TGF-茁1诱导胃癌细胞上皮间质转化与CD133表达研究

目的研究转化生长因子-茁1（TGF-茁1）促进胃癌侵袭能力,诱导胃癌MKN-45细胞发生上皮间质转化（EMT）的机制及其与PI3K/Akt信号通路调控肿瘤起始细胞标志物CD133表达的关系。方法设空白对照,应用TGF-茁1处理MKN-45细胞(TGF-茁1处理组),观察其对细胞形态学的影响;Transwell检测细胞侵袭能力的改变;RT-PCR及Westernblot检测细胞EMT相关因子Snail、E-cadherin、N-cadherin、p-Akt及CD133的表达水平;PI3K特异性抑制剂LY294002预处理后再应用TGF-茁1处理细胞（TGF-茁1+LY294002处理组）,检测p-Akt与CD133表达水平的变化;免疫磁珠分选CD133+与CD133-亚群细胞,检测CD133+组与CD133-组细胞EMT相关因子的表达差异。结果TGF-茁1处理72h后,TGF-茁1处理组细胞由上皮形态转化为间质形态。TGF-茁1处理组Snail、N-cadherinmRNA、蛋白表达水平均高于对照组（均P＜0.05）;而E-cadherinmRNA、蛋白表达水平均低于对照组（均P＜0.05）;Transwell检测发现TGF-茁1处理组穿膜细胞数高于对照组（P＜0.05）;TGF-茁1处理组p-Akt蛋白与CD133mRNA、蛋白表达水平均高于对照组（均P＜0.05）;TGF-茁1+LY294002处理组p-Akt蛋白与CD133mRNA、蛋白表达水平均低于TGF-茁1处理组（均P＜0.05）。CD133+组Snail、N-cadherinmRNA、蛋白表达水平均高于CD133-组（均P＜0.05）,而E-cadherinmRNA、蛋白表达水平均低于CD133-组（均P＜0.05）。结论TGF-茁1诱导胃癌细胞发生EMT,并通过PI3K/Akt信号通路调控CD133表达从而增强胃癌MKN-45细胞的侵袭能力。     

caveolin-1抑制转化生长因子-β1诱导的哮喘大鼠气道平滑肌细胞的增殖

目的 探讨TGF-β1对哮喘气道平滑肌细胞增殖的影响及caveolin-1在TGF-β1诱导的哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖中的抑制作用.方法 离体培养大鼠气道平滑肌细胞并进行分组,用CCK-8法检测1、10、100μg/L的TGF-β1作用后及ERK通路特异性抑制剂PD98059干预后各组ASMCs的增殖情况,用Western blot法检测PD98059及β-环糊精干预后caveolin-1、p-ERK1/2蛋白表达的情况.结果 10μg/L的TGF-β1刺激ASMCs增殖的作用最为显著（P＜0.05）,PD98059干预后,ASMCs增殖明显减少（P＜0.05）.TGF-β1刺激ASMCs增殖过程中,caveolin-1蛋白表达量减少,p-ERK1/2的表达增加（P＜0.05）;使用β-环糊精破坏微囊的结构后,caveolin-1表达量减少,而p-ERK1/2表达量增加（P＜0.05）.结论 caveolin-1可以抑制TGF-β1诱导的ASMC增殖,这种抑制作用可能是通过抑制ERK1/2通路来实现的.     

TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响研究

目的：探究TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响,进一步揭示哮喘的发病机制。方法建立大鼠慢性哮喘模型,原代分离培养大鼠ASMC,将细胞分为正常组、哮喘组、TGF-β1组和TGF-β1＋PD-98059组,以CCK-8法检测细胞增殖,Western blot法检测caveolin-1和p- ERK1/2蛋白表达。结果 TGF-β1组细胞增殖较正常组和哮喘组明显（均P＜0.01）;TGF-β1＋PD-98059组细胞增殖较TGF-β1组减低,但较哮喘组仍明显（均P＜0.05）。TGF-β1组p- ERK1/2表达量较正常组和哮喘组增加;TGF-β1＋PD-98059组p- ERK1/2表达量较TGF-β1组减少,但较哮喘组表达量仍有所增加（均P＜0.05）。TGF-β1组caveolin-1表达量较正常组和哮喘组减少（均P＜0.05）;TGF-β1＋PD-98059组caveolin-1表达量较TGF-β1组增加（P＜0.05）。结论 TGF-β1可以下调caveolin-1蛋白的表达量,激活ERK通路,从而促进哮喘大鼠ASMC的增殖,引起气道重塑。     

caveolin-1和P21在罗红霉素抑制哮喘离体气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：探讨caveolae/caveolin-1和P21在罗红霉素抑制离体哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖中的作用。方法：复苏冻存的哮喘ASMCs,CCK-8法检测不同浓度罗红霉素[A组（无罗红霉素）、R10组（罗红霉素10 µg/mL）、R25组（罗红霉素25 µg/mL）、R50组（罗红霉素50 µg/mL）、R100组（罗红霉素100 µg/mL)]干预哮喘ASMCs后细胞的增殖情况,透射电镜观察各组caveolae的表达,Western Blot法检测各组caveolin-1、P21的蛋白表达。结果：罗红霉素抑制哮喘ASMCs的增殖作用具有浓度依赖性,随罗红霉素浓度增加,caveolae的表达逐渐增加,caveolin-1、P21的蛋白表达亦逐渐增加,且R50组或R100组与A组、R10组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。相关分析示哮喘ASMCs增殖活性与caveolin-1、P21蛋白表达呈负相关（r= -0.881、r=-0.951,P＜0.05）,caveolin-1蛋白表达与P21蛋白表达呈正相关（r=0.957,P＜0.01）。结论：罗红霉素可能通过上调caveolae/caveolin-1的表达,引起P21蛋白表达增加,从而抑制离体哮喘ASMCs的增殖。     

线粒体ATP敏感钾通道对哮喘大鼠气道平滑肌细胞表型转化的影响

目的 研究线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)对哮喘气道平滑肌细胞(ASMCs)表型转化的影响.方法 腹腔注射和雾化吸人制备哮喘大鼠模型.取哮喘及正常大鼠ASMCs,分为以下6组进行干预:正常对照组;正常+mi-toKATP开放剂diazoxide组;正常+mitoKATP阻断剂5-HD组;哮喘对照组;哮喘+diazoxide组;哮喘+5-HD组.激光共聚焦显微镜检测各组ASMCs R-123荧光强度以反映线粒体膜电位(△ψm),Western blot法检测各组细胞α一肌动蛋白(ractin)表达量.结果 ①与正常对照组比较.哮喘对照组R-123荧光强度明显增强,α-actin表达明显下调(均P<0.05).②diazoxide干预ASMCs 24 h后.正常及哮喘ASMCs R-123荧光强度均明显增强(均P<0.05);正常ASMCs α-actin表达量无明显变化(P>0.05).但哮喘ASMCs α-actin表达量明显增加(P<0.05).结论 diazoxide引起mitoKATP开放,并逆转哮喘ASMCs由收缩型向合成型发生的表型转化.     

SERCA2表达对哮喘大鼠气道平滑肌细胞分泌IL-8的影响

目的探讨哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）中肌浆/内质网Ca2+-ATP酶（SERCA2）的表达对IL-8分泌的影响。方法建立卵清蛋白（OVA）诱导的哮喘大鼠模型,分离原代ASMCs,分别用qRT-PCR及Westernblotting、FuraPE-3/AM和ELISA法检测各组ASMCs中SERCA2表达、细胞内Ca2+浓度（[Ca2+]i）和IL-8,利用siRNA技术下调SERCA2、毒胡萝卜素（TSG）抑制SERCA2以及吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）抑制NF-资B活化,检测不同状态下IL-8的变化。结果与正常组比较,哮喘组SERCA2的表达减少,经缓激肽（BK）刺激的钙瞬变峰值明显下降,需更长时间重新摄取钙使[Ca2+]i恢复至基线水平,IL-8基础值和经IL-17刺激后的诱导值均增加（P＜0.05或0.01）。无论有无IL-17刺激,基因下调组IL-8mRNA表达和分泌均显著增加（均P＜0.01）,与哮喘对照组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。哮喘组I资B琢磷酸化和NF-资Bp65核转位均较正常组增加（P＜0.05或0.01）,基因下调组和TSG抑制组的NF-资Bp65核转位亦增加（P＜0.05或0.01）,而使用PDTC后,基因下调组、哮喘对照组和正常对照组在IL-17刺激诱导下的IL-8mRNA表达和分泌均减少（P＜0.05或0.01）。结论哮喘大鼠ASMCs中SERCA2表达减少,导致钙稳态的改变,可能通过增强NF-资B活化来介导IL-8分泌亢进。     

细胞外基质对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞免疫调节作用

目的 研究在哮喘状态下,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)对气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)的免疫调节作用.方法 健康雄性Wistar大鼠随机分为哮喘组(8只)及正常对照组(8只).大鼠哮喘模型使用卵清蛋白(OVA)致敏及激发的方法建立.分离培养得到的大鼠ASMCs分别置于包被有LA及COL-1的细胞瓶中进行培养.结果 Western blot法检测结果显示,eotaxin 、TGF-β1的表达,哮喘空白组高于正常对照空白组(P＜0.05),哮喘组内ECM的干预促进表达的增加(P＜0.05),正常对照组表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ECM影响哮喘ASMCs的免疫功能.     

微囊蛋白1对哮喘气道平滑肌细胞增殖的抑制机制及罗红霉素的调控作用

目的 探讨微囊蛋白1抑制气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的可能机制以及罗红霉素的调控作用.方法 复制哮喘大鼠模型,光镜观察肺组织病理学变化,透射电镜观察各组ASMCs上微囊的结构及变化,用组织贴壁法体外培养ASMCs,实验设对照组(A组:含2.5％胎牛血清的高糖培养液处理1h)、哮喘组(B组:处理同A组)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路阻断剂PD98059组(C组:10×10-6mol/L的PD98059处理1h)、罗红霉素组(D组:100 mg/L的罗红霉素处理1h)、β-甲基环糊精组(E组:5μmol/L的β甲基环糊精处理1h);用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况,Western印迹检测各组微囊蛋白1表达;逆转录(RT)-PCR和Western印迹分别检测ERK1/2mRNA、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA和磷酸化ERK1/2、MCP-1蛋白的表达.结果 C、D组ASMCs增殖显著低于B组(0.68±0.15、0.63 ±0.13比0.96 ±0.14,均P＜0.05);E组(1.26±0.11) ASMCs增殖强于B组(P＜0.05).C、D组微囊蛋白1表达均显著高于B组(0.332±0.057、0.392±0.064比0.237±0.032,均P＜0.05);C、D组ERK1/2蛋白表达均显著低于B组(0.241±0.017、0.268±0.007比0.346±0.009,均P＜0.01),E组(0.441±0.011) ERK1/2蛋白表达高于B组;C、D组ERK1/2 mRNA表达均显著低于B组(0.277±0.043、0.338±0.026比0.591±0.022,均P＜0.01).C、D组MCP-1蛋白表达均显著低于B组(0.198±0.015、0.286±0.019比0.482±0.026,均P＜0.01),E组(0.521±0.023) MCP-1蛋白表达较B有升高趋势;C、D组MCP-1mRNA表达均显著低于B组(0.212 ±0.042、0.249±0.032比0.676±0.053,均P＜0.01).结论 微囊蛋白1可能通过ERK信号通路抑制MCP-1表达,从而抑制哮喘ASMCs的增殖.罗红霉素可能上调微囊蛋白1的表达,抑制MCP-1 mRNA表达和翻译,进而抑制哮喘ASMCs的增殖.     

生物钟基因Bmal1通过氧化应激信号通路调节胰岛茁细胞凋亡的研究

目的探讨生物钟基因brainandmuscleArnt-likeprotein-1（Bmal1）对胰岛β细胞凋亡的调节作用。方法实验分为正常对照组（含5.5mmol/L葡萄糖,NC组）、高糖组（含33.3mmol/L葡萄糖）、正常糖浓度+无关RNA转染组（含5.5mmol/L葡萄糖,NC+siRNA组）、正常糖浓度+Bmal1基因沉默组（NC+Bmal1-/-组）、高糖+无关RNA转染组（含33.3mmol/L葡萄糖,高糖+siRNA组）、高糖+Bmal1基因沉默组（高糖+Bmal1-/-组）。NC组不加干预因素。采用RNA干扰技术沉默大鼠胰岛茁细胞瘤株（INS-1）Bmal1基因,应用TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测活性氧（ROS）含量,ATP检测试剂盒测定三磷酸腺苷（ATP）含量,实时荧光定量PCR检测Bmal1、去乙酰化酶sirtuin1（Sirt1）mRNA表达情况。结果与NC+siRNA组比较,NC+Bmal1-/-组ATP含量下降,ROS水平增加,Sirt1mRNA表达下降（均P＜0.01）。与NC组比较,高糖组ATP下降,ROS增加,Sirt1mRNA表达下降（均P＜0.01）,细胞凋亡增加（P＜0.05）。与高糖+siRNA组比较,高糖+Bmal1-/-组ATP下降,ROS增加,细胞凋亡增加（均P＜0.01）,Sirt1mRNA表达有下降趋势,但无统计学差异（P＞0.05）。结论Bmal1可通过调节氧化应激信号通路影响胰岛茁细胞功能和凋亡。     

β-catenin和YAP通路在Klotho蛋白调节硫酸吲哚酚诱导巨噬细胞极化中的作用

目的探讨茁-连环蛋白（茁-catenin）和Yes相关蛋白（YAP）在Klotho蛋白调节硫酸吲哚酚（IS）诱导巨噬细胞极化中的作用。方法THP-1细胞经丙二醇甲醚醋酸酯处理诱导成THP-1源巨噬细胞,构建Klotho过表达质粒,转染THP-1源巨噬细胞并分为4组。（1）对照组：转染未经处理的pIRES2-ZsGreen1质粒;（2）对照+IS组：转染未经处理的pIRES2-ZsGreen1质粒,并予IS（2mmol/L）干预;（3）过表达组：转染构建的Klotho过表达质粒;（4）过表达+IS组：转染Klotho过表达质粒并予IS（2mmol/L）干预。4组细胞采用流式细胞术检测M1极化标志物HLA-DR和M2极化标志物CD206,qRT-PCR法检测茁-catenin和YAPmRNA表达水平,Westernblot法检测β-catenin、YAP和磷酸化YAP（p-YAP）蛋白表达水平,细胞免疫荧光染色法检测茁-catenin、YAP入核率。结果与对照组比较,对照+IS组HLA-DR标记的阳性细胞百分比明显增加（P＜0.01）,CD206标记的阳性细胞百分比无明显变化（P＞0.05）;与对照+IS组比较,过表达+IS组HLA-DR标记的阳性细胞百分比明显减少（P＜0.01）,而CD206标记的阳性细胞百分比明显增加（P＜0.01）。与对照组比较,对照+IS组茁-cateninmRNA及蛋白表达水平均明显降低,入核率明显下降（均P＜0.01）;而与对照+IS组比较,过表达+IS组茁-cateninmRNA及蛋白表达水平均升高,入核率增加（均P＜0.05）。与对照组比较,对照+IS组YAP蛋白表达水平明显升高,p-YAP蛋白表达水平明显降低,YAP入核率增加（均P＜0.01）;与对照+IS组比较,过表达+IS组YAP蛋白表达水平明显降低（P＜0.01）,p-YAP蛋白表达水平升高（P＜0.05）。结论Klotho可通过茁-catenin通路抑制IS诱导的巨噬细胞极化。     

IL-1β辅助小胶质细胞M1型活化的作用机制研究

目的探讨IL-1茁辅助小胶质细胞M1型活化的作用和机制。方法将BV2细胞分为对照（Control）组、脂多糖（LPS）组、LPS+IL-1茁组。Control组常规培养;LPS组用终浓度为1mg/L的LPS处理;LPS+IL-1β组先用15滋g/L的IL-1β预处理6h,再用终浓度为1mg/L的LPS处理。LPS的处理时间为24h。酪氨酸激酶（JAK1）抑制剂IN-7处理的实验中,将BV2细胞分为LPS组、LPS+IL-1茁组、LPS+IL-1茁+IN-7组,其中LPS+IL-1茁+IN-7组在IL-1茁处理前6h用0.5滋mol/LIN-7预处理,阻断JAK1,其余处理同前。采用ELISA法检测培养基中IL-6、TNF-琢、一氧化氮（NO）和前列腺素G2（PEG2）水平;免疫荧光染色观察BV2细胞中CD86的荧光强度;Westernblot法检测M1型标志物单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、趋化因子8（CXCL-8）的表达以及JAK1-信号转导及转录激活蛋白1（STAT1）信号蛋白JAK1、STAT1、磷酸化的JAK1（p-JAK1）、磷酸化的STAT1（p-STAT1）的表达。结果与LPS组比较,LPS+IL-1β组培养基中在3、6、12、18、24h时IL-6、TNF-α、NO和PEG2表达水平均上调（均P＜0.05）,细胞中CD86荧光强度上调（P＜0.05）,细胞中MCP-1、CXCL-8、JAK1、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）。而IN-7处理后,与LPS+IL-1β组比较,LPS+IL-1β+IN-7组培养基在3、6、12、18、24h时IL-6、TNF-α、NO和PEG2表达水平均下调（均P＜0.05）,细胞中CD86荧光强度下调（P＜0.05）,细胞中MCP-1、CXCL-8、JAK1、STAT1、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平均下调（均P＜0.05）。结论IL-1β可以通过激活JAK1-STAT1信号,进一步促进小胶质细胞M1型活化,这是神经炎症进展的机制之一。     

ATP合酶在糖尿病大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞病变中的作用机制

目的探讨三磷酸腺苷（ATP）合酶在糖尿病大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞病变中的作用机制。方法体内实验：40只SD大鼠随机分为正常对照组与糖尿病组（按60mg/kg腹腔内注射链脲佐菌素后72h、1周、2周随机血糖水平＞16.7mmol/L为造模成功）,饲养10周后比较大鼠阴茎勃起功能;处死后取阴茎海绵体组织,采用胶原纤维染色法检测纤维化程度,免疫组化法检测Caspase-3表达,Westernblot法检测F1-ATPase蛋白表达。体外实验：取正常大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞进行细胞培养,分为对照组（正常培养基培养）、高糖组（含30mmol/L葡萄糖的培养基培养）、高糖+ATP酶过表达组（ATPase高表达质粒转染阴茎海绵体平滑肌细胞24h后,再用含30mmol/L葡萄糖的培养基培养）。48h后采用Westernblot法检测F1-ATPase、转化生长因子茁1（TGF-茁1）、结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达。结果在体内实验中,与正常对照组比较,糖尿病组30min内阴茎勃起次数明显减少（P＜0.05）,阴茎海绵体胶原纤维/肌纤维比例明显增加（P＜0.05）,Caspase-3阳性的平滑肌细胞比例明显升高（P＜0.05）,阴茎海绵体F1-ATPase蛋白表达明显降低（P＜0.05）。在体外实验中,与高糖组比较,高糖+ATP酶过表达组F1-ATPase蛋白水平较高糖组明显升高（P＜0.05）,CTGF、TGF-茁1蛋白表达明显降低（P＜0.05）。结论高糖状态会导致阴茎海绵体纤维化,促进阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡。通过线粒体ATP酶的上调,可以抑制TGF-茁1途径,改善阴茎海绵体平滑肌纤维化程度,恢复平滑肌的功能,促使阴茎勃起功能得到改善。     

糖尿病肾病患者血清sfrp-1水平及其与肾损害的关系研究

目的分析糖尿病肾病（DN）患者血清分泌型卷曲相关蛋白-1（sfrp-1）水平及其与肾功能和肾纤维化指标的关系。方法选取90例DN患者为研究对象,为DN组;另择同期行健康体检者90例作为对照（C组）。采用酶联免疫吸附试验检测两组血清sfrp-1水平,肾功能指标白蛋白（Alb）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、β2-微球蛋白（茁2-MG）和肾纤维化指标转化生长因子茁1（TGF-茁1）、金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、结缔组织生长因子（CTGF）、Ⅳ型胶原（CⅣ）水平。结果DN组患者血清sfrp-1水平低于C组（P＜0.05）。DN组Alb水平低于C组（P＜0.05）,Scr、BUN、UA、β2-MG水平均高于C组（P＜0.05）。DN组TGF-茁1、TIMP-1、CTGF、CⅣ水平均高于C组（均P＜0.05）。DN患者血清sfrp-1水平与Alb水平呈正相关（P＜0.05）,与Scr、BUN、UA、茁2-MG、TGF-茁1、TIMP-1、CTGF、CⅣ水平均呈负相关（均P＜0.05）。结论DN患者血清sfrp-1水平降低,可反映其肾损害程度。     

转化生长因子-?茁1促进骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化

目的：探讨转化生长因子?茁1（transforming growth factor-?茁1,TGF-?茁1）在骨形态发生蛋白9（bone morphogenetic protein 9,BMP9）诱导间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）成骨分化过程中的作用。方法：应用鼠MSC C3H10T1/2,以重组腺病毒法将BMP9导入,施加TGF-?茁1处理,建立BMP9联合TGF-β1诱导MSC成骨分化模型。改良SEAP化学发光法检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性;茜素红S染色进行钙盐沉积检测;实时荧光定量PCR检测成骨相关基因Ⅰa2型胶原（collagenⅠa2,COLⅠa2）、骨桥素（osteopotin,OPN）、骨钙素（osteocalcin,OCN）的mRNA转录表达水平,免疫细胞化学法检测细胞内OPN、OCN表达变化。荧光素酶报告基因法检测信号通路的Smad水平。结果：TGF-?茁1与BMP9联合处理较BMP9单独处理能更早更多地提高ALP活性和引起钙盐沉积（F处理=18 782.10,P=0.000）,持续处理达17 d后不再显示明显差异,TGF-?茁1单独处理与对照组间无明显差异（F=1.03,P=0.318）。TGF-?茁1与BMP9联合处理较BMP9单独处理可使COLⅠa2、OPN、OCN mRNA转录水平明显增高（COLⅠa2的F处理=250.30,P=0.000;OPN 的F处理=795.64,P=0.000;OCN的F处理=206.55,P=0.000）,COLⅠa2增高发生较早和显著（F=250.30,P=0.000）;细胞内OPN、OCN蛋白阳性表达显著增强。TGF-β1联合BMP9处理能刺激信号通路相应的Smad荧光素报告活性（?字2=32.84,P=0.000）。结论：在BMP9诱导MSC成骨分化中,联合应用TGF-?茁1具有促进成骨作用,BMP9与TGF-?茁1在成骨分化中可能存在互补效应。     

不同手术时机高血压脑出血患者外周血及脑组织TGF-茁1、NF-资B表达的差异

目的探讨不同手术时机高血压脑出血患者外周血及脑组织转化生长因子-茁1（TGF-茁1）和NF-资B表达的差异,以期为该病手术治疗时机的选择提供参考。方法选取2013年4月至2017年8月上海市浦东新区周浦医院收治的高血压脑出血患者245例,其中手术时机为超早期（出血后＜8h）105例、早期（出血后8~24h）95例、延迟（出血后＞24h）45例。采集患者外周血5ml;术中留取少量出血皮质区脑组织为出血区标本,血肿旁约1cm的周围脑组织为非出血区标本。采用RT-PCR、免疫组化和Westernblot法分别检测外周血及脑组织TGF-茁1、NF-资B蛋白及mRNA相对表达量,观察并比较3组患者术后并发症发生率。结果3组患者外周血及脑组织TGF-茁1、NF-资BmRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,其中超早期组＜早期组＜延迟组（均P＜0.05）。3组患者脑组织出血区和非出血区TGF-茁1、NF-资B蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,其中超早期组＜早期组＜延迟组（均P＜0.05）。3组患者术后发生了不同程度的消化道出血、肺部感染和颅内感染,合计并发症发生率比较差异有统计学意义（P＜0.05）,其中超早期组＜早期组＜延迟组（均P＜0.05）。结论高血压脑出血患者外周血及脑组织TGF-茁1、NF-资B表达可随手术时机推迟而明显升高,术后并发症发生率也明显升高,建议对有手术指征的患者早期进行手术。     

射干麻黄汤加味对哮喘小鼠TGF-β1的影响

目的：探讨射干麻黄汤加味对慢性哮喘小鼠TGF-β1的影响。方法：健康清洁级雌性BALB/c小鼠50只,每组10只,随机分为A组：正常对照组;B组：哮喘模型组;C组：地塞米松组;D组：射干麻黄汤组;E组：射干麻黄汤加味组。建立慢性哮喘小鼠模型后,分别予以相应药物干预,取材后分别采用ELISA法、免疫组化、实时定量PCR技术等方法检测BALF中TGF-β1含量、肺组织TGF-β1及TGF-β1mRNA表达强度的变化情况。结果：与正常对照组相比哮喘小鼠的BALF中TGF-β1含量、肺组织TGF-β1及TGF-β1mRNA表达强度均明显增加（P〈0.05）;经给予地塞米松、中药处理后上述指标均明显降低,哮喘发作程度减轻（P〈0.05）,其中射干麻黄汤加味组优于射干麻黄汤组（P〈0.05）。结论：射干麻黄汤加味可抑制BALB/c哮喘小鼠哮喘的发生,其机制有可能是通过降低TGF-β1的表达而实现的。     

干预miR-31对哮喘小鼠肺组织TGF-β1/Smad3、TLR2/MyD88/NF-资B信号通路的影响

目的探讨干预miR-31对哮喘小鼠肺组织肺组织转化生长因子-茁1（TGF-茁1）/果蝇MAD基因3哺乳动物类似基因（Smad3）、Toll样受体2（TLR2）/髓样分化因子（MyD88）/NF-资B信号通路的影响。方法选取40只SD健康雄性小鼠,10只为正常组,其余30只建立哮喘模型,建模成功后分为哮喘组、上调组、下调组,每组各10只。上调组小鼠尾部静脉注射miR-31激动剂干预,下调组小鼠尾部静脉注射miR-31拮抗剂干预,正常组、哮喘组小鼠尾部静脉注射等量0.9%氯化钠注射液干预。采用HE染色观察各组小鼠肺组织病理学改变情况,RT-PCR法检测各组小鼠肺组织miR-31、CD44mRNA表达水平,酶标分析仪检测各组小鼠血清IFN-酌、IL-2、IL-4、IL-22、IL-3水平,免疫透射比浊法各组小鼠血清总抗氧化能力（TAOC）、一氧化氮（NO）水平,Westernblot法检测TGF-茁1/Smad3、TLR2/MyD88/NF-资B信号通路蛋白水平。结果与正常组比较,其他3组小鼠miR-31、CD44mRNA表达水平,IL-2、IL-4水平,TAOC、NO、IL-22、IL-3水平,TGF-茁1、Smad3、TLR2、MyD88、NF-资Bp65蛋白表达水平均升高,IFN-酌水平均降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与哮喘组、上调组比较,下调组小鼠miR-31、CD44mRNA表达水平,IL-2、IL-4水平,TAOC、NO、IL-22、IL-3水平,TGF-茁1、Smad3、TLR2、MyD88、NF-资Bp65水平均降低,IFN-酌水平升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论下调哮喘小鼠miR-31水平,能够调控CD44mRNA水平,调节Th1/Th2平衡,减轻哮喘小鼠氧化应激反应、炎症反应的严重程度,其作用机制可能与调控TGF-茁1/Smad3、TLR2/MyD88/NF-资B信号通路蛋白水平有关。     

罗红霉熬caveolin-1-p—ERK1／2对离体哮喘大鼠气道平滑肌细胞cyclinD1表达的影响

目的探讨罗红霉素（RXM）经caveolin-1-P-ERKl／2对离体哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）cyclinDl表达的影响。方法将30只SPF级雄性SD大鼠随机均分为对照组和哮喘组,以卵自蛋白致敏和激发复制哮喘气道重塑模型;采用Im—age—ProPlusVersion60图像分析软件测定支气管壁和支气管平滑肌层厚度;透射电镜观察两组大鼠ASMCs微囊表达情况;CCK-8检测不同浓度RXM[A组（只含0．1％DMSO）、R10组（含RXMl0．g／ml＋0．1％DMSO）、R25组（含RXM25ug／ml＋01％DM—S0）、R50组（含RXM50ug／ml＋0．1％DMSO）、R100组（含RXM100tJg／ml＋0.1％DMSO）1干预哮喘ASMCs后细胞的增殖情况,Westernblot测定caveolin-1、P—ERK、cyclinDl的蛋白表达。结果哮喘组支气管壁和支气管平滑肌层明显增厚,而微囊表达匮乏。哮喘组大鼠支气管壁与平滑肌层厚度均高于对照组（均P〈0．01）。各RXM干预组ASMCsA值均低于A组,其中R100组明显低于A组（P〈0．05）。R100组caveolin-1表达明显高于A组及R10组,cyclinDl表达明显低于A组及Rt0组,差异均有统计学意义（P〈0,05或O．01）;R25、R50、R100组P—ERK表达均明显低于A组,差异均有统计学意义（P〈0．05或001）。哮喘ASMCs增殖活性与caveolin-1蛋白表达呈负相关（P〈0．05）,与P—ERK及cyclinDl蛋白表达呈正相关（P〈005或0．01）;caveolin-1与P—ERK蛋白表达呈负相关（P〈0．01）,与cyclinDl蛋白表达呈正相关（P〈001）;P—ERK与cyclinD1蛋白表达呈正相关（P〈0．01）。结论RXM可能通过上调caveolin-1表达、抑制ERK1／2活化,进而影响cyclinD1的表达,从而抑制哮喘大鼠ASMCs增殖。     

TGF-β_1对不同阶段哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖的作用

目的探讨TGF-β1对不同阶段哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖的作用。方法建立2周、6周哮喘大鼠模型,分别以1μg/L、10μg/L和100μg/LTGF-β1干预ASMCs生长。采用流式细胞仪、MTT法检测ASMCs增殖情况,观察不同浓度TGF-β1对ASMCs增殖的影响。结果 2周和6周哮喘组ASMCs的S期比例、A值分别为(34.31±1.41)%、(35.96±3.46)%;(0.546±0.005)、(0.559±0.009)与对照组(12.24±2.64)%、(0.289±0.009)比较均显著增高(均P0.01)。2周、6周哮喘模型组的各TGF-β1干预组ASMCs的S期比例、A值与各自哮喘组比较均显著升高(均P0.01),10μg/L和100μg/LTGF-β1组比1μg/LTGF-β1组对ASMCs增殖作用明显增加(P0.01),10μg/LTGF-β1组和100μg/LTGF-β1组相比,ASMCs增殖细胞占细胞总数的百分比无明显变化,两种浓度增殖作用无有明显差别(P0.05)。而2周和6周哮喘组相比,加入不同浓度TGF-β1干预后的差别不大(P0.05)。结论与正常鼠相比,2周和6周哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高,6周哮喘大鼠气道平滑肌较2周哮喘大鼠增殖更明显。经TGF-β1干预后,2周和6周哮喘哮喘大鼠气道平滑肌细胞处于S期的细胞比例增加,增殖增强,提示TGF-β1可能在哮喘早期阶段即可促进大鼠气道平滑肌细胞增殖,并促进各阶段哮喘大鼠气道平滑肌细胞持续增殖。     

iNOS、TGF-β1在哮喘大鼠中性粒细胞中的表达及其意义

目的：观察诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、转化生长因子-β1（TGF-β1）在哮喘大鼠中性粒细胞（PMN）中的表达情况,探讨PMN参与哮喘的可能机制。方法：20只健康雄性SD大鼠随机分成哮喘组和对照组,每组10只,用卵白蛋白（OVA）致敏和激发建立哮喘模型。分离纯化血PMN,免疫组织化学法检测PMN中iNOS、TGF-β1的表达水平。结果：哮喘组血PMN中iNOS、TGF-β1蛋白的表达水平（OD值）分别为0.122±0.017和0.228±0.016,高于对照组（分别为0.076±0.014和0.131±0.015）（均P＜0.01）。结论：哮喘大鼠血PMN中iNOS、TGF-β1的表达水平增加,PMN可能部分通过iN0S、TGF-β1合成的增加参与哮喘的气道炎症过程。