小剂量地塞米松对生长期小鼠骨微结构及骨代谢的影响

目的 观察小剂量地塞米松对生长期小鼠骨微结构及骨代谢的影响。方法 24只4周龄雌性小鼠随机分两组（n=12）：地塞米松组（DEX,1mg/kg,肌肉注射,2次/周）,对照组。4w后处死小鼠,检测血清Ⅰ型前胶原N端肽(PINP)和骨Ⅰ型胶原交联C端肽（β-CTX）蛋白的表达水平;检测胫骨干骺端骨保护素（OPG）、核因子-κ B受体活化因子配体（RANKL）表达;抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色方法检测破骨细胞;一侧胫骨行显微CT扫描分析。结果 DEX组小鼠胫表观骨密度和骨体积分数明显高于对照组（P<0.05）,骨小梁数量高于对照组,结构模型指数低于对照组,但无统计学意义。DEX组小鼠血清PINP及β-CTX浓度显著下降（P<0.05）。DEX组小鼠胫骨干骺端OPG表达明显增多,而RANKL表达无明显变化,相对于对照组,OPG/RANKL比值升高。TRAP染色示DEX组小鼠胫骨干骺端破骨细胞数量较对照组减少。结论 小剂量地塞米松间断给药可能通过上调OPG/RANKL比率维持生长期小鼠骨量。     

绝经后妇女护骨素基因启动子区T950C基因多态性与骨密度的关系研究

目的探讨绝经后妇女护骨素(OPG)基因启动子区T950C基因多态性与骨密度的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,测定随机选取的50例绝经后骨质疏松妇女和50例绝经后非骨质疏松妇女,OPG基因T950C的基因型;采用双能X线吸收法分别测定腰椎(L1-4)和股骨颈、髋部的骨密度。结果在绝经后妇女中发现TT、TC、CC三种基因型,各基因型的分布频率分别为:TT,27%;TC,51%;CC,22%,符合Hardy-Weinberg定律。骨质疏松组与非骨质疏松组之间OPG基因型分布频率的差异无显著性(P0.05)。比较各基因型的骨密度,绝经后妇女三种基因型之间无差异(P0.05)。结论护骨素基因启动子区T950C基因多态性与绝经后妇女的骨密度关系不密切,可能不能作为绝经后妇女是否发生骨质疏松的遗传标志。     

护骨素与女性年龄和骨密度的关系

目的 探讨血清护骨素(Osteoprotegrin,OPG)与女性年龄和骨密度(BMD)之间的关系.方法 用ELISA测定672名20～80岁女性志愿者的OPG,用DXA测定腰椎正位总体和股骨颈的BMD.根据年龄段、是否绝经分组.结果 ①OPG在30～39岁年龄段最低(2.80±1.37)pmol/L,与40～69岁的各组比较有统计学意义(P均＜0.05).②40～59岁人群中,绝经后组的OPG(5.70±3.14)pmol/L比绝经前组(3.45±2.01)pmol/L高(P均=0.000).③年龄与OPG和腰椎及股骨颈的BMD相关(r值分别为0.130,P均＜0.01);OPG与腰椎和股骨颈的BMD呈负相关(r=-0.183和-0.108,P＜0.01).结论 sOPG能较敏感地反映妇女随年龄及绝经变化的骨转换状况;且生化指标的变化先于骨密度的变化,可辅助用于预测骨丢失.     

不同浓度钛微粒对护骨素/护骨素配体基因表达影响的体外研究

目的: 探讨磨损微粒引起假体周围骨溶解的机理, 为人工关节假体松动的预防研究打下基础。方法: 采用不同浓度钛微粒 (粒径 <3μm) 对成骨细胞MG 63细胞进行 24h干预, 半定量RT PCR观察其对护骨素 (OPG) 及护骨素配体 (OPG- L) 基因表达的影响。结果:钛微粒能上调MG 63细胞OPG及OPG- L基因表达, 且对后者作用强于前者。结论: OPG- L/OPG比率随着钛微粒浓度的加大而增高, 引起骨溶解大于骨形成, 这可能是磨损微粒引起人工关节假体松动的重要原因, 这表明降低OPG- L/OPG比率有可能预防或逆转此病理过程。     

雄性不育相关基因敲除小鼠模型

男性不育的发生机制复杂,建立雄性不育的动物模型,特别是小鼠模型,为研究不育相关基因功能和分子机制提供了模型基础,目前用于生物医学研究的小鼠模型主要有3种类型,例如敲除/敲入/基因捕获方法获得小鼠,转基因小鼠和化学诱导的点突变小鼠。本文对雄性不育相关基因敲除的小鼠模型进行了总结,以期为研究男性不育的发病机制寻找合适的动物模型。     

格列美脲对高脂饮食ApoE-/-小鼠骨微结构的影响

目的观察格列美脲对高脂饮食喂养的Apo E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠骨微结构的影响。方法以8只野生型C57BL/6小鼠为野生正常组,24只ApoE~(-/-)小鼠随机分为3组,分别为ApoE~(-/-)正常组、ApoE~(-/-)高脂组、格列美脲组。野生正常组和ApoE~(-/-)正常组给予普通饲料饲养,ApoE~(-/-)高脂饮食组和格列美脲组给予高脂饲料,其中格列美脲组小鼠灌服25mg/kg格列美脲,其他各组小鼠均灌服等量去离子水。6w后,处死小鼠,取双侧股骨,分别进行HE染色和Safrain O/Fast Green染色评价骨微结构,利用骨生物力学评价骨强度,利用Cathepsin K表达评价骨吸收程度。结果格列美脲可明显改善高脂饮食喂养的ApoE~(-/-)小鼠骨微结构,提升股骨糖胺聚糖含量,提高股骨第一循环硬度、峰值压力和硬度形变量,降低Cathepsin K表达。结论格列美脲可改善高脂饮食饲养的ApoE~(-/-)小鼠的骨微结构,其作用机理可能与抑制Cathepsin K的表达相关。     

OPG基因敲除小鼠骨质疏松情况的研究

目的研究护骨素（Osteoprotegerin，OPG）基因敲除纯合子小鼠（homozygous OPG knockout mice，OPG^-1- mice）骨质疏松发生情况，为OPG^-1-小鼠骨质疏松模型的应用提供依据。方法非频密繁殖法获得OPG^-1-小鼠，PCR技术进行OPG基因表型鉴定。16周龄OPG^-1-子代小鼠和16周OPG野生型小鼠各10只，采用双能X线骨密度测量仪（DEXA）测定全身骨密度（Bone mineral density，BMD）、万能材料试验机测定股骨生物力学强度；骨组织形态计量学分析L5椎体骨小梁结构；实时荧光定量PCR检测L1椎体骨组织中BMP-2、Runx2 mRNA表达水平。结果OPG^-1-子代小鼠和亲代纯合子小鼠表现出相同的OPG基因缺失表型。与同龄野生型小鼠比较，16周龄OPG^-1-小鼠全身骨密度、股骨承受最大载荷、股骨结构刚度、腰椎椎体骨小梁数目、腰椎椎体骨小梁厚度显著下降（t=5．740，6．069，6．859，6．891，3．558，P〈0．01）；股骨承受破裂载荷、腰椎椎体骨小梁体积分数下降（t=3．157，3．329，P〈0．05）；股骨承受载荷后的最大位移、破裂位移显著增加（t=-3．868，-3．276，P〈0．01）；腰椎椎体骨小梁分离度增加（t=-2．575，P〈0．05），腰椎椎体Runx2 mRNA表达升高（t=-3．738，P〈0．05）；腰椎椎体中BMP-2 mRNA表达升高不明显，差异无统计学意义（t=-1．589，P〉0．05）。结论OPG^-1-小鼠表现出明显的骨质疏松，是一种理想的骨质疏松模式动物。     

环磷酰胺对大鼠骨密度和骨微结构的影响

目的：研究不同剂量环磷酰胺对雌性SD大鼠骨密度和骨微结构的影响。方法40只3月龄SD雌性大鼠随机数字表法分为环磷酰胺低剂量组、中剂量组、高剂量组和对照组,每组各10只,环磷酰胺各组分别腹腔注射不同剂量（5 mg／kg、8 mg／kg、10 mg／kg）的环磷酰胺,对照组腹腔注射等量生理盐水,每天一次,连续15天,观察大鼠骨密度及骨微结构等指标。结果不同剂量的环磷酰胺组与对照组比较,全身骨密度分别下降了9．8％、13．3％和15．6％;股骨骨小梁数目分别下降了49．8％、65．5％和72．8％;股骨骨小梁分离度则分别上升了225．2％、416．9％和577．4％。结论环磷酰胺可使大鼠骨密度降低,骨小梁数量减少,骨微结构受损,且环磷酰胺剂量越大,骨微结构受损越严重。     

不同频率脉冲电磁场对骨保护素基因敲除小鼠骨代谢指标影响

目的采用不同频率的脉冲电磁场干预骨保护素基因敲除小鼠骨质疏松模型,探讨脉冲电磁 场治疗骨质疏松的最适治疗频率。方法8周龄雌雄各半骨保护素基因敲除小鼠30只,随机分为 A、B、C 3组,每组10只,粤组为空白对照组,不进行干预;B组小鼠每天在强度为4皂栽,频率为8 HZ 的磁场中照射治疗20 min,共30 d;C组小鼠每天在强度为4 mT,频率为32 HZ的磁场中照射治疗20 min,共30凿。各组小鼠在治疗前及治疗30d后用酶联免疫法（ELISA )法检测抗酒石酸酸性磷酸酶 缘遭及血清骨钙素值。结果8HZ、32HZ两治疗组在治疗后抗酒石酸酸性磷酸酶5遭,血清骨钙素含 量与A对照组之间比较差异有统计学意义（P <0.05 ), 8 HZ、32 HZ两治疗组之间治疗前与治疗后所 测三种指标比较差异无统计学意义（P >0.05 )。结论脉冲电磁场对骨保护素基因敲除小鼠骨质疏 松有肯定治疗效果,应用频率为8-32 HZ的磁场治疗能产生相同的治疗效果。     

护骨素基因多态性与原发性骨质疏松的研究进展

骨质疏松是一种以低骨量和骨组织微结构破坏为特征、导致骨骼脆性增加和易发生骨折的全身性疾病。在原发性骨质疏松的众多发病因素中，遗传是重要的因素。自1994年澳大利亚Morrison等首先提出维生素D受体基因多态性与骨质疏松的相关性后，近年来各国学者对骨质疏松候选基因进行了许多研究，证实了维生素D受体基因、雌激素受体基因等候选基因的多态性与骨密度、骨峰值量、骨折风险等相关，证明了基因多态性在原发性骨质疏松病因中起重要作用。     

糖尿病合并去势大鼠骨微结构退化的研究

目的探讨糖尿病合并去势大鼠骨微结构的改变。方法 6月龄雌性大鼠40只,随机分为对照组、假手术组、去势组、糖尿病组和糖尿病合并去势组。6 w和15 w后应用Micro-CT测定股骨检测骨密度和骨微结构;利用Van Gieson胶原纤维染色法观察胶原纤维沉积变化;HE染色分析大鼠股骨头骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁间距(Tb.Sp)变化。结果与对照组相比,去势6 w和15 w组骨β-胶原降解产物水平和Tb.Sp明显升高,骨密度值和Tb.Th明显下降。去势15 w组骨胶原纤维明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。糖尿病组15 w松质骨β-胶原降解产物水平、胶原纤维和Tb.SP明显升高,骨密度值、胶原纤维和Tb.Th明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。糖尿病合并去势组6 w和15 w组松质骨β-胶原降解产物水平、胶原纤维和Tb.Sp明显升高,骨密度值和Tb.Th明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论糖尿病合并去势早期是以去势为主导致的骨质疏松,后期则由糖尿病缓慢的骨分解加持,骨质疏松继续加重。     

高分辨率磁共振成像评价骨质疏松症骨微结构

骨质疏松症是一种系统性骨骼疾病。目前诊断骨质疏松症的标准方法为双能X线检测,难以评价骨微结构。高分辨率磁共振成像能提供骨小梁结构的详细信息。本文就高分辨率磁共振成像在骨质疏松症骨微结构评价中的应用予以综述。     

α-玉米赤霉醇对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中OPG和RANKL蛋白表达的影响

目的 探讨α-玉米赤霉醇(α-zearalanol,α-ZAL)对小鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)向成骨细胞增殖、分化的影响。方法 采用全骨髓培养差速贴壁法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分为空白对照组、雌二醇阳性对照组、低浓度α-ZAL组、中浓度α-ZAL组,高浓度α-ZAL组。镜下每天观察细胞形态变化,碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞纯度,MTT实验测定细胞增殖活性绘制细胞生长曲线,采用酶联免疫吸附法(ELISΑ)测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨形态发生蛋白2( Bone morphogenetic protein-2,BMP-2),运用蛋白免疫印迹法（Western blotting,WB）检测护钙素（Osteoprotegerin,OPG）和NF-KB受体活化配体（Receptor actiator of nuclear factor-KB ligand, RANKL）的蛋白水平表达变化。结果 不同浓度的α-玉米赤霉醇可显著的促进小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞增殖、分化,增加细胞活性（P<0.05）,明显提高小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化后ALP和BMP-2的表达（P<0.05）,并且显著的上调了成骨细胞内OPG/ RANKL的表达率（P<0.05）。结论 不同浓度的α-玉米赤霉醇可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞增殖、分化,并且通过上调OPG/ RANKL的表达率抑制成骨细胞细胞向破骨细胞分化,有望成为临床骨折疏松症治疗的激素替代药物。     

蓇密牌钙片阻止OPG基因敲除小鼠的骨量丢失作用

目的 研究蓇密牌钙片及鹿角肽对骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)基因敲除纯合子小鼠(homozygous OPG knockout mice,OPG-/- mice)骨质疏松的影响.方法 以OPG-/-小鼠为研究对象,钙尔奇D、蓇密牌钙片及鹿角肽分别给各组OPG-/-小鼠连续灌胃30 d,酶联免疫法测定血清中抗酒石酸酸性膦酸酶5b(tartrate-resistant acid phosphatase form 5b,TRACP5b)的含量,竞争放射免疫法测定血清中骨钙素(Bone-γcarboxyglutamic acid, BGP)的含量;双能X线骨密度仪(Dual Engergy X-ray Absorbtiometry,DEXA)测定股骨和总体的骨密度(Bone mineral density,BMD).结果 蓇密牌钙片及鹿角肽能增加OPG-/-小鼠的股骨和总体的BMD值,降低TRACP5b的含量,增加BGP的含量.结论 蓇密牌钙片对OPG-/-小鼠的骨质疏松症有预防作用,其机制与抑制骨量高转换有关.     

D-半乳糖对不同月龄雌性小鼠骨代谢的影响

目的比较D-半乳糖对1月龄及3月龄雌性小鼠骨干重、骨羟脯氨酸、骨钙及微量元素的影响.方法 1月龄及3月龄昆明种雌性小鼠每日颈背部皮下注射D-半乳糖1O00mg·mg·d-1,连续42d,取右侧股骨测定骨干重、骨羟脯氨酸、骨钙、骨微量元素.结果 D-半乳糖对1月龄小鼠骨干重、骨羟脯氨酸、骨钙和微量元素无明显影响;可使3月龄小鼠骨干重、骨羟脯氨酸和骨钙减少,骨干重与体重比值,骨镁与骨干重比值降低.结论 D-半乳糖不能导致1月龄小鼠骨质丢失,但可导致3月龄小鼠骨质丢失,提示D-半乳糖对处于骨生长期及已进入骨维持期的雌性小鼠具有不同的骨药理作用.D-半乳糖导致3月龄小鼠骨质丢失可能与骨镁减少有关.     

慢性间歇性缺氧对大鼠骨代谢及OPG、RANKL基因表达的影响

目的通过建立wistar大鼠慢性间歇性缺氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)模型探讨CIH对骨代谢及骨组织骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)基因表达的影响。方法 20只健康wistar大鼠随机分为正常对照组及CIH组,每组10只。对照组置于空气循环舱内,CIH组于置于间歇性缺氧舱内,每日8 h,共8周。应用双能X线骨密度仪测定大鼠全身、股骨、腰椎骨密度(bone mineral density,BMD),采用ELISA法检测大鼠血清骨特异性碱性磷酸酶(bone specific alkaline phosphatase,BALP)、骨钙素(bone glaprotein,BGP)、Ⅰ型胶原N端前肽(type Ⅰ collagen N terminal peptide,PINP)、Ⅰ型胶原羧基端肽β降解产物(β-C-terminal telopeptide of type Ⅰ collagen,β-CTX)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)水平,应用Real-time PCR技术测定股骨OPG、RANKL mRNA相对表达量。结果与对照组相比,CIH组全身和股骨BMD下降[(0.141±0.028)vs(0.122±0.027)和(0.143±0.026)vs(0.125±0.034)]、血清BGP降低[(26.42±3.71)vs(22.05±2.16)]、血清β-CTX和TRAP升高[(132.24±26.25)vs(173.82±22.16)和(20.12±2.43)vs(23.58±2.36)]、股骨组织OPG mRNA相对表达量降低[(1.031±0.125)vs(0.924±0.141)]、RANKL mRNA相对表达量升高[(0.856±0.068)vs(1.113±0.134)],差异均具有统计学意义(P0.05)。结论慢性间歇性缺氧可使骨组织OPG mRNA表达减少、RNAKL mRNA表达增加,影响骨代谢,降低骨密度,增加了骨质疏松的发生风险。     

淋巴因子激活的骨髓细胞对小鼠同种异体骨髓移植的影响

以致死性剂量照射的成年小鼠为受鼠进行同种异体骨髓移植（Ａｌｌｏ－ＢＭＴ），实验组小鼠观察期间平均存活天数较对照组明显延长（Ｐ＜０．００１），应用肿瘤移植及单向混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）二项指标证实Ａｌｌｏ－ＢＭＴ的部分植活。实验结果表明，淋巴因子激活的骨髓细胞（ＬＡＢＭＣ）可有效预防致死性移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ），且不影响供髓植活。