三氧化二砷纳米粒对舌鳞癌细胞PI3K/AKT通路的影响

目的：探讨三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌Tca8113细胞作用前后PI3K/AKT信号通路关键因子表达情况。方法：使用MTT的方法观察三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌Tca8113细胞作用后的存活率情况,并用使用Western blot检测方法检测PI3K/AKT信号通路关键蛋白PI3K、p-AKT、AKT的表达和变化。结果：三氧化二砷固体脂质纳米粒对舌鳞癌细胞作用后,MTT显示舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制,且具有浓度依赖性,PI3K/AKT信号通路关键因子PI3K、p-AKT、AKT表达降低。结论：三氧化二砷纳米粒降低舌鳞癌细胞的PI3K/AKT通路信号传导。     

PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路在人舌鳞癌细胞耐药中的作用

目的:通过抑制舌鳞癌细胞中PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路的表达,检测细胞凋亡与自噬的变化,探讨舌鳞癌耐药的机制。方法:以舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP为研究对象。分别用PI3K/AKT抑制剂LY294002、mTOR抑制剂Rapamycin、p70S6K抑制剂LY2584702作用该通路各个环节。Western blot检测通路抑制剂作用后相关蛋白的变化。Cyto-ID荧光染色检测自噬体的形成。流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:Western blot结果显示加入抑制剂后舌鳞癌细胞Beclin1表达分别高于对照组,LC3II与LC3I以及Bax与Bcl-2的比值均升高,该通路的p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K等蛋白均有下降(P<0.05)。流式结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞凋亡率分别较对照组升高(P<0.05)。Cyto-ID荧光染色后结果显示加入抑制剂后的舌鳞癌细胞自噬小体的数目明显高于对照组(P<0.05)。对比两组细胞显示加入抑制剂后的Cal27细胞发生凋亡与自噬的水平高于Cal27/CDDP(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKT/mTOR/p70S6K信号通路可诱导舌鳞癌细胞Cal27与舌鳞癌耐顺铂细胞Cal27/CDDP发生凋亡与自噬,激活的PI3K/AKT/mTOR/p70S6K通路抑制细胞凋亡与自噬是Cal27/CDDP细胞产生顺铂耐药的原因之一。     

mTORC1/2信号通路在肿瘤治疗中的应用

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是PI3K-Akt信号传导通路的重要下游蛋白激酶。真核生物的mTOR被体内的生长因子、营养及能量等信号激活后,能加速细胞内蛋白质的合成,为肿瘤细胞的生长提供物质基础,所以mTOR通路是治疗癌症的重要靶点。雷帕霉素（西罗莫司）及其衍生物对mTOR具有特异性抑制作用,在临床上被用于多种癌症的治疗。由于肿瘤的高度异质性和复杂性,一些肿瘤对mTOR抑制剂具有耐药性。因此,充分了解mTOR通路对肿瘤增殖和生存的作用机制,对进一步提高肿瘤疗效具有重要意义。     

PI3K/AKT信号通路对体外人牙髓细胞增殖和成牙本质向分化能力的影响

目的 研究PI3K/AKT信号通路对人牙髓细胞（hDPC）体外增殖作用和成牙本质向分化能力的影响.方法 体外培养hDPC,采用PI3K通路抑制剂LY294002（LY）处理hDPC,CCK8法检测细胞增殖情况,Western blot蛋白印记检测PI3K/AKT通路下游蛋白AKT、磷酸化AKT（p-AKT）水平在6、12、24、48、72 h的改变,检测成牙本质向分化指标DSPP的蛋白水平变化;设立空白对照组、矿化诱导组、LY组、矿化诱导＋LY组共4组,成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节形成情况.结果 CCK8结果显示,LY294002在24、48和72 h可抑制hDPC的增殖（24 h：Z=-0.358,P＜ 0.05;48 h：t=11.674,P＜ 0.05;72 h：t=10.832,P＜ 0.05）;Western blot显示,LY294002抑制PI3K/AKT通路下游蛋白p-AKT活性,在24 h时作用最明显,成牙本质向分化指标DSPP蛋白水平降低;茜素红染色结果显示,矿化结节的数量B组最多、C组最少.结论 PI3K/AKT信号通路可促进hDPC的增殖和成牙本质向分化能力.     

mTOR调控口腔鳞状细胞癌增殖转移的机制研究

目的：研究Toll样受体4（TOLL-like receptor 4,TLR4）分子高表达与口腔鳞状细胞癌预后的关系,探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通过TLR4信号通路间接调控口腔鳞状细胞癌增殖转移的潜在机制。方法：采用免疫组织化学法检测50例口腔鳞状细胞癌患者病理切片中TLR4的表达;使用mTOR抑制剂(雷帕霉素)作用于口腔鳞状细胞癌细胞系CAL27后,再用LPS激活TLR4信号通路,通过MTT法检测CAL27细胞的增殖能力,Transwell法检测CAL27细胞的迁移能力, Western 免疫印迹检测其对肿瘤细胞中NF-κB 及MAPK信号通路的影响。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。结果：TLR4分子高表达与口腔鳞状细胞癌预后差显著相关（P<0.05）;雷帕霉素能够显著抑制TLR4激活后的CAL27细胞的增殖和迁移能力（P<0.01）,显著抑制TLR4下游的NF-κB 及MAPK信号通路（P<0.01）。结论： mTOR通过TLR4信号通路调控口腔鳞状细胞癌的增殖与转移,有望成为治疗口腔鳞状细胞癌的新靶点。     

IGF-1通过PI3K/AKT信号通路促进牙髓细胞增殖及碱性磷酸酶活性的研究

目的:研究IGF-1对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:采用酶消化法分离培养原代人牙髓细胞。Western blot检测牙髓组织中IGF-1蛋白表达,不同浓度的IGF-1处理牙髓细胞7d,CCK8法检测细胞增殖。用IGF-1(100 μg/L)及LY294002(10 μmol/L)分别单独或同时处理牙髓细胞,培养7 d后MTT实验检测细胞增殖;在培养第3、5、7、14天时检测细胞ALP 活性;在培养第7天时用Western blot检测AKT和p-AKT蛋白表达情况。结果:IGF-1在牙髓炎组织中低表达, IGF-1在20~100 μg/L浓度范围内从作用第3天开始能够显著促进牙髓细胞增殖(P<0.05或P<0.01),且具有剂量和时间依赖效应。LY294002能够抑制牙髓细胞的增殖和碱性磷酸酶活性,具有时间依赖性。IGF-1能促进p-AKT蛋白表达,而 LY294002能减低IGF-1对p-AKT蛋白表达的促进作用。结论:IGF-1可以促进牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶活性,且具有浓度和时间依赖性,作用机制可能与PI3K/AKT信号通路相关。[关键词] 牙髓细胞 细胞增殖 碱性磷酸酶     

PI3K/Akt/mTOR通路在头颈部鳞状细胞癌中的靶向治疗研究进展

头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）在全球最常见的恶性肿瘤中位居第六,晚期患者转移并复发率高,预后较差,为患者家庭和社会经济带来严重损失。靶向药物结合经典放化疗的个性化方案有望提高治疗功效并延长生存期。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）在HNSCC中普遍存在过度激活,是控制肿瘤发生、发展及研发靶向药物的重要通路。本文就PI3K/Akt/mTOR通路应用于HNSCC靶向治疗的个体性差异发生的潜在机制,以及临床试验取得的进展与目前所面临的困境进行探讨,拟为HNSCC的临床靶向治疗提供参考思路,从而提高患者的生存质量。     

山奈酚通过mTORC1信号促进牵张力下小鼠骨髓间充质细胞成骨分化机制研究

目的探讨山奈酚(kaempferol,Kae)对周期性单轴牵张力下小鼠骨髓间充质细胞(bone marrow mes?enchymal cells,BMMCs)成骨分化过程中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin com?plex 1,mTORC1)信号通路的作用。方法对体外分离培养的小鼠BMMCs施加形变量10%的单轴动态牵张力,通过细胞毒性试验筛选出合适浓度Kae,并添加工具药pp242改变内源性mTOR信号,在牵张后4 h利用化学比色法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性变化、ELISA法检测骨钙素(osteocalcin,OCN)表达量,流式细胞仪检测细胞内钙离子相对含量;利用Western Blot检测内源性mTORC1信号通路主要分子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、核糖体蛋白S6激酶(ribosomal proteinS6 kinases,S6K)、4E/BP1的磷酸化表达及成骨转录因子Runx2和Osterix的表达变化,qRT?PCR检测上述因子mRNA表达水平。结果10μmol/L Kae对细胞的抑制作用较小,且成骨能力最强。加力结束后4 h,Kae能够有效促进BMMCs成骨分化,ALP表达为(153.04±18.72)U/mg,OCN表达为(1.64±0.25)U,成骨转录因子Runx2、Osterix的mRNA水平和蛋白水平表达上调,细胞内钙离子含量下降,同时mTORC1信号通路中mTOR、S6K mRNA水平及蛋白磷酸化表达上调,4E/BP1 mRNA水平及蛋白磷酸化表达下调;在加入pp242抑制mTORC1信号表达后,mTOR、S6K mRNA水平及蛋白磷酸化表达下调,4E/BP1 mRNA水平及蛋白磷酸化表达上调,BMMCs成骨分化效应显著被抑制,Runx2、Osterix的mRNA水平和蛋白表达显著下调,ALP及OCN表达下调,细胞内钙离子含量增高。结论Kae通过mTORC1信号通路促进牵张力下小鼠BMMCs成骨分化。     

抑制脉管畸形的相关靶向药物研究进展

脉管畸形是一种先天性疾患,主要发生在头颈部,其无法自行消退,且随着患者的生长而逐渐加重。脉管畸形的传统治疗方式包括：激光治疗、硬化治疗、介入栓塞、手术切除等。但是对于一些范围较大的病变,传统治疗方式效果不佳。随着分子遗传学的发展,基因突变目前被认为是脉管畸形发生的根本原因,基因突变引起的相关通路的活化进一步促进了脉管畸形病变的进展。低流速脉管畸形主要涉及磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）通路的激活;而高流速的脉管畸形主要涉及大鼠肉瘤（rat sarcoma,RAS）/快速加速纤维肉瘤（rapidly accelerated fibrosarcoma,RAF）/促分裂原活化蛋白激酶激酶（mitogen-activated protein kinase kinase,MAPKK）/细胞外信号调节激酶（extracellular-signalregulated protein kinas...     

PI3K/AKT信号通路在2型糖尿病患者种植体骨结合中作用机制的研究进展

口腔种植治疗目前被认为是缺牙患者的首选治疗方案,但糖尿病仍然是种植治疗的相对禁忌证。糖尿病患者的高血糖环境以及微血管病变等可能会影响成骨细胞及破骨细胞的功能,影响骨代谢,导致种植失败。目前,对于糖尿病影响种植体骨结合的确切机制尚未阐明。PI3K/AKT信号通路在骨组织代谢中起重要作用,可促进成骨细胞的增殖和分化;此外,PI3K/AKT/mTOR也是响应胰岛素信号传导的经典途径。该文分别对PI3K/AKT信号通路在2型糖尿病和种植体骨结合中作用机制的研究进展进行综述,为今后促进糖尿病患者种植体周围骨再生等研究奠定基础。     

愈口宁中土茯苓对大鼠复发性阿弗他溃疡的治疗作用

目的:研究愈口宁(YKN)中土茯苓对于大鼠复发性阿弗他溃疡(RAU)抗炎作用。方法:随机将50只大鼠分为5组：左旋咪唑、模型对照、YKN、YKN-T(YKN去土茯苓)及土茯苓组,每组10只;化学灼烧法建立RAU模型,连续给药7 d。模型对照组给予等体积生理盐水,观察造模后用药1、3、7 d大鼠口腔溃疡状况。麻醉下脱颈处死大鼠,HE染色观察病理变化。蛋白免疫印记法(Western blot, WB)检查溃疡组织中TLR4、PI3K、p-PI3K、AKT、NF-κB、mTOR的蛋白表达量,ELISA法检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平。结果:模型对照组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显升高(P<0.01),土茯苓组血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著下调(P<0.01)。WB示模型对照组TLR4、AKT、NF-κB、mTOR蛋白表达量显著上调,p-PI3K/PI3K显著下降,土茯苓组TLR4、AKT、NF-κB、mTOR表达量显著下降,p-PI3K/PI3K显著上升。结论:土茯苓对于RAU大鼠体内炎性因子可以起到调和作用,可能通过抑制相关通路以降...     

PI3K/Akt信号通路抑制剂在舌鳞癌细胞系增殖和凋亡中的作用

目的:探讨PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对舌鳞癌细胞系Tca8113增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法:LY294002处理Tca8113细胞,MTT法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot及ELISA分析LY294002作用前后p-Akt及Akt蛋白的表达。结果:随LY294002浓度(0、10、25、50、75μmol/L)的增加及作用时间(24、48 h)的延长,实验组Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增大,LY294002抑制作用与浓度及作用时间呈正相关LY294002干预细胞24 h后,细胞凋亡率显著高于未干预组,p-Akt蛋白表达明显降低,而总Akt表达无显著改变。结论:LY294002可诱导Tca8113细胞凋亡,其作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路的效应分子p-Akt的活化有关。     

薯蓣皂苷对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨薯蓣皂苷对人口腔鳞癌细胞SCC-4和SCC-25增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10、30μmol/L)薯蓣皂苷处理SCC-4和SCC-25细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测薯蓣皂苷对SCC-4和SCC-25细胞存活的影响,根据IC₅₀值筛选出后续实验浓度(0、1、2、4μmol/L);EdU检测薯蓣皂苷对SCC-4和SCC-25细胞增殖的影响;流式细胞术检测薯蓣皂苷对SCC-4和SCC-25细胞凋亡的影响;Western Blot检测薯蓣皂苷处理48 h后,细胞中Noxa、Cleaved-Caspase 3蛋白的表达水平;qRT-PCR检测细胞中Noxa mRNA表达情况。结果:在一定浓度范围内,薯蓣皂苷可抑制口腔鳞癌细胞SCC-4和SCC-25的增殖,呈时间依赖性和剂量依赖性(P<0.05)。同时,实验组(1、2、4μmol/L)薯蓣皂苷干预48 h后可促进SCC-4和SCC-25细胞的凋亡(P<0.05),并上调细胞中Noxa、Cleaved-Caspase 3的表达水平,且SCC-4和SCC-2...     

三氧化二砷对口腔鳞癌细胞系Nrf2通路的激活作用

目的探讨三氧化二砷(AS2O3)对人口腔鳞癌细胞系SCC-15中氧化应激Nrf2通路的作用。方法通过体外培养人口腔鳞癌细胞系SCC-15,采用细胞免疫荧光法检测不同浓度AS2O3对SCC-15中Nrf2及其下游基因Ⅱ相抗氧化酶—血红素氧合酶1(HO-1)和醌氧化还原酶(NQO1)表达水平的影响,计数平均光密度值。同时采用蛋白免疫印迹方法定量检测不同浓度AS2O3对SCC-15中Nrf2及其下游Ⅱ相抗氧化酶—血红素氧合酶1和醌氧化还原酶表达水平的影响。结果不同浓度的AS2O3对Nrf2、血红素氧合酶1和醌氧化还原酶均有一定的激活作用,并呈剂量依赖关系。结论 AS2O3可激活口腔鳞癌细胞系SCC-15的Nrf2信号通路,具有促进抗氧化基因表达的作用。     

膜联蛋白A1的表达对口腔鳞癌TPF化疗效果的影响

目的探讨在口腔鳞癌中,膜联蛋白A1的表达水平对TPF（T=多西他赛,P=顺铂,F=5氟尿嘧啶）化疗药物杀伤癌细胞疗效的影响。方法构建Annexin A1 siRNA的反转录病毒载体,对口腔鳞癌细胞系进行干预,通过细胞增殖实验、细胞毒性实验和免疫印迹方法,分析Annexin A1表达干预对TPF化疗药物作用的影响,以及PI3K/AKT相关信号通路和细胞凋亡的影响。采用SPSS18.0软件包对数据进行双因素方差分析。结果下调Annexin A1的表达,口腔鳞癌细胞的增殖能力增强。通过PI3K/AKT途径抑制P27kip1的表达,口腔鳞癌细胞对TPF化疗药物的敏感性提高,促进了癌细胞的凋亡。结论Annexin A1低表达能增强口腔鳞癌细胞的增殖能力,提高对TPF的敏感性,促进癌细胞凋亡。     

马来酸噻吗洛尔对人脐静脉内皮细胞VEGF传导通路表达的影响

目的:研究马来酸噻吗洛尔在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中血管生成信号传导通路的表达,以探讨这些药物作为治疗婴幼儿血管瘤的作用机制。方法:采用RT-PCR和Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、局部黏着斑激酶(FAK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达。应用SPSS17.0统计包进行数据分析。结果:RT-PCR检测发现,马来酸噻吗洛尔以剂量依赖的方式明显抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)诱导的ERK、Akt、mTOR及FAK的mRNA表达;Western blot结果显示:马来酸噻吗洛尔以剂量依赖的方式明显抑制VEGF对磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的调控。结论:马来酸噻吗洛尔可以通过抑制ERK、Akt、mTOR、FAK信号通路的表达,抑制血管瘤内皮细胞增殖和促进细胞凋亡,从而达到治疗婴幼儿血管瘤的目的。     

丝/苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/p70 S6K信号通路在口腔鳞癌中的表达及临床意义

目的 探讨丝/苏氨酸蛋白激酶（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/p70 S6K信号通路在口腔鳞癌组织中的表达情况,为口腔鳞癌的早期诊断和治疗提供参考。方法 收集口腔鳞癌标本51例,癌旁黏膜组织10例,正常口腔黏膜10例。采用免疫组织化学SP法检测口腔鳞癌、癌旁黏膜组织及正常口腔黏膜中p-Akt、p-mTOR及p70 S6K的表达情况,分析三者相互之间表达的相关性。结果 p-Akt、p-mTOR及p70 S6K在口腔鳞癌组中的表达显著高于正常口腔黏膜组和癌旁黏膜组的表达。p-Akt、p-mTOR及p70 S6K在口腔鳞癌的表达与患者的年龄、性别及临床分期无相关性,但与口腔鳞癌的分化程度及有无淋巴结转移有相关性。p-Akt、p-mTOR及p70 S6K在口腔鳞癌的表达相互之间具有较强的正相关关系。结论 Akt/mTOR/p70 S6K信号通路分子在口腔鳞癌中表达活跃,提示可能与口腔鳞癌的发生发展具有重要的相关性。     

姜黄素对口腔鳞癌SCC-25细胞EGFR信号通路表达的影响

目的:探讨姜黄素对口腔鳞癌SCC-25细胞EGFR信号通路表达的影响及其相关的分子机制。方法:不同浓度姜黄素作用细胞24 h,MTT法检测姜黄素对细胞增殖作用的影响,Transwell实验检测EGF和姜黄素共同作用下细胞侵袭能力的变化,Western blot检测姜黄素对SCC-25细胞EGFR活性及下游信号分子(Akt、ERK1/2和STAT3)表达的影响。结果:不同浓度姜黄素作用SCC-25细胞24 h后,均可抑制SCC-25细胞增殖,亦可以抑制EGF诱导的细胞侵袭转移。Western blot结果显示姜黄素对SCC-25细胞总EGFR表达无影响,但可以剂量依赖性抑制SCC-25细胞p-EGFR表达,同时可以剂量依赖性抑制EGFR信号通路下游转录因子Akt、ERK1/2和STAT3磷酸化。结论 :姜黄素可剂量依赖性抑制SCC-25细胞EGFR磷酸化活性及其下游信号通路分子(Akt、ERK1/2、STAT3)的磷酸化。     

Fam83h突变对小鼠成骨细胞增殖和迁移的影响

目的:探究Fam83h突变对小鼠成骨细胞(mouse osteoblasts, MOBs)增殖和迁移的影响以及其相关机制。方法:Micro-CT扫描分析5月龄Fam83h突变纯合子小鼠和野生型小鼠的全身骨;体外分离培养Fam83h突变纯合子小鼠和野生型小鼠的MOBs,利用CCK-8实验、划痕实验研究Fam83h突变对MOBs增殖和迁移的影响并测序分析细胞转录组差异基因,Western blot检测相关通路关键分子表达情况。结果:Fam83h突变纯合子小鼠全身骨长及骨体积分数均小于野生型小鼠(P<0.001)。体外实验结果显示,Fam83h突变纯合子小鼠MOBs的增殖和迁移能力均显著低于野生型小鼠(P<0.01),KEGG Pathway富集分析提示PI3K/AKT通路差异明显,Western blot结果显示Fam83h突变纯合子小鼠的MOBs的p-AKT1-S473的蛋白水平降低。结论:Fam83h突变可能通过PI3K/AKT通路抑制MOBs的增殖和迁移从而导致小鼠骨量减少。     

雷帕霉素促进上颌窦黏膜细胞成骨分化

目的:探讨雷帕霉素对上颌窦黏膜细胞成骨分化的影响。方法:上颌窦黏膜细胞经不同浓度的自噬激动剂雷帕霉素处理后诱导成骨分化,然后进行碱性磷酸酶活性检测、茜素红染色以及自噬基因和成骨基因转录水平的检测,评估上颌窦黏膜细胞成骨分化和自噬水平的改变。结果:碱性磷酸酶活性、钙结节形成量以及成骨基因的表达随成骨诱导逐渐增加,并且100 nmol/L的雷帕霉素处理组表现出较强的成骨能力和自噬水平。结论:合适浓度的雷帕霉素可促进上颌窦黏膜细胞的成骨分化,这一过程可能与自噬途径相关。