芸香诱导K562细胞凋亡机制探讨

目的:研究芸香诱导白血病K562细胞凋亡过程中Caspase-3基因的表达.方法:体外培养白血病K562细胞,生长曲线观察芸香对K562细胞的细胞抑制作用,MTT法观察芸香的细胞毒作用,测定IC50,Hoechst 33342/PI双荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR观察Caspase-3的表达,CaspACETM分析系统检测Caspase-3酶活性.结果:芸香浓度为2×10-5mol/L、4×10-5mol/L、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制;不同浓度quercetin处理K562细胞48 h 后,IC50为4×10-5mol/L;Hoechst 33342/PI双荧光染色可观察到明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测芸香处理后细胞发现G2期细胞显著增多(64.7%),DNA合成受抑,凋亡率增加;以Caspase-3 基因和内参照β-actin序列设计引物,PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪下明显观察到约300 bp 条带;CaspACETM分析系统检测Caspase-3酶活性明显升高(P＜0.05).结论:芸香诱导白血病细胞Caspase-3基因表达,细胞发生凋亡,caspase-3途径诱导凋亡是芸香作用机制之一.     

特拉唑嗪体外诱导PC-3细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨特拉唑嗪诱导前列腺癌细胞株PC 3凋亡的作用。方法 :以不同浓度的特拉唑嗪体外作用于雄激素非依赖性前列腺癌PC 3细胞 ,细胞的生长抑制效应采用MTT检验。细胞凋亡指数采用双免疫荧光染色 (AnnexinV/PI)和流式细胞仪技术 ,凋亡细胞的形态学研究采用AO/EB双染色和激光共聚焦显微镜技术。结果 :经特拉唑嗪作用后的前列腺癌细胞通过诱导凋亡而被抑制了细胞的活性 ,这结果与药物浓度呈正相关 (r=0 .998,P <0 .0 5 )。细胞被阻滞于G0 ～G1期。结论 :特拉唑嗪通过诱导凋亡而抑制前列腺肿瘤的生长 ,具有治疗前列腺癌潜在的功能。     

塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞凋亡与Fas/FasL表达的影响

目的 观察选择性环氧合酶2抑制剂塞来昔布体外诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其机制.方法 用吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、流式细胞仪(FCM)技术观察不同浓度的塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响,用流式细胞仪技术榆测Fas和FasL.蛋白表达.结果 荧光染色法显示塞来昔布在15～120 μmol/L时诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,且呈浓度和时间依赖性.FCM显示不同浓度的塞来昔布作用SGC-7901细胞48 h后.凋亡率分别为8.02%～50.81%,呈浓度依赖性.塞来昔布上凋胃癌SGC-7901细胞Fas蛋白的表达,下调FasL蛋白的表达.结论 塞来昔布可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡;Fas/FasL表达的改变可能是塞来昔布诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制之一.     

FTY720诱导大鼠系膜细胞的凋亡

目的 观察新型免疫抑制剂FTY720对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的促凋亡作用及其对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响,以探讨其作用机制。 方法 体外培养大鼠GMC,加入20 μmol/L FTY720,分别作用6 h、12 h、24 h、48 h后,以MTT法检测GMC增殖情况;流式细胞术检测GMC凋亡;Hoechst33258和PI染色观察凋亡细胞形态变化;琼脂糖DNA凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体DNA的断裂现象。并通过SuperArray 实时定量PCR细胞周期基因芯片测定FTY720对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响。 结果加入FTY720培养6 h 后,流式细胞术检测发现,GMC出现典型细胞凋亡的亚二倍体峰;12 h后Hoechst33258和PI荧光染色观察发现亮蓝色的凋亡小体,且开始出现典型细胞凋亡形态改变;24 h后DNA琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯度的出现。随FTY720作用时间延长,细胞凋亡明显增加,不同时间组间细胞凋亡率差异有统计学意义（P < 0.01）。SuperArray 实时定量PCR细胞周期基因芯片发现FTY720分别显著上调系膜细胞Dnajc2、LOC688900、RGD1562436_predicted基因表达,分别达41.6、38和16倍。 结论 FTY720 在体外可呈时间依赖诱导正常大鼠GMC凋亡,其机制与影响细胞周期调节蛋白及凋亡相关基因的表达有关。     

TFu对肝门部胆管癌细胞系FRH-0201增殖和凋亡的影响

目的探讨N3-邻甲苯甲酰基-氟尿嘧啶(N3-toluyl-FlulorouractilTFu)对FRH-0201细胞的生物学效应及其作用机制,为胆管癌临床化疗提供参考。方法光学显微镜、荧光显微镜观察FRH-0201细胞在TFu作用后形态学变化;集落形成实验检测TFu对FRH-0201细胞的增殖抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测DNALadder观察细胞的凋亡;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡并与5-Fu进行比较;MTT试验比较TFu与5-Fu等常用化疗药物对FRH-0201细胞抑制率。结果TFu能体外抑制FRH-0201细胞的增殖,其作用在0.016~4mmol/L范围内具有浓度依赖性及时间依赖性,同浓度比较抑制率高于5-Fu;流式细胞仪检测可见随作用时间延长,TFu及5-Fu组G1细胞期增多,S期细胞减少,细胞增殖被阻滞在G1期;细胞凋亡检测可见,随作用时间延长,TFu及5-Fu组较对照组细胞凋亡率增加,同时相TFu组凋亡率高于5-Fu组;化疗敏感性比较,TFu抑制FRH-0201细胞增殖作用不及阿霉素和顺铂,但明显优于5-Fu及泰素,联合用药阿霉素、顺铂和TFu联合对FRH-0201细胞抑制率最高,达79.02%,优于阿霉素、顺铂、5-Fu联合。结论TFu可明显抑制胆管癌细胞株FRH-0201细胞的增殖,该抑制作用可能通过阻滞细胞周期并进一步诱导细胞凋亡机制发生,同摩尔浓度TFu较5-Fu对FRH-0201细胞抑制作用强,TFu可作为胆管癌联合化疗的新药。     

人参二醇组皂苷对人前列腺癌DU145细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察人参二醇组皂苷(panoxadiol saponin PDS)体外对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT比色法检测不同浓度PDS对DU145细胞增殖活力的影响.吖啶橙染色观察PDS诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡,并计算细胞平均凋亡率;细胞免疫化学和Western blot技术观察细胞内激活的caspase3的表达.结果 经中(100mg/L)、高(200mg/L)剂量的PDS处理后,DU145细胞生长受到不同程度抑制,且呈现剂量依赖性;吖啶橙荧光染色可见经中、高剂量PDS处理后的细胞呈明显凋亡形态,并随药物剂量增加,凋亡细胞数增多;流式细胞术结果显示,PDS可明显提高细胞的凋亡率,呈剂量依赖关系;免疫细胞化学染色和Western blot结果,随着PDS剂量增加,细胞内激活的caspase3的表达上调.结论 PDS体外对DU145细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关.     

姜黄素诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞周期阻滞和凋亡研究

目的观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞的生长抑制作用。方法10～100μmol姜黄素作用PC3细胞5～24h后,溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)比色法检测细胞生长活性,流式细胞仪检测细胞周期时相及细胞凋亡变化,透射电镜观察细胞超微结构变化,Western印迹法检测细胞内IκBα的表达。结果姜黄素能显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞的体外生长(P<0.05),呈时间与剂量依赖性;姜黄素将PC3细胞周期阻滞于G2/M期;不同浓度姜黄素诱导PC3细胞凋亡率分别为(6.33±0.88)%、(7.53±2.32)%、(12.74±3.02)%、(18.09±2.51)%与(27.54±2.63)%(P<0.05);细胞内IκBα的表达随姜黄素剂量的增加而逐步升高(P<0.05)。结论姜黄素通过抑制PC3细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长。     

咖啡酸苯乙酯对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对培养的大肠癌SW480细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法不同浓度CAPE处理培养的大肠癌SW480细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,TUNEL染色观察凋亡细胞。结果CAPE对SW480细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞仪检测发现2.5、5.0、10mg/L的CAPE对SW480处理24h后,G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,细胞凋亡率上升,呈剂量依赖性。TUNEL染色也发现CAPE作用后凋亡细胞数量增加。结论CAPE对大肠癌SW480细胞株具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与阻滞细胞周期G期和诱导细胞凋亡有关。     

蛇床子素诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制研究

目的 研究蛇床子素在体外实验中诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制.方法 体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于FB,应用MTT法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响.Hoechst 33342荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核的变化.以DNA ladder和流式细胞仪进行凋亡检测.采用RT-PCR法检测蛇床子素对FB相关凋亡基因Bcl-2和Bax的mRNA表达的影响.结果 在蛇床子素作用下,人增生性瘢痕成纤维细胞的生长受到抑制,MTT法检测的IC50为(15.5±2.2)μmol/L.荧光显微镜观察到了凋亡小体;DNA ladder法检测到细胞凋亡时DNA降解形成的梯带,流式细胞仪观察到细胞周期的变化.蛇床子素作用于成纤维细胞后可上调促凋亡基因Bax的表达,同时下调抑凋亡基因Bcl-2的表达.结论 蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以诱导其凋亡,其作用机制可能与影响Bcl-2、Bax等凋亡调控基因的表达有关.     

鱼藤素诱导人前列腺癌细胞凋亡及其机制研究

目的 观察鱼藤素对于激素抵抗型前列腺癌(HRPC)细胞PC3和DU145增殖、细胞周期和凋亡的影响并探讨其机制.方法 设阴性对照组(有细胞但不加药),空白对照组(无细胞仅有培养液),阳性对照组(渥曼青霉素100 nmoL/L),及鱼藤素分别10、100、1 ìmol/L共6组.CCK-8法进行细胞毒性实验,检测细胞生长抑制率.流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Westem-blot检测Akt、MAPK及其磷酸化蛋白表达,探讨药物作用机制.结果 10 nmol/L～1 ìmol/L鱼藤素对PC3细胞均有生长抑制作用,呈现明显的时间、浓度依赖性,对DU145细胞则无此作用.鱼藤素使PC3细胞出现G2/M期阻滞现象并引起浓度依赖性的凋亡,而未改变DU145细胞的周期分布也不能诱导其凋亡.鱼藤素能够阻断P13K/AKT通路而对MAPK通路无影响.结论 鱼藤素通过阻断PI3K/AKT通路实现抑制PC3细胞增殖、诱导凋亡的作用.两株细胞间实验结果 的差异是因为其PI3K/AKT通路活化状态的差异造成的.     

Modulation of prostate carcinoma cell growth and apoptosis by chromogranin A

PURPOSE: We elucidated the effect and possible pathways of chromogranin A in regulating prostatic cancer cell growth. MATERIALS AND METHODS: Chromogranin A expression in prostatic cancer cell lines were detected with immunofluorescence flow cytometry (FCM) and the inhibition of cell growth due to chromogranin A antibody was measured using microculture tetrazolium. Cell cycle and RNA changes were evaluated with acridine orange FCM. Intracellular chromogranin A variations were detected with FCM, as were apoptotic changes, p53, Fas and tumor necrosis factor-alpha. Apoptosis and caspase-3 expression of tumor cells was assessed with dual immunohistochemical staining. RESULTS: Increased chromogranin A expression was observed in PC-3, DU145 and LNCap cells independent of hormone dependence. Dose and time dependent growth inhibition occurred at 12 hours. Chromogranin A antibody arrested PC3 cells in the S-phase immediately after treatment. The number of G0/G1 and G2/M cells subsequently decreased. PC3 tumor cells had transiently increased RNA at 12 hours with a marked decrease at 48 hours. Decreasing chromogranin A expression started at 12 hours and was most prominent at 48 hours. Apoptotic cells markedly increased at 12 hours with an increase in p53, Fas and tumor necrosis factor-alpha (Fas more than the others). Increased apoptotic cell and caspase-3 expression was observed on immunohistochemical stains. CONCLUSIONS: Chromogranin A is an important neuropeptide regulating the growth of prostate cancer cells. Specific antibodies can suppress its function through apoptotic pathways (Fas and caspase-3), leading to programmed cell death. Chromogranin A antibody mediated apoptosis may be a specific alternative treatment for prostate cancer.     

维生素E琥珀酸酯诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯（VES）对非雄激素敏感的前列腺癌PC-3细胞株的凋亡诱导作用及分子机制。方法：以体外培养的PC-3细胞为研究对象,采用含不同浓度的VES培养液作用于细胞。采用噻唑兰（MTT）比色法检测细胞增殖活性;采用Wright—Giemsa染色、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡并测定Fas蛋白表达水平;采用酶联免疫法检测转化生长因子口（TGF-β）的表达水平的变化。结果：VES可显著抑制PC-3细胞的生长及增殖,光镜下可见到PC-3细胞呈典型凋亡的形态学改变。FCM细胞周期分析显示G2／M期细胞增加而s期细胞明显减少,Fas蛋白和TGF-β表达明显上调。结论：VES可诱导前列腺癌PC3细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Fas、TGF-β的表达有关。     

法舒地尔对前列腺癌PC3细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察法舒地尔对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 不同浓度法舒地尔、顺铂及两药联合干预PC3细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot法检测Rock Ⅰ、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,法舒地尔、顺铂单独或联合作用PC3细胞均可抑制细胞增殖,两药联合后抑制效果更显著;法舒地尔、顺铂联合用药可明显增强PC3细胞的凋亡;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Caspase-3表达上调,法舒地尔可明显下调Rock Ⅰ蛋白表达.结论 法舒地尔可促进PC3细胞凋亡,其作用机制可能与法舒地尔抑制Rho激酶的表达有关.     

2-chloroadenosine modulates PAR-1 and IL-23 expression and enhances docetaxel effects on PC3 cells

BACKGROUND: Docetaxel-based chemotherapy is the only treatment that demonstrated an overall survival benefit in men with hormone refractory prostate cancer. 2-CADO inhibits the growth of PC3 cells by inducing apoptosis and cell cycle arrest through a mechanism that involves cellular uptake. METHODS: Androgen-independent and -sensitive (PC3 and LNCaP) prostate cancer cells and non-neoplastic HECV cells were used in the study. Proliferation and cell cycle progression were analyzed in the presence of 2-CADO and Docetaxel. Invasive potential was assessed by soft agar assay and metastatic ability by adhesion assay. IL-23 and PAR-1 expression were determined by real time PCR. RESULTS: 2-CADO pre-treatment followed by Docetaxel at subclinical dosage reduced the viability of either PC3 or LNCaP while it did not enhance Docetaxel-induced cytotoxicity in adherent non-neoplastic HECV. The drugs reduced the invasive potential of PC3 cells by inducing apoptosis and blocking cell cycle progression in the S-phase. Down-regulation of PAR-1 gene expression resulted in a slightly lower metastatic potential, whereas up-regulation of IL-23 induced the activation of the immune system. CONCLUSIONS: Pretreatment of PC3 cells with 2-CADO decreased the effective concentration of Docetaxel, lowered the metastatic potential, and induced the production of cytokines known to stimulate the immune response against cancer. The treatment was effective for prostate cancer cells independently on their androgen sensitiveness.     

The survival effect of prolactin on PC3 prostate cancer cells

OBJECTIVES: Recent studies suggest a paracrine/autocrine loop involving prolactin (PRL) within the human prostate. The aims of this study were to determine the effects of PRL on the growth and survival of prostate cancer cells and the intracellular signalling mechanisms underlying such effects. METHODS: The effect of PRL on proliferation of LNCaP, PC3 and DU145 was assessed by Coulter counting. The effect of PRL on TRAIL-, staurosporine- and flavopiridol-induced apoptosis was assessed by Timelapse microscopy and Annexin V binding. The status of the PRL receptor (PRL-R) and Akt/PKB (protein kinase B) activity were assessed by Western blotting. RESULTS: All three cell lines expressed both the short and long forms of the PRL receptor. Although, no significant effect of PRL on the proliferation of these cells was found, PRL partially inhibited TRAIL-induced apoptosis in PC3 cells. PRL also enhanced the phosphorylation of Akt/PKB in these cells. CONCLUSIONS: PRL had no significant effect on the proliferation of PC3, DU145 and LNCaP, but inhibited TRAIL-induced apoptosis in PC3 cells, possibly via enhanced Akt/PKB phosphorylation in PC3 cells. Further investigations are underway to determine the survival effect of PRL on the other two prostate cancer cell line.     

姜黄素对前列腺癌细胞核转录因子抑制蛋白表达的影响

目的观察姜黄素对前列腺癌细胞核转录因子抑制蛋白(IkBα)表达的影响,探讨姜黄素抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制。方法分别用10、25、50、75和100μmol/L 浓度的姜黄素对雄激素依赖性及雄激素非依赖性前列腺癌细胞株 LNCaP 和 PC3进行干预,5、12和24 h 后采用噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞增殖情况;采用流式细胞术测定24 h 后细胞周期变化;5 h 后 Western 印迹法检测细胞中 IkBα的表达。结果姜黄素显著抑制 LNCaP 及 PC3细胞的生长,呈剂量和时间依赖性;姜黄素将两种前列腺癌细胞阻滞于 G_2、M 期[LNCaP 与 PC3细胞,空白对照分别为(11.4±1.3)%与(17.3±1.7)%,100μmol/L 姜黄素作用后分别为(27.3±2.8)%与(33.4±4.0)%],从而诱导肿瘤细胞凋亡;姜黄素作用于 LNCaP 细胞后,细胞中 IkBα表达无变化(F=0.129,P>0.05);但作用于 PC3细胞后,细胞中 IkBα的表达明显增强,呈现出显著的剂量依赖性(F=31.618,P<0.05)。结论姜黄素通过活化 IkBα在 PC3细胞中的表达发挥抑制 PC3细胞增殖的作用。对于 LNCaP 细胞,姜黄素可能通过抗氧化、抑制细胞内代谢产物形成等方式抑制 LNCaP 细胞增殖。     

Exogenous p27KIP1 expression induces anti-tumour effects and inhibits the EGFR/PI3K/Akt signalling pathway in PC3 cells

p27 is a cyclin-dependent kinase inhibitor that regulates the progression of cells from G1 to S phase of the cell cycle. Loss of p27 has been associated with disease progression and with an unfavourable outcome in prostate cancer. In this study, we investigated whether exogenous p27 expression in the human androgen-independent prostate cancer PC3 cell line had any effect on cell growth, and we studied the molecular mechanisms involved. p27 expression was restored in PC3 cells by plasmid delivery. Cell proliferation and apoptosis were assessed in PC3 cells transfected with p27. We also investigated the effects of p27 on the epidermal growth factor receptor （EGFR）/ phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）/Akt signalling pathway in PC3 cells. By restoring p27 expression in PC3 cells, we observed that p27 reduced proliferation and induced arrest in G0/G1 phase. Moreover, p27-transfected PC3 cells underwent apoptosis, as shown by flow cytometric analysis and western blotting analysis of Bcl-2, Bax, Bad, caspase-3 and poly（ADP-ribose）polymerase expression. Furthermore, the p27-induced anti-tumour action corre- lated with inhibition of the EGFR/PI3K/Akt signalling pathway, as confirmed by western blotting analysis and densitometry of EGFR, PI3K （p85）, Akt and p-Akts473 expression. Our results suggest that exogenous expression of p27 inhibits the proliferation of PC3 cells through induction of G1 arrest and apoptosis, and this process correlates with inhibition of the EGFR/PI3K/Akt signalling pathway.     

地高辛联合姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3生长的影响

目的 观察地高辛联合姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3生长作用的影响及可能机制.方法 地高辛、姜黄素及两药联合作用PC3细胞,MTT法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,Western Blot法检测PC3细胞中抑制低氧诱导因子-1(hypoxia-induc-ible factor-1α,HIF-1α)、血管生成因子(VEGF)蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,联合用药组显著抑制PC3细胞的增殖(P＜0.05);地高辛、姜黄素联合较单独用药可升高PC3细胞凋亡率(P＜0.05);蛋白印迹法检测提示地高辛组、姜黄素组、联合用药组中HIF-1α、VEGF表达明显下调,联合用药组效果更显著(P＜0.05).结论 地高辛联合姜黄素可显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3的增长并诱导其凋亡,并可能与下调HIF-1α、VEGF表达有关.     

沉默PAK6基因可抑制前列腺癌生长并增强多烯紫杉醇的作用

目的 观察沉默p21活化激酶6(PAK6)基因对前列腺癌生长及联用多烯紫杉醇的作用.方法 转染siRNA(30 nmoL/L)前列腺癌细胞PC-3和DU145中,检测细胞增殖、集落形成能力、侵袭性能力、细胞周期及凋亡.以3 x 106个PC-3细胞(100μl)注射裸鼠皮下成瘤,观察siRNA及联用多烯紫杉醇对肿瘤生长效应.结果 PAK6-siRNA能有效沉默PAK6并抑制前列腺癌细胞的生长、集落形成能力和侵袭力、使细胞周期停滞在G2/M期.还可抑制裸鼠体内移植瘤生长.PAK6-siRNA治疗组瘤体重为(146.0±8.5)mg,低于对照组(451.0±22.3)mg(P<0.01).PAK6-siRNA在体内外均可增强多烯紫杉醇作用.结论 沉默PAK6可抑制前列腺癌生长并增强多烯紫杉醇的化疗作用.