针刀调控软骨细胞自噬维持骨关节炎软骨细胞的稳态

背景：针刀是治疗骨关节炎的有效方法,临床疗效肯定,但具体机制尚未明确。目的：探讨针刀调控软骨细胞自噬维持骨关节炎软骨细胞稳态的作用。方法：采用随机数字表法将28只新西兰兔分为对照组、骨关节炎组、针刀组和透明质酸组,每组7只,后3组保持左后肢过伸位采用石膏绷带固定6周建立膝骨关节炎模型,建模成功后,对照组与骨关节炎组不进行任何治疗,针刀组给予针刀治疗(15 min/次,1次/周),透明质酸组膝关节腔内注射透明质酸钠溶液(1次/周),均连续治疗5周。末次治疗后第2天,采用DR片观察兔膝关节宏观结构,透射电镜观察软骨细胞超微结构,Tunel染色检测软骨细胞凋亡,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路及自噬相关蛋白表达。结果与结论：(1)DR片显示,骨关节炎组兔膝关节间隙变窄、周围骨赘形成;相较于骨关节炎组,透明质酸组、针刀组兔膝关节间隙增宽,周围骨赘减少;(2)透射电镜下可见骨关节炎组兔膝关节软骨细胞内自噬体数量减少,细胞核皱缩、核膜破裂,细胞器形态不完整、细胞呈现明显死亡趋向;相较于骨关节炎组,透明质酸组与针刀组自噬体明显增加,细胞核核膜完整,细胞生存状态良好;(3)T...     

自噬基因在骨关节炎软骨细胞凋亡过程中的保护和平衡效应

背景：软骨细胞在低营养供给下可发生细胞自噬,细胞自噬和细胞坏死、凋亡不同,可以使软骨细胞在营养供给不足时,能够存活下来,可能是软骨细胞自身的重要保护机制之一。 目的：综合阐述自噬基因保护关节软骨及抑制骨关节炎等方面的机制和作用。 方法：应用计算机检索中国知网、万方数据库及PubMed数据库2000年1月至2015年1月关于自噬基因与骨关节炎的相关研究的文章,中文检索词为“自噬基因、骨关节炎、关节软骨、软骨细胞”,英文检索词为“autophagy、osteoarthritis、beclin1、LC3”。选择自噬基因与骨关节炎的相关文章,初检得到269余篇文献,根据纳入标准选择其中的38篇进行综述。  结果与结论：软骨细胞的损伤凋亡是软骨退变的主要机制,不予控制,就可能会进一步发展为骨性关节炎。细胞的损伤凋亡是软骨退变的重要机制之一,因此防止软骨细胞的损伤凋亡,可能有利于损伤软骨的修复,以此来缓解骨关节炎的病情发展。自噬现象能够抑制受损软骨细胞凋亡,发现其可将改变传统治疗骨关节炎的局限,但目前自噬基因与骨关节炎相关的研究还处于初级阶段,特别是对自噬途径在软骨中如何被诱导,如何进行信号转导,如何对软骨细胞生存产生影响等方面的认识还不够全面,有待进一步的研究。     

SIRT1作为调控软骨细胞自噬潜在靶点治疗骨关节炎的研究进展

目前骨关节炎的治疗主要以缓解疼痛和延缓病情发展的对症治疗为主.近年来研究表明,Sirtuin1(SIRT1)是骨相关疾病的潜在治疗靶点,可通过促进自噬来保护软骨细胞.本文就SIRT1通过调控自噬来保护软骨细胞以及SIRT1作为治疗骨关节炎等骨退行性疾病潜在靶点的研究进展做一综述.     

软骨细胞凋亡与骨关节炎

骨关节炎（OA）是一种老年人常见的关节疾患，近年研究显示，软骨细胞过度凋亡可能在OA的发病中产生了重要影响，在OA中，软骨细胞凋亡多通过NO途径和Fas途径发生，并且受IL-1β，TNF-α，IL-8，bcl-2等因素的影响。阐明软骨细胞凋亡在OA的发病机制中的作用。将有助于OA的防治。     

自噬通过抑制凋亡促进体外饥饿状态下脂肪细胞存活

 目的: 观察体外饥饿状态下脂肪细胞的自噬变化,研究自噬在维持体外饥饿状态下脂肪细胞存活中的作用。方法: 将小鼠3T3-L1细胞诱导成为脂肪细胞后,雷帕霉素(rapamycin,RAP)预处理脂肪细胞,在缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)模拟的饥饿环境中孵育细胞。应用Western blotting及透射电镜法检测细胞自噬变化,用TUNEL染色及Western blotting检测脂肪细胞凋亡。结果: OGD条件下脂肪细胞的自噬水平明显升高,RAP预处理进一步上调了OGD条件下的细胞自噬。与对照组相比,OGD组细胞cleaved caspase-3的水平及细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。RAP预处理降低了OGD 条件下cleaved caspase-3的水平,并明显降低了细胞凋亡率(P<0.05)。结论: 自噬在饥饿状态下脂肪细胞存活中发挥保护性作用,提高自噬水平有助于降低饥饿状态下脂肪细胞的凋亡水平。     

软骨细胞凋亡与骨关节炎

骨关节炎 (OA)是一种老年人常见的关节疾患 ,近年研究显示 ,软骨细胞过度凋亡可能在OA的发病中产生了重要影响。在OA中 ,软骨细胞凋亡多通过NO途径和Fas途径发生 ,并且受IL 1β、TNF α、IL 8、bcl 2等因素的影响。阐明软骨细胞凋亡在OA的发病机制中的作用 ,将有助于OA的防治。     

舒芬太尼诱导宫颈癌细胞自噬和凋亡并抑制癌细胞恶性增殖

目的 探讨舒芬太尼对宫颈癌细胞 SiHa 自噬、 凋亡及细胞增殖的影响。 方法 采用 CCK8 法检 测舒芬太尼梯度浓度 (3. 125、 6. 25、 12. 5、 25、 50、 100、 200、 400、 800 nmol / L) 作用下宫颈癌细胞 SiHa 细胞活力, 选取 4 个舒芬太尼作用浓度 (0、 25、 50、 100 nmol / L) 处理 SiHa 细胞 24 h, 采用流式细胞法、 克隆形成实验检测 SiHa 细胞凋亡及增殖情况, 免疫荧光法检测各组细胞 LC3 水平, 采用 Western 印迹检测 自噬相关蛋白 LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ、 Beclin1、 ATG7 与增殖、 凋亡相关蛋白 P21、 Survivin 水平, 采用 RT-PCR 检测 细胞增殖相关基因 Ki67、 PCNA 表达水平。 结果 随着舒芬太尼处理浓度的增加, SiHa 细胞活力逐渐降低。 50、 100 nmol / L 舒芬太尼处理下 SiHa 细胞的 LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ、 Beclin1、 ATG7 水平显著高于 0 nmol / L 舒芬太 尼处理, 免疫荧光检测结果显示 50、 100 nmol / L 舒芬太尼处理下 LC3 荧光信号高于 0 nmol / L 舒芬太尼处 理, 流式细胞仪检测结果显示 50、 100 nmol / L 舒芬太尼处理下 SiHa 细胞凋亡高于 0 nmol / L 舒芬太尼处理。 克隆形成实验结果显示 50、 100 nmol / L 舒芬太尼处理下 SiHa 细胞克隆形成率降低, Survivin 水平与 Ki67、 PCNA 表达水平降低, 而 P21 水平升高。 结论 舒芬太尼对宫颈癌细胞自噬、 凋亡有促进作用, 对细胞增 殖有抑制作用, 可能与调节细胞自噬、 凋亡、 增殖相关蛋白或基因水平有关。     

037 软骨细胞凋亡与骨关节炎

骨关节炎(OA)是一种老年人常见的关节疾患,近年研究显示,软骨细胞过度凋亡可能在OA的发病中产生了重要影响.在OA中,软骨细胞凋亡多通过NO途径和Fas途径发生,并且受IL-1β、TNF-αIL-8、bcl-2等因素的影响.阐明软骨细胞凋亡在OA的发病机制中的作用,将有助于OA的防治.     

骨关节炎中软骨细胞自噬的作用及其靶向治疗

背景:骨关节炎发生后,软骨细胞的自噬受到抑制.而自噬是一种维持细胞稳态的重要生理机制,可降解损伤的大分子和细胞器,改善细胞自噬则有可能缓解骨关节炎的发展.目的:探索软骨细胞自噬在骨关节炎中的作用机制及基于软骨细胞自噬治疗骨关节炎的方法.方法:在PubMed和中国知网、万方数据库,以骨关节炎,软骨细胞,自噬,治疗,信号...     

糖皮质激素激活自噬对软骨细胞衰老的影响

目的:探讨糖皮质激素对关节软骨细胞衰老和自噬影响,并分析自噬在其中的作用及机制。方法:培养SD大鼠软骨细胞,阿利辛染色和collagen II免疫组化进行鉴定。使用不同浓度的地塞米松作用于软骨细胞不同的时间后,Lyso Tracker Red和MDC染色观察自噬囊泡的生成,Western blot检测LC3、beclin-1、P62、p70S6K和4EBP1蛋白表达的变化。β-半乳糖苷酶染色分析糖皮质激素对软骨细胞衰老的影响,并使用自噬抑制剂来探讨自噬对地塞米松作用下软骨细胞衰老的作用。结果:地塞米松可以显著提高软骨细胞的自噬水平,尤其是在作用4 d后,LC3-II表达随着地塞米松浓度的增加而升高,而P62和beclin-1的表达也验证自噬水平的升高。Lyso Tracker Red和MDC染色发现软骨细胞中自噬泡的生成随着地塞米松浓度的升高而增加。m TOR信号通路上的p70S6K和4EBP1的磷酸化均被地塞米松抑制。更重要的是,地塞米松可以引起软骨细胞的衰老,而使用3-MA抑制自噬后,细胞进一步衰老。结论:糖皮质激素激活软骨细胞中的自噬,并同时诱导软骨细胞的衰老,而自噬在这过程中对细胞的衰老可能具有代偿性的保护作用。同时糖皮质激素抑制m TOR信号通路,可能与自噬的激活相关。     

神经干细胞自噬与自噬机制研究现状

<正>自噬(autophagy)作为细胞内物质代谢的重要方式,是亚细胞膜内的结构发生动态变化,也是溶酶体介导细胞内蛋白质和细胞器降解的正常新陈代谢过程。细胞死亡包括坏死、凋亡和自噬三种形式。在细胞平衡合成和分解代谢过程中,通过自噬保持细胞内环境的稳定,使细胞自我更新,保持活力[1-4]。自噬不足则细胞衰老,过度则出现程序性细胞死亡     

自噬抑制增强白藜芦醇对人软骨肉瘤细胞凋亡的诱导

目的:研究白藜芦醇(resveratrol,Res)诱导软骨肉瘤细胞凋亡的同时是否激活自噬及自噬抑制剂联合白藜芦醇对软骨肉瘤细胞的作用。方法:SW1353软骨肉瘤细胞设对照组、Res组、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3MA)组及Res+3MA组,用透射电镜观察对照组及Res组细胞自噬体,CCK-8法反映4组细胞活力,Western blotting测cleaved caspase-3、Bax及Bcl-2表达量及TUNEL法来反映4组细胞凋亡情况,Western blotting检测Beclin1、LC3-Ⅱ及p62表达量反映4组细胞自噬情况。结果:在Res作用下,正常细胞活力下降和凋亡水平上升的同时,自噬水平明显上升(P0.05);应用3MA下调正常细胞自噬水平后,3MA组凋亡水平较正常组上升(P0.05);在Res联合3MA作用下,Res+3MA组较Res组细胞活力和细胞自噬水平显著下降(P0.05),而凋亡水平显著上升(P0.05)。结论:Res诱导软骨肉瘤细胞凋亡的同时,上调细胞自噬水平;自噬抑制增强Res对人软骨肉瘤细胞凋亡的诱导。     

植物凝集素诱导肿瘤细胞凋亡和自噬的研究进展

植物凝集素是一种非免疫原性的蛋白质,在植物界广泛分布。它可以专一性地识别并结合单糖或寡糖,这种结合具有可逆性。植物凝集素与细胞表面表达的糖分子结合后能够引发细胞内一系列的生物化学反应,使细胞或机体代谢发生改变,例如诱导细胞凋亡和自噬。现就植物凝集素诱导肿瘤细胞凋亡和自噬可能的分子机制作一综述。     

运动训练通过诱导自噬、抑制凋亡改善老龄大鼠心脏功能

 目的：观察梯度运动对老龄大鼠心肌细胞自噬及凋亡的影响,探讨运动训练提高老龄大鼠心脏功能的机制。方法：实验分为3组,青年组(young)、老年组(old)和老年运动组（old+Ex）。超声心动图记录大鼠心脏功能,透射电镜观察心肌细胞超微结构变化、自噬体的形成以及线粒体形态学的改变,Westernblotting检测心肌组织自噬相关蛋白5（Atg5）、自噬相关蛋白Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及心肌线粒体细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达,TUNEL方法检测心肌细胞凋亡,分光光度法检测钙诱导的线粒体通透性转换孔(mPTP)开放。结果: （1）与young组比较,透射电镜下可见old组大鼠心肌肌原纤维排列不整齐,线粒体基质疏松,线粒体膜有破裂,肌丝间有大量脂褐素颗粒沉积;心肌组织中Beclin 1与Atg5蛋白表达降低,LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低,线粒体Cyt C表达下降,细胞凋亡指数增加,mPTP开放数目增加,左心室收缩末期与舒张末期直径明显增大,左心室射血分数与缩短分数降低(P＜0.05或P＜0.01)。（2）与old组比较,old+Ex组大鼠心肌超微结构观察可见肌节结构清晰,线粒体基质致密,数目增多,自噬体形成增多,脂褐素颗粒沉积明显减少;并且心肌组织Beclin 1与Atg5蛋白表达增加,LC3 I向LC3 II转换增加,细胞凋亡指数减少,mPTP开放数目减少,心肌线粒体Cyt C表达上调,左室功能有明显改善（P＜0.05或P＜0.01）。结论：运动训练通过上调老龄大鼠心肌细胞自噬,抑制细胞凋亡,改善老龄大鼠心脏功能。     

姜黄素对H2O2诱导软骨细胞自噬的调控

背景:姜黄素对骨关节炎具有良好的治疗作用,但具体机制还不清楚;研究表明自噬的激活可降低骨关节炎的严重程度。目的:探讨姜黄素对H₂O₂诱导软骨细胞自噬的调控作用。方法:体外培养C57小鼠关节软骨细胞,分为对照组、模型组以及姜黄素不同剂量组(10,20,40,80μmol/L)。模型组给予H₂O₂(1 mmol/L)处理,模拟骨关节炎体内氧化应激状态;姜黄素组中不同浓度姜黄素与软骨细胞培养48 h后,加入H₂O₂,24 h后收集细胞进行检测。CCK-8法检测各组细胞活力;酶联免疫吸附法检测炎症因子白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平;TUNEL染色检测凋亡状况;流式细胞法检测各组细胞凋亡率;Western-blot法检测凋亡相关蛋白(活化半胱天冬酶3、Bax/Bcl-2)、细胞自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白)及自噬相关信号通路蛋白(蛋白激酶B、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)的表达情况;实时荧光定量PCR检测软骨基质降解相关基因(基质金属蛋白酶13、血...     

通过抑制自噬作用增强声动力学疗法诱导的肿瘤细胞凋亡研究

探讨声动力疗法诱导S180细胞凋亡过程中自噬现象的发生及其在细胞凋亡中的作用。用频率为1.1 MHz、功率为3 W/cm²的超声,结合1 μg/mL原卟啉Ⅸ作用于S180细胞,MTT检测细胞存活率;DAPI染色检测凋亡细胞核形态变化;Rhodamine 123 染色检测线粒体膜电位;Western blotting检测自噬标记分子LC3由Ⅰ型向Ⅱ型的转化;吖啶橙（AO）活细胞染色观察自噬小体。声动力处理后,S180细胞明显受损,MTT显示存活率为59.3%并且出现了典型的凋亡形态学特征,线粒体膜电位下降至MFI=971.28,LC3-II表达明显升高;利用自噬和凋亡的抑制剂实验结果提示自噬体的形成（1 h）早于细胞凋亡的发生 (8 h),自噬抑制剂3-MA和Ba A1增强了SDT对线粒体膜电位的破坏,DAPI染色进一步证实了自噬抑制剂有利于促进SDT诱导的S180细胞凋亡。提示自噬参与了SDT诱导的S180细胞死亡,自噬特异性药物抑制剂增强了SDT诱导的细胞凋亡。     

长春新碱诱导的自噬性细胞凋亡对线粒体膜电位的影响

目的：了解长春新碱（VCR）诱导的自噬性细胞凋亡是否与线粒体跨膜电位（△Ψm）改变有关及其可能的机制。材料与方法：以正常人的肝细胞系为体外模型,应用碘化丙啶（PI）／Rhodamine123(Rh123)双重染色检测△Ψm,通过亚GI期细胞和透射电镜鉴定细胞凋亡。结果与结论：VCR可明显诱导线粒体△Ψm下降,也可以诱导L－02细胞自噬性凋亡。线粒体△Ψm下降可能是VCR诱导自噬性细胞凋亡的关键环节。     

自噬与软骨细胞生存及软骨损伤

背景：自噬是细胞通过溶酶体途径处理内源性底物的过程,它普遍存在于机体细胞中,又被看作是细胞Ⅱ型程序性死亡,自噬可能是正常软骨细胞的一种保护或平衡机制。 目的：就自噬与软骨及其损伤相关性的最新研究进展进行讨论,旨在对自噬在软骨及其损伤修复中的作用有一个更好的理解。 方法：应用计算机检索中国知网、万方数据库及PubMed数据库最近20年有关自噬与软骨损伤方面的文献,中文检索词为“自噬、软骨、软骨细胞”,英文检索词为“autophagy、cartilage、chondrocytes、beclin1、LC3”。 结果与结论：软骨细胞能感受关节内微环境变化而做出应答,以调整细胞基质代谢,维持关节软骨生物学功能,而软骨细胞所处低氧环境是引起细胞自噬的重要因素。自噬是正常软骨细胞的一种平衡或者保护机制,虽然自噬与软骨及其损伤相关性在近些年的研究中取得了长足的进步,但不得不承认其仍处于初级阶段,在分子水平上一些Atg的发现加深了对自噬的认识,但在软骨中如何诱导自噬途径,自噬信号是如何传导的,对软骨细胞生存会产生怎样的影响等方面的了解还不够丰富,有待广大学者进一步研究。     

自噬/苄氯素1调节因子1在自噬与凋亡中作用的研究进展

细胞凋亡(Ⅰ型程序性死亡)和自噬性细胞死亡(Ⅱ型程序性死亡)这2种细胞死亡方式可通过一些蛋白的相互作用而介导形成平衡对立状态.一方面,细胞凋亡由胱天蛋白酶(caspase,CASP)依赖性通路经内源性、外源性或内质网应激诱导途径予以控制,而死亡信号则可经这3种途径介导受损或感染细胞的清除[1-2].另一方面,细胞自噬由...