尼美舒利对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长调控作用的研究

目的研究尼美舒利（nimesulide,NIM）体外对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长抑制和诱导凋亡的作用,对其机制做进一步探讨。方法 MTT法检测不同浓度、时间NIM对乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制率;流式细胞技术分析细胞周期变化,计算细胞凋亡率;免疫组织化学检测bcl-2,bax,cox-2蛋白表达变化;RT-PCR半定量检测COX-2mRNA表达改变;ELISA法检测PGE2水平变化。结果 NIM可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,呈浓度、时间依赖性;不同浓度NIM处理48h后,细胞内Bcl-2、COX-2蛋白及COX-2mRNA表达水平均明显降低,Bax蛋白水平明显升高（P〈0.05）。结论 NIM可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性。其机制与抑制COX-2有关外,还可能与调节bcl-2、bax等表达有关。     

mDRA-6与尼美舒利对Jurkat细胞的杀伤效应

目的：探讨mDRA-6与尼美舒利对Jurkat细胞有无杀伤作用及二者有无协同效应。方法：常规培养Jurkat细胞，流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率，MTT法检测细胞毒性作用，Hoechst33258染色观察Jurkat细胞核形态变化，流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果：①Jurkat细胞表面DR5的表达率为84.83%。②mDRA-6与尼美舒利均能杀伤Jurkat细胞，存在浓度依赖性。400μmol/L的尼美舒利作用细胞10小时，细胞凋亡率为11.51%；0.5ng/ml与1ng/ml的mDRA-6作用细胞10小时，细胞凋亡率分别为3.67%和6.3%；③二者联合具有较好的协同促凋亡作用，400μmol/L的尼美舒利联合0.5ng/ml与1ng/ml的mDRA-6作用细胞10小时，细胞凋亡率分别为50.38%和63.79%。结论：mDRA-6与尼美舒利均有杀伤Jurkat细胞的作用，二者具有较强的协同作用，杀伤作用是通过诱导凋亡实现的。     

表皮生长因子受体沉默联合尼美舒利对胶质瘤细胞U251作用及机制

目的:研究尼美舒利(NIM)与表皮生长因子(EGF)受体沉默联合应用对胶质瘤U251细胞作用及机制.方法:不同浓度的尼美舒利(0、25、50、100、200、400μmol/L)与靶向EGF受体的小分子RNA(siRNA-EGFR)联合应用培养U251胶质瘤细胞,ELISA试剂盒检测培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)水平,MTT法检测细胞的增殖并计算抑制率,免疫印迹检测细胞增殖、凋亡和血管形成调控相关蛋白,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡.结果:siRNA-EGFR浓度小于2μg/ml联合NIM(25～400 μmol/L)处理U251细胞,其生长抑制率与NIM的浓度依赖性增高,流式检测阻滞U251细胞于G2/M期及诱导细胞凋亡,蛋白分析表明,当沉默U251细胞EGF受体时,Bax蛋白表达随尼美舒利浓度增加表达上调,而bcl-2、细胞增殖核抗原(PCNA)和促血管生成素-2(ANG-2)蛋白表达明显下调,促血管生成素-1(ANG1)表达变化不明显;siRNA-EGFR与25 μumol/L的尼美舒利处理U251胶质瘤细胞12 h后,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,并且随尼美舒利处理时间的延长,凋亡峰增加,随处理尼美舒利剂量的增加而呈现增加趋势,各组间差异具有统计学意义.结论:当siRNA-EGFR浓度为2μg/ml以下和作用时间在48 h之前,EGF受体沉默联合尼美舒利能发挥协同作用,其机制可能与Bax蛋白表达上调和bcl-2、PCNA、VEGF、ANG-2蛋白表达明显下调有关.     

尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡并下调HSP70基因表达

目的:探讨尼美舒利诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及其机制。方法:以不同浓度的尼美舒利处理体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和/或Western blot法检测caspase-9和PARP的剪切情况及HSP70的表达水平;通过RNAi技术沉默HSP70基因表达,观察其对细胞凋亡的影响。结果:尼美舒利可抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,诱导细胞凋亡,导致caspase-9和PARP的剪切活化及HSP70的mRNA和蛋白表达下调;在人肝癌SMMC-7721细胞中转染靶向HSP70的siRNA可沉默HSP70表达、剪切活化caspase-9和PARP,进而显著促进细胞凋亡。结论:尼美舒利可诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡,这一作用可能与抑制HSP70表达有关。     

尼美舒利对大鼠实验性牙周炎防治作用的评价

目的： 评价尼美舒利对实验性牙周炎的防治效果，探讨前列腺素与牙周炎发病的关系，为牙周炎临床治疗的联合用药提供依据。方法： Sprague-Dawly大鼠120只，随机分成4组。正常对照组及各实验组分别于4、5和8周末分批处死动物。在处死动物前测量各时点的牙龈指数，通过组织学方法观察各组动物牙周组织的病理学改变，用Tiger细胞图像分析仪测量牙周附着丧失情况。结果： （1）大鼠经丝线结扎4周后成功复制出牙周炎模型。（2）实验性牙周炎组，4周时牙龈指数明显高于正常对照组(P<0.01)，附着丧失明显高于正常对照组(P<0.01)。组织学观察到牙周组织出现明显的病理改变，并且牙周组织破坏程度随着时间的推移逐渐加重。（3）尼美舒利预防组牙龈指数和附着丧失明显低于牙周炎组(P<0.01)，组织学观察到牙周组织的炎症较轻，牙槽骨未见明显破坏吸收。（4）在实验性牙周炎形成后，尼美舒利治疗组自第5周开始给予尼美舒利治疗，5周和8周末时牙龈指数和附着丧失明显低于牙周炎组(P<0.01)，8周时牙龈指数和附着丧失降低尤为明显。结论： 预防性给予尼美舒利，可有效阻止实验性牙周炎的发展；在牙周炎发生后，给予尼美舒利治疗，能有效降低牙周组织的炎症和破坏程度。     

桑叶液对乳腺癌肿瘤细胞MDA-MB-231作用的研究

该文应用CCK-8、Western blot和ELISA等细胞检测技术研究桑叶液对人乳腺癌肿瘤细胞MDA-MB-231增殖、细胞凋亡、细胞周期及部分因子的影响及其抑制肿瘤可能的机制。实验结果表明,桑叶液对乳腺癌肿瘤细胞MDA-MB-231的增殖具有抑制作用(P0.05);流式细胞仪分析表明,经桑叶液处理过的乳腺癌肿瘤细胞凋亡的数量有显著性增加(P0.01);桑叶液能够阻碍肿瘤细胞周期的进程,阻止其有丝分裂;桑叶液能够调节MDA-MB-231部分因子的表达水平。其中促细胞凋亡因子caspase-3,caspase-9会随着桑叶液浓度的增加而增加,而对VEGF则呈现出反向调节作用。     

尼美舒利引起严重肝损伤致死尸检1例

临床上,尼美舒利主要用于解热镇痛、抗炎,治疗风湿痛、头痛、外伤痛,癌症疼痛等,而且因消化道副作用较小而被临床广泛接受,尤其是在小儿解热镇痛剂的应用上比较广泛[1].由于其独特的药理作用机制该药曾被认为是一个安全性好(胃肠道反应少),有良好发展前景的非甾体抗炎药.但近年来,其严重肝毒性反应,国外多有报道.国内的研究报道较多的是有关尼美舒利对于食管癌、结肠癌和肝癌等多种肿瘤细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用[2],但有关尼美舒利引起肝脏损害的报道则非常罕见.近年来,国外已陆续报道了多起与应用尼美舒利有关的重度肝脏损害的病例报告,严重者甚至可以引起死亡[3].现将2007年11月我们在尸检工作中遇到的1例冈服用尼美舒利引起严重肝损害而死亡的病例报道如下,希望能引起临床医生的足够重视.     

儿童口服尼美舒利安全性的系统评价

目的评价儿童口服尼美舒利的安全性。方法计算机检索PubMed、EMBASE、Cochrane图书馆（2011年第3期）、Cochrance临床对照试验数据库、中国生物医学文献光盘数据库、中国期刊全文数据库、中国维普科技期刊数据库和万方数据库,检索时间均从建库至2011年3月。手工检索中国《药品不良反应信息通报》、WHO Pharmaceuticals Newsletter、MHRA Drug Safety Update和FDA Drug Safety Newsletter。获得儿童尼美舒利安全性评价的队列研究、病例对照研究、RCT研究、非随机分组的对照研究和病例报告,此外还获取上市后药物不良反应监测,各国药物监督和管理机构对尼美舒利的风险利益评估、适应证修改等资料。按纳入和排除标准筛选文献,评价文献质量,提取资料。RCT文献采用RevMan 5.0软件进行Meta分析,余文献采用描述性分析,采用WHO-UMC评价体系评价病例报告中不良反应与尼美舒利的关联性。结果未检出儿童尼美舒利安全性评价的队列研究和病例对照研究。检出符合纳入标准的RCT文献43篇,病例报告9篇,尼美舒利上市后不良反应监测1篇。①RCT文献结果：儿童口服尼美舒利不良反应包括胃肠道反应、体温过低、皮疹,肝酶升高和神经系统不良反应（嗜睡或烦躁）。胃肠道反应发生率低于布洛芬（P〈0.000 01）和对乙酰氨基酚（P=0.000 9）;体温过低（P=0.01）和神经系统不良反应（P=0.03）发生率高于布洛芬;ALT和（或）AST升高发生率与布洛芬、对乙酰氨基酚差异均无统计学意义。②病例报告分析结果：报道3例严重肝脏不良反应,其中2例死亡;1例很可能由尼美舒利引起,2例可能由尼美舒利引起;报道5例血尿,均很可能由尼美舒利引起。③上市后不良反应监测结果：未检索到中国尼美舒利不良反应监测数据;印度监测4 092例患儿,报告肾脏不良反应13例,未报告肝脏不良反应。④中国食品药品监督管理局于2008年6月修改尼美舒利说明书,仅用于1岁以上儿童,用于退热疗程不超过3 d;欧洲药品管理局于2007年评估尼美舒利风险和效益后,限制其适应证仅为止痛,不用于退热,且疗程不超过15 d,12岁以下儿童禁用;2011年2月印度卫生部禁止12岁以下儿童使用尼美舒利。结论儿童口服尼美舒利胃肠道反应发生率可能低于布洛芬和对乙酰氨基酚,体温过低和神经系统不良反应发生率可能高于布洛芬,肝酶升高发生率可能与布洛芬和对乙酰氨基酚相似,严重肝脏不良反应有待进一步研究明确其与尼美舒利的因果关系。     

尼美舒利对慢性牙周炎治疗效果的评价

目的:评价尼美舒利对慢性牙周炎的治疗效果。方法:选择136名慢性牙周炎患者，所有患者均进行牙周基础治疗，然后分别应用尼美舒利和甲硝唑治疗4周。在牙周治疗前及治疗2和4周后常规临床检查，记录探诊出血、菌斑指数和探诊深度，分别比较两种药物对慢性牙周炎的临床治疗效果。 结果:在临床治疗中观察到尼美舒利和甲硝唑均能有效减轻牙周炎症程度，但尼美舒利能显著降低探诊深度（P<0.05）;尼美舒利治疗慢性牙周炎的显效率明显高于甲硝唑治疗组（P<0.05）。 结论:与甲硝唑相比较，尼美舒利对慢性牙周炎的临床治疗效果更显著。     

核糖核酸酶抑制因子对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和侵袭的影响

目的:将核糖核酸酶抑制因子(RI)转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,探讨RI对细胞凋亡和侵袭的影响。方法:(1)应用脂质体LipofectamineTM2000分别将重组表达载体pLNCX-RI和空载体pLNCX导入MDA-MB-231细胞,G418筛选阳性克隆并扩增传代。RT-PCR和Western blot检测RI表达。(2)流式细胞术、Transwell细胞侵袭实验分别观察RI对乳腺癌细胞凋亡、侵袭的影响。(3)RT-PCR和West-ern blot法检测Survivin mRNA和蛋白的表达,Western blot方法检测Caspase-3蛋白的活化情况,初步探讨RI诱导乳腺癌细胞凋亡的相关机制。(4)RT-PCR和Western blot法检测CD24mRNA和蛋白的表达,初步探讨RI抑制细胞侵袭的机制。结果:(1)成功构建表达外源性RI的亚克隆细胞系MDA-MB-231/pLNCX-RI。(2)与未转染的MDA-MB-231细胞及转染空载体的MDA-MB-231/pLNCX细胞相比,MDA-MB-231/pLNCX-RI细胞凋亡率增加(P<0.01);细胞穿膜数减少(P<0.01);Survivin mRNA和蛋白的表达量下降(P<0.01),且能活化Caspase-3;CD24 mRNA和蛋白的表达量亦下降(P<0.01)。结论:(1)外源性RI基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的稳定表达可以通过抑制Survivin的表达和激活Caspase-3促进细胞凋亡,并能通过抑制CD24表达降低细胞侵袭力。     

尼美舒利联合EGF受体沉默对胶质瘤细胞U251的作用

<正>目的:研究尼美舒利(NIM)与内皮生长子受体(EGFR)沉默联合应用对胶质瘤U251细胞的作用及机制。方法:不同浓度NIM(0、25、50、100、200、400mol/L)与靶向EGFR小分子RNA(siRNA-EGFR)联合作用于培养胶质瘤细胞U251,ELISA检测培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)水平,MTT法检测细胞增殖并计算抑制率,Western Blotting检测细胞增殖、凋亡和血管形成调控相关蛋白,流式细胞术测定细胞周期和凋亡。     

MDA-7/IL-24对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长抑制和凋亡的影响

 摘要：目的 探讨IL-24基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制和促凋亡作用。方法 利用脂质体将穿梭质粒pDC316-hIL-24-EGFP瞬时转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过RT-PCR检测转染后hIL-24基因mRNA的转录,Western blot检测转染后IL-24和Caspase-3蛋白的表达,MTT比色法测定细胞增殖的抑制, 流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,Hoechst 33258染色检测细胞的凋亡情况。结果IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达。IL-24可上调MDA-MB-231细胞中Caspase-3蛋白表达。IL-24基因的表达使得乳腺癌MDA-MB-231细胞出现增殖抑制。流式细胞仪检测显示MDA-MB-231细胞DNA 合成受到抑制,细胞周期主要抑制在G2/M期。Hoechst 33258染色显示IL-24基因转染后MDA-MB-231细胞出现凋亡。结论IL-24基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后能够抑制细胞增殖并促进其凋亡,其机制之一可能是上调Caspase-3的表达。     

白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2表达的影响。方法不同浓度白藜芦醇处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测白藜芦醇对细胞增殖抑制率,流失细胞技术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1和Caspase-3的表达。结果白藜芦醇25、50、100、200μmol/L处理细胞,增殖抑制率分别为(24.22±1.66)%、(30.79±1.60)%、(45.72±1.25)%和(53.31±1.94)%。白藜芦醇0、50、100、200μmol/L处理细胞,凋亡率分别为(3.53±0.25)%、(28.80±1.34)%、(38.78±1.19)%和(58.96±1.26)%。Western blot结果显示,白藜芦醇处理细胞后,Caspase-3蛋白裂解片段表达增加,凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达减低。结论白藜芦醇能诱导MDA-MB-231细胞凋亡增加,这可能与白藜芦醇激活Caspase-3蛋白同时抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl表达有关。     

重楼单体PP-11对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用及其机制

目的:探讨中药重楼(Paris polyphylla,PP)活性单体PP-11体外抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的作用及其机制.方法:采用不同浓度的PP-11作用于MDA-MB-231细胞,采用MTT法和集落形成实验检测细胞增殖情况;Hoechst 33258染色及Annexin V-FITC/PI双染流式细...     

尼美舒利对食管癌Eca-109细胞增殖及COX-2和P27kip1表达的影响

目的观察选择性COX-2抑制剂尼美舒利对食管癌Eca-109细胞增殖、凋亡及COX-2表达的影响,并探讨与抑癌基因P27kip1的关系。方法用MTT法测定Eca-109细胞增殖;透射电镜及流式细胞仪观察细胞凋亡及细胞周期;RT-PCR法检测Eca-109细胞COX-2mRNA表达变化;Westernblot检测COX-2和P27kip1蛋白表达变化。结果尼美舒利以时间、剂量依赖方式抑制Eca-109增殖,增加G0/G1期细胞比例;呈剂量依赖性诱导细胞凋亡,降低COX-2mRNA和蛋白表达,上调P27kip1蛋白表达。结论尼美舒利可抑制食管癌Eca-109细胞增殖,使细胞周期受阻于G0/G1期并诱导细胞凋亡。其机制可能是通过下调COX-2表达和上调P27kip1蛋白表达水平实现的。     

LCL161联合Z-VAD-FMK对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响

目的:探讨第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激动剂小分子(Smac)类似物LCL161联合天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)抑制剂Z-VAD-FMK诱导细胞发生坏死性凋亡对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响。方法:体外培养MCF-7、MDA-MB-231细胞株。噻唑蓝(MTT)法检测2种细胞株空白对...     

上调胰岛素样生长因子结合蛋白6基因对乳腺癌细胞 MDA-MB-231细胞周期和凋亡的影响*

目的：探究上调胰岛素样生长因子结合蛋白6（IGFBP-6）基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期和凋 亡的影响。方法：体外培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,转染IGFBP-6 过表达质粒,实时荧光定量PCR 法验证转染效率;流式细胞术检测转染IGFBP-6 后的细胞周期的改变及凋亡的情况;免疫印迹检测增殖细胞核抗 原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、凋亡相关蛋白Bcl-2 和Bax 的蛋白表达水平。结果：IGFBP-6 转染 MDA-MB-231细胞后,IGFBP-6 的mRNA水平明显上调;PCNA、细胞周期蛋白D1 的表达水平明显降低;细胞 G1/S 期阻滞;凋亡细胞增多。结论：IGFBP-6 可以显著抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

选择性环氧合酶2抑制剂尼美舒利抑制皮肤瘢痕形成的研究

背景：尼美舒利是一种选择性环氧合酶2抑制剂,可通过抑制环氧合酶2的合成、抑制前列腺素的合成、白细胞的介质释放等环节影响炎症的发生过程,具有解热、镇痛和抗炎作用。 目的：探讨尼美舒利抑制小鼠皮肤瘢痕形成的作用及机制。 方法：昆明种小鼠背部脊柱两侧建立皮肤损伤模型,随机分为模型组、25,50,100 μmol/L尼美舒利组,切口分别涂抹0.5 mL玻璃酸钠凝胶、25,50,100 μmol/L尼美舒利玻璃酸钠分散制剂。 结果与结论：应用25,50 μmol/L尼美舒利可以明显减小瘢痕组织的面积(P < 0.01),但100 μmol/L尼美舒利却造成损伤面积增大(P < 0.05),与模型组相比,不同剂量的尼美舒利治疗的小鼠在创伤形成第3,7,14天环氧合酶2的表达明显降低,且其中50和100 μmol/L尼美舒利治疗的小鼠创口微血管的生成速度明显降低(P < 0.05),提示尼美舒利可以通过适度下调皮肤修复过程中环氧合酶2的表达,控制微血管的形成,达到抑制病理性瘢痕形成的治疗目的,但剂量过大(100 μmol/L)则可抑制创伤的愈合。     

山苍子油对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其可能机制的研究

目的:研究山苍子油对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及可能机制.方法:CCK-8比色法和流式细胞术(FCM)分别检测山苍子油对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响;Western blot方法检测经山苍子油作用后MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、E...     

白花蛇舌草提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用

目的：观察白花蛇舌草提取物对MDA-MB-231细胞的抑制作用。方法：采用CCK-8试剂盒检测白花蛇舌草提取物对MDA-MB-231细胞的抑制作用,HE染色观察细胞形态的变化。结果：白花蛇舌草提取物可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖关系;HE染色可见核深染,染色质边集等凋亡形态改变。结论：白花蛇舌草提取物可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,其机制可能与诱导凋亡有关。