全反式维甲酸对EC9706细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞体外增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法:应用不同浓度(1×10-6、1×10-5、5×10-5 mol/L)ATRA体外处理人食管癌细胞EC9706(ATRA1、ATRA2、ATRA3组),并设不加ATRA的对照组,倒置显微镜下观察细胞的生长状态,HE染色后光镜下观察细胞结构的改变,应用MTT法测定细胞生长抑制率,免疫组织化学技术检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达情况.结果:经ATRA处理后,ATRA3组与对照组比较,细胞生长速度减慢,群体倍增时间延长(P均＜0.05);光镜下可见细胞形态趋向良性分化,细胞质内成熟细胞器增多,生长抑制率增加(P＜0.05).与对照组比较,3个ATRA组细胞Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01),且以ATRA2、ATRA3组为明显(P<0.05).结论:ATRA能有效抑制EC9706细胞增殖,其机制与Bax及Bcl-2蛋白表达调控有关.     

环巴胺对食管癌EC9706细胞的生长抑制作用

目的 研究环巴胺(cyelopamine)对入食管癌EC9706细胞生长抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 培养EC9706细胞,加入不同浓度环巴胺,作用不同时间,MTT法检测细胞生长抑制率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪、AO/EB双荧光染色观察药物作用于细胞后的细胞凋亡情况;Western blot观察不同浓度的药物作用于细胞后对Gli-1蛋白表达的影响.结果 MTT法显示,与空白对照组和DMSO对照组相比,环巴胺对EC9706细胞有明显的生长抑制作用,且环巴胺对EC9706细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性;AO/EB双荧光染色显示,细胞体积缩小,皱缩变圆,边缘毛糙,形成不规则突起,细胞核凝集、固缩;环巴胺通过促进细胞凋亡而达到对细胞的生长抑制作用,其调亡率明显高于空白对照组及DMSO组,且呈剂量依赖性.Western blot显示,环巴胺可能是通过影响Gli-1蛋白的表达来调控细胞的生长.其表达率低于空白对照组及DMSO组,呈剂量依赖性.结论 环巴胺对人食管癌细胞系EC9706的生长有明显抑制作用,提示食管鳞状细胞癌的发生和发展与Hedgehog信号转导通路的异常激活有关,且Gli-1对肿瘤的发生发展起重要作用,这对食管癌的诊断、治疗以及新药开发提供新的思路.     

靛玉红甲肟对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨靛玉红甲肟对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别用0、1、5和10μmol/L靛玉红甲肟处理EC9706细胞12、24和48h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;用10μmol/L靛玉红甲肟处理EC9706细胞0、24、48和72h后,采用流式细胞术法检测凋亡率;分别用0、1、5和10μmol/L靛玉红甲肟处理EC9706细胞48h后,采用RT-PCR法检测细胞Sox-2mRNA的表达。结果:靛玉红甲肟对食管癌EC9706细胞增殖具有明显的抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性(F剂量=135.237,F时间=96.488,F交互=189.544,P均<0.001)。靛玉红甲肟作用EC9706细胞后,细胞凋亡率呈时间依赖性上升(F=195.350,P<0.001),Sox-2mRNA的表达呈剂量依赖性下调(F=87.552,P<0.001)。结论:靛玉红甲肟对食管癌EC9706细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能与下调Sox-2mRNA表达有关。     

鞣酸对人食管癌细胞系EC9706的抑制作用

目的 探讨鞣酸对体外培养的人食管癌细胞EC9706的生长抑制作用。方法 不同浓度鞣酸（100、200、300、400、500μmol／L）作用EC9706细胞24、48、72、96h后，通过MTT比色法研究鞣酸对EC9706细胞增殖的影响，采用流式细胞仪观察400μmol／L鞣酸能否诱导EC9706细胞凋亡。^3HTdR、^3HLeucine掺入法研究400μmol／L鞣酸对食管癌细胞DNA复制及蛋白合成的影响。结果 鞣酸呈时间、剂量依赖性方式抑制EC9706细胞增殖；流式细胞术检测显示出典型的凋亡峰，细胞凋亡率为46．8％；^3H—TdR、^3H—Leucine掺入量明显减少。结论 鞣酸可以抑制食管癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，可能是预防和治疗食管癌的一种新型化合物。     

RASSF1A基因对食管癌细胞EC9706生长抑制作用的研究

目的观察RASSF1A基因对食管癌细胞EC9706生长的抑制。方法将包含RASSF1A基因的质粒转染RASSF1A表达缺失的EC9706细胞,建立稳定转染细胞系,通过MTT法检测细胞活性和增殖能力、流式细胞仪检测其对细胞周期的影响、裸鼠移植瘤实验检测转染细胞的体内成瘤特性。结果稳定表达RASSF1A的EC9706细胞较对照组细胞的RASSF1A蛋白表达增加;细胞生长速度减慢（P〈0．01）;细胞周期中G1期比例增加,S期比例减少（G1期：RASSF1A组细胞：68．53％±3．34％;空质粒组：54．25％±4．61％;未转染组：53．41％±5．60％。S期：RASSF1A组细胞：（23．19±5．04）％;空质粒组：（31．81±2．05）％;未转染组：32．09％±1．99％）（P〈0．01）;同时裸鼠致瘤能力也被抑制（P〈0．05）。结论RASSF1A基因的外源性表达能显著抑制食管癌细胞在体内外的生长,提示该基因在食管癌的发生发展中发挥重要作用。     

P53蛋白高表达与林县食管癌关系的病例对照研究

目的：探讨Ｐ５３蛋白高表达在食管癌发病中的意义．方法：于１９９５年１０月～１２月在林县进行了病例对照调查，并收集了组织学材料．采用免疫组化ＳＰ法，对病例组（５９例）手术切除的癌组织和对照组（３７例）食管粘膜活检标本的Ｐ５３蛋白表达情况进行了检测．结果：５７．６％（３４／５９）的病例标本和１６．２％（６／３７）的对照标本存在有Ｐ５３蛋白高表达，病例组明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）．单因素分析有显著意义的因素为Ｐ５３蛋白高表达、病前２０年食酸菜史、病前１０年食水果史和食管癌家族史，其比值比（ＯＲ）及其９５％可信限（ＣＩ）分别为７．０３（２．３３～２２．２１）、２．９８（１．１０～８．２０）、０．１９（０．０４～０．９０）和２．５１（０．９９～６．４４，Ｐ＜０．０５）．男性、女性Ｐ５３蛋白高表达的ＯＲ（９５％ＣＩ）及合并ＯＲ（９５％ＣＩ）分别为７．３８（１．９６～２９．６４）、８．１７（０．７７～２０３．３６）和７．５８（２．４１～２５．０１），与分层前ＯＲ接近．多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析显示Ｐ５３蛋白高表达的ＯＲ（９５％ＣＩ）为５．９１（１．９５～１８．２７）．结论：结果提示Ｐ５３蛋白高表达与食管癌之间存在     

EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（EphA2）基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 取对数生长期人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、空载组及沉默组,分别转染Lipofectamine^TM 2000、含无义随机序列（siRNA-NC-PGCsi3.0）和EphA2干扰序列（EphA2-siRNA-PGCsi3.0）质粒和脂质体的复合物。稳定转染后,Brd U法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR和Western blotting分别检测细胞中EphA2、Wnt1、β-连环蛋白（β-catenin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）mRNA及蛋白相对表达量。结果 对照组、空载组、沉默组Brd U阳性率分别为（26.48±2.79）%、（23.52±2.57）%、（13.29±2.06）%,Brd U阳性率组间比较,差异有统计学意义（F =38.560,P =0.000）。与对照组、空载组比较,沉默组Brd U阳性率降低（P <0.05）;对照组与空载组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、空载组、沉默组细胞划痕愈合率分别为（83.16±8.31）%、（82.35±7.24）%、（34.24±5.27）%,细胞划痕愈合率组间比较,差异有统计学意义（F =78.869,P =0.000）。与对照组、空载组比较,沉默组细胞划痕愈合率降低（P <0.05）;对照组与空载组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、空载组、沉默组穿膜细胞数分别为（326.74±33.15）个、（331.27±34.59）个、（126.23±26.18）个,穿膜细胞数组间比较,差异有统计学意义（F =68.997,P =0.000）,与对照组、空载组比较,沉默组穿膜细胞数减少（P <0.05）;对照组与空载组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,与对照组、空载组比较,沉默组Wnt1、β-catenin、Vimentin mRNA相对表达量降低（P <0.05）,E-cadherin mRNA相对表达量升高（P <0.05）。对照组、空载组、沉默组细胞中EphA2、Wnt1、β-catenin、E-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,与对照组、空载组比较,沉默组EphA2、Wnt1、β-catenin、Vimentin蛋白相对表达量降低（P <0.05）,E-cadherin蛋白相对表达量升高（P <0.05）。对照组和空载组上述指标比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 EphA2基因沉默对人食管癌EC9706细胞迁移和侵袭有一定的抑制作用,其机制可能与阻止Wnt/β-catenin信号通路相关。     

DMS0对EC9706细胞端粒酶活性及生长的影响

目的 研究二甲基亚砜(DMSO)对EC9706细胞端粒酶活性及生长的影响。方法 用1．3％DM50处理食管癌EC9706细胞，TRAP—ELISA法检测细胞端粒酶活性的改变，流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果 DMSO处理后的EC9706细胞，端粒酶活性明显下降，且细胞周期明显改变，Gl期细胞比率显著增高，S期细胞数显著降低。结论 DMSO可抑制EC9706细胞端粒酶活性，使EC9706细胞生长停滞于Gl期，并诱导细胞凋亡。提示DMSO可用于食管癌的治疗。     

全反式维甲酸对食管癌EC9706细胞NDRGl mRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响.方法:将10μmol/LATRA作用于人食管癌EC9706细胞,应用免疫组织化学SP法和RT-PCR方法分别检测对照组及ATRA作用1 d、2d、3 d及5 d组NDRG1蛋白和mRNA的表达.结果:ATRA作用1 d、2 d、3 d及5 d组NDRG1 mRNA相对含量分别为1.47±0.18、1.69±0.24、1.72±0.19和1.58±0.25,均高于对照组的1.08±0.10(P＜0.05或0.01).ATRA作用1 d、2 d、3 d及5 d组NDRG1蛋白表达积分分别为254±37、277±34、265±30和239±24,均高于对照组的164±29(P＜0.01).结论:ATRA可上调EC9706细胞分化相关基因NDRG1的表达,从而促进其分化.     

仙鹤草水提液对食管癌Eca109细胞生长的抑制作用

目的:研究仙鹤草水提液对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用及其可能机制.方法:MTT法测定0g/L、2 g/L、4 g/L、8 g/L、16 g/L的仙鹤草水提液分别作用于Eca109细胞24 h、48 h、72 h,观察对Eca109细胞生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色技术检测16 g/L仙鹤草水提液作用72 h对Eca109细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响.结果:MTT结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用48 h和72 h后Eca109细胞生长明显受抑;免疫组化结果显示16 g/L仙鹤草水提液作用72 h后Eca109细胞内Bcl-2蛋白表达下调,P53蛋白表达上调.结论:仙鹤草水提液体外能诱导Eca109细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调P53蛋白表达有关.     

姜黄素对食管癌EC-9706细胞增殖的影响

目的观察姜黄素对人食管癌EC-9706细胞增殖的影响并探讨其分子机制。方法应用50～200txmol／L姜黄素处理食管癌EC-9706细胞株12—48h后,应用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测细胞增殖抑制率、逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测热休克蛋白70（Hsrv0）mRNA的表达。结果经姜黄素干预后,人食管癌EC一9706细胞生长减慢,MTT法检测结果显示增殖抑制率达18．3％～77．5％（P〈0．05）,呈良好的时间一剂量效应关系,HSP70mRNA的表达下调。结论姜黄素能够有效抑制人食管癌细胞EC-9706的增殖．其机制可能与抑制HSP70mRNA的表达有关。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398对食管癌细胞株EC9706的生长抑制作用

目的:探讨NS-398对人食管癌细胞株EC9706的生长抑制作用。方法:采用3H-TdR掺入法检测不同浓度(0、10、20、50、100μmol/L)和作用24、48、72、96h的NS-398对细胞的增殖抑制效应;采用流式细胞术(FCM)及DNA片段分析法检测NS-398诱导的细胞凋亡情况。结果:EC9706经不同浓度的NS-398处理后,实验组3H-TdR掺入量明显减少,具有时间和剂量依赖关系,与对照组比较差异显著(P<0.05或P<0.001)。FCM检测发现实验组在G1期前出现亚倍体凋亡峰,细胞凋亡率达(45.23±1.08)%,并出现典型的细胞凋亡梯带;而对照组无凋亡峰出现,细胞凋亡率为(2.14±0.28)%,两组比较有显著性差异(P<0.001)。结论:NS398对食管癌细胞株EC9706细胞具有增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用。     

逆转录病毒介导的p53基因对食管癌细胞株的生长抑制作用

目的 :观察人类野生型 p5 3(wtp5 3)基因对人食管癌细胞系的抑制作用。　 方法 :用逆转录病毒为载体 ,将外源性wtp5 3基因导入人食管癌细胞系ECA10 9,通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及其对肿瘤的抑制作用。　结果 :p5 3在转染细胞ECA10 9/p5 3中表达水平提高。外源性wtp5 3基因的导入和表达能使ECA10 9细胞的生长速度减低 ,软琼脂集落形成能力下降 ,G0 G1期细胞比例增加、S期细胞比例降低 ,调亡指数升高 ,裸鼠体内成瘤能力明显下降。　结论 :逆转录病毒载体介导的外源性wtp5 3基因能够抑制人食管癌细胞生长     

体外hEGF对食管癌EC9706细胞增殖影响的研究

目的:研究人表皮生长因子(hEGF)对食管癌EC9706细胞增殖的影响作用,探讨hEGF不同浓度、不同时间对食管癌细胞生长的影响。方法:体外正常条件培养EC9706食管鳞癌细胞株,无血清饥饿细胞,加入hEGF,通过镜下形态观察、MTT染色、流式细胞技术等观察细胞增殖变化情况。结果:hEGF在200ng/ml浓度、24h作用时间点,对EC9706细胞有明显刺激增殖作用;倒置显微镜下观察,hEGF刺激细胞呈长梭形改变,细胞连接紧密;细胞周期分析,hEGF刺激细胞30.03%处于增殖活跃的S期,较之对照组15.52%,有极显著性差异。结论:hEGF能够刺激食管癌EC9706细胞增殖,其对细胞增殖的刺激作用呈量效、时效关系。     

人食管癌相关基因4在食管癌中的抑癌功能

目的 探讨人食管癌相关基因4(ECRG4)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的抑癌功能及其机制.方法 利用DNA重组技术,构建ECRG4真核表达质粒pcDNA3.1-ECRG4,在ESCC细胞系EC9706细胞中转染表达ECRG4蛋白,检测细胞生长状态、细胞黏附、迁移、侵袭能力和裸鼠成瘤能力的改变.Western印迹检测ECRG4表达诱导P53和P21蛋白表达的变化.结果 ECRG4基因转染组裸鼠成瘤的最后体积和重量分别为(264±43)mm3和(0.39±0.09)g,对照组裸鼠分别为(464±128)mm3和(0.76±0.13)g,差异均有统计学意义(均P＜0.05).ECRG4基因转染组肿瘤细胞与基质的黏附性、迁移和侵袭能力均低于对照组,但差异均无统计学意义(均P＞0.05).ECRG4基因转染组P53和P21蛋白表达均高于对照组(100.00±3.87和35.71±2.36比16.6±1.92和1.09±0.11,均P＜0.05).结论 ECRG4是ESCC的候选抑癌基因,ECRG4可能通过参与P53通路调控P21蛋白表达来发挥其抑癌功能.     

小白菊内酯诱导人食管癌细胞凋亡的研究

目的 探讨小白菊内酯(Parthenolide,PN)对人食管癌细胞EC9706增殖和凋亡的影响及PN的作用机制.方法 MTT法检测PN(20、40和80μmoL/L)作用EC 970624、48和72 h细胞增殖活性的变化;流式细胞术和免疫细胞化学法分别检测PN处理的EC9706细胞凋亡和NF-K Bp65蛋白表达的变化.结果 ①PN抑制EC 9706的增殖活性,呈时间和剂量依赖性.②PN作用EC 970648 h后,NF-κ Bp65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).③PN作用EC 970672h后,细胞早期和晚期凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 PN抑制EC9706细胞的增殖,诱导其凋亡,作用机制与抑制NF-κB有关.     

ROCK抑制剂对人食管癌EC9706细胞迁移能力的影响

目的研究ROCK特异性抑制剂Y-27632对人食管癌EC9706细胞迁移能力的影响,并探讨其可能的机制。方法体外培养人食管癌株EC9706,加入20μmoL／L的Y-27632溶液（实验组）及等体积的PBS（对照组）培养1h,采用细胞计数、MTF实验检测细胞生长情况,采用Transwell实验观察细胞迁移情况,采用Westernblot检测Cav-1的表达水平,并进行两组的比较。结果细胞计数、MTT、Transwell实验结果显示,Y-27632可以抑制细胞的生长与迁移能力,与对照组比较差异有统计学意义（P均〈0．05）。Westernblot检测结果显示,Y-27632处理细胞1h后,Cav-1蛋白表达水平明显下降,并明显低于对照组（P均〈0．05）。结论ROCK信号通路参与EC9706细胞生长与迁移的调节,Y-27632可以抑制EC9706细胞的生长及迁移能力,其机制可能与下调Cav-1的表达有关。     

奥曲肽联合5-FU对体外培养的大肠癌细胞增殖及突变型p53蛋白表达的影响

目的：通过生长抑素类似物奥曲肽（OCT）联合5-FU对体外培养的大肠癌细胞作用及对p63蛋白的影响为大肠癌的临床治疗提供一定的理论依据。方法：采用结肠癌细胞原代培养，采用MTT比色分析法测定奥曲肽与5-FU联合是否抑制作用增强；流式细胞仪间接免疫荧光技术检测药物作用后的肿瘤细胞突变型p63蛋白表达情况。结果：5-FU和奥曲肽联合应用对大肠癌的抑制率高于单独应用。5-FU和1．0μg/ml OCT组均抑制突变型p63蛋白的表达，联合用药组更为明显。结论：奥曲肽和5-FU都能抑制肿瘤细胞的突变型p63蛋白的表达，且联合应用抑制作用强于两者的单独应用，这可能是奥曲肽能增强5-FU对结肠癌细胞抑制作用的机制之一。     

复方苦参注射液对人食管鳞癌EC9706细胞凋亡及生长抑制的影响

目的 探讨复方苦参对人食管癌细胞株EC9706的生长抑制和诱导凋亡作用.方法 体外实验分为复方苦参25.00 μl/ml组、6.25 μl/ml组及对照组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,SP法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达.流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡,Western印迹检测细胞半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、Bc1-2及Fas蛋白的表达.平板克隆形成实验测定细胞克隆形成率.裸鼠移植瘤实验检测复方苦参的体内抑瘤作用,分为200μl／d治疗组、25μl／d治疗组及生理盐水对照组.SP法检测移植瘤PCNA及Bc1-2的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡.结果 体外实验中25.00 μl/ml组细胞48、72、96h增殖活性均低于对照组(均P＜0.01);PCNA表达水平及体外克隆形成率均低于对照组(均P＜0.05);细胞凋亡率、激活型caspase—3表达及Fas表达均高于对照组[(25.2±7.3)％比(3.4±1.5)％、(21.3±4.4)％比(1.8±0.6)％、(30.2±8.3)％比(5.4±1.6)％,均P＜0.01],Bc1-2表达低于对照组(P＜0.01).动物实验200μL／d治疗组瘤体质量低于生理盐水对照组[ (987±386) nmg比(1935±838) mg,P＜0.01],凋亡指数高于生理盐水对照组[(33.8±8.7)％比(5.3±1.4)％,P＜0.01].结论 复方苦参能够抑制EC9706细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻止移植瘤生长.诱导凋亡机制可能与EC9706细胞周期阻滞、Bc1-2表达下调、Fas表达上调及caspase-3激活有关.     

组织蛋白酶B特异性siRNA对人食管癌EC9706细胞体外侵袭力的抑制作用

目的:探讨组织蛋白酶B(CB)特异性siRNA对人食管癌EC9706细胞体外侵袭力的抑制作用.方法:将体外转录合成的针对CB的特异性siRNA设10 μmol/L、15 μmol/L和20 μmol/L 3个不同剂量转染人食管癌EC9706细胞,用Boyden chamber体外侵袭实验检测转染前后细胞体外侵袭力的变化.对照组设无关siRNA转染组、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不进行任何操作).结果:和正常对照组相比,特异性siRNA 15μmol/L组和20 μmol/L组穿越Matrigel胶的细胞数明显减少(P＜0.05),而10 μmol/L特异性siRNA组、空白对照组和无关siRNA转染组与正常对照组之间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:特异性CB siRNA能有效抑制人食管癌EC9706细胞的体外侵袭力.