蛇床子素对人肝癌细胞生长和TGF-β诱导侵袭转移的干预作用

目的观察蛇床子素对人肝癌细胞Hep G2的杀伤及侵袭转移的影响。方法将人肝癌细胞Hep G2用不同浓度的蛇床子素干预后,采用MTT法检测蛇床子素对Hep G2细胞增殖的抑制作用;PI染色流式细胞术检测细胞内DNA含量,测定蛇床子素对Hep G2细胞周期的影响;采用transwell技术检测Hep G2细胞在TGF-β培养体系中蛇床子素对细胞侵袭力的影响;Western blot检测肿瘤侵袭力相关蛋白MMP-9和vimentin的表达。结果与对照组比较,蛇床子素对Hep G2细胞有显著的抑制作用(P0.05);蛇床子素各浓度组48h与24h比较,差异有统计学意义(P均0.05);蛇床子素各浓度组72h与48h比较,差异有统计学意义(P均0.05);蛇床子素100、150、200μM浓度组与对照组比较,差异有统计学意义(P均0.05);蛇床子素150与100μM浓度组比较,差异有统计学意义(P均0.05);蛇床子素200与150μM浓度组比较,差异有统计学意义(P均0.05);蛇床子素加TGF-β各浓度组细胞个数明显低于对照组(P均0.05);100、150、200μM蛇床子素加TGF-β组MMP-9表达量与对照组比较,差异有统计学意义(P均0.05);100、150、200μM蛇床子素加TGF-β组vimentin表达量与对照组比较,差异有统计学意义(P均0.05);蛇床子素加TGF-β各浓度组间细胞个数、MMP-9、vimentin表达量比较,差异有统计学意义(P均0.05)。结论蛇床子素能抑制人肝癌细胞的生长和侵袭转移。     

蛇床子素在体外对人肝癌细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的：研究蛇床子素在体外对人肝癌HepG2、SMMC-7721、Bel-7402细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法：取人肝癌细胞进行复苏,传代,培养。实验分为空白组和给药组,给药组给予不同浓度梯度（50、100、150、200 μmol/L）蛇床子素药液处理。利用MTT法和细胞集落实验测定不同浓度蛇床子素体外抑制人肝癌细胞增殖作用;利用细胞划痕实验和Transwell小室实验测定不同浓度蛇床子素对人肝癌细胞的迁移和侵袭的抑制作用;利用蛋白质印迹（Western blot）法评价蛇床子素对人肝癌细胞中上皮细胞-间充质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin和细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达情况的影响。结果：蛇床子素能在体外抑制人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721 和Bel-7402 的增殖,IC50 值分别为147.62、141.57、179.67 μmol/L,呈现一定的浓度依赖性。与空白组相比,给药组在蛇床子素50、75、100 μmol/L浓度条件下可以显著抑制人肝癌细胞增殖（P ＜0.05）。与空白组相比,给药组人肝癌细胞的迁移和侵袭能力显著降低（P ＜0.05）;给药组细胞MMP-2 蛋白的表达量降低（P ＜0.05）,E-cadherin蛋白的表达量增加（P ＜0.05）。结论：蛇床子素在体外对人肝癌细胞增殖和侵袭具有抑制作用,其抑制侵袭作用机制与下调MMP-2 蛋白和激活E-cadherin蛋白的表达有关。     

水飞蓟宾通过降低MEK/ERK途径依赖的MMP9蛋白表达抑制人乳腺癌细胞的侵袭转移

目的：探讨水飞蓟宾对人乳腺癌细胞生长和侵袭转移的影响及机制。方法：用不同浓度水飞蓟宾处理人乳腺癌细胞系MCF-7 24h,用MTT法和台盼蓝染色法检测水飞蓟宾对MCF-7细胞的抑制作用;用transwell技术检测水飞蓟宾对MCF-7细胞侵袭转移的影响;Western blot检测水飞蓟宾对MCF-7细胞MEK及ERK蛋白磷酸化水平及MMP9表达水平的影响。结果：水飞蓟宾可显著抑制MCF-7细胞的增殖并造成肿瘤细胞死亡;水飞蓟宾通过抑制MEK和ERK的磷酸化降低MMP9的表达并抑制MCF-7细胞侵袭转移的能力。结论：水飞蓟宾抑制人乳腺癌细胞的生长和侵袭转移。     

白术多糖对肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用及其机制

目的探讨白术多糖（PAM）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2分别给予不同 浓度的PAM处理,通过CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞的增殖、侵袭能力。采用免疫荧光技术检测肝癌细胞中β-catenin 蛋白表达水平,采用RT-PCR技术和免疫印迹法检测AKT、GSK-3β的基因和蛋白表达水平及其磷酸化表达,检测MMP-2的基 因和蛋白表达水平。HepG2 细胞给予LiCl/PAM/LiCl 联合PAM处理,检测细胞增殖、侵袭能力改变,检测GSK-3β磷酸化和 MMP2的蛋白水平。结果与空白对照组相比,PAM处理后肝癌细胞体外增殖能力下降、侵袭能力下降（P<0.05）;PAM处理可 以下调β-catenin蛋白表达、下调MMP-2基因与蛋白表达水平,同时抑制AKT与GSK-3β的磷酸化（P<0.05）。PAM对肝癌细胞 体外增殖、侵袭及AKT/GSK-3β/β-catenin通路的影响呈浓度依赖性：PAM的浓度越高,对肝癌细胞体外增殖、侵袭的抑制作用 越强;对AKT与GSK-3β的磷酸化的抑制作用越强,对β-catenin表达的抑制作用也越强。LiCl可以逆转PAM对肝癌细胞增殖、 侵袭的抑制作用,同时可以逆转PAM对GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白表达的抑制。结论PAM对肝癌细胞的体外增殖和侵 袭能力具有抑制作用,PAM可能通过影响Wnt/β-catenin 信号通路发挥作用。     

中药提取物配伍对乳腺癌MDA-MB-231BO细胞侵袭作用的影响及其机制

目的：探讨中药蛇床子、补骨脂、附子有效成分蛇床子素、补骨脂素、乌头碱对乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO的侵袭抑制作用及其机制。方法：采用均匀设计实验方案进行组方设计,逐步回归分析拟合蛇床子素、补骨脂素配伍乌头碱的回归方程;采用人乳腺癌骨高转移细胞（MDA-MB-231BO）体外侵袭实验,实时荧光定量聚合酶链反应检测,观察药物处理MDA-MB-231BO细胞后,细胞侵袭作用特点和相关基因的表达。结果：通过逐步回归方程,获取蛇床子素、补骨脂素和乌头碱3个药物的最佳配伍比例为6.44∶8.89∶9.44;有效成分和阳性药物唑来磷酸注射液在体外作用24h可以显著抑制MDA-MB-231BO细胞的侵袭;药物处理组转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7、核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）、NF-κB受体活化因子（receptor activator of NF-κBligand,RANK）mRNA表达量显著降低,最佳药物配伍组和唑来磷酸药物组与空白对照组,最佳药物配伍组与最差药物配伍相比差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：蛇床子素、补骨脂素、乌头碱配伍应用可显著抑制MDA-MB-231BO细胞侵袭,其机制与抑制TGF-β/Smad的信号转导有关,同时可降低NF-κB和RANK的表达。     

MMP2和MMP9在HepG2肝癌细胞系及HCC组织中表达的比较研究

目的分析MMP2和MMP9在HepG2细胞系及肝细胞癌(HCC)组织中的表达,探讨不同的基质金属蛋白酶(MMPs)与肝细胞癌侵袭转移的特异相关性。方法免疫细胞化学检测HepG2细胞系中MMP2和MMP9的表达,免疫组织化学检测38例HCC肝癌组织中MMP2和MMP9的表达。结果MMP9在HepG2细胞系的表达高于MMP2的表达。MMP9和MMP2在HCC组织中均有所表达,但MMP9的表达率84.2%(32/38)明显高于MMP2的表达52.6%(20/38),二者有显著差异(P<0.05)。结论MMP2、MMP9的表达在体内外呈现出一致性,即MMP9在体内外的表达均高于MMP2,推测可能MMP9与HCC的侵袭转移关系更为密切。     

HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响

目的观察HIF-1α516对人肝癌HepG2细胞侵袭转移能力的影响。方法人肝癌HepG2细胞分为空白组(同步培养,不做任何处理)、对照组(转染siRNA)和siRNA干扰组(转染HIF-1α516 siRNA)。siRNA和HIF-1α516 siRNA通过脂质体转染HepG2,转染18h后Western blot检测HepG2细胞中HIF-1β核蛋白和全细胞蛋白的表达、ELISA法检测细胞培养上清中MMP-2、MMP-9的含量,Transwell小室观察HepG2的转移侵袭能力。结果 HIF-1α516 siRNA能显著降低HepG2细胞HIF-1α516mRNA的表达(降低70.0%)(P<0.01);增强HepG2细胞的侵袭转移能力(增强71.10%)(P<0.01)。HIF-1α516siRNA对全细胞HIF-1β蛋白的表达无影响,但能促进HIF-1β蛋白的核转移(增强64.1%)(P<0.01)。HIF-1α516 siRNA能明显升高HepG2细胞培养上清中MMP-2、MMP-9蛋白表达,分别升高37.72%、55.46%(P<0.01)。结论 HIF-1α516能抑制HepG2的转移侵袭,其机制可能与抑制HIF-1β的核转移有关。     

奥沙利铂对人肝癌HepG2细胞周期、凋亡及侵袭能力的影响

目的 研究奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖、周期与凋亡及侵袭力的影响.方法 应用MTT法检测奥沙利铂对HepG2细胞生长的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期的分布和凋亡的情况;Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力变化.结果 奥沙利铂对HepG2生长有明显的抑制作用,使细胞周期阻滞于s期(P＜0.01),细胞凋亡率增加(P＜0.05);奥沙利铂作用后癌细胞的侵袭力明显减弱(P＜0.01).结论 奥沙利铂能明显抑制肝癌细胞增殖及侵袭能力,诱导癌细胞凋亡.     

RNA干扰沉默mTOR基因对肝癌HepG2细胞侵袭和转移的影响

目的：探讨RNA干扰技术对人肝癌HepG2细胞mTOR的表达及细胞侵袭与转移的影响。方法：体外合成mTOR siRNA,并转染HepG2细胞24 h,同时设无义对照组（转染无义对照siRNA）、空白对照组（转染空脂质体）及正常对照组（不转染）。采用western blot法检测各组HepG2细胞的mTOR蛋白表达;应用Transwell小室细胞体外实验检测转染后肝癌HepG2细胞的穿膜细胞数,评价肝癌细胞体外侵袭和转移能力的变化。结果：mTOR siRNA转染组HepG2细胞mTOR蛋白的表达低于各对照组（P〈0.05）;HepG2细胞侵袭和转移力均显著低于各对照组（P〈0.05）。结论：mTOR siRNA可有效抑制HepG2细胞mTOR蛋白的表达,且能抑制HepG2细胞的侵袭和迁移。     

苦参碱调控Wnt/β⁃catenin途径抑制宫颈癌细胞系Caski细胞侵袭迁移

目的：基于Wnt/β?catenin途径探索苦参碱抑制人宫颈癌细胞系Caski细胞侵袭迁移的分子机制。方法：Caski细胞用不同浓度苦参碱处理后,MTT法检测细胞增殖抑制情况;Transwell小室侵袭迁移实验检测细胞侵袭迁移情况;ELISA法检测细胞基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP?9）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的分泌变化;实时荧光定量PCR检测细胞糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK?3β）、Wnt2B蛋白的表达情况;免疫蛋白印迹检测细胞β连环蛋白（β?catenin）、磷酸化β连环蛋白（p?β?catenin）含量。结果：苦参碱对Caski细胞的增殖具有抑制作用（P＜0.05）,且呈现时间、浓度依赖性;苦参碱抑制Caski细胞的侵袭迁移率（P＜0.05）,对Caski细胞分泌MMP?9、VEGF的能力具有显著抑制作用（P＜0.05）;苦参碱可显著降低Caski细胞Wnt2B mRNA的表达及β?catenin的蛋白含量,增加Caski细胞中GSK?3β mRNA的表达和p?β?catenin的蛋白含量。结论：苦参碱通过促进Caski细胞Wnt/β?catenin通路中GSK?3β mRNA表达,提高p?β?catenin蛋白含量,降低Wnt2B mRNA表达、β?catenin蛋白含量以及Caski细胞内MMP?9、VEGF的分泌,进而抑制Caski细胞的侵袭迁移。     

桔梗皂苷D通过促进DISC的形成增强TRAIL对肺癌细胞的凋亡诱导效应

目的: 探讨中药活性成分桔梗皂苷D对抗肿瘤药物TRAIL抗肺癌活性的影响并研究其机制。方法: 用桔梗皂苷D联合TRAIL体外治疗肺癌细胞系A549,MTT法检测肿瘤细胞的细胞活力,Annexin V/PI染色检测肿瘤细胞的凋亡,免疫共沉淀法检测RIP1-FADD-caspase-8复合物的形成,western blot法检测A549细胞caspase-8的活化。结果: 对照组,桔梗皂苷D组,TRAIL组,桔梗皂苷D+TRAIL组对A549细胞活力的抑制率分别为0,(7.6±0.7)%,(13.4±1.0)%,(60.3±4.2)% (P<0.05)。对照组,桔梗皂苷D组,TRAIL组,桔梗皂苷D+TRAIL组对A549细胞凋亡的诱导率分别为(1.6±0.2)%,(4.5±0.3)%,(7.2±0.5)%,(40.2±2.8)% (P<0.05)。免疫共沉淀及western blot结果发现联合桔梗皂苷D后,TRAIL治疗的A549细胞内的RIP1-FADD-caspase-8复合物水平及caspase-8的活化程度显著提高。RIP1 siRNA及z-IETD-fmk能显著抑制桔梗皂苷D对TRAIL的协同作用。对照组,桔梗皂苷D+TRAIL组,桔梗皂苷D+TRAIL+RIP1 siRNA组,桔梗皂苷D+TRAIL+z-IETD-fmk组对A549细胞活力的抑制率分别为0,(61.2±5.0)%,(24.5±1.9)%,(17.5±1.7)% (P<0.05)。对照组,桔梗皂苷D+TRAIL组,桔梗皂苷D+TRAIL+RIP1 siRNA组,桔梗皂苷D+TRAIL+z-IETD-fmk组对A549细胞的凋亡诱导率分别为(1.8±0.2)%,(39.5±2.6)%,(12.3±1.1)%,(9.4±0.8)% (P<0.05)。结论: 桔梗皂苷D通过促进死亡受体复合物的形成增强TRAIL对肺癌细胞的凋亡诱导效应。     

金华佛手遗传多态性的RAPD分析与品种的分子鉴定

目的 通过对佛手RAPD反应的优化，分析其遗传多态性，并对3个品种作出了分子水平上的鉴定。方法 PAPD反应在以下条件下进行：10－100ng/μL模板DNA，3．0－5．0mmol/LMgCl2,200μmol/LdNTP,0.2μmol/L10-mer Primer,lunit Taq Polymerase/25μL反应体积。结果 从38个引物中挑出12个有效稳定的引物。用距离系数UPGMA法聚类分析产生了树状图。根据PAPD分析及形态学观察，品种白花青皮与白花白皮的亲缘关系较近。不同的品种RAPD反应有各自独特的扩增带型。结论 本方法简单、高效，适宜用于中药佛手的遗传多态性和品种分子鉴定。     

合并有广泛性焦虑障碍的老年原发性高血压患者心率变异性的临床分析

【】目的 分析合并有广泛性焦虑障碍(GAD)的老年原发性高血压患者的心率变异性(HRV)。方法 入选50例合并有GAD的老年原发性高血压患者作为A组,50例老年原发性高血压患者作为B组,50例健康老年体检者作为C组,行24h动态心电图检查,比较3组间HRV时域指标各参数的差异。结果 A组HRV时域指标各参数均明显低于B组和C组,B组的各参数均明显低于C组,差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 合并有GAD的老年原发性高血压患者时域指标各参数均较老年高血压患者及健康老年人低,提示此类患者自主神经功能明显受损。     

金华市老年保健护理院的做法与体会

介绍了金华市老年保健护理院开展老年保健护理的特色服务、取得成效,提出相应的建议：建立老年保健护理保险制度,适当增加财政投入,医保政策应对老年保健予以支持,加强与医院及敬老机构的双向转诊服务。老年保健护理要加强自身建设,提供优质服务。     

玉叶金花清热片治疗急性咽喉炎的临床效果

目的 探讨玉叶金花清热片治疗急性咽喉炎的临床效果。 方法 选择2022年9月至12月深圳市前海蛇口自贸区医院耳鼻喉科就诊的急性咽喉炎患者100例,采用随机数字表法将其分为对照组和观察组,各50例。对照组给予头孢呋辛酯片治疗,观察组在对照组的基础上给予玉叶金花清热片治疗,两组均治疗5 d。比较两组临床疗效;比较两组治疗前后咽痛、干痒咳嗽、咽部充血评分;比较两组治疗前后咽痛、干痒咳嗽、咽部充血消退时间;比较两组治疗前后C反应蛋白（CRP）、白细胞计数（WBC）及中性粒细胞计数水平;观察治疗期间不良反应发生情况。 结果 观察组临床疗效优于对照组（P＜0.05）。治疗后,两组咽痛、干痒咳嗽、咽部充血评分及CRP、WBC、中性粒细胞计数低于治疗前,且观察组低于对照组（P＜0.05）。观察组咽痛、干痒咳嗽、咽部充血消退时间短于对照组（P＜0.05）。两组均未出现胃肠道不适及肝肾功能异常等不良反应。 结论 玉叶金花清热片治疗急性咽喉炎效果显著,可广泛使用。     

薄层光密度法测定栀子金花丸中栀子甙的含量

栀子金花丸是由栀子、黄连、黄芩、金银花等八味中药制成的水丸,用作清热降火,便秘等症。栀子甙是栀子中的有效成分,有致泻等作用。中国药典未载其有效成分的含量测定方法。此法未见报道。     

浙江金华医家魏祖清及其著作考略

[目的]考证浙江金华医家魏祖清生平，并对其著作的版本、流传以及内容进行整理研究。[方法]采用文献研究法结合田野调查法，检索史志、地方志、目录工具书并结合实地调研，对魏氏人物生平进行考证，整理研究其著作文献，归纳其学术思想特点。[结果]清中期浙江金华汤溪医家魏祖清，儒道医理皆通，以医行于世，有《村居急救方》《卫生编》《树蕙编》《千金方翼注》《保产机要》等著作，其中后两部著作已佚，前三部著作的清刻本馆藏于苏州、常州、北京、上海等地。魏氏在养生、求嗣、方书等方面颇有建树，结合其著作可将其学术思想归纳为儒道结合重养生、求简务实擅急救、擅制膏丹(丸)名京师。[结论]魏祖清是清中期浙江金华著名医家，儒医皆通，擅养生、求嗣、方书等，其学术著作丰富，流传广泛，反映了当时金华地方中医学特色。     

在金华地区三种中学生群体中的学习倦怠状况

目的调查金华地区三种中学生学习倦怠状况(城市中学,农村中学,民办中学)。方法使用《中学生学习倦怠问卷》,在金华地区的城市中学、农村中学和民办中学的926名学生中进行施测。结果多元方差表明三种学生群体在学习倦怠四因子上有显著差异。结论农村中学学生在学习的低效能感、师生疏离程度高于其他两类学校。民办中学学生情绪耗竭高于其他两类学校并且与城市中学一样在生理耗竭显著地高农村中学学生。     

金华地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型及耐药基因位点突变类型分析

目的分析金华地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型分布特征及HBV耐药基因位点突变情况,并探讨两者的关系。方法选取104例经核苷（酸）类似物治疗的慢性乙型肝炎患者为研究对象,采用Sanger双脱氧法测序技术检测患者血清HBV的基因型和10种常见的HBVP区耐药基因位点突变情况,并分析两者关系。结果本组慢性乙型肝炎患者中,HBVB基因型占46.15%,C基因型占53.85%,未发现其他基因型。检测出发生耐药基因位点突变61例,突变率为58.65%,其中C基因型占65.57%,B基因型占34.43%。HBVP区耐药基因位点突变率最高的为M204V/I（73.85%）,其次为L180M（36.92%）和A181V/T（23.08%）。HBVP区耐药基因发生单位点突变的占50.82%,其中M204I突变类型最多（29.51%）;发生多位点突变的占49.18%;以M204I和M204V/I+L180M两种突变类型最常见。HBVC基因型的患者耐药基因突变率高于B基因型的患者（71.43%vs43.75%,P＜0.05）,其中C基因型的患者A181V/T位点突变率高于B基因型的患者（14.29%vs2.08%,P＜0.05）。结论金华地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型以B、C基因型为主;HBVP区耐药基因位点突变类型以M204I和M204V/I+L180M两种类型最常见;HBVC基因型的患者比B基因型的患者更易发生耐药突变,且更易发生A181V/T位点突变。     

金华市家蝇对5种卫生杀虫剂抗性现状调查

采用点滴法测定了我省金华市家蝇对溴氰菊酯、二氯苯醚菊酯、敌敌畏、三氯杀虫酯、仲丁威5种杀虫剂的抗性。测定结果显示,该地家蝇对溴氰菊酯,二氯苯醚菊酯、敌敌畏3种杀虫剂产生了较高的抗性,与1981年—1983年我省家蝇抗性本底调查时相比较,这3种杀虫剂抗性分别提高了20.1429倍,7.7111倍和5.6494倍。三氯杀虫酯抗性提高了1.8633倍,抗性上升不明显。对仲丁威抗性,1981年—1983年尚未测定,本次测得其LD_(50)为80.6887(μg/蝇)。