卵巢癌患者一线化疗后CD8~+T细胞和NK细胞数量及功能动态变化的研究

目的:研究晚期卵巢癌患者经一线化疗后体内CD8+T细胞和NK细胞数量及功能的动态变化.方法:选取术后行紫杉醇联合卡铂化疗的晚期卵巢上皮癌患者共13例,采集化疗前(S_0)、化疗后5-7天(S_1)、化疗后12～14天(S_2)和化疗后25～28天(S_3)外周血,流式细胞术检测患者外周血中CD3~+、CD4~+、CD8~+和NK细胞的百分比及绝对数量.采用体外自体肿瘤细胞裂解物脉冲淋巴细胞共培养的方法检测不同时间点CD8~+T细胞IFN-γ的分泌功能,并以LDH释放法测定NK细胞对K562细胞的杀伤活性.结果:在一个完整的化疗周期中,CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞的绝对数目均于S_1期降至最低点,且与S_0期分别都有显著性差异.与对照组相比,当体外给予自身肿瘤细胞裂解物刺激诱导培养后,在S_1、S_2和S_3期产生IFN-γ的CD8~+细胞比例均较对照组显著增加,且CD8~+IFN-γ~+细胞比例在S2期达到最高.NK细胞的绝对数目于S1期降至最低点,且与S0期有显著性差异,NK细胞的比例及杀伤活性在化疗前、后均无显著性差异.结论:卵巢癌患者于一线化疗后机体经历免疫重建的过程,该过程中CD8~+T细胞介导的免疫应答一过性增高,而NK细胞的杀伤活性无明显变化.化疗后免疫重建期可能是免疫治疗实施的最佳窗口期.     

不明原因自然流产与蜕膜NK细胞表面活化性受体表达的相关性研究

探讨不明原因自然流产患者蜕膜NK细胞杀伤活性与其细胞表面活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D表达的相关性。选取21例早孕不明原因自然流产患者为病例组,25例正常早孕人流妇女为对照组,收集两组的蜕膜组织,Ficoll密度梯度离心分离淋巴细胞,MACS磁珠分选CD3-CD56+NK细胞。以K562细胞为靶细胞,用细胞染色及流式细胞技术检测两组蜕膜NK细胞杀伤活性,用流式细胞技术检测两组蜕膜CD56brightCD16-NK和CD56dimCD16+NK细胞上活化性受体NKp46、NKp44、NKp30和NKG2D的表达,并与NK细胞杀伤活性进行相关性分析。结果:(1)早孕蜕膜NK细胞具有杀伤活性;(2)病例组蜕膜NK细胞的杀伤活性较正常对照组显著增强(P=0.014);(3)病例组蜕膜CD56brightCD16-NK细胞中NKp44的表达比正常对照组显著升高(P=0.021);病例组蜕膜CD56dimCD16+NK细胞中NKp46和NKp44的表达比正常对照组显著升高(分别P=0.026,P=0.041);其余活化性受体的表达两组未见明显差异;(4)蜕膜NK细胞杀伤功能与蜕膜CD56brightCD16-NK细胞中NKp44的表达呈显著正相关(r=0.677,P<0.05),和蜕膜CD56dimCD16+NK细胞中NKp46的表达呈显著正相关(r=0.634,P<0.05)。蜕膜NK细胞活化性受体NKp46和NKp44表达增加,从而使蜕膜NK细胞的杀伤功能增强可能在不明原因自然流产的发病中起重要作用。     

胃癌病人血中NK及K细胞数量及活性的测定

<正> 本文报告胃癌患者外周血Leu-11b~+,Leu—7~+细胞百分率以及NK细胞和ADCC活性的测定及其差异。 材料和方法 一、检测对象:正常对照组30名,年龄26～60岁。男性18名,女性12名。胃癌组:30例,均经病理证实,男性20例,女性10例,年龄30～74岁。     

CD16~-的NK细胞亚群的非抗体依赖细胞的细胞毒作用

低亲和力IgG 受体,即CD16(FcrRⅢ),几乎在所有外周血NK 细胞中得到表达,而CD3~-、CD16~-、CD56~+的NK 细胞小亚群在外周血淋巴细胞中含量低于1%,当用IL-2进行体内治疗时,这类亚群扩增明显。作者为了进一步分析CD16~-这类亚群的细胞功能。首先得到了一系列NK 克隆,对其中一个克隆(TNKZ)进行了研究,它表现出大颗粒淋巴细胞形态,且有正常的NK 活性,由于这个克隆缺少CD16的表达,因而不执行ADCC 作用,CD16的McAb 对NK 依赖的靶细胞不产生细胞毒活性。这些     

EBV阴性侵袭性NK细胞白血病/淋巴瘤的临床、病理及分子遗传学特征

<正>侵袭性NK细胞淋巴瘤(ANKL)是一种系统性NK细胞肿瘤,与EB病毒(EBV)有关。EBV阴性的ANKL临床罕见,且提示具有惰性的生物学行为。作者报道7例EBV阴性ANKL的临床病理、免疫表型及分子遗传学特征。7例均为成人,年龄22~83岁,中位年龄63岁;男∶女为2.5∶1;     

HIV感染者外周血CD8~+NK细胞百分比及功能变化研究

目的探讨HIV感染者外周血中CD8~+NK细胞百分比的变化与表达CD107a的能力。方法选取未经高效抗逆转录病毒疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART)治疗的HIV慢性感染者,感染者按照CD4~+T细胞数量分成高、低2组,用流式细胞仪检测其外周CD8~+NK细胞百分比的变化情况和CD107a的表达量。结果 HIV感染者外周血中CD8~+NK细胞的百分比明显低于正常人(P=0.011 1),CD8~+NK细胞的百分比与病毒载量成明显的负相关关系(r=-0.541 9,P=0.045 3)。K562细胞系刺激后,CD4~+T细胞高组CD107a的表达量明显增高。结论具有抗病毒作用的CD8~+NK细胞在HIV感染后百分比下降;CD8~+NK细胞水平高以及功能较强者HIV病毒水平相对降低,CD4~+T细胞数量相对高。     

NK细胞对激素敏感型肾病综合征患儿预后判断的价值

为探讨NK细胞在肾病综合征患儿中的临床价值,选取激素敏感型原发性肾病综合征(steroid-sensitive nephrotic syndrome, SSNS)患儿共63例,对照组30例,采用流式细胞术检测患儿治疗前后淋巴细胞亚群(CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、CD19~+)和NK细胞,并在患儿出院后对其进行随访。结果显示治疗后患儿NK细胞水平显著升高(P0.05),NK细胞水平与患儿预后显著相关。提示激素治疗能够显著影响SSNS患儿体内NK细胞的水平, NK细胞可以作为一个评估SSNS患儿预后的指标。     

结肠癌患者单核或树突状细胞MICA的表达及其与NK细胞活性的关联

目的:观察结肠癌患者单核或树突状细胞是否表达MHCⅠ类相关抗原A(MICA),并分析MICA+单核细胞的频率是否与患者体内NK细胞的活性相关联。方法:首先利用流式细胞仪检测MICA在外周血单核细胞和由单核细胞诱导而来树突状细胞(DCs)上的表达;并用IL-15和IFNα-刺激树突状细胞,观察MICA表达的变化;然后检测患者外周血NKG2D+、CD16+、CD69+NK细胞的频率及NK细胞的杀伤活性;最后分析MICA+单核细胞的频率是否与NK细胞表达NKG2D及其杀伤活性关联。结果:与健康个体相比,结肠癌患者MICA+单核细胞的频率无显著变化。未成熟DCs表达MICA,但受IL-15和IFNα-刺激后,结肠癌来源的DCs表面MICA的表达无显著上调。结肠癌患者外周血NKG2D+、CD69+NK细胞的频率显著降低,NK细胞的杀伤活性显著降低,而CD16+NK细胞的频率无明显变化。结肠癌患者MICA+单核细胞的频率与NK细胞表达NKG2D无明显关联,但与NK细胞杀伤靶细胞时CD107a的表达正相关。结论:结肠癌患者体内单核细胞表达MICA与NK细胞表达NKG2D无关,但高频率MICA阳性的单核细胞与NK细胞的抗肿瘤活性正相关。     

脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离,培养,NK细胞活性和T细胞表型研究

本文应用酶消化和不连续密度梯度离心法,从9例原发性脑胶质瘤手术切除的瘤组织中分离出胶质瘤浸润淋巴细胞(GIL),在含IL-2培养液内培养4周,GIL 平均扩增48.4倍,最高达118倍;新制备GIL 的NK 活性极低,经过1周培养,NK 活性明显升高;新制备GIL 中CD_3~+细胞为71.0士11.9%,其中CD_8~+细胞多于CD_4~+细胞。     

细粒棘球蚴感染中阻断TGF-β1受体对淋巴细胞的影响

目的:观察TGF-β1对细粒棘球蚴体外与BALB/c小鼠T淋巴细胞培养的影响。方法:阻断剂组:BALB/c小鼠脾细胞+细粒棘球蚴+SB525334共培养;对照组:BALB/c小鼠脾细胞+细粒棘球蚴+PBS共培养;空白对照:BALB/c小鼠脾细胞+RPMI-1640培养基+SB525334共培养。方法:48 h收集淋巴细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+T细胞的数量、NK细胞的数量及其活性受体NKG2D的表达;乳酸脱氢酶法检测NK细胞的杀伤活性。结果:体外阻断TGF-β1受体后,引起细粒棘球蚴介导的CD4+T细胞数量升高、CD8+T细胞数量降低、CD4+/CD8+T细胞比值升高、CD4+CD25+T细胞数量减少、NK细胞活性受体NKG2D的表达增加、NK细胞对靶细胞Yac-1的裂解率增加和NK细胞活性及其活性受体NKG2D成正相关。结论:体外阻断TGF-β1受体可提高T淋巴细胞免疫,从而抵制细粒棘球蚴的感染。     

外周血免疫细胞表达水平对肺癌患者生存期的影响

目的:探讨肺癌患者外周血中免疫细胞的表达水平与预后的相关性。方法:采用流式细胞仪对2012年1月～2016年12月间山西省肿瘤医院住院且有免疫检测的10 285例肺癌患者外周血中T细胞亚群、NK细胞以及B细胞的表达水平进行检测。通过Cox回归模型确立影响肺癌患者的独立预后因素,以生存曲线描述生存率。结果:患者的平均生存时间为18.8个月。其中3、12、24、36、48和60个月的生存率分别为92.1%、64.5%、41.6%、30.7%、25.0%和21.9%。单因素分析显示,影响患者预后的因素包括性别、年龄、CD3~+T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD56~+NK细胞和CD19~+B细胞。多因素分析得出影响患者预后的独立因素包括性别、年龄、CD4~+细胞、CD8~+细胞和CD19~+细胞。生存曲线图显示CD3~+细胞、CD4~+细胞、CD8~+细胞、CD56~+细胞和CD19~+细胞的表达分别处于50%～80%、≥30%、30%、≤30%、10%～20%之间时,患者的预后生存率最高。结论:肿瘤在发生发展过程中与机体的免疫功能有十分密切的相互作用。当外周血中的免疫细胞处于一个平衡状态时,肺癌患者的预后最佳。     

乏氧对人外周血NK细胞NKG2A、NKG2D及CD44表达的影响

目的： 观察乏氧微环境对人外周血自然杀伤细胞(NK)表面自然杀伤细胞2族成员A(NKG2A)、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)及CD44分子表达的影响,探讨乏氧抑制NK细胞杀伤活性的分子机制。方法: 采用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞（PBMC）,贴壁去除单核细胞获得外周血淋巴细胞（PBL）,分别置常氧（21％O2）、乏氧（1％O2）以及有或无人重组白细胞介素2(rhIL-2)（1×106 U/L）刺激条件下培养16 h,流式细胞术（FCM）检测不同 NK细胞亚群 NKG2A、NKG2D以及CD44分子的表达。结果: 常氧条件,人外周血CD3-CD56+NK细胞NKG2A、NKG2D表达的阳性率分别为16.16%和78.45%,乏氧条件下二者表达的阳性率分别为15.16%和71.08%;rhIL-2上调NKG2A和NKG2D的表达,乏氧不影响 rhIL-2对NKG2D、 NKG2A的上调作用;rhIL-2显著上调NK细胞CD44的表达,乏氧抑制CD44的表达（P<0.05）。结论: 乏氧下调外周血NK细胞表面受体NKG2D及CD44的表达,但对NKG2A的表达无显著影响。由此提示,NKG2D及CD44分子可能在乏氧引起的NK细胞杀伤活性抑制中具有重要作用。     

急性髓细胞白血病患者外周血淋巴细胞亚群的特征及临床意义

目的通过检测急性髓细胞白血病患者外周血各淋巴细胞亚群的分布,探讨该类患者免疫功能状况。方法通过流式细胞术检测健康对照组(n=20)、急性髓细胞白血病初发患者(n=31)及完全缓解期患者(n=31)外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、CD16+CD56+NK细胞比例;通过细胞杀伤实验分析NK细胞和γδT细胞的杀伤活性以及与Treg的关系。结果与对照组相比,初发白血病患者和完全缓解患者外周血中CD4+T细胞、CD8+T细胞比例无明显差异,但CD4+CD25+Treg比例明显增高,TCRγδ+T细胞和CD16+CD56+NK细胞比例明显下降。初发病患者NK细胞和γδT细胞具有杀伤活性,但Treg能明显抑制其杀伤活性。结论急性髓细胞白血病患者外周血γδT和NK细胞虽具有杀伤功能,但比例明显下降,Treg对其杀伤功能具有抑制作用。     

妊娠早期蜕膜CD56~+NK样细胞杀伤活性的研究

分离早孕妇女蜕膜CD56~+NK样细胞,采用改进的乳酸脱氢酶(LDH)释放试验,比较蜕膜与外周血NK细胞杀伤活性。结果发现:蜕膜NK样细胞杀伤活性低于孕妇外周血及正常育龄妇女外周血NK细胞。提示妊娠早期蜕膜局部NK细胞活性受到抑制,可能有利于滋养细胞侵袭和胎盘形成。     

用核仁镀银法检查甲状腺细胞的功能活性

０１４用核仁镀银法检查甲状腺细胞的功能活性［俄］／ＭａｍａｅｂＨＨ…／／－１９９４，（２）．－５８～６１用镀银染色法检查核仁嗜银蛋白，研究甲状腺细胞核仁生成区活性。检查甲状腺疾病患者１２５例，男１３例，女１１２例。年龄１９～８４岁，平均４０岁，其中中...     

小细胞和非小细胞肺癌晚期患者NK细胞表达的差异

目的:探索小细胞和非小细胞肺癌晚期患者NK细胞是否存在差异,并为治疗提供参考。方法:选取肺癌晚期患者共65例,其中包括小细胞肺癌14例,非小细胞肺癌51例以及20例健康对照。用流式细胞仪检测研究对象外周血淋巴细胞表面CD3-CD16+CD56+的表达情况。结果:小细胞肺癌晚期的患者较健康对照NK细胞显著升高;非小细胞肺癌晚期的患者较健康对照NK细胞无显著变化;肺癌晚期患者外周血NK细胞表达的百分比与CD4+T细胞表达的百分比呈负相关性。结论:小细胞肺癌晚期患者NK细胞升高,天然免疫可能成为已严重受损的细胞免疫的有力补充,但有待于进一步的研究。     

HIV-1感染对NK细胞及其活化性受体CD226表达的影响

目的　评价HIV 1感染对NK细胞以及CD2 2 6 /PTA1表达的影响。方法　采用流式细胞术分析了 2 7例HIV 1感染者以及 16例健康献血员NK细胞相关膜抗原 ,用HIV 1SF3 3 株体外感染外周血单个核细胞 (PBMC) ,进行NK细胞活化表达CD2 2 6的动态观察。结果　 2 7例HIV 1感染者均处于无症状感染期 ,CD16 + CD3-、CD8+ CD3-细胞亚群百分率和绝对数均低于健康对照 (P <0 .0 5 ) ,CD16 + CD3-和CD8+ CD3-细胞中表达CD2 2 6的细胞比例显著高于对照 (P <0 .0 5 )。HIV 1和PHA均可体外诱导CD2 2 6在CD16 + NK细胞表面高水平表达。结论　CD2 2 6分子可能参与HIV 1感染诱导的NK细胞活化机制。     

淋巴结细胞毒性自然杀伤/T细胞淋巴瘤

目的 探讨淋巴结细胞毒性自然杀伤（NK/T）细胞淋巴瘤的临床病理学特征。方法 对5例淋巴结细胞毒性NK/T细胞淋巴瘤作临床病理观察及随访、用ISAB法做免疫表型分析（CD35RO、CD8、CD56、CD30、CD20、TIA-1）及EBER1/2原位杂交检测。结果 淋巴结细胞毒性NK/T细胞淋巴瘤的瘤 理组织学特点为：（1）淋巴结结构明显破坏并被瘤细胞所取代：（2）瘤细胞呈多形性;（3）我数肿瘤细胞表达淋巴细胞分化抗原。5例中CD45RO阳性的有4例,其中3例瘤细胞同时呈CD56阳性;1例为无标记细胞性;所有病例的TIA-1和EBER均为阳性。结论 淋巴结细胞毒性NK/T细胞淋巴瘤有特征性的形态改变和免疫表型。提示肿瘤进展及预后不良。     

健康人骨髓CD34~+造血干/祖细胞衰老与年龄的相关性研究

目的探讨增龄过程中健康人CD34~+造血干/祖细胞(CD34~+HSC/HPCs)衰老的变化过程。方法由重庆医科大学附属第一医院血液科骨穿室提供正常人骨髓9例,将其分为青年组3例(女性31岁、男性26岁、男性28岁)、中年组3例(男性59岁、男性57岁、女性52岁)和老年组3例(男性70岁、男性70岁、女性62岁)。提取骨髓单个核细胞(BMNCs)后,免疫磁性细胞分选法分离纯化CD34~+细胞群,流式细胞术检测细胞纯度,台盼蓝染色检测细胞活性,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察各年龄组阳性细胞百分比;造血干/祖细胞混合集落培养比较各年龄组CD34~+造血干/祖细胞形成混合集落能力。结果分选前每106个BMNCs中CD34~+细胞群比例为(1. 31±0. 54)%;免疫磁性分选后每106个细胞中CD34~+细胞群比例为(92. 5±0. 39)%。各年龄组人骨髓CD34~+造血干/祖细胞存活率可达99. 1%以上。人骨髓CD34~+造血干/祖细胞的SA-β-gal染色阳性率出现明显的随增龄变化趋势,老年组明显高于中年组及青年组。CD34~+造血干/祖细胞形成的干细胞混合集落能力随年龄增加降低。结论随年龄增加人骨髓CD34~+造血干/祖细胞出现明显衰老,表现为造血增殖能力下降,可能是造成一些老年人血液学疾病的原因。     

Smad4基因条件性敲除对T细胞发育的影响

目的:探讨特异性地在T细胞中敲除Smad4基因后,对T细胞发育的影响。方法:制备小鼠胸腺单细胞悬液,通过流式细胞术检测表面标记分子CD4、CD8、TCRβ、NK1.1、γδT CR和核因子Foxp3的表达情况。结果:Smad4在T细胞中的缺失不影响CD4~-CD8~-、CD4~+CD~8+、CD4~+SP、CD8~+SP、TCRβ~(hi)、NK1.1~+TCRβ~-、NK1.1~+TCRβ~+、CD8~-γδT~+、CD8~+γδT~+、CD4~+Foxp3~+ nTreg等细胞亚群在胸腺细胞中的比例与绝对数。结论:Smad4基因在T细胞中的条件性敲除不影响T细胞的发育。