新型三唑类化合物Ⅱ3的镇痛作用及对环氧酶活性的影响

目的： 研究化合物Ⅱ₃的镇痛作用及其对环氧酶-1(COX-1)和环氧酶-2(COX-2)活性的影响。方法： 采用小鼠热板实验和扭体实验研究化合物Ⅱ₃的镇痛作用;利用放免法测定巨噬细胞中PGE_{2的含量,考察化合物Ⅱ3对COX-2活性的影响;测定内皮细胞中6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)含量,考察化合物Ⅱ3对COX-1活性的影响。结果： 化合物Ⅱ3高、中、低3个剂量组均可以延长小鼠的热痛阈值,延长造模后小鼠第一次出现扭体反应的时间并减少15 min内扭体反应出现的次数(P<0.05,P<0.01);在1×10^-5,1×10^-6,1×10^-7 mol/L浓度时均能抑制小鼠腹腔巨噬细胞PGE2的生成, 1×10^-6 mol/L浓度显著地抑制生成后的COX-2活性,在相同浓度下对新生小牛胸主动脉内皮细胞6-keto-PGF1α生成的抑制作用相对较弱。结论： 化合物Ⅱ3具有一定的镇痛作用,而且对COX-2具有选择性抑制作用。}     

银杏内酯B对H2O2诱导H9C2心肌细胞损伤保护作用研究

目的 研究银杏内酯B（ginkgolide B,GB）对H₂O₂诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法 将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为4组：空白对照、H₂O₂（200μmol/L）干预、GB（100μmol/L）+H₂O₂（200μmol/L）干预、GB（200μmol/L）+H₂O₂（200μmol/L）干预,每组设10个复孔。经药物干预16h后观察各组细胞形态,采用MTT法检测细胞存活率;检测培养液中心肌酶（AST、CPK、LDH）活性;测定细胞中抗氧化酶（SOD、GSH-Px、CAT）活性和丙二醛（MDA）含量;酶联免疫法（ELISA）测定培养液中炎性因子（CRP、TNF-α、IL-1、IL-6）含量水平;采用流氏细胞术检测细胞凋亡状况并计算细胞凋亡率,采用反转录PCR（RT-PCR）技术检测细胞中bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞中NF-κB蛋白表达并进行半定量分析。结果 与H₂O₂干预组比较,GB（100、200μmol/L）+H₂O₂（200μmol/L）干预组细胞培养液中AST、CPK活性和TNF-α、IL-6、CRP、MDA含量均显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡率显著降低;bcl-2 mRNA表达显著上调、Bax mRNA表达显著下调,bcl-2/Bax表达比值显著升高,差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;其中GB（200μmol/L）+H₂O₂（200μmol/L）干预组细胞生存状态明显改善、存活率显著升高,LDH活性、IL-1含量以及NF-κB蛋白表达量显著降低,细胞中GSH-Px活性显著升高,差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 GB对H₂O₂诱导损伤H9C2心肌细胞具有保护作用,作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,上调抑凋亡基因bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高bcl-2/Bax表达比值,下调NF-κB蛋白表达,降低炎性因子含量相关。     

苦参素对H2O2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤保护作用的研究

目的 研究苦参素（oxymatrine,OMT）对H₂O₂诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法 无菌环境下分离并培养乳鼠心肌细胞72h后随机分为空白对照组、H₂O₂（200μmol/L）干预组、OMT（20、40、60μmol/L）+H₂O₂（200μmol/L）干预组,每组设10个复孔。药物干预12h后,MTT法检测细胞存活率,采用氧敏感荧光探针DCFH-DA检测氧自由基（ROS）;测定细胞中抗氧化酶（SOD、GSH-Px、CAT）活性和丙二醛（MDA）含量,检测细胞培养液中心肌酶（AST、CPK、LDH）含量,流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测细胞凋亡并计算凋亡率,Western blot法检测细胞中caspase-3、NF-κB蛋白表达并进行半定量分析。结果 与H₂O₂（200μmol/L）干预组比较,OMT（40、60μmol/L）干预12h能够显著提高H₂O₂诱导损伤乳鼠心肌细胞存活率,降低ROS含量,改善SOD、GSH-Px、CAT活性并降低MDA含量,降低培养基中AST、CPK、LDH含量,降低细胞凋亡率,降低caspase-3、NF-κB蛋白表达,差异均有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 苦参素可能通过改善抗氧化酶活性而提高氧自由基清除能力、抑制促凋亡蛋白表达而降低细胞凋亡,对H₂O₂诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤起到保护作用。     

HPLC法测定稳心颗粒中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与党参炔苷的含量

[目的] 建立高效液相法（HPLC）同时测定稳心颗粒中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd与党参炔苷的含量。[方法] 采用Agilent1260 DAD高效液相色谱仪,Amethyst C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,4μm）,乙腈-水为流动相,检测波长为210 nm,流速1 mL/min。[结果] 三七皂苷R₁对照品在8~247 mg/L线性关系良好,平均回收率为102.69%,RSD=2.74%（n=6）;人参皂苷Rg₁对照品在14~422 mg/L线性关系良好,平均回收率为98.72%,RSD=1.85%（n=6）;党参炔苷对照品在1.5~42 mg/L线性关系良好,平均回收率为97.69%,RSD=1.94%（n=6）;人参皂苷Rb₁对照品在2.65~847 mg/L线性关系良好,回收率为102.11%,RSD=1.96%（n=6）;人参皂苷Rd对照品在8~255 mg/L线性关系良好,平均回收率为99.66%,RSD=2.49%（n=6）。[结论] 本实验中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd和党参炔苷的含量测定方法稳定可靠,可作为稳心颗粒中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd与党参炔苷含量测定方法。     

纳米SiO2及磁性γ-Fe2O3@SiO2对Hg2+的吸附及去除

首先用微乳法合成了纳米SiO₂和纳米γ-Fe₂O₃,然后利用传统的St ber方法合成出核壳结构的γ-Fe₂O₃@SiO₂,并利用X射线衍射仪（XRD）、透射电子显微镜（TEM）、振动样品磁强计（VSM）对其进行了表征。采用双硫腙光度法在551 nm处,测定了Hg²⁺在纳米SiO₂、纳米γ-Fe₂O₃和γ-Fe₂O₃@SiO₂表面的吸附等温线,发现三者的吸附等温线类型依次为Ⅱ、Ⅲ和Ⅰ型,等温线类型与纳米材料的分散性、表面硅羟基、离子空位以及磁性有关。利用双吸附等温线法、准一级和准二级动力学模型对吸附数据进行拟合得出：纳米SiO₂和γ-Fe₂O₃@SiO₂对Hg²⁺的吸附符合Langmuir等温式,而纳米γ-Fe₂O₃对Hg²⁺的吸附符合Freundlich等温式。三者对Hg²⁺的去除率均与pH有关,均属于准二级动力学模型。     

抑制PI3K通路增强CAHB对Jurkat细胞的凋亡作用

目的 探讨CAHB单独使用及与LY294002联合应用对Jurkat细胞体外作用的影响.方法 分别用不同剂量的CAHB(0、5、10、20、40mmol/L)诱导Jurkat细胞,用MTS法检测Jurkat细胞的增殖抑制效应,流式细胞术分析Jurkat细胞凋亡情况;取40mmol/L浓度的CAHB加入PI₃K抑制剂LY294002,流式细胞术分析Jurkat细胞凋亡情况.结果 CAHB对Jurkat细胞生长有显著的抑制作用,并能显著诱导Jurkat细胞发生凋亡,其作用呈明显剂量、时间依赖性.PI₃K抑制剂LY294002能显著增强CAHB对Jurkat细胞的凋亡作用.结论 CAHB能抑制Jurkat细胞增殖,并诱导其凋亡.抑制PI₃K通路能增强CAHB对Jurkat细胞的凋亡作用.     

紫草素抑制PI3K/Akt/mTOR通路逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药

目的 探讨紫草素对人胃癌细胞奥沙利铂耐药的影响及机制。方法 以0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L 紫草素干预对数生长期人胃癌奥沙利铂耐药细胞(MGC803/L-OHP)24h,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,参照半抑制浓度(IC₅₀)设定后续实验紫草素浓度。取对数生长期MGC803/L-OHP细胞,设空白对照组、奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂组、紫草素+奥沙利铂+IGF-1(PI₃K激活剂)组。药物干预24h后,检测细胞增殖抑制率和凋亡率,GFP-LC3质粒转染后观察自噬小体,Western blot法检测p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR、caspase-3、cleaved caspase-3、Beclin1、LC3表达。结果 紫草素对MGC803/L-OHP细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,IC₅₀值为9.58μmol/L,后续实验紫草素浓度设定为10μmol/L。与空白对照组比较,奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多。与奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(P<0.05),自噬小体增多;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达下调,cleaved caspase-3、Beclin1表达上调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ升高(P<0.05)。与紫草素+奥沙利铂组比较,紫草素+奥沙利铂+IGF-1组细胞增殖抑制率、凋亡率降低(P<0.05),自噬小体减少;p-PI₃K、p-Akt、p-mTOR表达上调,cleaved caspase-3、Beclin1表达下调,cleaved caspase-3/caspase-3、LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ降低(P<0.05)。结论 紫草素可逆转人胃癌细胞奥沙利铂耐药,其机制可能与抑制PI₃K/Akt/mTOR通路而促进胃癌细胞凋亡和自噬有关。     

膝关节半月板热身运动前后磁共振T2时间变化研究

目的 通过比较分析热身运动前后膝关节半月板磁共振T₂时间的变化,探讨利用T₂时间变化反映热身运动前后半月板变化的可行性。方法 选择40例无膝关节相关症状的志愿者,其中男性15例,女性25例;患者年龄22~30岁,平均年龄26.32±2.1岁。在同等强度的热身运动前后对每位志愿者行右膝关节的MR T₂ mapping序列成像,分别测量内、外侧半月板前角、后角、体部的T₂时间,采用配对t检验比较热身运动前后膝关节半月板T₂时间变化。结果 热身运动后膝关节半月板各个部位的T₂值均增高（P=0.000）;外侧半月板体部T₂值增高幅度小于内侧半月板前角（P<0.05）、内侧半月板后角（P<0.05）及外侧半月板前角（P<0.05）。结论 热身运动可以增加膝关节半月板T₂时间,提示可以增加半月板内含水量,改善半月板的生理活性,对半月板起到一定的保护作用;MR T₂ mapping成像技术可以评价运动前后半月板T₂时间,是评估半月板的1项可靠手段。     

大豆异黄酮抗衰老作用研究

目的 探讨大豆异黄酮 (soybean isoflavon, SI) 抗衰老的作用及其机制。方法 体内实验以 D-半乳糖 (D-gal) 120 mg/kg 颈背部 sc 6 周,构建大鼠衰老模型,次日以 ig 方式给予 SI 100、200、400 mg/kg,连续 6 周。通过 Morris 水迷宫观察大鼠学习记忆能力的改变;分光光度法检测脑组织中丙二醛 (MDA) 水平、超氧化物歧化酶 (SOD) 活性、Na⁺,K⁺-ATP 酶和 Ca²⁺-ATP 酶活性;酶标仪检测血清中 NO 活性。体外实验建立 H₂O₂ 致 PC12 细胞损伤模型,给予 0.5、1.0、2.0 mg/mL SI 干预,采用 MTT 比色法测定细胞存活率,酶标仪检测细胞上清中 NO 活性,Western blotting 检测各组 PC12 细胞 Bcl-2 蛋白的表达。结果 SI 中、高剂量可改善 D-gal 致衰老大鼠的学习记忆能力,增强脑组织中 SOD、Na⁺, K⁺-ATP 酶和 Ca²⁺-ATP 酶活性,降低血清中 NO 的量,SI 低、中、高剂量降低大鼠脑组织中 MDA 水平,同模型组比较有统计学差异 (P＜0.05、0.01)。SI (1.0、2.0 mg/mL) 可抑制 H₂O₂ 致 PC12 细胞氧化损伤及 NO 的增多,与模型组比较具有统计学意义 (P＜0.05);SI 可增加 Bcl-2 蛋白表达。结论 SI 可通过抗氧化作用、降低 NO 水平及上调 Bcl-2 蛋白表达,起到抗衰老作用。     

钙改性NiO/ZnO-Al2O3-SiO2吸附剂反应吸附脱硫效果

通过浸渍沉淀法制备了钙改性NiO/ZnO-Al₂O₃-SiO₂汽油脱硫吸附剂,并与S-Zorb工业吸附剂进行比较。物理性质分析、X射线衍射和原位吡啶吸附红外光谱表征结果表明,钙改性NiO/ZnO-Al₂O₃-SiO₂吸附剂比表面积为137.7 m²/g,孔容为0.31 cm³/g,NiO及ZnO晶体分布均匀且L酸总量更多。在420℃、2.9 MPa、质量空速10.98 h^-1、氢油体积比48:1的条件下,催化裂化汽油中的硫含量从243.38 μg/g降至10 μg/g以下,汽油辛烷值仅降低0.3;新鲜和再生吸附剂穿透硫容分别可达57.12 mg/g及47.33 mg/g,经过长周期再生循环后脱硫性能保持优良。同时,物理性质分析、光电子能谱等表征结果表明失活吸附剂再生后效果明显改善,汽油中硫元素最终被ZnO吸附生成ZnS。     

PM2.5对大鼠子宫组织形态及氧化应激效应的影响

目的 探究PM_2.5对大鼠子宫组织生理及相关生化应激效应的影响。方法 将30只SD雌鼠随机分为3个不同PM_2.5暴露组（生理盐水对照组、1.5 mg/kg PM_2.5低剂量组和37.5 mg/kg PM_2.5高剂量组）。PM_2.5暴露10 d后,将雌鼠处死,HE染色观察子宫组织病理变化,并检测子宫组织中SOD、GSH、MDA和LDH含量。结果 与对照组相比,PM_2.5暴露组雌鼠子宫组织结构异常,内膜上皮细胞变薄,排列混乱;固有层基质细胞和血管减少。氧化应激指标检测结果显示,高剂量组MDA和LDH含量分别为（6.53±1.24） nmol/mg prot和（265.62±24.65） U/g prot,明显高于对照组（P<0.05）;高剂量组和低剂量组SOD和GSH含量均明显低于对照组（P<0.05）。结论 PM_2.5可对大鼠子宫组织形态造成破坏,并诱发子宫相关的氧化应激反应。     

硫化氢供体型美金刚衍生物的合成及其活性

H₂S具有保护缺血再灌注损伤的神经元、显著降低脑梗死面积的作用,但高浓度H₂S产生神经毒性。N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂美金刚可以降低高浓度H₂S引起的神经毒性。将硫化氢缓释供体5-对羟基苯基-1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮(ADT-OH)与美金刚通过烷烃连接臂拼合,设计了9个结构全新的化合物I₁~I₉,以ADT-OH为原料,经过4步反应得到目标化合物,其化学结构经¹H NMR、¹³C NMR和HRMS确证。利用MTT法评价不同浓度目标化合物对谷氨酸损伤的HT-22细胞的影响,结果发现,该类化合物在1 μmol/L时能明显提高受损HT-22细胞的生存率(P<0.01),对于谷氨酸诱导损伤的神经元细胞具有较好的保护作用。     

对氧磷酶1和脂蛋白磷脂酶A2与冠心病的相关性

目的 探讨冠心病患者血清对氧磷酶1(PON1)与脂蛋白磷脂酶A₂(LP-PLA₂)活性与冠脉病变支数及斑块稳定性的相关性.方法 入选88例冠心病患者为研究组,同期行冠状动脉造影术(CAG)排除冠心病的32例患者为对照组.检测两组患者血清PON1、LP-PLA₂活性,对PON1、LP-PLA₂活性与冠状动脉病变支数及斑块稳定性进行相关性分析.结果 冠心病患者血清PON1活性明显低于对照组(P<0.05);活性均值随冠状动脉病变支数增加而降低(P<0.05); 在斑块不稳定组PON1活性明显低于斑块稳定组(P<0.05).冠心病患者血清LP-PLA₂活性均值明显高于对照组(P<0.05),随冠状动脉病变支数增加而升高(P<0.05),且与患者总胆固醇、低密度脂蛋白水平呈正相关.结论 血清PON1及LP-PLA₂活性与冠心病的发生及冠状动脉病变支数有相关性,PON1活性降低可作为冠状动脉斑块趋于不稳定的观察指标.     

谷氨酸对人交感神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系超极化激活的阳离子通道的影响

目的 观察谷氨酸(Glu)对交感神经细胞超极化激活的阳离子通道(I_h通道)活动的影响。 方法 采用人交感神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系作为交感神经细胞模型,用全细胞电压箝方式记录I_h通道电流。 结果 SH-SY5Y细胞存在I_h通道电流;Glu(1mmol/L)可抑制SH-SY5Y细胞I_h电流的K⁺电流成分,但增强I_h电流的Ca²⁺电流和Na⁺电流成分,综合效应是使I_h电流增大。 结论 Glu可增大SH-SY5Y细胞的I_h电流。这一效应提示,Glu可能通过诱发交感神经元去极化并促进其传出冲动增加。     

Nb2O5掺杂对SrTiO3陶瓷显微结构和微波介电损耗的影响

采用无压烧结工艺制备了Nb₂O₅掺杂SrTiO₃陶瓷,研究了Nb₂O₅掺杂量对SrTiO₃陶瓷相组成、显微结构和微波介电损耗的影响。结果表明：Nb₂O₅掺杂对SrTiO₃陶瓷的相结构没有产生明显的影响,但会在一定程度上阻碍样品的致密化,同时促进晶粒的生长。随着Nb₂O₅掺杂量的增加,SrTiO₃陶瓷的介电常数从296逐渐下降至230左右,温度系数从1.714×10^-3℃^-1逐渐下降至1.629×10^-3℃^-1,Q×f值则先急剧升高,之后又慢慢下降。当Nb₂O₅掺杂量为0.15%（质量分数,下同）时,SrTiO₃陶瓷样品的介电损耗最低,Q×f可达6 281 GHz,大约是纯SrTiO₃（1 145 GHz）陶瓷样品的5.5倍（此时介电常数约为270,温度系数约为1.684×10^-3℃^-1）。此外,对材料显微结构、介电常数、温度系数特别是介电损耗变化的原因进行了分析。     

72例克罗恩病患者中血清同型半胱氨酸、叶酸和维生素B12水平分析

目的 探讨血清同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）、叶酸和维生素B₁₂水平与克罗恩病（Crohn''s disease,CD）的关系。方法 收集72例CD患者和128名性别、年龄相匹配的健康对照者,采用简化克罗恩病活动指数（CDAI）评估CD疾病活动度。采用循环酶法检测Hcy水平,化学发光免疫法检测叶酸和维生素B₁₂水平。采用Pearson相关性分析和多元线性回归分析探讨CD组中Hcy水平与CDAI评分及叶酸、维生素B₁₂、白蛋白等血清学指标的关系。最后采用Logistic回归分析评估CD的独立危险因素。结果 与对照组相比较,CD组中Hcy平均水平显著增高（P=0.002）,而叶酸和维生素B₁₂平均水平显著降低（P均=0.000）。CD组中高同型半胱氨酸血症（>15.0μmol/L）、叶酸缺乏（<4.0ng/ml）和维生素B₁₂缺乏（<203.0pg/ml）比例均显著高于对照组（P均<0.01）。与缓解期患者（CDAI<5）比较,活动期CD患者（CDAI≥5）中Hcy平均水平显著增高（P=0.001）,而叶酸和维生素B₁₂平均水平显著降低（P均=0.000）。经性别、年龄因素校正后,多元线性回归分析显示CD组中Hcy水平与叶酸和维生素B₁₂呈独立负相关（β=-0.262,P=0.037;β=-0.293,P=0.020）。Logistic回归分析结果提示叶酸缺乏和维生素B₁₂缺乏为CD的独立危险因素（OR=4.421,P=0.006;OR=9.036,P=0.000）。结论 浙江籍汉族CD患者中可能普遍存在高同型半胱氨酸血症、叶酸缺乏和维生素B₁₂缺乏,血清Hcy、叶酸和维生素B₁₂水平与CD疾病活动度密切相关,叶酸缺乏和维生素B₁₂缺乏是CD的独立危险因素。     

O3/UV和O3/H2O2氧化法处理聚丙烯酰胺采油废水

为降低油田采油废水的化学需氧量（COD）负荷,提高其可生化性,采用O₃/UV和O₃/H₂O₂氧化法对聚丙烯酰胺采油废水进行处理,分别考察了氧化时间、H₂O₂与O₃物质的量之比、pH以及紫外灯功率对采油废水处理效果的影响。结果表明,与采用单独臭氧氧化相比,O₃/UV以及O₃/H₂O₂联用技术对采油废水中的COD及聚丙烯酰胺（PAM）的去除效果更为显著,废水可生化性均有所提高,且O₃/H₂O₂氧化法对采油废水的可生化性提高程度更大。O₃/UV氧化法对于聚丙烯酰胺采油废水可生化性影响的最佳条件为：pH=8.0,O₃质量浓度为19.7 mg/L,紫外灯功率为18 W,氧化时间为30 min,可生化性（B/C）提高至0.092;O₃/H₂O₂氧化法对于聚丙烯酰胺采油废水可生化性影响的最佳条件为：pH=8.0,O₃质量浓度为19.7 mg/L,H₂O₂与O₃物质的量之比为0.3,氧化时间为30 min,B/C提高至0.175。氧化预处理提高了废水的可生化性,减轻了后续生化处理压力。     

PM2.5对雌鼠生殖内分泌水平和妊娠结局的影响

目的 研究PM_2.5对雌性大鼠生殖内分泌激素水平和妊娠结局的影响。方法 30只雌鼠随机分为对照组（生理盐水）、低剂量PM_2.5组（1.5 mg/kg）和高剂量PM_2.5组（37.5 mg/kg）。PM_2.5暴露10 d,采集孕前血液后合笼,妊娠第19天时,处死大鼠,采集并分离血清,用ELISA试剂盒测定妊娠前后血清中雌二醇（estradiol,E2）、孕酮（progesterone,PROG）、绒毛膜促性腺激素（chorionic gonadotropin,CG）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）和促卵泡生成素（follicle-stimulating hormone,FSH）激素水平;剖宫观察胎鼠情况。结果 对照组、低剂量组和高剂量组的活胎率分别为90.77%、59.49%和60.27%。与对照组相比,低剂量组和高剂量组胎鼠的活胎率均明显降低（P<0.05）。与对照组相比,PM_2.5能够明显降低各暴露组雌鼠妊娠前后血中E2、PROG、CG和LH水平（P<0.05）。与对照组相比,低剂量PM_2.5暴露组雌鼠妊娠前血中FSH变化不明显（P>0.05）,但高剂量组血中FSH明显降低（P<0.05）。结论 PM_2.5可能通过影响内分泌激素分泌水平而影响妊娠结局。     

KATP通道E23K突变对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响

目的 研究ATP敏感性钾通道Kir6.2亚基E23K突变对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 （1）在心肌组织中提取总RNA,RT-PCR法获取cDNA,合成特异性引物,用PCR法获得kir6.2、SUR2A的ORF片段,用T4DNA连接酶将上述片段与线性化的pEGFP-C1连接,重组的pEGFP-C1/kir6.2用PCR法进行E23K定点突变,获得真核表达质粒pEGFP C1/kir6.2,pEGFP C1/kir6.2（E23K）及pEGFP C1/SUR2A。（2）重组质粒采用脂质体法瞬时共转染H9C2细胞,使其在H9C2细胞中表达。（3）生理盐水与1mg/L阿霉素（Adriamycin,ADR）分别处理转染后细胞,分为4组：A组为野生型重组质粒+生理盐水处理组（WT+NS）;B组为含E23K突变重组质粒+生理盐水处理组（E23K+NS）;C组为野生型重组质粒+阿霉素损伤组（WT+ADR）;D组为含E23K突变重组质粒+阿霉素损伤组（E23K+ADR）。（4）采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数（AI）。（5） Western blot法测定caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。AlphaEase FC软件取值读取各样品条带灰度值。结果 （1） TUNEL结果示,应用ADR后凋亡比例升高,与WT+ADR组相比,E23K+ADR组凋亡比例更高（P<0.05）。（2）阿霉素处理后,所有组促凋亡相关蛋白（caspase-3、Bax）表达均增高,抗凋亡蛋白（Bcl-2）表达降低,且E23K+ADR组caspase-3与Bax蛋白表达均大于WT+ADR组,Bcl-2蛋白表达低于WT+ADR组（P<0.05）。结论 K_ATP通道kir6.2亚基E23K突变加重阿霉素诱导的细胞凋亡。     

干预GLP-1通路保护过氧化氢诱导心肌细胞凋亡的研究

目的 观察Exendin-4（Ex-4,GLP-1受体激动剂）对H₂O₂孵育的心肌细胞凋亡的影响,探讨GLP-1通路干预心肌细胞损伤的机制。方法 分离、培养心室肌细胞,分成5组∶A组为对照组;B组为H₂O₂干预组（100μmol/L,24h）;C组为H₂O₂+Ex-4（Ex-10nmol/L,孵育24h）组;D组为H₂O₂+Ex-4（Ex-20nmol/L,孵育24h）组;E组为H₂O₂+Ex-4+LY294002（Ex-20nmol/L,LY-5μmol/L,孵育24h）组。荧光染色测定各组细胞内活性氧簇（ROS）生成的水平;流式细胞仪测定各组细胞凋亡率情况。以Western blot法测定各组细胞凋亡蛋白及机制蛋白（PI₃K/AKT）的表达。结果 与H₂O₂孵育组相比,Ex-4干预使得心肌细胞内ROS水平下降,细胞凋亡率下降,在高剂量组（D组）均达到差异统计学意义（P<0.05）。同时,Ex-4干预可使p-AKT/AKT表达显著增加,caspase-3表达显著下降（P<0.05）;而这些效应可被LY294002共孵育（E组）所逆转。结论 干预GLP-1通路,可缓解H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡,此效应至少部分是通过影响PI₃K/AKT途径实现的。