血管紧张素Ⅱ诱导人内皮细胞凋亡

为探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)能否诱导人内皮细胞凋亡,将健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代,用不同浓度AngⅡ培养不同时间,用TUNEL和ELISA检测细胞凋亡,并检验Caspase-3酶活性变化.用RT-PCR检测AngⅡ受体AT1和AT2的mRNA表达.发现AngⅡ可以诱导出典型的凋亡,凋亡细胞阳性率极显著高于对照组,凋亡强度与AngⅡ呈现剂量依赖关系.Caspase-3酶活性在AngⅡ作用后有极显著的增加.内皮细胞同时表达AT1和AT2的mR-NA.结果表明AngⅡ经AT1或(和)AT2可以诱导人内皮细胞凋亡,并且是Caspase-3依赖性的.这一结果有助于阐明AngⅡ的致病机制.     

血管紧张素Ⅱ诱导人内皮细胞凋亡

为探讨血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）能否诱导人内皮细胞凋亡,将健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代,用不同浓度Ang Ⅱ培养不同时间,用TUNEL和ELISA检测细胞凋亡,并检验Caspase-3酶性变化,用RT－PCR检测Ang Ⅱ受体AT1和AT2的mRNA表达。发现Ang Ⅱ可以诱导出典型的凋亡,凋亡细胞阳性率极显著高于对照组,凋亡强度与Ang Ⅱ呈现剂量依赖关系。Caspase-3酶活性在Ang Ⅱ作用后有极显著的增加。内皮细胞同时表达AT1和AT2的mRNA。结果表明：Ang Ⅱ经AT1或（和）AT2可以诱导人内皮细胞凋亡,并且是Caspase-3依赖性的。这一结果有助于阐明Ang Ⅱ的致病机制。     

血管紧张素Ⅱ上调Bax表达诱导人内皮细胞凋亡

为了研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导凋亡的机制,将人脐静脉内皮细胞培养至第3代,用不同浓度Ang Ⅱ培养不同时间,用TUNEL检测细胞凋亡。Bax和Bcl-2蛋白表达用Western Blot和图像分析法测定。结果发现：Ang Ⅱ组的凋亡阳性率极显著高于对照组;Bax的表达极显著地升高且具有时间和剂量依赖性,Bcl-2无显著变化,Bax/Bcl-2比值极显著地增加。提示：Ang Ⅱ通过诱导Bax的高表达,致Bax/Bcl-2比值极显著地增加而诱发凋亡。     

血管紧张素Ⅱ上调BaX表达诱导人内皮细胞凋亡

为了研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导凋亡的机制,将人脐静脉内皮细胞培养至第3代,用不同浓度Ang Ⅱ培养不同时间,用TUNEL检测细胞凋亡.Bax和Bcl-2蛋白表达用Western Blot和图像分析法测定.结果发现Ang Ⅱ组的凋亡阳性率极显著高于对照组;Bax的表达极显著地升高且具有时间和剂量依赖性,Bcl-2无显著变化,Bax/Bcl-2比值极显著地增加.提示AngⅡ通过诱导Bax的高表达,致Bax/Bcl-2比值极显著地增加而诱发凋亡.     

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法体外培养HUVECs,取对数生长期HUVECs细胞接种96孔培养板中,常规培养细胞24 h后,弃掉旧培养基,加入新Ham′s F12k培养基,并分别加入AngⅡ,使其终浓度分别为0μmol.L-1、0.01μmol.L-1、0.1μmol.L-1、1μmol.L-1和10μmol.L-1,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测不同浓度AngⅡ在不同时间点的细胞活性,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果MTT结果:与对照组相比,1μmol.L-1AngⅡ组作用24 h和10μmol.L-1AngⅡ组作用12 h、18 h和24 h的HUVECs的细胞活性均显著下降(P<0.05或P<0.01),并呈现时间依赖性;其余各组差异均无统计学意义(P>0.05)。琼脂糖凝胶电泳结果:10μmol.L-1AngⅡ组作用18 h的HUVECs呈现明显的"梯状"DNA断裂条带。流式细胞术结果:对照组和10μmol.L-1AngⅡ组作用18 h的HUVECs细胞凋亡率分别为(1.11±0.54)%和(19.87±3.18)%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论10μmol.L-1AngⅡ可通过诱导细胞凋亡引起HUVECs损伤,从而可能在动脉粥样硬化发生发展中发挥作用。     

P53蛋白调节血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞凋亡

为研究p53基因在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的凋亡中是否发生了变化，取健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代，用不同浓度AngⅡ作用不同时间，发现AngⅡ同2型血管紧张素Ⅱ受体（AT2）激动剂CGP42112A一样可以诱导内皮细胞凋亡；并且凋亡强度与AngⅡ成典型的剂量依赖关系。在AngⅡ与CGP42112A作用18h后，没有观察到p53 mRNA的表达有显著的变化。在AngⅡ作用24h组，可以检测到P53蛋白显著增加，在18h、48h组未能观察到P53蛋白的显著改变。表明P53在AngⅡ诱导凋亡时通过转录后机制发生显著的改变，参与调节AngⅡ诱导的凋亡。     

血管紧张素Ⅱ与内皮细胞凋亡

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是许多心血管病的病理基础,其发生机理被认为与血管壁的脂质浸润、血栓形成、损伤后的生物连锁反应、平滑肌细胞的克隆增殖以及各种黏附分子所介导的炎症反应有关.     

血管紧张素Ⅱ、卡托普利及氯沙坦对血管内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ在不同浓度和不同作用时间下对血管内皮细胞凋亡的作用及卡托普利和氯沙坦的影响。方法：采用流式细胞术测定在血管紧张素Ⅱ不同浓度和不同作用时间下血管内皮细胞凋亡率的变化和卡托普利、氯沙坦的影响。结果：血管紧张素Ⅱ可明显促进血管内皮细胞凋亡，且其作用呈剂量依赖性和时间依赖性；单用氯沙坦对细胞凋亡无明显作用，卡托普利有一定的作用，二者合用时抑制作用较明显。结论：血管紧张素Ⅱ具有明显的促血管内皮细胞凋亡的作用；合用卡托普利和氯沙坦可明显抑制内皮细胞凋亡。     

血管紧张素Ⅱ调控bax mRNA表达诱导内皮细胞凋亡

目的　研究AngⅡ诱导凋亡细胞内机制。方法　健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第三代,用不同浓度AngⅡ作用不同时间,用TUNEL和ELISA检测AngⅡ能否诱导凋亡及有否剂量依赖性;用RT—PCR检测bax的mRNA表达。结果　AngⅡ同AT2 受体激动剂CGP42 1 1 2A一样可以诱导内皮细胞凋亡;并且凋亡强度与AngⅡ成典型的剂量依赖关系。在AngⅡ与CGP42 1 1A作用1 8小时后,baxmRNA显著增加。结论　AngⅡ在转录水平上诱导baxmRNA高表达,使得Bax蛋白高表达,致Bax Bcl- 2比值极显著地增加,细胞内促凋亡因素占优势地位而诱发凋亡。     

血管紧张素Ⅱ对内皮细胞致凋亡效应及血脂康的保护作用

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖与凋亡的影响及血脂康对AngⅡ此效应的干预作用,探讨AngⅡ的致动脉粥样硬化作用及血脂康调脂之外的内皮保护作用。方法将体外培养内皮细胞株ECV304进行实验分组:空白对照组;AngⅡ诱导组,培养基中AngⅡ终浓度分别为10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L,与细胞共孵育18h。利用三磷酸腺苷生物素发光法(ATP法)检测AngⅡ对HU VECs生长增殖的影响,用电子显微镜观察AngⅡ(10-4mol/L)诱导后内皮细胞的超微结构特点,用流式细胞仪检测AngⅡ作用后内皮细胞凋亡率的变化,采用比色法检验AngⅡ(10-4mol/L)诱导后内皮细胞Caspase3活性的改变;血脂康干预组,培养基中AngⅡ浓度为10-4mol/L,同时加入血脂康500ng/ml与细胞共培养18h,检测该组内皮细胞凋亡率和Caspase3活性的变化。结果与对照组比较,不同浓度(10-8～10-4mol/L)的AngⅡ均能抑制内皮细胞生长增殖(P<0.05),且其作用呈剂量依赖性;不同浓度(10-7～10-4mol/L)的AngⅡ均可显著诱导内皮细胞凋亡(P<0.05),同时Caspase3的活性在AngⅡ(10-4mol/L)作用后明显增加(P<0.01);透射电镜下可见AngⅡ诱导后内皮细胞呈明显凋亡改变;血脂康(500ng/ml)可抑制AngⅡ(10-4mol/L)所诱导的内皮细胞凋亡(P<0.05)。结论     

人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的逆转作用.方法 体外培养HUVECs,采用台盼蓝染色方法筛选人参皂苷Rg1最适浓度,采用琼脂糖凝胶电泳和末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况.结果 台盼蓝染色显示人参皂苷Rg1的最适浓度为40 μg/mL.琼脂糖凝胶电泳显示,对照组和Rg1组未见凋亡条带,AngⅡ组可见清楚的细胞凋亡的"梯状"条带,而AngⅡ+Rg1组可见不明显的细胞凋亡的"梯状"DNA断裂条带.TUNEL染色显示,与对照组和Rg1组相比,AngⅡ组细胞凋亡数量增加,差异有统计学意义(P<0.01);与AngⅡ组相比,AngⅡ+Rg1组细胞凋亡数量减少,差异有统计学意义(P<0.01),凋亡百分比由38.667%下降到10.667%,但仍高于对照组和Rg1组(P<0.01).结论 40 μg/mL人参皂苷Rg1可一定程度逆转AngⅡ诱导的HUVECs凋亡.     

厄贝沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞产生组织因子的影响

目的：观察不同浓度的厄贝沙坦（Irbesartan）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）产生组织因子（TF）的影响。方法：胶原酶消化法分离HUVEC，采用改良后一期凝血法、酶联免疫吸附法（ELISA）和RT—PCR测各组细胞TF促凝血活性、含量和mRNA表达的变化。结果：①3种浓度的AngII组HUVECTF促凝血活性、含量和TFmRNA明显升高，与对照组相比，有显著性差异（P〈0．05），AngⅡ的浓度越高，HUVECTF促凝血活性和含量越明显；②3种浓度厄贝沙坦＋AngⅡ组与对照组相比，TF促凝血活性和含量均显著降低（P〈0．05），TFmRNA未见表达；HUVECTF促凝血活性、含量和TFmRNA表达显著降低，与单独AngⅡ组相比，有显著性差异（P〈0．05），且随着厄贝沙坦浓度的升高，HUVECTF促凝血活性和含量进一步降低。结论：AngⅡ可诱导内皮细胞产生TF，影响内皮细胞抗血栓特性，厄贝沙坦通过抑制TF的产生，对保护血管内皮细胞，提高抗血栓功能有积极作用。     

血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞分泌NO和ET1的影响

目的通过体外细胞实验研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌NO和ET1的影响,探讨其可能的机制。方法体外培养HUVECs,对其进行不同浓度AngⅡ刺激(1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6mol/L刺激组),及相同浓度不同作用时间AngⅡ刺激(1×10-7mol/L刺激2、6、12、18、24 h),并应用不同的受体阻断剂(AT1R阻断剂替米沙坦、AT2R阻断剂PD123319)及信号通路阻断剂(Erk1/2阻断剂PD98059、P38 MAPK阻断剂SB203580、PKC阻断剂Staurosporine)观察AngⅡ的作用通路,用ELISA法检测细胞分泌的内皮素1(ET1),用Griess法检测一氧化氮(NO),用RT-PCR方法检测e NOS/ET1 mRNA水平。结果 AngⅡ对血管内皮细胞的刺激作用有浓度效应,AngⅡ越高,e NOS mRNA表达和NO水平越低,而ET1 mRNA表达与蛋白水平越高;AngⅡ对内皮细胞功能的影响有时间效应,AngⅡ作用时间越长,NO/ET1水平越低;替米沙坦、PD98059和SB203580能阻断AngⅡ的效应;而PD123319和Staurosporine不能阻断AngⅡ的效应。结论 AngⅡ可损伤内皮细胞的分泌功能,表现为NO降低而ET1升高,其通过AT1R发挥,用并可能通过Erk1/2及MAPK信号通路途径起作用。     

人参皂苷Rg1抗血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制

目的探讨人参皂苷Rg1抗血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEGs)凋亡的相关机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,免疫细胞化学方法检测NF-κB p65细胞内分布状态,分别用逆转录聚合酶链反应和Western blotting分析各组NF-κB p65 mRNA和蛋白质的表达情况。结果免疫细胞化学结果显示,对照组和Rg1组中,NF-κB p65主要分布于胞质;而AngⅡ组NF-κB p65主要分布于胞核,出现明显的核移位;与AngⅡ组比较,AngⅡ+Rg1组NF-κB p65胞质分布增多,胞核分布减少,Rg1组可明显阻止AngⅡ诱导的NF-κB p65核移位;逆转录聚合酶链反应和Western blotting结果显示:对照组、Rg1组、AngⅡ组和AngⅡ+Rg1组NF-κB p65 mRNA水平和蛋白水平表达均无明显变化(P>0.05)。结论人参皂苷Rg1可一定程度逆转AngⅡ诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与其阻止AngⅡ诱导的NF-κB p65核移位密切相关。     

血管紧张素Ⅱ调控bax、bcl-2 mRNA表达诱导血管内皮细胞凋亡

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导细胞凋亡的机制。方法健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代，用不同浓度AngⅡ作用18h，用TUNEL和ELISA检测AngⅡ能否诱导细胞凋亡及其量效关系；用RT—PCR检测bax和bcl-2的mRNA表达。结果．AngⅡ与2型血管紧张素Ⅱ受体（AT2）激动剂CGP42112A一样可以诱导血管内皮细胞凋亡；并且凋亡强度与AngⅡ是典型的剂量依赖关系。在AngⅡ与CGP4211A作用18h后，bax mRNA显著增加，bcl-2 mRNA显著减少。结论AngⅡ通过在转录水平调节bax和bcl-2 mRNA的表达，从而诱导血管内皮细胞凋亡。     

黄芪含药血清对血管紧张素Ⅱ致内皮细胞凋亡的保护作用

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的致凋亡效应及黄芪含药血清的保护作用。方法将培养的 ECV-304分为以下3组：（1）空白对照组;（2）AngⅡ诱导组,使培养基中 AngⅡ终浓度为0、1×10－6、1×10－5、1×10－4 mol／L,与细胞共孵育18 h。MTT 法检测 AngⅡ对 HUVECs 生长增殖的影响;流式细胞仪检测 AngⅡ作用后内皮细胞凋亡率的变化;电子显微镜观察 AngⅡ诱导后内皮细胞的超微结构特点;（3）黄芪含药血清干预组,培养基中加入不同浓度黄芪含药血清培养24 h 后,加入 AngⅡ（1×10－4 mol／L）孵育18 h,检测内皮细胞凋亡率的变化。结果不同浓度的 AngⅡ均能抑制内皮细胞生长增殖。不同浓度的 AngⅡ均可显著诱导内皮细胞凋亡。透射电镜下可见 AngⅡ诱导后内皮细胞的凋亡形态。黄芪含药血清抑制 AngⅡ所诱导的内皮细胞凋亡。结论黄芪含药血清具有内皮保护作用。     

Ghrelin对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 观察促生长激素释放肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ) 诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs) 凋亡的影响.方法 将体外培养的HUVECs随机分为6组:正常对照组、Ghrelin组、AngⅡ组、AngⅡ+Ghrelin不同浓度组(Ghrelin 10-8、10-7、10-6mol/L3个浓度组),每组6个复孔,分别用AngⅡ及Ghrelin干预18 h后,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测HUVECs的活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与正常对照组比较,AngⅡ组HUVECs存活率显著降低(P<0.01),凋亡率显著升高(P<0.01);Ghrelin呈浓度依赖性抑制AngⅡ诱导的细胞存活率下降及促细胞凋亡;单用Ghrelin对HUVECs无明显影响.结论 Ghrelin可抑制AngⅡ诱导HUVECs 凋亡作用,对内皮细胞具有保护作用.     

前荷叶碱对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察前荷叶碱对血管紧张素Ⅱ(A ngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC s)凋亡的影响,探讨其对HUVEC s的保护作用机制。方法体外培养HUVEC s细胞系ECV 304,以10μm o l/L卡托普利或10、1、0.1、0.01μm o l/L前荷叶碱作用于HUVEC s,30 m in后再加入A ngⅡ1μm o l/L,光镜下观察细胞形态,M TT法观察前荷叶碱对HUVECs活性的影响,比色法测定NO、总一氧化氮合酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果与对照组比较,Ang能明显诱导HUVECs的凋亡(P<0.01),10μmol/L卡托普利及0.01~10μmol/L前荷叶碱可明显改善内皮细胞形态,组织活性明显升高(P<0.05),能增加HUVECs释放NO及生成tNOS(P<0.05),但对iNOS影响不大,使Ang诱导的HUVECs凋亡细胞数明显减少(P<0.05)。结论前荷叶碱通过增加NO生成而抑制Ang诱导的HUVECs凋亡,从而发挥可能的内皮保护功能。     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡及牛磺酸的作用

目的 观察外源性血管紧张家Ⅱ(AngⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用，并探讨牛磺酸对其可能的作用和影响。方法 利用培养的乳鼠心肌细胞，随机分成不同AngⅡ浓度(10^—9—10^—5M)诱导的细胞凋亡组和不同浓度牛磺酸(10、20、40mmol/L)作用组，观察培养24h后的各组心肌细胞存活率，光镜和电镜观察凋亡细胞形态结构变化．TUNEL法检测凋亡，流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果 10^—9M的AngⅡ可诱导心肌细胞发生凋亡，心肌细胞呈现特征性的凋亡形态结构变化；TUNEL检测观察到凋亡细胞核呈黄褐色改变；流式细胞仪PI染色呈现典型的亚二倍体峰。牛磺酸可以明显的降低血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡率(P＜0．05)。结论 一定浓度的AngⅡ可以引起体外培养的乳鼠心肌细胞发生调亡，且牛磺酸可对这种凋亡产生保护作用。     

血管紧张素Ⅱ调控人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体

目的：研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX－1）基因转录和蛋白表达的影响。方法：将不同浓AngⅡ(10^-5mol/L－10^－5mol/L）与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）共孵育24h，将10^-6mol/LAngⅡ与HUVECs作用不同时间（0、3、6、12、24、36、48h）后，用细胞酶联免疫法和半定量RT－PCR分别检测LOX－1蛋白和mRNA表达。结果：10^-5mol/L－－10^-10mol/LAngⅡ作用24h，使内皮细胞LOX－1蛋白一达的OD值与对照组相比显著增加（P＜0．001），其中AngⅡ浓度为10^-5mol/L－10^-9mol/L时，LOX－1表达增加呈浓度依赖性。10^-10mol/LAngⅡ的作用结果与10^-9mol/LAngⅡ的作用结果差异无显著性；10^-5mol/L－10^-8mol/LAngⅡ可以使内皮细胞LOX－1mRNA的表达增加，分别为对照组的4．43、4．25、2．71和1．84倍。10^-9mol/L,10^-10mol/AngⅡ作用24h,LOX－1mRNA表达与对照组相比无显著变化（P＞0．05）。用 10^-6mol/LAngⅡ作用HUVECs不同时间，发现共孵育3h后，内皮细胞LOX－1mRNA的表达和LOX－1蛋白表达的OD值与对照组相比都有显著增加（P＜0．001），随着时间延长，LOX－1mRNA的表达至24h左右达最高峰；LOX－1蛋白表达至24－36h达到最高峰之后表达量逐渐减低，结论：AngⅡ能明显增加强HUVECs表达LOX－1，并随着AngⅡ浓度的增加和作用时间的延长，LOX－1表达增加。