人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究—细胞形态，生长曲线及碱性磷酸酶活性测定

目的：建立人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外培养模型并对其生物学特性作初步探讨。方法．;采用组织块法常规条件下分别进行牙龈和牙周韧带成纤维细胞的培养,通过光镜,透射电镜,生长曲线及碱性磷酸酶测定等手段对其部分生物学特性进行研究。结果：两种培养的原代及传代细胞在光镜下细胞排列及结构无明显判别,传代培养时牙龄纤维细胞有接触抑制现象,而牙周韧带成纤维细胞则可呈复层生长,牙周韧带成纤维细胞排列方向性较明显,生长曲线表明牙周韧带成纤维细胞增殖活性高于牙龄成纤维细胞;碱性磷酸酶活性测定及染色法显示两者有明显的判别。结论：体外培养的两种细胞在形态及排列上相似,但百细胞亚型的组成上存在差异。     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究——细胞形态、生长曲线及碱性磷酸酶活性测定

目的 :建立人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外培养模型并对其生物学特性作初步探讨。方法 :采用组织块法常规条件下分别进行牙龈和牙周韧带成纤维细胞的培养 ,通过光镜、透射电镜、生长曲线及碱性磷酸酶测定等手段对其部分生物学特性进行研究。结果 :两种培养的原代及传代细胞在光镜下细胞排列及结构无明显差别 ,传代培养时牙龈成纤维细胞有接触抑制现象 ,而牙周韧带成纤维细胞则可呈复层生长 ,牙周韧带成纤维细胞排列方向性较明显 ,生长曲线表明牙周韧带成纤维细胞增殖活性高于牙龈成纤维细胞 ;碱性磷酸酶活性测定及染色法显示两者有明显的差别。结论 :体外培养的两种细胞在形态及排列上相似 ,但在细胞亚型的组成上存在差异。     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的比较研究

目的：研究人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的差异。方法：用组织块法培养同一患者的牙龈和牙周韧带成纤维细胞，取第4-8代细胞用矿化培养液长期培养，倒置显微镜下观察矿化情况，von Kos-sa染色显示钙盐沉积，生化法测定各组碱性磷酸酶活性，扫描电镜及X线能谱法分析矿化结节中钙磷比例。结果：倒置显微镜下观察牙周韧带成纤维细胞可呈复层生长，形成肉眼可见的白色结节，von Kossa染色显示结节内有钙盐沉积，碱性磷酸酶活性测定表明随着矿化培养时间的延长牙周韧带成纤维细胞组ALP活性比牙龈成纤维细胞组增高明显，扫描电镜下表明结节处电子反射增强，X射线能谱分析显示钙化结节内的钙磷比例与矿化组织相似；牙龈成纤维细胞及对照组体外不能形成钙化结节。结论：人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力不同。     

EGFR在人牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中表达的研究

成纤维细胞是人牙龈及牙周膜中的主要细胞类型 ,在维持牙龈组织的结构完整、牙周膜的更新、牙周组织损伤后的再生及牙周组织自身结构的稳定等方面具有重要作用。两种部位来源的成纤维细胞虽然形态相似 ,但功能上明显不同 ,目前尚无明确鉴定它们的细胞标记物。为此 ,我们研究了表皮生长因子受体 (ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＥＧＦＲ)在人牙龈成纤维细胞 (ｇｉｎｇｉｖａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ,ＧＦ)和牙周韧带细胞 (ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｃｅｌｌ,ＰＤＬＣ)中的不同表达。一、材料与方…     

两种方法培养人牙周膜成纤维细胞成功率的比较

目的探讨酶消化组织块法及传统组织块法培养人牙周膜成纤维细胞的成功率,并比较两种方法获得的细胞在形态学和生物学特性上的差异。方法分别采用酶消化组织块法及传统组织块法培养人牙周膜成纤维细胞各20份,观察细胞形态并通过免疫细胞化学染色法检测波形蛋白、角蛋白的表达情况,比较两种培养方法的成功率。结果酶消化组织块法成功率为65%,传统组织块法为30%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。两组细胞均以梭形为主,波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,符合人牙周膜成纤维细胞的形态学特征和生物学特性。结论酶消化组织块法培养成功率高于传统组织块法。两种方法获得的细胞在形态学和生物学特性上无明显差异。     

三种太金属表面处理方法对牙周膜成纤维细胞附着和生长的影响

目的：比较三种不同表面处理方法对牙周膜细胞在钛金属表面附着和生长影响。方法：将三种经不同方法表面处理的钛金属（纯钛,钛75,钛表面氮化处理）试件放在12孔培养板内,取生长良好的第5代人牙周膜成纤维细胞（PDLF）接种在试件表面,分别在接种后24h和72h进行贴壁细胞计数,并在扫描电镜下观察细胞在金属表面附着情况.结果：接种24h后纯钛表面的贴壁细胞数多于钛75金属表面的细胞数（P＜0．05）,但在接种后72h时这种差异消失,不论接种后24h或72h钛表面氮化处理金属表面的细胞数都明显少于另外两种金属表面的细胞数（P＜0．05）,扫描电镜结果表明PDLF在纯钛和钛75表面伸展,而在钛表面氮化处理的金属表面细胞基本不伸展。结论：人PDLF在纯钛,钛75表面的生物性附着优于在表面氮化处理的钛金属表面。     

牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞前列腺素含量分析

作者对体外培养的人牙龈成纤维细胞（ＧＦ）和牙周韧带细胞（ＰＤＬＣ）采用免疫组化ＡＢＣ染色及显微分光光度法分析，测定ＧＦ和ＰＤＬＣ中前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）、６－酮一前列腺素Ｆ１ａ．（６－Ｋ－ＰＧＦ１ａ）和血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）含量，以探讨其与牙周炎的关系，结果表明ＧＦ的ＰＧＥ２吸光度为０．２５±０．０３，６－Ｋ－ＰＧＦ１ａ的吸光度为０．２０±０．０３，与对照组相比均有非常显著性差异；ＰＤＬＣ的吸光度分别为ＰＧＥ２０．２１±０．０２、ＴＸＢ２０．１６±０．０３和６－Ｋ－ＰＧＦ１ａ０．１３±０．０２，与对照组相比均有非常显著性差异。表明ＧＦ和ＰＤＬＣ均可分泌一定量的ＰＧＥ２、ＴＸＢ２和６－Ｋ－ＰＧＦ１ａ，但分泌的量略有差异，提示ＧＦ和ＰＤＬＣ可通过分泌ＰＧ，影响牙龈炎症变化和牙周组织再生。     

人牙周膜成纤维细胞体外培养的研究进展

人牙周膜成纤维细胞是牙周细胞生物学、药理学、毒理学和牙周组织工程学研究的基础,对口腔各个领域意义重大。由于受到牙周组织的解剖结构和取材数量的限制,牙周膜成纤维细胞的体外培养较为困难,因此本文就人牙周膜成纤维细胞的体外培养方法和应用等研究进展作一综述。     

尼古丁对人牙周韧带成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的：研究尼古丁（nicotine）对人牙周韧带成纤维细胞（periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）增殖和细胞周期的影响.方法：用不同浓度尼古丁分别在不同时间作用于PDLFs,用MTF比色法及流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测细胞增殖和细胞周期.结果：尼古丁能明显抑制PDLFs增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性;FCM结果表明,经尼古丁作用后,PDLFsG0-G1期细胞百分比显著增加（P＜0.01）,G2-M期细胞、S期细胞百分比显著下降（P＜0.01）,反映细胞增殖和性的增殖指数PI值（S＋G2M）随着浓度的递增而下降.结论：尼古丁可抑制PDLFs增殖并减少细胞DNA合成.     

牙龈成纤维细胞及牙周韧带成纤维细胞细胞标记物的研究现况

发育中的牙周组织，间充质为疏松的结缔组织，含有大量的星网状细胞及丰富的细胞外基质，其星网状细胞为许多成熟牙周组织细胞的前体细胞。口腔上皮诱导胚胎期颌骨中间充质细胞形成具有成牙特性的细胞，牙滤泡的间充质则具有分化成成牙骨质细胞、成骨细胞和牙周韧带中的成纤维细胞(periodontal ligamentcell，PDLC)。     

人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长特性

目的：探讨人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长特性。方法：用倒置显微镜和MTT法观察人牙周膜成纤维细胞在无血清培养液中的生长和增殖变化。结果：人牙周膜成纤维细胞在无血清培养条件下可以生长的增殖，但与含血清培养液相比，其增殖速率变缓，分化明显。结论：无血清培养液可应用于人牙周膜成纤维细胞的体外培养和实验研究中。     

苯妥英钠对人牙周膜成纤维细胞生物学活性影响的实验研究

目的研究苯妥英钠（PHT）对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）生物学功能的影响,并探讨其用于促进牙周组织再生的可能性。方法将不同质量浓度的PHT（1、5、20、100、500、2 500 mg/L）加入体外培养的第4代hPDLF,检测其对细胞增殖活性、蛋白合成、碱性磷酸酶（ALP）活性的影响;Von Kossa染色法检测PHT（20、100、500 mg/L）对第4代hPDLF矿化结节形成能力的影响;应用ELISA法测定PHT（20、100 mg/L）对第3代hPDLF中骨形态发生蛋白- 2（BMP- 2）表达的影响。结果在20、100 mg/L的质量浓度时,PHT可显著促进hPDLF的增殖及分化（P<0.01）;在质量浓度100 mg/L时,PHT可增强hPDLF的蛋白合成（P<0.05）;同时,PHT在质量浓度100 mg/L可显著促进hPDLF的矿化能力及BMP- 2的表达（P<0.01）。但高质量浓度（2 500 mg/L）的PHT则严重抑制细胞的生物学活性。结论适当质量浓度的PHT对hPDLF的增殖和分化有促进作用,但过高质量浓度的PHT具有细胞毒性,不利于牙周组织的修复和再生。     

NGF mRNA在人牙周膜成纤维细胞的表达

目的:研究牙周组织中是否存在神经生长因子(NGF)的表达。方法:采用RT-PCR方法研究培养的人牙周膜成纤维样细胞(hPDLF)是否表达NGF mRNA。结果:通过RT-PCR技术,在培养的hPDLF中扩增出NGF mRNA阳性产物。结论:通过离体研究初次显示培养的人牙周膜成纤维样细胞(hPDLF)表达NGF mRNA。     

周期性牵张力加载下人牙周膜细胞中血管内皮生长因子表达变化的研究

目的：观察周期性牵张力作用下，体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts，HPLFs)中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)表达的变化，以探讨机械力介导下牙周组织改建的机制。方法：通过体外细胞培养加载系统，采用周期性牵张力(每分钟6个循环，12％形变量)加载l、3、5、7d，用免疫组化和原位杂交技术，观察VEGF在HPLFs中的表达。结果：HPLFs在体外表达VEGF，其蛋白水平及mRNA水平的表达从加力ld开始升高，5d达到高峰，在加力7d开始下降。结论：在一定条件下，周期性牵张力可显著影响HPLFs VEGF的蛋白和mRNA水平的表达，进一步证实机械力作用下，VEGF参与了牙周组织改建，在正畸牙齿移动的机制中具有重要意义。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养,MTT方法检测细胞增殖情况;并对细胞进行矿化诱导,检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内,与细胞增殖成正比,而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下,碱性磷酸酶活性明显增加,在联合应用bFGF的情况下,100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同,在一定浓度条件下,低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

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目的 研究不同剂型亚甲基蓝(methylene blue,MB)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)的毒性作用.方法 将体外培养的HPDLFs分别加入两种不同剂型MB中(水剂型和混合剂型,均设置5组浓度,分别为0.1、1.0、10、25、50 μmol/L),孵育10 min,波长670 nm半导体激光照射5min,输出功率40 mW,功率密度10 mW/cm2.光照结束后继续培养24h,用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞毒性,光镜下观察细胞形态学变化.结果 两种不同剂型MB介导的PDT对体外培养的HPDLFs的毒性作用未见明显差异(P＞0.05).当MB浓度≤25 μmol/L时,细胞毒性为1～2级,光镜下观察细胞未发现明显形态学改变;浓度＞ 25 μmol/L时,细胞毒性为3级,并可观察到细胞皱缩、变圆.结论 PDT对HPDLFs的毒性作用受光敏剂浓度影响,适当浓度的两种剂型MB介导的PDT对体外培养的HPDLFs影响轻微,且两种剂型MB介导的PDT对体外细胞毒性无差异.     

金栀含漱液对人牙周膜成纤维细胞毒性的实验研究

目的：采用MTT法评价中药制剂金栀含漱液、氢氧化钙药尖及FC对人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）的细胞毒性及毒性的可逆性。方法：体外培养HPDLF，选用金栀含漱液作为实验组（A组），氢氧化钙药尖浸提液为阴性对照组（B组），FC（C组）为阳性对照组，培养基作为空白对照组，分别与HPDLF接触1、3、5、7d时用Mr丌法测细胞增殖率及接触第1天的回复度。结果：A组及B组对HPDLF增殖无显著性抑制作用，细胞毒性可逆；C组对HPDLF增殖有显著的抑制作用，细胞毒性不可逆。FC组与金栀含漱液组和氢氧化钙药尖组相比抑制作用均有显著性差异，后两组的作用与培养基相当。结论：中药制剂金栀含漱液对HPDLF无明显细胞毒性作用。     

雌激素对牙周膜细胞生物学性质的影响

目的：明确雌激素对体外牙周膜成纤维细胞迁移、增殖和碱性磷酸酶的影响，以探讨雌激素对牙周组织改建的影响。方法：SD大鼠来源的牙周膜成纤维细胞经传代培养至第四代，建立体外创伤模型，分别在普通培养基和含雌激素的培养基中培养，观察测量细胞迁移情况，运用MTT、酶联检测仪测定细胞的增殖速度，对细胞的ALP进行提取和测定。结果：MTT结果硅示加入雌激素对该细胞的增殖无明显影响；在含雌激素的培养基中成纤维细胞的迁移速度加快；同时牙周膜成纤维细胞的ALP表达娃著提高。结论：雌激素能明显促进牙周膜成纤维细胞的迁移，促进其分化。     

同一个体成骨细胞和牙周韧带成纤维细胞的原代培养

目的：探索用简单，高效的方法对同一个体的成骨细胞和牙周韧带成纤维细胞进行原代培养，以便迅速建立相关的体外研究模型，为进一步研究两种细胞的相互作用奠定基础。方法：实验用酶消化法结合组织块培养法获取大鼠牙周韧带成纤维细胞，用组织块移行生长法培养成骨细胞，并对细胞培养中取材的对象和部位，酶消化时间，污染的控制等进行探讨。结果：发现所获得的细胞符合成骨细胞和成纤细胞的形态特征和生物学特性，且生长良好。结论：用酶消化法结合组织块培养法培养大鼠牙周韧带成纤维细胞，其方法可行，结果可靠。     

人牙周膜体外分离培养及其成骨表型的研究

目的：体外培养人牙周膜细胞（human periodontal ligament fibroblasts hPDLFs）,并对其成骨表型特征进行研究。方法：采用胶原酶消化法获得大量成活率高的人牙周膜细胞。在DMEM培养基中进行原代及传代培养,免疫组化方法检测细胞波形丝蛋白及角蛋白的表达,鉴定细胞。使用矿化液诱导,然后应用碱性磷酸酶活性检测、Von Kossa染色等方法观察hPDLFs在矿化液作用下生物学特性的改变。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。矿化诱导5d后,有部分hPDLFS转化为成骨样细胞,碱性磷酸酶活性显著升高,诱导20d后可见矿化结节形成。结论：酶消化法可以快速得到大量hPDLFs,且hPDLFs具有一定的成骨表型特征。