞凋亡参与了大鼠肠缺血再灌注后肺损伤的发生,肠缺血前给予异丙酚可明显减轻肠缺血再灌注后肺损伤。     

小鼠肝缺血再灌注后Toll样受体2在缺血肝组织中的激活及其意义

目的　探索小鼠肝缺血再灌注后缺血肝组织中Toll样受体 2 (TLR2 )的激活及其与肝功能损伤之间的关系。方法　缺血再灌注损伤组 (I/R组 ),假手术对照组 (S组 )均采用实时荧光定量多聚酶链反应检测肝组织中TLR2mRNA及TLR2蛋白的表达,同时检测门静脉血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子α(TNF α)及门静脉血清内毒素 (endotoxin, EN)水平。结果　肝脏部分缺血1h再灌注 4h后,I/R组与S组小鼠缺血肝组织TLR2 mRNA的表达 (ΔCt值 )分别为 1. 0 6±0. 9 1和5. 0 8±1. 3 2, 两组间差异有显著性 (P < 0. 0 1 ),I/R组缺血肝组织TLR2 蛋白的表达 (OD值 )( 4 3 3. 9 1±2 5. 5 3 )水平较S组 ( 1 0 2. 8 6±1 3. 5 8 )显著升高 (P< 0. 0 1 )。I/R组门静脉血清TNF α[ ( 1 1 2. 5 2±1 4. 4 1 )pg/mL]较S组 [ ( 5. 9 6 ±4. 4 3 )pg/mL]显著升高 (P < 0. 0 1 );I/R组ALT[ ( 8 4 8. 3 3±2 7 1. 3 7 )U/L]较S组 [ ( 4 2. 3 9±1 4. 7 5 )U/L]显著升高 (P < 0. 0 1 );而门静脉血清内毒素水平组间差异无显著性 (P> 0. 0 5 )。结论　TLR2mRNA及蛋白在肝脏缺血再灌注过程中缺血肝组织的表达增强, 此变化伴有TNF α的升高及肝功能的损伤。     

瑞芬太尼对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨瑞芬太尼对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠30只,体重260～300 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=10):肝硬化组(C组)、肝硬化+肝缺血再灌注组(I/R组)和瑞芬太尼组(R组).C组、I/R组和R组采用四因素综合法制备大鼠肝硬化模型,I/R组和R组在肝硬化模型制备成功后1周制备大鼠70％肝脏缺血再灌注模型,R组于缺血前10 min开始静脉输注瑞芬太尼1μg·kg-1·min-至再灌注结束.于再灌注4h时取静脉血样和肝组织,测定血清ALT和AST活性、肝细胞Bcl-2和Bax表达及肝细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数,光镜下观察肝组织病理学结果.结果 与C组比较,I/R组血清ALT和AST的活性升高,肝细胞Bcl-2表达下调,Bax表达上调,细胞凋亡指数升高(P＜0.05);与I/R组比较,R组血清ALT和AST的活性降低,肝细胞Bcl-2表达上调,Bax表达下调,细胞凋亡指数降低(P＜0.05).R组肝组织病理学损伤轻于I/R组.结论 瑞芬太尼可减轻肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤,其机制与平衡肝细胞Bcl-2与Bax表达而抑制肝细胞凋亡有关.     

氯胺酮对兔肺缺血/再灌注损伤后细胞凋亡和Caspase-3mRNA表达的影响

目的 观察氯胺酮对兔肺缺血/再灌注损伤后细胞凋亡和Caspase-3 mRNA表达的影响.方法 90只兔建立单肺缺血再灌注模型后,被随机分成3组（每组30只）：对照组（C组）、缺血/再灌注组（I/R组）和氯胺酮组（KET组）.每组30只兔子又平均分成再灌注后1小时、3小时、5小时组.检测各组超氧物歧化物（SOD）活性、丙二醛（MDA）浓度、肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量和凋亡指数（AI）变化.图像分析TUNEL染色和原位杂交对肺细胞凋亡及Caspase-3mRNA表达.结果各相同时间点I/R组比C组SOD活性显著降低（P〈0.01）,而MDA、TNF-α含量和AI明显升高（P〈0.01）;与I/R组比较,相同时间点KET组SOD活性升高,而MDA、TNF-α含量和AI则有不同程度降低（P〈0.01或P〈0.05）.肺再灌注后TUNEL法检测阳性细胞主要分布在肺泡上皮细胞和血管内皮细胞,Caspase-3 mRNA表达主要分布在血管内皮细胞;每个时间点I/R组Caspase-3 mRNA表达相比C组显著增加,同时肺细胞凋亡也显著增加.然而,使用氯胺酮后,两者都有明显减少.结论氯胺酮可通过减少缺血/再灌注后MDA、TNF-α含量,提高SOD活性,降低caspase-3 mRNA表达而抑制肺细胞凋亡,减轻再灌注后兔肺损伤.     

丙泊酚对大鼠全心缺血-再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响

目的　探讨丙泊酚对大鼠全心缺血 再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响。方法　Wis tar大鼠 36只 ,随机分为对照组 (C组 )和丙泊酚组 (P组 )。每组再分为缺血前、缺血 30min和再灌注30min三个亚组。采用DNA原位末端缺口标记技术 (TUNEL法 ) ,观察各组心肌细胞凋亡的变化情况。结果　与缺血前组相比较 ,缺血 30min及再灌注 30min各组的凋亡指数显著增加 (P <0 0 1) ,而丙泊酚组中缺血 30min及再灌注 30min各亚组的凋亡指数 ,均较对照组显著降低 (P <0 0 1)。结论　缺血 30min及再灌注 30min的心肌均发生了细胞凋亡 ,且再灌注组的细胞凋亡更为显著。丙泊酚可减少心肌缺血 再灌注时心肌细胞凋亡的发生。     

通过短时间预缺血改变肾小管上皮细胞命运诱导肾脏缺血耐受

目的 探讨短时间缺血预处理在诱导肾脏缺血耐受中的作用,及其对肾小管上皮细胞坏死、凋亡、增殖等的影响。 方法 雄性SD大鼠随机分为3组：假手术组（Sham）,只分离两侧肾蒂,不进行夹闭;单纯缺血再灌注组（I/R）,第0天假手术,第4天用无损伤动脉夹夹闭两侧肾蒂40 min,然后恢复灌注;缺血预适应组（IPC）,第0天预缺血20 min,第4天再次缺血40 min。PAS染色观察肾组织形态学,透射电镜观察小管上皮细胞超微结构,原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况,免疫组织化学法观察肾小管上皮细胞增殖核抗原（PCNA）的表达。 结果　与单纯缺血再灌注组相比,缺血预适应组肾脏功能和病理性损伤显著减轻（P < 0.01）;大鼠死亡率从33%降低为0 ;肾小管上皮细胞凋亡和坏死显著减少（P < 0.05）,细胞增殖（PCNA阳性）显著增多（P < 0.01）。 结论 短时间缺血预处理能诱导肾脏耐受长时间缺血,减少小管上皮细胞死亡和促进其及时增殖修复可能是预缺血发挥肾脏保护作用的机制之一。     

参附注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨参附注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法健康雄性 SD大鼠24,只,随机分为3组(n=8):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I／R组)、参附处理组(SF 组)。Sham组丝线穿过冠状动脉前降支但不结扎,I／R、SF组通过结扎心脏左冠状动脉前降支30 min, 再灌注60 min制作缺血再灌注损伤动物模型。缺血前30 min,SF组经腹腔注射参附注射液10 ml／kg, 其余两组注射等量生理盐水。于再灌注末通过右颈动脉置管取血,采用酶联免疫吸附法测定血浆肿 瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)浓度,电镜下观察缺血区心肌超微结构变化。结果 与 Sham组比较,I／R组血浆TNF-α、IL-6浓度升高,SF组血浆IL-6浓度升高(P<0．01)。与I／R组比较,SF 组血浆TNF-α、IL-6浓度降低(P<0．01)。I／R组心肌超微结构明显受损,SF组受损较轻。结论参附 注射液可通过降低大鼠全身炎症反应减轻心肌缺血再灌注损伤。     

瑞芬太尼对大鼠肾缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的 评价瑞芬太尼对大鼠肾缺血再灌注时细胞凋亡的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠75只,体重220～ 250 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=25)∶假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和瑞芬太尼组(R组).I/R组和R组采用夹闭双侧肾动脉45 min时恢复灌注法建立肾缺血再灌注损伤模型.R组于缺血前15 min至再灌注30 min经尾静脉输注瑞芬太尼1.0μg· kg-1·min-1,S组和I/R组给予等容量生理盐水.于缺血前15 min(T0)、再灌注3 h(T1)、6 h(T2)、12h(T3)及24 h(T4)时取肾组织标本.采用流式细胞术检测肾细胞凋亡率及Bax、Bcl-2蛋白表达,采用RT-PCR检测Bax和Bcl-2的mRNA表达,计算Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值,采用Paller法行肾小管损伤评分.结果 与S组比较,I/R组和R组T1-4时肾小管损伤评分和肾细胞凋亡率升高,Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值T12时升高,T3,4时降低(P＜0.01);与I/R组比较,R组T1-4时肾小管损伤评分和肾细胞凋亡率降低,Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值升高(P＜0.05或0.01);与T0时比较,I/R组和R组T1-4时肾小管损伤评分和肾细胞凋亡率升高,Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达比值T1,2时升高,T3,4时降低(P＜0.01).结论 瑞芬太尼减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的机制与其调节Bcl-2/Bax蛋白表达,抑制肾组织细胞凋亡有关.     

异丙酚对肺缺血再灌注损伤大鼠肺上皮细胞凋亡的影响

目的拟通过观察肺上皮细胞凋亡的变化,探讨异丙酚减轻大鼠肺缺血再灌注损伤的作用机制。方法雄性SD大鼠136只,随机分为3组:假手术组(S组,n=24)、缺血再灌注组(I/R组,n=56)、异丙酚组(P组,n=56)。I/R组、P组制备大鼠肺原位热缺血模型,缺血1h。P组于缺血前30min静脉输注异丙酚20mg·kg~(-1)·h~(-1)至再灌注4h。S组除不作缺血处理外,其余处理与I/R组相同。分别于再灌注0.5、1、2、4h随机处死大鼠(S组每个时点处死6只,I/R组、P组每个时点分别处死14只大鼠),每组每个时点的一半大鼠用于测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞百分比、蛋白浓度,另外一半大鼠用于测定肺组织丙二醛(MDA)含量、湿,干重比(W/D)及肺上皮细胞凋亡指数(TUNEL法),并在光镜下观察肺组织的病理学改变;I/R组、P组肺上皮细胞凋亡指数与W/D进行直线相关分析。结果与S组相比,I/R组和P组再灌注各时点BALF中中性粒细胞百分比、蛋白浓度及肺组织MDA含量、W/D、肺上皮细胞凋亡指数均增加(P<0.05或0.01);与I/R组比较,P组上述指标均降低(P<0.05或0.01),肺组织病理学损伤减轻;I/R组、P组肺上皮细胞凋亡指数与W/D之间的相关系数分别为0.784、0.830(P<0.01)。结论异丙酚抑制肺上皮细胞凋亡可能是减轻大鼠肺缺血再灌注损伤的机制之一。     

大鼠移植胰腺冷缺血再灌注后细胞凋亡及其调控基因的研究

目的探讨胰腺移植再灌注后胰腺细胞凋亡发生的过程,以及Bax、Bcl2及Fas等调控基因的表达。方法65只SD大鼠随机分成7组假手术组,冷缺血2h组,冷缺血2h再灌注1、3、6、9、12h组。电镜观察胰腺组织的病理变化;采用缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞;采用免疫组织化学方法检测胰腺组织中Bax、Bcl2及Fas蛋白的表达。结果胰腺移植后早期即可观察到细胞凋亡,凋亡的高峰期为再灌注后3h,凋亡指数(AI)为(95±29)%,P<001,再灌注6h组细胞凋亡有所减少,AI为(57±17)%,P<001,再灌注9h及12h组,AI分别为(36±16)%及(33±14)%,P<005。假手术组与冷缺血2h组均未见Bax、Fax蛋白表达。冷缺血再灌注1h组Bax( )、Fas( ),未见Bcl2蛋白表达;至冷缺血再灌注3h组Bax及Fas表达均增强,分别为Bax( )、Fas( ),以后各组表达有所下降。Bcl2蛋白在假手术组、冷缺血2h组及冷缺血再灌注1h组均未见表达,冷缺血再灌注3h及以后各组表达为( )。结论细胞凋亡是胰腺移植后的早期事件,Bax、Fas基因可能促进了胰腺细胞的凋亡,而Bcl2基因可能抑制细胞凋亡。     

远端缺血后处理对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨远端缺血后处理对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠128只,体重为200～ 250 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=32):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、I/R+远端缺血后处理组(I/R+ RIPoC组)以及远端缺血再灌注组(RI/R组).采用改良的Pulsinelli四动脉阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型.S组不制备全脑缺血再灌注模型;I/R+ RIPoC组于再灌注开始行双侧股动脉缺血15 min,再灌注15 min,共计3个循环;RI/R组仅行双侧股动脉缺血15 min,再灌注15 min,共计3个循环.于再灌注24、48 h时取脑组织,行海马CA1区和额叶皮层凋亡细胞计数,测定海马CA1区Bcl-2和Bax的表达水平,并于再灌注48 h测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)的含量;再灌注4d时行Morris水迷宫实验;再灌注7d时取脑组织,计算海马CA1区和额叶皮层神经元密度.结果 与S组比较,I/R组再灌注时凋亡细胞计数升高,Bcl-2和Bax表达上调,神经元密度、SOD和CAT活性降低,MDA含量升高,逃避潜伏期明显延长,穿越原平台次数与第2象限停留时间百分比降低(P≤0.Ol),RI/R组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与I/R组比较,I/R+ RIPoC组再灌注时凋亡细胞计数降低,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,神经元密度、SOD和CAT活性升高,MDA含量降低,逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数与第2象限停留时间百分比升高(P＜0.01).结论 远端缺血后处理可减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤,其机制与抑制脂质过氧化反应,调节Bcl-2与Bax的平衡抑制细胞凋亡有关.     

抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体减轻骨骼肌缺血再灌注损伤的研究

目的　研究抗肿瘤坏死因子 α(TNF α)单克隆抗体对骨骼肌缺血再灌注损伤的作用。方法　SD大鼠 2 4只 ,建立后肢缺血再灌注模型 ,抗TNF α单克隆抗体用量为 2mg/kg体重。采用酶联免疫吸附试验 (ELISA )法、比色法、免疫组织化学、流式细胞计数及电镜观察分别测定血浆TNF α、组织过氧化物酶 (MPO)、血管内皮细胞粘附分子 (ICAM ) 1、中性粒细胞CD18表达及超微结构改变。结果　应用抗TNF α单克隆抗体后血浆TNF α水平显著降低 (P <0 .0 1)。组织MPO(骨骼肌 :2 .11± 0 .2 5vs 4.2 8± 0 .5 5 ,P <0 .0 1;肺 :0 .93± 0 .0 1vs 2 .62± 0 .10 ,P <0 .0 1)、血管内皮细胞ICAM 1及中性粒细胞CD18(4 8.75± 9.2 8vs 1.13± 0 .2 0 ,P <0 .0 1)均明显下降 ,组织结构损伤减轻。结论　抗TNF α单克隆抗体能减轻骨骼肌缺血再灌注损伤。     

中华眼镜蛇毒抑制肾缺血再灌注损伤的实验研究

目的 探讨中华眼镜蛇毒(CCV)对大鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤的肾保护作用及其机制。方法 雄性SD大鼠32只,随机分为4组。Ⅰ、Ⅱ组建立肾I/R模型, 分别于再灌注前0.5 h、12 h腹腔注射0.1% CCV(0.4 mg/kg); Ⅲ组制备肾I/R模型作病理对照; Ⅳ组为假手术组。应用苦味酸法和二乙酰一肟法分别测定大鼠缺血前、再灌注24 h的Scr和BUN值。用免疫比浊法测定再灌注0、0.5、2、24 h的血清补体C3水平。HE染色光镜下观察肾组织损伤形态学改变,并利用原位凋亡检测法(TUNEL)检测细胞凋亡情况。结果 再灌注后24 h的Scr和BUN值在Ⅱ组明显降低,与Ⅰ、Ⅲ组相比差异有统计学意义(P < 0.05)。补体C3水平在Ⅱ组于再灌注0 h显著降低,与其他组0 h时比较,差异均有统计学意义(P < 0.05);Ⅰ、Ⅲ组C3于再灌注2 h明显下降,与再灌注0 h比较,差异有统计学意义(P < 0.05)。HE染色可见Ⅰ、Ⅲ组损伤较重,以近端小管变性,坏死为主;Ⅱ组病变明显减轻。在Ⅲ和Ⅰ组均可见大量TUNEL阳性细胞,而在Ⅱ组其数量与上两组相比显著减少(P < 0.05)。结论 肾I/R可明显引起肾组织损伤和功能损害。再灌注前12 h用CCV预处理大鼠,能够明显降低补体C3, 从而有效抑制补体介导的肾I/R损伤。