RNA干扰Jabl基因对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖影响

目的 通过脂质体将人工合成的Jab1 siRNA Ⅱ包裹后导入人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞(简称Hep-2细胞)中,使Jab1基因的表达受到抑制,并通过不同的方法来观察Jab1 siRNA Ⅱ对Jab1基因的表达及细胞增殖影响.方法 MTT法检测Jab1 siRNA Ⅱ不同时间对Hep-2细胞增殖的影响,RT-PCR方...     

RNAi沉默TRF2基因对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生长增殖的影响

目的:探讨采用RNA干扰技术沉默端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生长增殖的作用情况.方法:构建特异性表达TRF2 mRNA且含有荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA,并将其转染Hep-2细胞,采取PCR琼脂糖凝胶电泳检验靶基因TRF2表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,cell counting kit-8(CCK-8)法观察细胞增殖活性.结果:Hep-2细胞被转染后,TRF2基因表达明显受抑,细胞凋亡发生,增殖活性明显降低.结论:RNA沉默TRF2可明显抑制人喉鳞状癌细胞的增殖,促进细胞发生凋亡.     

线粒体基因组单倍型类群与喉鳞状细胞癌的相关性研究

目的检测常见线粒体基因组（mtDNA）单倍型A、B、C、D、F、G、M在正常人群及喉癌患者中的分布频率,探讨mtDNA单倍型与喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma, LSCC）发病的相关性。方法选取2013年12月~2015年12月80例LSCC患者作为实验组,同期选取健康体检者74例作为对照组（normal control, NC）,提取两组病例的全血DNA,经PCR-扩增、基因测序,划分单倍型及其子单倍型,计算mtDNA单倍型及其子单倍型在不同组的分布频率,运用SPSS 20.0统计学软件进行统计分析,P<0.05为有统计学意义。结果mtDNA单倍型B及D4在LSCC组的分布频率高于NC组(P﹤0.05),且与临床分期无关（P>0.05）。结论mtDNA单倍型B和D4可能是LSCC的风险因素,可以作为LSCC发病的基因筛查参考指标。     

RNAi沉默miRNA-224-5p对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响

目的通过慢病毒载体介导的RNA干扰技术,来探讨沉默miRNA-224-5p对人喉鳞状细胞癌（简称喉鳞癌）Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-224-5p-RNAi-LV3转染喉鳞癌Hep-2。设为干扰组（miRNA-224-5p-siRNA,SI组）、阴性对照组（NC组）和空白对照组（BC组）,分别采用聚合酶链反应方法检测miRNA-224-5p的表达情况,用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭情况。结果 miRNA-224-5p-RNAi-LV3可显著降低miRNA-224-5p的表达,转染后Hep-2细胞增殖能力显著降低,细胞侵袭能力明显减弱,细胞周期及细胞凋亡均未见明显影响。结论 RNAi沉默miRNA-224-5p可以抑制Hep-2细胞增殖,并降低其侵袭能力。     

CDR1as在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨环状RNA ciR 7(CDR1as)在喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）中的表达及临床意义,并分析CDR1as与miR 7的相关性。方法收集2011—2013年手术切除并病理确诊为鳞状细胞癌的标本61例,同期选取病理确诊为炎症或正常黏膜的癌旁组织（距肿瘤切缘大于0.5 cm）标本48例,采用实时荧光定量PCR方法检测喉癌及癌旁组织中CDR1as、miR 7的转录表达水平。结果Real time PCR显示,在LSCC组织中,CDR1as mRNA表达水平均显著高于癌旁组织（P＜0.001）;miR 7 mRNA表达水平均显著低于癌旁组织（P＜0.0001）; CDR1as在淋巴结转移患者的LSCC组织中表达水平较无淋巴结转移患者的LSCC组织中显著增高(P＜0.01);CDR1as在不同TNM分期患者的喉癌组织中表达水平差异具有统计学意义(P＜0.05);CDR1as在LSCC组织中表达水平与患者的预后相关 (P=0.02);同时,CDR1as表达水平与miR 7表达呈负性相关(r=-0.643,P=0．001)。结论CDR1as参与LSCC的发生和发展,其表达可以作为判断预后的一项指标,CDR1as与miR 7呈现出的一定的相关性,CDR1as可能通过靶向调控miR 7的表达影响喉癌进展。     

喉及下咽鳞状细胞癌的ras基因突变热点的研究

目的：研究ｒａｓ基因第１２密码子在喉及下咽癌组织中的突变情况。方法：采取多聚酶链延伸反应－限制性片段长度多态性分析方法，对３７例喉癌、下咽癌手术标本进行三种ｒａｓ基因测定。结果：三种ｒａｓ基因的１２位密码子在喉癌及下咽癌组织中的突变率为３５．１％，其中Ｎ－ｒａｓ基因的１２密码子突变率为１６．２％，Ｋ－ｒａｓ鹤率为１３．５％，Ｈ－ｒａｓ基因的突变率为５．４％，其突变率与喉癌、下咽癌组织分化和分化程度     

手术在局部晚期喉咽鳞状细胞癌综合治疗中的应用

目的评价手术联合诱导化疗＋同步放/化疗对于改善局部晚期喉咽鳞状细胞癌总体预后的价值。方法回顾性分析中山大学肿瘤防治中心2003年6月～2015年12月收治的122例III～IV期喉咽鳞状细胞癌临床资料,入组患者均接受2程诱导化疗,根据后续治疗将患者分为手术组（62例,手术＋同步放/化疗）和非手术组（60例,同步放/化疗）,比较两组患者的临床病理参数、疗效差异及预后的影响因素。采用SPSS 22.0统计软件对所有数据进行分析。结果入组患者中手术组62例,死亡45例;非手术组60例,死亡38例。单因素分析示:分化程度、肿瘤临床分期III/IV期和是否颈淋巴结转移（P<0.05）是影响患者预后生存的独立因素; 多因素分析示：分化程度（P=0.010）、肿瘤临床分期III/IV期（P=0.044）是影响患者预后生存的重要因素。分层分析诱导化疗有效组,手术组患者3年和5年总生存率（overall survival,OS）为93.2％和86.0％,非手术组患者的3年和5年OS分别为74.3％和60.2％,两组之间差异具有统计学意义(χ2=5.274,P=0.022) 。结论对于局部晚期喉咽鳞癌患者,诱导化疗+手术+同步放/化疗的综合治疗模式虽然不能有效提高患者总生存率和无瘤生存率,但对诱导化疗有效者显示了良好的疗效及安全性,可能从手术治疗中获益。     

垂体肿瘤转移基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨喉鳞状细胞癌中垂体肿瘤转移基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)蛋白表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测56例喉鳞癌及13例喉正常黏膜中PTTG的表达,分析PTTG表达与喉鳞癌临床病理指标之间的关系。结果 PTTG蛋白在喉鳞癌组织中的阳性表达率为64.3%,在喉正常黏膜细胞中的阳性表达率为23.1%(P<0.05);PTTG的阳性表达及其强度与喉鳞癌临床病理指标之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 PTTG基因蛋白阳性表达及其强度可做为判定喉鳞癌生物学行为及其预后的参考指标之一。     

喉鳞状细胞癌的体外原代培养

利用体外组织培养方法对１１组喉鳞状细胞癌标本进行原代培养。结果原代培养平时时间２月，培养成功率６３．６％（７／１１），并可继续传代，介绍了组织块培养和胰蛋白酶消化分离培养两种方法以及去除成纤维细胞的方法。讨论了喉鳞癌原代培养中的注意事项。     

RASSF2A基因甲基化在喉癌组织中的表达及意义

目的 探讨抑癌基因RASSF2A表达水平及其基因异常甲基化与喉癌的关系及意义。 方法 采用RT-PCR及甲基化特异性PCR(MSP)检测50例喉癌组织(实验组)和10例癌旁正常黏膜组织(对照组)中RASSF2A基因mRNA的表达水平及其启动子甲基化状态。 结果 喉癌组织中有54%(27/50)存在RASSF2A基因启动子,而对照组正常黏膜组织中未发现RASSF2A基因甲基化现象,差异有统计学意义(χ2=9.818, P=0.002)。RASSF2A甲基化水平程度与喉癌患者临床病理特征无明显相关性。喉癌组织中RASSF2A基因mRNA的表达水平明显低于正常黏膜组织(χ2=9.818, P=0.002)。RASSF2A基因甲基化的喉癌组织中其mRNA的表达减少,反之亦然。 结论 喉癌组织中RASSF2A基因CpG岛甲基化与其基因表达缺失有关,可能参与了喉癌的发生发展过程。     

人乳头状瘤病毒感染与国内喉鳞状细胞癌相关性的Meta分析

目的为了综合评价国内喉鳞状细胞癌(LSCC)患者中人乳头状瘤病毒(HPV)阳性表达的流行现状。方法利用计算机全面、系统地检索各数据库,根据纳入及排除标准收集文献,应用Stata 14.0统计学软件对所提取的数据进行Meta分析,对收集的数据总体情况进行分析,并以地域因素、患者性别、HPV分型（高危型和低危型）、吸烟史、饮酒史、癌症临床特征（分化程度、原发部位及癌症分期）进行亚组分析,采用Revman 5.3统计学软件对亚组分析的结果进行统计学检验,最终得到国内喉癌患者HPV感染情况。结果共纳入13篇文献,国内喉癌患者中HPV总阳性率为12％（95％CI：9％～15％）;亚组分析结果：国内喉癌患者中高危型HPV阳性率［10％（95％CI：7％～13％）］较低危型HPV阳性率［3％（95％CI：1％～4％）］高,组间差异具有统计学意义（P<0.00 001）;无吸烟史的喉癌患者HPV阳性率［19％（95％CI：12％～26％）］较有吸烟史喉癌患者HPV阳性率［7％（95％CI：2％～12％）］高,差异具有统计学意义（P=0.004）;无饮酒史的喉癌患者HPV阳性率［12％（95％CI：9％～16％）］较有饮酒史的喉癌患者HPV阳性率［5％（95％CI：3％～8％）］高,差异具有统计学意义（P=0.001）。北方喉癌患者中HPV阳性率［12％（95％CI：7％～17％）］与南方喉癌患者HPV阳性率［13％（95％CI：9％～17％）］、女性喉癌患者HPV阳性率［26％（95％CI：3％～55％）］与男性喉癌患者HPV阳性率［11％（95％CI：7％～15％）］、中低分化的喉癌患者HPV阳性率［15％（95％CI：8％～21％）］与高分化的喉癌患者HPV阳性率［9％（95％CI：6％～13％）］、声门型喉癌的HPV阳性率［10％（95％CI：6％～13％）］与非声门型喉癌患者HPV阳性率［13％（95％CI：7％～19％）］、Ⅰ、Ⅱ期喉癌患者的HPV阳性率［16％（95％CI：10％～21％）］与Ⅲ、Ⅳ期喉癌患者的HPV阳性率［17％（95％CI：10％～25％）］对亚组间差异的检验结果显示无明显统计学意义。结论本研究通过对全国喉癌患者HPV阳性率进行Meta分析,进一步明确了HPV与喉癌患者基本特征之间的关系。国内喉癌患者中存在较低的HPV阳性表达,其中高危型HPV阳性率较低危型高,无吸烟史或饮酒史的喉癌患者HPV阳性率更高。此研究结果对了解国内喉癌发生危险因素的分析有一定的参考价值,可用来指导HPV阳性喉癌患者的个体化治疗方案。     

AKT和HK2在喉鳞状细胞癌中的表达及意义

摘要：目的探讨丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT(the serine/threonine kinase, also known as protein kinase B, PKB)、己糖激酶2（hexokinase 2, HK2）在喉鳞状细胞癌组织及癌旁组织中的表达,分析其与喉癌发病诸病理因素间的相互关系。方法采用免疫组化Streptavidian perosidase(SP)法检测30例喉癌患者的癌组织中AKT和HK2蛋白的表达情况,同期选取其癌旁组织作为对照。结果AKT、HK2蛋白在喉癌组织中高表达,与肿瘤的分化程度和有无淋巴结转移密切相关,差异具有统计学意义（P＜0.05）;AKT、HK2蛋白的阳性表达与患者的年龄、肿瘤发生部位以及临床分期无关（P＞0.05）;喉鳞癌组织中AKT与HK2的表达呈正相关（r=0.424,P=0.019）。结论喉鳞癌组织中AKT、HK2蛋白高表达与肿瘤的侵袭和转移密切相关,可提示预后不良。     

Role of siRNA silencing of MMP-2 gene on invasion and growth of laryngeal squamous cell carcinoma

The purpose of this study was to explore the effects of MMP-2 silencing on the invasion and growth of laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC). Hep-2 cells were transfected with MMP-2-RNAi-Lentivirus, and MMP-2 expression and invasive properties of the cells were evaluated. The experimental tumors in the nude mice were intratumorally injected with the same recombinant lentivirus. The inhibition of tumor growth was observed. The expression of MMP-2 protein in MMP-2 siRNA transfected Hep-2 cells was effectively suppressed. Both the viability and invasive ability of Hep-2 cells were significantly inhibited. The average weight and volume of tumor in MMP-2-RNAi-Lentivirus treated group were significantly lower than those in the control group (P < 0.01). The PCNA index was obviously lower in MMP-2 RNAi treated tumors (P < 0.01). In conclusion, MMP-2 silencing by recombinant lentivirus mediated RNA interference can inhibit invasion and growth of LSCC, and MMP-2 might be a potential target for gene therapy in LSCC.     

IDO和BIN1在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

摘要：目的通过检测喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma)患者肿瘤组织中吲哚胺2,3 双加氧酶(indoleamine 2,3 dioxygenase,IDO)和桥接整合因子1(bridging integrator 1,BIN1)的表达,探讨其在喉癌发生发展中的作用。方法应用免疫组织化学染色法检测50例喉鳞状细胞癌肿瘤组织和23例正常喉黏膜组织中IDO和BIN1的表达,并分析两者表达的相关性及其与患者临床特征的关系。结果IDO在50例喉癌中阳性表达率为60%,而在癌旁正常喉黏膜组织中IDO表达为17.39%,与癌旁正常喉黏膜组织比较,喉癌IDO阳性表达率明显增高,差异具有统计学意义(P<0.01);BIN1在50例喉癌中阳性表达率为50%,而在癌旁正常喉黏膜组织中BIN1蛋白阳性表达率为95.65%,与癌旁正常喉黏膜组织比较,BIN1阳性表达率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);而且IDO在原发灶和转移灶中的表达显著增高,BIN1在原发灶和转移灶中的表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。在喉癌肿瘤组织中,IDO表达与有无淋巴结转移、临床分期相关;BIN1表达与肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、临床分期相关。结论喉癌患者肿瘤组织和颈部转移淋巴结中IDO表达水平明显提高,而BIN1表达水平显著降低,并且与患者临床特征紧密相关,这两者可能是影响喉癌发生发展的重要因素。     

ECRG4基因甲基化在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)中ECRG4的mRNA和蛋白表达以及其在LSCC肿瘤组织中的甲基化水平,分析其临床意义。方法 从人类蛋白图谱(HPA)以及基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库分析ECRG4在头颈部肿瘤中的表达,收集15例原发LSCC患者的组织样本及癌旁正常组织样本,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测样本中的ECRG4 mRNA表达,Western blot检测组织中的蛋白表达,甲基化特异性PCR(MSP)及测序分析检测ECRG4启动子甲基化水平,比较ECRG4mRNA表达及甲基化水平与LSCC患者临床病理特征之间的相关性。结果 HPA和GEPIA分析结果发现ECRG4在头颈部鳞状细胞癌中表达下降。与癌旁正常组织相比,RT-qPCR和Western blot实验结果表明LSCC患者肿瘤组织中的ECRG4 mRNA和蛋白表达较低(P<0.001),测序分析结果指出LSCC肿瘤组织中ECRG4启动子甲基化水平明显升高(P<0.001)。ECRG4 mRNA高表达水平与LSCC患者Ⅲ、Ⅳ期、存在淋巴转移、复发以及G2、G3期相关(P<0.05),而Ⅲ、Ⅳ期、复发以及G2、G3期的LSCC患者肿瘤组织中的ECRG4启动子甲基化水平升高更明显(P<0.05)。结论 ECRG4在LSCC中表达水平下降,甲基化水平升高,在Ⅲ、Ⅳ期、复发以及G2、G3期的患者中变化更明显,为LSCC后续研究提供理论基础。     

MicroRNA-107抑制喉癌细胞的迁移及侵袭能力的临床分析

目的通过观察microRNA 107（miR 107）在喉癌及癌旁组织中的表达,并且在喉癌细胞系选择性上调及敲减miR 107,检测其对喉癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法收集40例喉癌及其邻近癌旁组织标本,运用RT qPCR检测miR 107的表达,并分析其在喉癌中的临床意义。在人喉癌细胞TU212及TU686中过表达或敲减miR 107,通过Transwell法检测其对喉癌细胞迁移及侵袭能力的影响。结果MiR 107在喉癌组织中的表达显著低于癌旁组织,差异具有统计学意义（P<0.05）,miR 107的表达水平与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移及原发部位相关（P<0.05）。细胞实验显示,过表达miR 107后喉癌细胞迁移及侵袭能力明显下降（P<0.05）,而敲减miR 107后细胞迁移及侵袭能力明显增强（P<0.05）。结论MiR 107在喉癌中表达显著下调,它能够抑制喉癌细胞的迁移和侵袭能力。