胶质母细胞瘤中CD133阳性细胞的分布与组织微血管增殖的相关性

目的 观察胶质瘤干细胞标记物CD133和血管内皮细胞标记物CD34在胶质母细胞瘤及瘤周不同部位的表达情况,探讨胶质瘤干细胞在恶性胶质瘤中的侵袭迁移规律.方法 收集52例胶质母细胞瘤病人的组织标本,每例标本分别取肿瘤中心组织、肿瘤和水肿交界区组织及肿瘤周围水肿区组织3部分.采用免疫组织化学染色和Western印迹法检测CD133在各组标本中的表达情况,采用免疫组织化学染色法检测CD34-微血管在组织标本中的分布,并分析两者的相关性.结果 CD133在对照组组织中不表达,而在肿瘤和水肿交界区、肿瘤中心区,瘤周水肿区组织中免疫组化染色表达分值分别为7.3±1.4、5.2±1.1、2.7±1.0,光学显微镜下可见,在交界区CD133+细胞分布密集,往往形成以微血管为中心的假菊型团样结构,在中心区CD133+细胞常在微血管附近簇状分布,在水肿区CD133+细胞以散在分布为主;Western印迹检测吸光度值分别为0.79±0.03、0.38±0.01、0.20±0.04;各区域间的差异有统计学意义(P＜0.05).在高倍视野下,肿瘤和水肿交界区、肿瘤中心区、肿瘤周围水肿区、对照组组织中CD34-微血管密度(个/视野)分别是31.3±4.0、21.8±2.6、15.3±2.4、4.7±1.5;各组之间的差异有统计学意义(P＜0.05).CD133的表达水平和组织微血管的分布呈正相关(r=0.948,P＜0.05).结论 胶质瘤干细胞向微血管生成丰富的交界区富集,认为他和组织微血管之间可能存在密切的"营养"联系;胶质瘤干细胞在胶质母细胞瘤中的分布特征可能与其侵袭迁移有关.

Abstract：

Objective To investigate the expression of CD133 and CD34 in different parts of glioblastoma and its margin and explore the invasive path of glioma stem cells within the tumor and surrounding tissue.Methods The surgical specimens were collected from the core of mass,junctional zones between tumor and peritumoral edematous areas and edematous areas in 52 patients with glioblastoma.Immunohistochemical cell staining and Western blot were employed to evaluate the expression of CD133 in different specimens while immunohistochemistry was used to detect the CD34-microvesel postforming.A correlation analysis was performed between them.Results The expression of CD133 was not detected in the control groups while the scores were 7.3 ± 1.4,5.2 ± 1.1,2.7 ± 1.0 in junctional zones,tumor cores and edematous areas with immunohistochemistry and 0.79 ± 0.03,0.38 ± 0.01,0.20 ± 0.04with Western blot respectively.There were significant differences between different groups (P ＜ 0.05).Under light microscope,the CD133-positive cells frequently forming perivascular pseudorosettes were dense in junctional zones and mostly clustered near the microvessels in tumor cores and scattered in edematous areas.At a high magnification (200 ×),the CD34-MVD(/HP) values were 31.3 ±4.0,21.8 ± 2.6,15.3 ±2.4,4.7 ± 1.5 respectively in junctional zones,tumor cores,edematous areas and control tissues.Significant differences were also found in these groups(P ＜ 0.05).The expression level of CD133-positive cell was positively correlated with the distribution of CD34-microvessels (r =0.948,P ＜ 0.05).Conclusion Glioma stem cells tend to assemble in the junctional zones where the microvessels are enriched.There is probably an intimate nourishing relationship with the microvessels.The distribution of glioma stem cells may be related with the invasiveness within glioblastoma.     

脑微血管内皮细胞、星形胶质细胞共同培养建立血脑屏障模型

目的：建立能够模拟在体血脑屏障的体外模型。方法：培养大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞，用免疫组织化学染色的方法鉴定细胞，分别接种两种细胞于多聚酯多孔膜的两面，相关显微镜及HE染色观察细胞在多聚酯膜上的生长情况。结果：培养的脑微血管内皮细胞多数为梭形铺路石样外观，而星形胶质细胞呈具有多个突起的典型形态，免疫组织化学染色鉴定细胞的纯度分别在90％和95％以上，两种细胞能够以单层细胞的形式生长于多聚酯多孔膜的两面。结论：通过脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞共同培养能够形成与在体血脑屏蔽类似的结构，是一种建立血脑屏障模型的可行方法。     

胶质母细胞瘤组织中TRAIL受体表达的研究

目的研究TRAIL受体(TRAIL receptor,TRAIL-R)在胶质母细胞瘤中的表达,并探讨其临床意义。方法联合采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测胶质母细胞瘤及正常脑组织中TRAIL-R的表达。结果25例胶质母细胞瘤均表达死亡受体(death receptor,DR)4和DR5,11例(44.0%)表达诱骗受体(decoy receptor,DcR)1,5例(20.0%)表达DcR2,而20例正常脑组织普遍表达DcR1和DcR2。胶质母细胞瘤组织中DR的高表达以及DcR的低表达不同于正常脑组织中DR的低表达及DcR的高表达,两者间差异有显著性(P<0.01)。RT-PCR显示,25例胶质母细胞瘤组织分别有22例(88.0%)DcR1和15例(60.0%)DcR2在mRNA水平呈阳性表达,DcR在转录水平的表达明显高于翻译水平(P<0.01)。结论胶质母细胞瘤中普遍存在DR的高表达和DcR的低表达,DcR在胶质母细胞瘤中限制性表达的调控位于转录后水平。这可能为胶质母细胞瘤的凋亡诱导治疗提供新的靶点和策略。     

复发胶质母细胞瘤治疗进展

胶质母细胞瘤即使经过最大限度的手术切除及规范放化疗,仍有极高的复发概率;因而针对日益增多的复发胶质母细胞瘤患者,如何达到有效治疗及改善预后一直是神经肿瘤学的巨大挑战。本文拟从多个方面综述现有的多种针对复发胶质母细胞瘤的治疗方式,并对未来可能治疗方向进行预测。     

脊髓胶质母细胞瘤一例报告

脊髓的星形细胞瘤,特别是胶质母细胞瘤(星形细胞瘤Ⅲ～Ⅳ级),非常罕见。黄文清等总结了国内12个地区近20年的中枢神经系统肿瘤25,122例。其中有病例资料的椎管内肿瘤2355例,胶质母细胞瘤13例,占0.55％。 本室自建国以来至1983年4月共做了2441例尸体解剖,只发现1例脊髓胶质母细胞瘤(星形细胞瘤Ⅲ级)。现报告如下。 病史摘要 朱某,男,10岁,因项背部疼痛,     

大鼠脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养血脑屏障体外模型的建立

[目的]建立大鼠脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养血脑屏障体外模型。[方法]采用原代培养脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养方法建立血脑屏障体外模型。[结果]星形胶质细胞与脑微血管内皮细胞共培养可提高血脑屏障特异性酶——γ-谷胺酰胺转肽酶、碱性磷酸酶的表达,提高脑微血管内皮细胞跨细胞间电阻。[结论]成功建立脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养血脑屏障体外模型,而且较单层内皮细胞模型更接近在体状态。     

miR-181家族在胶质母细胞瘤中的表达及其临床意义

目的探讨miR-181家族在人多形性脑胶质母细胞瘤（GBM）中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用茎环实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测40例胶质母细胞瘤中miR-181a、miR-181b、miR-181c、miR-181d的表达水平,并分析其与胶质母细胞瘤临床病理特征的关系。采用慢病毒转染上调胶质瘤细胞系U251miR-181a的表达,分析miR-181a对U251克隆形成、细胞增殖和凋亡的影响。结果miR-181a高表达的GBM患者生存预期明显延长（P＜0.05）;且miR-181a表达水平越高,GBM瘤周水肿越明显（P＜0.05）。O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）阳性组的GBMmiR-181a表达明显高于阴性组（P＜0.05）。上调miR-181a的表达后,U251胶质瘤细胞克隆形成数明显少于对照组（P＜0.05）,且细胞生长抑制在第5天最明显,差异有统计学意义（P＜0.01）;对细胞凋亡起促进作用（P＜0.05）。结论miR-181a表达水平与GBM患者的临床预后相关。miR-181a表达减少与GBM的发生密切相关。     

脑多形性胶质母细胞瘤1例

脑多形性胶质母细胞瘤(Glioblastoma multiforme,GBM)临床常见,而本例为不典型的病例. 1 病例资料 患者,女,74岁,右利手,退休医生.因“突发左侧肢体乏力4h余”于2011年5月15日上午9时入院.患者既往有高血压病病史,曾有上消化道出血、十二指肠球部溃疡等病史,近期无急性发作,但一直未服用抗血小板聚集药物,否认其他特殊病史.     

应用表达谱芯片研究胶质母细胞瘤相关基因的表达及功能

目的:应用基因表达谱芯片筛选研究人脑胶质母细胞瘤发生,发展中相关基因的表达及生物信息分析功能.方法:采用含13 939条基因(设置173个对照点)的BioStarH140S型表达谱芯片;用改良的"一步法"抽提2例正常脑及6例胶质母细胞瘤组织总RNA,制备杂交探针;杂交芯片后用ScanArray4000扫描芯片荧光信号,提取正常脑及胶质母细胞瘤组织差异基因;对差异基因进行生物信息分析,初步分类及Northern杂交研究.结果:按照差异显著标准,在胶质母细胞瘤中共有198条(1.42%)基因表达差异显著,其中77条(0.55%)表达上调,121条(0.87%)表达下调,55条新基因尚未在GenBank登录;生物信息分析发现肿瘤相关基因与细胞信号和传递蛋白、代谢、蛋白翻译合成、细胞骨架和运动、免疫、原癌基因和抑癌基因、细胞周期、细胞凋亡等9类基因密切相关;Northern杂交结果与表达谱芯片一致.结论:基因表达谱芯片可低成本、高通量、高效率筛选胶质瘤相关基因,并为基因群功能研究提供了方向;本研究结果有助于揭示胶质母细胞瘤分子机制,为指导肿瘤的临床诊断、治疗和预后判断提供依据.     

模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响

目的 研究模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响,为防御失重所导致的不良影响寻找新的治疗靶点.方法 采用回转器模拟失重效应干预肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC),回转培养72h,同时设1g对照静置培养组.之后用免疫荧光染色标记细胞骨架肌动蛋白F-actin,并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的改变;光镜下观察单核细胞(THP-1) 与PMVEC 的黏附作用,并计算黏附率;绿色荧光标记的腺病毒感染细胞,荧光显微镜下观察,并在流式细胞仪检测感染效率.结果 回转72h PMVEC 胞质内F-actin 的表达减少,微丝的拉丝感和方向感明显弱化,排列松散,细胞伸展不好,体积变小;模拟失重抑制PMVEC 对单核细胞的黏附,导致黏附率(37.69%±6.5% vs 51.25%±8.2%,P<0.05) 下降;模拟失重组的腺病毒感染率更高(84.55%±5.31% vs 66.32%±5.74%,P<0.05),更容易受到腺病毒感染.结论 模拟失重可以损伤PMVECs 的屏障功能.     

骨髓基质干细胞来源的血管内皮细胞Angiogenin1，Angiogenin2基因的表达

目的：研究骨髓基质干细胞来源的血管内皮细胞表达成熟血管内皮细胞特异性基因,探讨为组织工程血管化提供种子细胞的可行性．方法：从SD大鼠后肢获取骨髓基质干细胞,进行体外扩增培养,取生长良好的第3代细胞体外诱导培养14d．细胞分诱导组（含内皮诱导因子VEGF和bFGF的完全血管内皮细胞条件培养基）和对照组（含M199普通培养基）．MTT法检测两组细胞增殖活性．免疫细胞化学法检测CD31,CD34蛋白的表达;RT—PCR检测细胞血管生成素1（Ang1）、血管生成素2（angiogenin2,Ang2）mRNA的表达．结果：MTT法检测发现,诱导组与对照组在1,2,3,4,5d5个时间点内,其细胞增殖活性无显著性差异（P1d=0．855,P2d=0．053,P3d=0．249,P4d=0．059,P5d=0．174）．免疫细胞化学检测结果CD34,CD31呈阳性表达．RT—PCR结果显示,诱导的血管内皮细胞表达成熟内皮细胞特异性基因Ang1,Ang2．结论：骨髓基质干细胞在一定诱导条件下可以表达血管内皮细胞特异性标志,可作为组织工程血管化理想的种子细胞．     

溶血磷脂酰胆碱对牛视网膜微血管内皮细胞PDGF-B表达的影响

[目的]探讨溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)对牛视网膜微血管内皮细胞(bovine retinal microvascular endothelial cells,BRECs)表达血小板衍生生长因子-B (platelet derived growth factor B,PDGF-B)的影响.[方法]原代培养的牛视网膜微血管内皮细胞分为4组:对照组,LPC(20、40、60 μmol/L)3组;LPC各组根据不同作用时间(6、12、24 h)又分为3个亚组,用PDGF-B试剂盒检测各组内皮细胞培养上清液中PDGF-B蛋白的含量;用RT-PCR法检测PDGF-B mRNA的表达.[结果]LPC可使BRECs表达PDGF-B增加,具有时间和剂量依赖性,LPC(60 μmol/L)作用12h时效果最明显,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]LPC可引起BRECs表达PDGF-B增加,在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)早期保护周细胞.     

大鼠脾脏内皮祖细胞的分离培养及鉴定

目的 研究大鼠脾脏内皮祖细胞(EPC)的体外分离、定向培养及鉴定方法.方法 用密度梯度离心法获取大鼠脾脏中单个核细胞,用含血管内皮生长因子的DMEM培养液培养,每4天更换培养基去除非贴壁细胞,观察经过不同时间培养后的细胞形态、结构和功能变化.结果 培养4 d可发现梭形贴壁细胞,7 d后细胞呈集落状,14 d左右可观察到条索状、网状血管样结构,原代细胞培养21 d左右接近融合并呈典型的鹅卵石样排列.细胞免疫组化显示,培养7 d细胞CD31表达阳性,细胞DiI-LDL摄取和FITC-Lectin结合双阳性,流式细胞仪检测细胞CD133及VEGFR2的阳性率分别为(53.2±3.5)%和(64.5±5.1)%.结论 密度梯度离心法联合贴壁筛选及血管内皮生长因子诱导分化可以获得大鼠脾脏EPC.     

胚胎干细胞来源的内皮细胞构建内皮化血管支架

目的探索胚胎干细胞定向分化为血管内皮细胞,并用于构建内皮化血管支架,为临床心血管疾病治疗提供实验基础。方法采用改良后单层分化体系,血管内皮生长因子（VEGF）作为独立诱导因子定向诱导胚胎干细胞分化为血管内皮细胞,用RT-PCR法检测分化时程各时间点内皮特异性标志的表达,用免疫荧光法检测分化体系中的内皮细胞蛋白标志。将分化成熟的内皮细胞种植于支架表面,构建内皮化血管支架。结果胚胎干细胞全能性分子标志Oct3／4,早期内皮标志Flk-1,Tie-2,PECAM-1,以及成熟内皮标志VE-cadherin在胚胎干细胞分化体系中呈现一定的转录时序性;免疫荧光结果显示分化细胞Flk-1,VE-cadheiin阳性,血管支架被表达VE-cadherin的内皮细胞覆盖。结论我们改良了胚胎干细胞分化为血管内皮细胞的方法,并用于探索内皮化血管支架的构建。     

体外定向诱导人胎盘源间充质干细胞向内皮细胞分化

目的：探讨人胎盘源间充质干细胞（HPMSCS）在特定环境诱导下向内皮细胞分化的潜能，为其促进创伤愈合提供理论依据。方法：在患者知情同意的情况下，从足月分娩产妇娩出的胎盘组织中分离培养HPMSCS，通过倒置显微镜观察其生物学形态，利用流式细胞术检测其表面标志，并通过成骨诱导鉴定及成脂肪诱导鉴定确定其多向分化潜能。对鉴定后的HPMSCS在体外通过内皮细胞诱导液使之向内皮细胞分化，并对诱导后细胞进行细胞化学荧光染色，检测内皮细胞特异性Ⅷ因子（vWF）的表达；采用流式细胞术检测诱导后细胞表面标志，观察是否具有内皮细胞表型。结果：HPMSCS在培养基中持续培养后,形态由成纤维细胞样转变为类似内皮细胞的铺路石样结构。成熟内皮细胞特异的表面标志vWF为阳性表达。流式细胞术检测结果显示：CD31及CD34均有表达。结论：本诱导方案能够诱导HPMSCS出现内皮细胞表型,提示HPMSCS在体外特定条件下具有定向分化为内皮细胞的潜能。     

血管内皮生长因子在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的：研究人脑胶质瘤中血管内皮生长因子（VEGF）的表达及意义。方法：采用免疫组化SABC法检测63例人脑胶质瘤组织中VEGF的表达。结果：63例中50例VEGF染色阳性，阳性率79．4％，VEGF的表达与胶质瘤的恶性程度及肿瘤复发相关（P＜0．01），而与患者的性别、年龄、肿瘤生长部位及肿瘤大小无关（P＞0．05）。结论：VEGF的表达与胶质瘤的恶性程度及复发相关，可作为一项有意义的预后指标。     

脑星形细胞瘤微血管密度和血管内皮生长因子表达的意义

目的：探讨脑星形细胞瘤组织中微血管密度（ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ ｄｅｎｓｉｔｙ,ＭＶＤ）和血管内皮生长因子（ｖａｓｃｒｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的表达及其临床病理意义。方法：采用免疫组化Ｓ－Ｐ法对８３例不同分化的脑星莆细胞瘤组织进行ＭＶＤ和ＶＥＧＦ检测。结果：ＶＥＧＦ在Ⅰ、Ⅱ级、Ⅲ－Ⅳ级星形细胞瘤阳性表达率分别为１９．１％、４８．６％、７４．１％,阳性率     

人海绵状血管瘤内皮细胞特性的体外研究

目的 研究人海绵状血管瘤内皮细胞在形态、表型和功能方面的改变。方法 从人海绵状血管瘤组织分离、纯化血管内皮细胞,并应用透射电子显微镜、流式细胞术、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、明胶酶谱法和激光共聚焦显微镜等技术与人正常人肝窦内皮细胞进行比较分析。结果 与正常人肝窦内皮细胞相比,人海绵状血管瘤内皮细胞的超微结构上,具有异常膨大的内质网和空泡样结构;表型上,高表达整合素αvβ3;功能上,体外形成血管样网络结构异常,并可能与其高表达的内源性血管内皮细胞生长因子、血管生成素1以及基质金属蛋白酶2有关。结论 人海绵状血管瘤内皮细胞在形态、表型和功能特性上都不同于正常肝窦内皮细胞。