二甲双胍激活AMPK促进顺铂对肝癌细胞凋亡的初步研究

目的 探讨二甲双胍与顺铂合用对肝癌细胞的作用,为进一步的体内研究奠定基础.方法 MTT法检测不同浓度、不同时间二甲双胍、顺铂单用及两者合用于SMMC7721、HepG2肝癌细胞所致细胞增殖及凋亡;Hoechst33258检测二甲双胍、顺铂单用及合用对HepG2细胞核形态变化的影响.Western blot检测细胞内AMPK/p-AMPK的表达.结果 二甲双胍、顺铂单用及合用于SMMC7721、HepG2,随着作用时间及浓度增加抑制率增加,呈时间-浓度依赖性;Hoechst33258结果显示合用组细胞凋亡最严重;Western blot结果显示二甲双胍、顺铂单用及合用均激活AMPK,联合用药组p-AMPK上调最明显.结论 二甲双胍联合低浓度顺铂可激活AMPK,增加其对SMMC7721、HepG2癌细胞的毒性.     

二甲双胍和紫杉醇对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：研究二甲双胍联合紫杉醇在体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,阐明二甲双胍与紫杉醇的药物协同效应。方法：将卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、不同浓度（0.01、0.50、1.00、5.00和10.00 mmol·L^-1）二甲双胍组和联合用药组（不同浓度二甲双胍及紫杉醇联合用药）。MTT法检测各组SKOV3细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组SKOV3细胞凋亡率及细胞周期变化;MTT法检测各组SKOV3细胞增殖抑制率。结果：MTT法检测,不同浓度二甲双胍组SKOV3细胞增殖抑制率明显升高,并呈浓度和时间依赖性,与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术检测,不同浓度二甲双胍作用下SKOV3细胞凋亡率明显升高,与空白对照组比较,随着二甲双胍浓度的增加,药物作用48h后实验组SKOV3的细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;同时细胞周期发生明显变化,随着二甲双胍浓度的增加,G₀/G₁期细胞百分率降低（P<0.05）,而 G₂/M期细胞百分率升高（P<0.05）。MTT法检测,1.00 mmol·L^-1二甲双胍与紫杉醇联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于0.50 mmol·L^-1二甲双胍与紫杉醇联合用药组（P<0.05）;二甲双胍与紫杉醇联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于单独紫杉醇组（P<0.05）。结论：二甲双胍通过诱导细胞凋亡抑制卵巢癌细胞SKOV3细胞增殖,二甲双胍能够增强紫杉醇对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制作用,二者具有药物协同效应。     

二甲双胍抑制赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1介导的卵巢癌细胞增殖和迁移

目的: 探讨二甲双胍抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的可能分子机制。方法: 用不同浓度二甲双胍(0、5、10和20 mmol/L)处理卵巢癌HO8910和SKOV3细胞,EdU和迁移实验检测细胞增殖和迁移能力;免疫印迹和qRT-PCR检测细胞内赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)蛋白及mRNA表达水平;免疫印迹检测PI3K/AKT信号通路蛋白表达水平。建立诱导型稳定敲低LSD1的卵巢癌HO8910和SKOV3细胞株,经10 mmol/L二甲双胍处理,通过EdU和迁移实验检测各组细胞增殖和迁移能力。结果： 与对照组相比,不同浓度二甲双胍处理组细胞增殖和迁移能力明显降低(P均＜0.01),LSD1蛋白表达水平明显降低,LSD1特异性底物H3K4me2蛋白表达水平明显升高(P均＜0.01);PI3K/AKT信号通路蛋白PI3K和p AKT表达水平明显降低(P均＜0.01)。二甲双胍处理和敲低LSD1后,细胞增殖和迁移能力均显著降低（P<0.05)。结论： 二甲双胍可能通过抑制PI3K/AKT通路下调LSD1蛋白表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖与迁移。     

EG00229对卵巢癌细胞增殖侵袭的作用及机制

目的:初步探讨EG00229对卵巢癌细胞侵袭、增殖的作用及其分子机制。方法:采用铺Matrigel基质胶Transwell实验检测细胞的侵袭能力;采用细胞计数方法检测细胞的增殖能力;采用Western blotting检测下游信号分子的表达变化。结果:EG00229显著抑制SKOV3卵巢癌细胞的侵袭、增殖,EG00229发挥作用的机制是通过抑制VEGFR2磷酸化和抑制ERK MAPK信号通路而抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭。结论:EG00229可以作为一个潜在的卵巢癌治疗药物。     

洛铂与顺铂对卵巢癌细胞抑制作用的对照研究

目的研究两种不同的抗癌药物对卵巢癌细胞的抑制作用,为洛铂用于卵巢癌的化疗提供理论依据。方法洛铂与顺铂分别作用于体外培养的卵巢癌SKOV3细胞系,用MTT比色法检测洛铂和顺铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用。结果体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊和顺铂处理后细胞生长明显受到抑制,两种药物对于卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用相比差异无统计学意义。结论洛铂与顺铂均能有效地抑制卵巢癌细胞增殖。     

联合顺铂对卵巢癌细胞内凋亡基因bax和bcl-2的影响

目的:研究卡培他滨联合顺铂对体外培养的卵巢癌细胞SKOV3凋亡作用的影响。方法:体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测卡培他滨及顺铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用以及RT-PCR检测凋亡相关基因bax、bcl-2的表达。结果:卡培他滨及顺铂对SKOV3细胞体外生长有明显抑制作用,并可诱导细胞的凋亡,二者联合应用作用更明显。结论:巢癌SKOV3细胞对顺泊具有药物敏感性,顺泊可诱导卵巢癌细胞的凋亡。     

PI-103对人卵巢癌细胞株SKOV3／DDP顺铂化疗效果的影响

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）双抑制剂PI-103对卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响。方法：将PI-103、顺铂及两者联合分别作用于SKOV3/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞生长情况,流式细胞技术检测药物单独或联合作用对细胞凋亡的影响;应用Western blot检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核糖体蛋白（rpS6）、磷酸化rpS6（p-rpS6）以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达变化。结果：PI-103能够抑制SKOV3/DDP细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;联合用药可以明显增加对细胞生长抑制和凋亡作用。 PI-103能下调Akt和rpS6的磷酸化水平,促DDP上调Bax和下调Bcl-2的表达。结论：PI-103抑制PI3 K/Akt/mTOR信号传导通路,促DDP上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达,从而抑制癌细胞生长,诱导其凋亡,增加卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP细胞对DDP的化疗效果。     

二甲双胍与顺铂联合诱导人结肠癌HCT-8细胞凋亡的研究

目的研究二甲双胍联合顺铂对HCT-8人类结肠癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法将HCT-8人类结肠癌细胞分成二甲双胍组(MET)、顺铂组(DDP)、二甲双胍联合顺铂组(MET+DDP)、空白对照组(CK) 4组,MTT实验观察4组细胞于24 h、48 h、72 h时的增殖能力;流式细胞术观察各组细胞48 h的凋亡比例;Western blotting观察各组细胞48 h时凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3(激活型)以及AKT/GSK-3通路蛋白的表达水平。结果该实验中MET+DDP组的细胞增殖能力弱于其它三组(P0. 05);细胞凋亡比例高于其它三组(P0. 05); Bax、caspase-3(激活型)表达量高于其它组群,Bcl-2、P-AKT、P-GSK-3表达量低于其它组群,AKT、GSK-3在4组中表达量相对恒定(P0. 05)。结论二甲双胍、顺铂可能通过下调AKT/GSK-3信号通路,改变Bcl-2家族蛋白的表达活性从而促进HCT-8人类结肠癌细胞的凋亡,并促进p-caspase-3剪切转化为caspase-3(激活型);二甲双胍与顺铂可协同发挥促HCT-8人类结肠癌细胞凋亡的作用。     

紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖抑制作用及其机制

目的:研究紫杉醇联合顺铂对人乳腺癌细胞MCF-7增殖抑制作用,探讨药物作用过程中与MAPK通路?Bcl-2基因家族关系及相关机制?方法:采用CCK-8试剂盒检测不同浓度紫杉醇?顺铂单独或联合作用MCF-7细胞48 h后对细胞增殖的50%抑制浓度(IC50),以及紫杉醇?顺铂分别联合ERK通路阻断剂(U0126)?JNK通路阻断剂(sp600125)对细胞增殖的抑制率;采用流式细胞仪检测紫杉醇?顺铂作用细胞48 h后的细胞周期分布情况;应用Western blot分别检测紫杉醇?顺铂及两药联合作用MCF-7细胞48 h后MAPK通路蛋白及Bcl-2?Bax蛋白表达?结果:紫杉醇(0.025~0.400 μmol/L)?顺铂(1~16 μmol/L)联合作用细胞时呈协同作用(CI < 0.95)?sp600125对MCF-7细胞增殖具有明显的抑制作用,sp600125联合紫杉醇?顺铂的抑制作用强于紫杉醇?顺铂单独作用细胞时的抑制作用?两药联合时处于G2期的细胞较紫杉醇单独作用时减少,较顺铂单独作用增加?紫杉醇?顺铂联合作用细胞48 h后p-ERK?Bcl-2蛋白表达较两药单独作用时降低,p-JNK/SAPK?p-p38蛋白表达较对照组明显增加?结论:紫杉醇联合顺铂作用MCF-7细胞时具有协同作用,两药与JNK通路阻断剂联用时对细胞的抑制作用强于单独用药时?紫杉醇联合顺铂时可以减少细胞在G2/M期的积聚,同时可以激活JNK?p38通路,抑制ERK通路的激活?     

洛铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的探讨洛泊对体外培养的浆液性卵巢癌细胞SKOV3凋亡的诱导作用。方法体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用以及流式细胞仪检测洛铂对SKOV3细胞株的凋亡率。结果体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡。结论卵巢癌SKOV3细胞对洛泊敏感,洛泊对卵巢癌细胞的杀伤作用是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

miRNA145联合二甲双胍对人结直肠癌细胞株HCT116增殖的影响

目的:探讨miRNA145联合二甲双胍对人结直肠癌细胞株HCT116增殖的影响?方法:慢病毒法将miRNA145转染入人结直肠癌细胞株HCT116,实时定量PCR检测细胞miRNA145表达的变化?通过CCK-8细胞增殖实验检测miRNA145和/或二甲双胍对HCT116细胞增殖的影响?通过Western blot检测miRNA145和/或二甲双胍对细胞AMPK?mTOR蛋白表达水平的影响?结果:CCK-8实验表明miRNA145?二甲双胍均具有抑制HCT116细胞增殖的作用,二者联用使细胞增殖受到更大程度的抑制?Western blot结果表明,二甲双胍?miRNA145以及二者联用可进一步促进AMPK的活化进而影响mTOR蛋白表达水平?结论:miRNA145联合应用二甲双胍具有更强的抑制人结肠癌细胞株HCT116增殖的作用?     

多西环素增加卵巢癌细胞HO8910对顺铂化疗敏感性

目的探讨多西环素对卵巢癌的抗肿瘤作用及可能机制。方法采用MTT方法检测多西环素单独作用及与顺铂联合用药时对卵巢癌细胞HO8910增殖的影响;采用RT-RCR检测卵巢癌细胞HO8910中CXCR4mRNA的表达;采用蛋白质免疫印迹法检测多西环素作用后卵巢癌细胞HO8910中CXCR4表达的改变。结果较低浓度多西环素(10μg/mL)作用48h后即可抑制卵巢癌细胞HO8910的增殖活力(P<0.01),当其浓度为50μg/mL时抑制率达(70±2)%。多西环素与顺铂联合用药后对癌细胞的抑制效应大于同一浓度顺铂单独作用时,可提高癌细胞对顺铂的化疗敏感性。多西环素抑制卵巢癌细胞HO8910中CXCR4的表达。结论多西环素对卵巢癌细胞HO8910有明确的抑制增殖作用,能增加癌细胞对顺铂化疗的敏感性。SDF-1/CXCR4通路可能参与其中。     

溶血磷脂酸促卵巢癌细胞增殖机制的研究

目的 探讨溶血磷脂酸(LPA)促进卵巢癌细胞增殖的机制。方法 体外培养人卵巢上皮癌细胞株SKOV3,选用促分裂素原活化蛋白激酶（MAPK）信号传导通路特异性阻断剂PD98059,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定LPA和PD98059对SKOV3细胞增殖活性的影响;应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定LPA单独或合用PD98059对SKOV3细胞表达环氧化酶-2(COX-2)的影响;应用流式细胞仪（FCM）测定细胞的凋亡及细胞周期的变化。结果 LPA(浓度＞10μmol／L)以剂量依赖方式促进SKOV3细胞增殖,PD98059抑制LPA促增殖作用（P＜0.05）。RT-PCR结果显示,LPA能促进COX-2的表达（P＜0.05）,而合用PD98059后COX 2的表达降低（P＜0.05）。FCM结果显示,LPA能促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,增加S期比率,而合用PD98059后LPA促增殖作用消失,且G0/G1期比率升高,S期比率降低。结论 LPA通过MAPK信号传导通路促进卵巢癌细胞增殖,且与COX-2表达有关。     

脂质体莪术醇联合顺铂抗人卵巢癌细胞作用和机制研究

目的 研究脂质体莪术醇(LC)联合顺铂抗人卵巢癌细胞的作用和机制.方法 实验以卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910为研究对象,以10 μg/ml LC为基准,联合不同浓度的顺铂(0、2、4、8、16、32、64 μg/ml)进行分组,MTT、Transwell和流式法分别检测各组细胞增殖、侵袭、迁移能力和凋亡率的变化,Western blot检测各组AKT、p-AKT和cleaved-Caspase8、9、3蛋白表达的变化.结果 MTF结果显示,与单用顺铂或者LC组比较,联合用药组的肿瘤细胞增殖率降低(P＜0.05),联合用药中顺铂对SKOV3的IC50为(12.67±2.03)μg/ml[单用顺铂的IC50:(38.28±5.98)μg/ml];联合用药中顺铂对HO8910的IC50为(10.55±1.55)μg/ml[单用顺铂的IC50:(26.41 ±2.30) μg/ml].联合组(8μg/ml的顺铂+ 10 μg/ml的LC)的卵巢癌细胞侵袭和迁移率均降低(P＜0.05),凋亡率最高(P＜0.05).Western blot结果提示联合用药组卵巢癌细胞的p-AKT蛋白的表达水平降低(P＜0.05),cleaved-Caspase8、9、3蛋白水平上升(P＜0.05).结论 低剂量LC可以增强顺铂抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进肿瘤细胞凋亡,联合用药可能通过PI3K/AKT通路促进卵巢癌细胞凋亡.     

苯乙双胍通过激活AMPK抑制肝癌细胞增殖、集落形成及侵袭

目的探讨苯乙双胍对肝癌SMMC-7721、Hep-G2细胞系增殖、集落形成和侵袭的影响及分子机制。方法使用不同浓度苯乙双胍处理SMMC-7721细胞、Hep-G2细胞以及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)沉默的Hep-G2细胞,MTT实验检测细胞增殖生长情况,克隆实验检测细胞集落形成能力,细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力,蛋白印迹法(Western blot)检测AMPK和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达。结果苯乙双胍抑制肝癌细胞增殖生长、集落形成以及侵袭能力。苯乙双胍处理组p-AMPK蛋白表达明显上升,p-mTOR蛋白表达明显下降,沉默AMPK后的Hep-G2细胞,苯乙双胍抑制肝癌细胞增殖和侵袭能力下降。结论苯乙双胍通过激活AMPK抑制肝癌细胞的增殖生长、集落形成和侵袭,为苯乙双胍应用于临床治疗肝癌提供理论基础。     

艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞作用的研究

目的 探讨艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞的抗肿瘤作用.方法 应用MTT法和RT-PCR 法、ELISA方法分别检测艾迪注射液对SKOV3细胞增殖及SKOV3细胞中VEGF mRNA、VEGF蛋白含量的影响.结果 艾迪组SKOV3人卵巢癌细胞增殖受到抑制,48 h达高峰,抑制率59.51%;SKOV3细胞中VEGF mRNA含量艾迪组较对照组减少,差异有显著性(P＜0.01).结论 艾迪能抑制SKOV3人卵巢癌细胞的增殖,在mRNA、蛋白水平抑制VEGF的表达,进而实现其抗肿瘤作用.     

高浓度二甲双胍通过JNK通路抑制MIN6细胞增殖和迁移

目的本研究从细胞生物学角度检测二甲双胍对小鼠胰岛瘤MIN6的影响,并探讨此过程中包含的分子生物学机制。方法 MTT法检测不同浓度二甲双胍(1、2、5、10、20 mmol/L)对MIN6细胞活力的影响,细胞划痕实验检测二甲双胍对MIN6细胞迁移的影响,免疫印记实验检测此过程中细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3表达的变化,及AMPK和JNK信号通路蛋白磷酸化水平的变化。结果二甲双胍浓度大于10 mmol/L时可以抑制MIN6细胞的活力(P<0.01),降低其迁移能力(P<0.01),高浓度二甲双胍可以上调细胞内凋亡蛋白Bax(P<0.05)和p-AMPK的表达(P<0.05),降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,增加caspase3剪切体(P<0.05)。同时,二甲双胍可以降低MIN6细胞内JNK信号通路的磷酸化水平(P<0.05)。结论高浓度二甲双胍可以抑制MIN6细胞的增殖和迁移,其作用可能与降低了JNK信号的通路活化有关。     

顺铂作用于耐顺铂卵巢上皮癌细胞后其细胞生物学特性的改变

目的:探讨耐顺铂卵巢癌SKOV3/DDPⅡ细胞对于顺铂作用后其细胞周期、凋亡、增殖及铂类耐药相关基因ARHGDIB和CCND1表达量的变化。方法:采用流式细胞术检测不同浓度和时间顺铂作用后SKOV3/DDPⅡ细胞周期和凋亡率的变化,并与标记GFP的上皮性卵巢癌细胞株SKOV3-GFP(敏感株)相比较;通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测不同浓度和时间顺铂作用后细胞增殖的变化;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测裸鼠体内瘤块耐药基因CC-ND1和ARHGDIB基因的表达情况。结果:半抑制浓度的顺铂作用48h后,SKOV3-GFP和SKOV3/DDPⅡ两株细胞分布于G0/G1期的比例相对于无顺铂处理组明显下降(P<0.01,P<0.05),SKOV3/DDPⅡ细胞分布于G2/M期的比例则相对于无顺铂处理组明显升高(P<0.01);而顺铂作用48h内SKOV3-GFP和SKOV3/DDPⅡ两株细胞凋亡率随时间和浓度的增大而增大;以9.9,19.8,29.7μmol/L浓度的顺铂处理6d以后,SKOV3/DDPⅡ的增殖抑制得到解除,并继续生长,而SK-OV3-GFP细胞则随顺铂作用时间延长增殖持续受到抑制。顺铂作用体内移植瘤5次后,CCND1在SKOV3/DDPⅡ-5的相对表达比SKOV3/DDPⅡ-0增高92.98倍,作用第8次后,ARHGDIB在SKOV3/DDPⅡ-8的相对表达比SKOV3/DDPⅡ-0增高2.51倍。结论:具有耐药表型的卵巢上皮癌细胞在顺铂作用下降低分布于G0/G1期细胞数使细胞生长受到一定程度的抑制,但在顺铂刺激后肿瘤细胞过度表达CCND1基因使细胞顺利通过G1/S检查点促进肿瘤细胞增殖,同时上调表达ARHG-DIB基因抵抗顺铂诱导的肿瘤细胞凋亡。     

降糖药二甲双胍对甲状腺未分化癌细胞增殖及凋亡的作用

目的:研究二甲双胍对甲状腺未分化癌细胞增殖及凋亡的作用,初步探讨其作用机制?方法:以不同浓度二甲双胍作用于未分化癌SW1736细胞,MTT法检测其增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况?结果:二甲双胍可显著抑制SW1736细胞增殖,其抑制作用呈剂量依赖性,并随着作用时间的延长抑制作用逐渐增强,于72 h达到最大抑制效果?流式细胞检测结果显示二甲双胍可阻滞未分化癌细胞周期至G0/G1期;并可促进肿瘤细胞凋亡,随着二甲双胍作用浓度的递增,肿瘤细胞的凋亡率逐渐增加,20 mmol/L二甲双胍作用48 h后,可使SW1736细胞凋亡率从8.3%增加至13.3%,与对照组相比,有显著统计学差异?结论:二甲双胍可抑制甲状腺未分化癌细胞的增殖活性,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,为甲状腺未分化癌的治疗研究提供了新的方向?     

二甲双胍抑制大鼠胆管成纤维细胞胶原生成的分子信号机制

目的 探讨二甲双胍是否通过活化腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）抑制转化生长因子-β1（TGF-β1）刺激的大鼠胆管成纤维细胞胶原生成并揭示其分子信号机制。方法 取雌雄各半的SD大鼠共50只（体质量150~200 g）,CO2窒息法处死后,无菌条件下分离并培养大鼠胆管成纤维细胞,倒置显微镜观察所培养的细胞,发现不同体质量及性别的大鼠所获取的细胞形态及活性无差异。采用随机数字表法进行随机分组,分别设置对照组、TGF-β1组、Smad3 siRNA干预组、结缔组织生长因子（CTGF）siRNA干预组、二甲双胍干预组、Compound C干预组,每组3个样本。设置对照组：大鼠胆管成纤维细胞正常培养;TGF-β1组：10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;Smad3 siRNA干预组：Smad3 siRNA转染24 h后＋10 ng/mL TGF-β1孵育细胞;CTGF siRNA干预组：CTGF siRNA 转染 24 h 后＋10 ng/mL TGF-β1 孵育细胞;二甲双胍干预组：10 mmol/L 二甲双胍＋10 ng/mL TGF-β1 孵育细胞;Compound C干预组：10 μmol/L Compound C＋10 mmol/L二甲双胍＋10 ng/mL TGF-β1孵育细胞。以TGF-β1刺激大鼠胆管成纤维细胞分泌胶原,以Smad3 siRNA或CTGF siRNA转染细胞以抑制Smad3或CTGF蛋白的表达,以二甲双胍孵育细胞以激活AMPK,以Compound C预处理细胞以抑制AMPK的活性。采用ELISA或Western-blot的方法检测CTGF、胶原（I Col I）蛋白水平;Western-blot的方法检测p-Smad3/t-Smad3、p-AMPK/t-AMPK、CTGF水平。结果 TGF-β1以时间和剂量依赖的方式刺激胆管成纤维细胞胶原I生成,二甲双胍激活的AMPK也剂量依赖性抑制TGF-β1诱导的胶原I生成;AMPK抑制剂Compound C预孵育细胞,可显著逆转二甲双胍激活的AMPK抑制胶原I生成的作用（P<0.01）。进一步发现,二甲双胍激活的AMPK对TGF-β1刺激的Smad3磷酸化无抑制作用,却可抑制其下游的CTGF蛋白表达（P<0.01）及胶原I生成（P<0.01）,而AMPK抑制剂可逆转二甲双胍对CTGF及胶原I的上述作用。结论 二甲双胍通过激活AMPK抑制TGF-β1/Smad3信号通路诱导的CTGF蛋白表达,进而抑制胆管成纤维细胞胶原I生成。