应用特异性核酸探针杂交分析法进行献血员HLA分型的初步报告

目的 探讨利用特异性核酸探针杂交分析法检测ＨＬＡ等位基因的可行性。方法 １０例西南某地献血员,提取ＤＮＡ后经ＰＣＲ扩增,采用酶联探针免疫杂交分析法检测ＨＬＡⅠ和ＨＬＡⅡ等位基因。结果 １０例标本经检测ＨＬＡ Ⅰ和ＨＬＡ Ⅱ等位基因,表现为Ａ＊０２、Ａ＊２４、Ａ＊１１、Ｂ＊３５、Ｂ＊１５、Ｂ＊５１、Ｂ＊５２、Ｂ＊４０、ＤＲＢ１＊１１０１、ＤＲＢ１＊０９０１、ＤＱＢ１＊０３０３、ＤＱＢ１＊０３０１等类     

核酸探针的制备

本实验室用地高辛-dUTP随机引物方法标记人内皮细胞特异性分子(human endothelial specific molecular-1,hESM-1)cDNA探针,并应用于ESM-1基因在肾癌中mRNA转录的检测。现报道如下。     

Polymin-HRP核酸杂交探针

本文叙述一种将辣根过氧化物酶(HRP)与单链DNA交联以制备非同位素核酸杂交探针的新方法。HRP-单链DNA复合物可用于斑点杂交,经杂文并与HRP底物溶液作用后,可直接检出互补的DNA靶序列,而不需繁冗的细胞化学夹心法。本法可检出 1～4 pg的靶DNA。     

用PCR技术标记双链DNA探针

利用ＰＣＲ技术制备生物素或地高辛标记的ＤＮＡ探针，经原位杂交试验及敏感性和特异性检测，均取得满意效果，ＰＣＲ标记法具有经济，快速，简易和标记量大等优点，实践中发现Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ＵＴＰ的质量，ｄＴＴＰ和Ｄ－１１－ｄＵＴＰ的比例及起始ＤＮＡ模板浓度是标记成败的关键。     

不同生物素检测系统在核酸分子杂交检测中的应用——Ⅰ 辣根过氧化物酶标记亲和素检测系统

用化学方法制备生物素化λDNA探针。应用辣根过氧化物酶标记亲和素(A-HRP)检测系统,对斑点杂交结果进行检测。当以DAB为显色剂时,探针检测敏感性为120pg,当以OPD为显色剂时,探针检测敏感性为24pg。     

聚合酶链反应和DNA探针杂交法检测沙眼衣原体的比较

目的：探讨聚合酶链反应（PCR）和DNA探针杂交法检测泌尿生殖道沙眼衣原体（Ct)的临床诊断价值。方法：应用这两种方法对未使用过抗衣原体药物的80例宫颈炎患者同时进行Ct检测。结果：PCR法检出Ct基因的阳性率（23．8％）高于探针杂交法（15．0％），两者比较有显著性差异。结论：PCR法检测Ct较DNA探针杂交法敏感，如将两法结合应用结果将更可信。     

地高辛标记核酸探针的应用

本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。     

支原体全DNA光敏生物素探针杂交方法的建立

支原体基因组全ＤＮＡ分子量较小，本研究直接制备肺炎支原体，人型支原体和解脲脲原体中３个型ＳＵ１，ＳＵ４，ＳＵ８全ＤＮＡ光敏生物毒探针，用斑点杂交鉴定表明探针可用于检测同种支原体，但３个型ＵＵ探针不能用于型别鉴定。探针检测灵敏义较一般片段ＤＮＡ探针灵敏度低，可能是由于前者分子量较大，降低了杂交速率和效率。     

PCR制备地高辛配基标记的探针检测登革病毒核酸

用聚合酶链反应(PCR)技术，以重组质粒PDEⅡ305 DNA为模板．在底物中补充标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(DIG-dUTP)，经扩增反应制备了地高辛配基标记的登革病毒2型(DEN2)cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交表明该探针有DEN2型特异性，可检出0．1pgDEN2-RNA。PCR扩增标记只用10ng模板DNA，数小时内可制备约1ug标记的cDNA探针，而用六聚棱苷酸随机引物(RHP)标记，从质粒DNA酶切、片段回收到标记获得探针，至少需数10h。可见PCR技术直接制各地高辛配基标记的cDNA探针较方便，快速、标记率高、特异性强，具有一定的应用前景。     

地高辛标记核酸探针的应用

本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。     

不同生物素检测系统在核酸分子杂交检测中的应用——Ⅲ 链霉亲和素-碱性磷酸酶标记生物素检测系统

使用链霉亲和素(sA)结合碱性磷酸酶标记生物素(B-Ap)对斑点杂交结果进行检测。先摸索出sA和B-Ap的最佳浓度比。当反应液中sA浓度为1μg/ml,sA和B-Ap浓度比为1.7～2.0时,斑点杂交检测敏感性可达到pg水平。     

核酸探针技术及其在诊断中的应用

基因检测技术的发展,使对某些疾病的诊断达到了特异性强、敏感性高及简便快速的目的。近年来各种血清学方法发展很快,但血清学方法主要是测抗体,是间接的证据。另外,同群不同型病原体之间常因共同抗原的出现交叉反应而使诊断发生困难。因此人们早就盼望能直接检测病原体核酸,因为不同