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相似文献
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1.
用人工合成的丙型肝炎病毒(HCV)结构区寡肽Cp-19及非结构区寡肽NS4-21组装成抗-HCVELISA试剂。经中国药品生物制品检定所抗-HCV标准系列血清验证二次。第一次参比血清组结果与预期结果完全相符,第二次参比血清组除1份弱阳性标本漏检外,其余也完全相符,但检测血清的稀释度较标准稀释度低。试剂重复性好,在18~20℃放置7天,4℃放置3个月,仍保持原活性。试剂与国内合成肽抗-HCVELISA试剂水平相当,可供临床检测之用。  相似文献   

2.
肝细胞癌中丙型肝炎病毒NS3抗原和HBsAg的表达汪荣泉周子成杨建民房殿春作者单位:630038重庆第三军医大学西南医院消化科1996年9月18日收稿1997年6月17日修回原发性肝细胞癌(HCC)是我国目前最常见的恶性肿瘤之一,血清学和分子流行病学...  相似文献   

3.
国产丙型肝炎病毒NS3抗原的质量检定   总被引:15,自引:1,他引:15  
目的为了研究我国丙型肝炎病毒(HCV)诊断试剂用抗原的质量,加快改进丙型肝炎病毒抗体诊断试剂。方法特选国内“八五”攻关课题研究出的丙型肝炎NS3抗原和目前我国的主要使用的两种国外丙型肝炎NS3抗原,建立了单片段检测NS3抗体的试剂,对NS3抗原质量利用我国抗-HCV第二代国家检验参考品以及中国药品生物制品检定所最近收集的部分血清样品,对其抗原性进行了比较研究。结果发现我国生产单位对NS3抗原的纯化条件及在试剂中的组装条件的研究尚嫌薄弱,使得在利用这些NS3抗原组成诊断试剂检测时出现了检出率较低及假阳性等问题。结论提示国内有关单位应加强对这方面的研究。  相似文献   

4.
观察2例慢性HCV携带者及1例HCVRNA转阴者外周血淋巴细胞对HCVNS3区辅助性T细胞抗原表位的应答。方法用血清学方法检测患者的HLA分型。根据计算机软件分析和文献资料,合成了1个位于HCVNS3区长度为14个氨基酸的辅助性T细胞表位,与在GeneBank中已发表达的34个HCV全长序列进行了比较。  相似文献   

5.
目的:研究丙型肝炎患者血清中HCV E1抗体,确定HCV E1抗原在抗体检测中的应用价值。方法:应用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测80份卫生部第3代HCV血清参比品,821例职业献血员血清和720例临床肝炎患者血清中E1抗体。结果:用E1抗原单包板检查80份卫生部血清参比品的阳性符合率为70%、阴性符合率为100%;从821例职业献血员血清样品中检出E1抗体阳性率为1.9%;从720例临床肝炎患者血清中检出E1抗体阳性率为68%。大部分E1抗体阳性血清,同时也能和HCV的Core、NS3抗原及NS5A抗原呈阳性反应,但有个别血清只对E1抗原呈阳性反应。用市购HCV抗ELISA检测试剂盒检测为阴性的218例肝炎科门诊患者、813例献血员和848例一般人群血清,用E1抗原单包板复检,检出的阴性率分别为1.4%、1.1%和0.9%。在3例患者血清学转变的追踪研究中,HCV E1抗体都同现最早。结论:用E1工程蛋白检测E1抗体具有较高的灵敏度和特异性。E1抗体在HCV感染患者中普遍存在而且早出现,在临床诊断上是有意义的。  相似文献   

6.
检测抗丙型肝炎病毒总抗体的双抗原夹心法的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
以丙型肝炎病毒(HCV)结构区和非结构区基因工程表达抗原及人工合成多肽包被酶标板,用辣根过氧化物酶标记抗原,建立了检测血清中抗-HCV总抗体的双抗原夹心法。与普遍采用的检测抗-HCVIgG的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)比较,其灵敏度(1∶128)稍高于间接法(1∶64),特异性相同,均为100%。该法可同时检测抗-HCV各类抗体,使检出率提高10%。  相似文献   

7.
丙型肝炎病毒抗原检测方法的建立   总被引:15,自引:0,他引:15  
目的以特异性单克隆抗体为基础建立丙型肝炎病毒(HCV)抗原检测的酶联免疫吸附(ELISA)法,探索从血浆或血清中检测HCV抗原的可能性.方法利用我们制备的抗-HCV核心及NS3区单克隆抗体(McAbs),进行多种交叉组合模式的分析,确立实验室模式,并测定348份义务献血员血样,确定此方法的Cutofff值,并分析146份抗-HCV阳性及225份抗-HCV阴性血浆,阳性结果用套式PCR试剂盒确证.结果构建了以抗-HCV核心区单抗C39及NS3区单抗C7-6为包被抗体,以C39及NS3区C7-57为标记抗体的夹心ELISA检测模型,以C7为抗原,其检出灵敏度为5ng/ml,其Cutoff值为阴性对照均值±0.25.146份抗-HCV阳性样本中,11份为抗原反应阳性,225份抗-HCV阴性样本中,16份为抗原阳性,这些阳性样本经PCR检测后,23份为HCVRNA阳性.结论用单抗构建的HCV抗原检测方法分别从抗-HCV阳性及阴性样本中检测出HCV抗原反应阳性样本,并经PCR确证,表明直接从血浆样本中检测HCV抗原是可能的,这将对于HCV和基础研究及控制HCV的传播有重要意义.  相似文献   

8.
丙型肝炎病毒抗原检测试剂在临床诊断中的初步应用   总被引:1,自引:0,他引:1  
本文利用重组丙型肝炎病毒(HCV)多表位复合抗原免疫动物制备抗HCV多克隆抗体,建立HCAgELISA检测方法,对不同的临床样品进行检测,分析不同临床样品HCAg检出率,并与荧光定量PCR结果进行对比。95份HCAb阳性的样品中,51份样品HCAg阳性,阳性率为53.7%;88份重症肝病患者血清中检出HCAg阳性33份,阳性率为37.5%,均明显高于其它样品(P<0.05);73份肝功异常但HCAb阴性血清样品,检出HCAg阳性8份,阳性率为11.0%;HCAg与HCAb之间存在相关性(r=0.5076,P<0.01),HCAg与HCV-RNA符合率为85.7%。HCAg ELISA检测可作为临床HCV诊断的检测指标,为临床早期诊断及治疗预后提供依据。  相似文献   

9.
以S.tyPhi全菌体免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,建立了分别针对S.tyPhiO9、O12、Hd和Vi抗原的单克隆抗体(MCAb)杂交瘤共30株。通过对MCAb的亚类、效价和表位测定等进行筛选,建立了可分别检测S.tyPhi可溶性O、H和Vi抗原的双抗体夹心ELISA法。检测3种抗原成分的敏感度分别为:15.625ng/ml,8ng/ml和0.305ng/ml。检测全菌体的敏感度为105~106个/ml。检测了疑似伤寒患者的血培养物104份,其中27份三种抗原检测全部呈阳性,与细菌分离的结果完全相同,从而证实此27例为S.typhi感染。上述结果提示:此方法具有较高的敏感性及特异性。对S.typhi抗原成分的检测分析,将可能应用于伤寒的早期诊断。  相似文献   

10.
目的方法利用ZhouJian教授提供的重组质粒DNApBV220/eAg,转染DH5α细胞,经30℃培养3小时,42℃培养6小时温度诱导后,提取乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)。经DEAE-SepharoseFastFlow层折纯化后免疫打点分析,收集阳性蛋白。经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝G250染色,显示为单一的蛋白带,用免疫印迹法(Westernblot)和免疫打点(lmmunodot)法,确定表达产物的特异性。将纯化的HGeAg用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫条。方法基检测人血清中的相关抗体。结果经49例乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)阳性病人血清检验证实了其特异性。结论免疫条方法较ELISA方法更敏感、特异。  相似文献   

11.
丙型肝炎病毒不同基因型NS3蛋白的抗原异质性分析   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的探讨不同基因型丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白的抗原特性及其用于抗-HCV检测的意义。方法分别构建和表达含有HCV1型和6型NS3基因片段的重组质粒和重组蛋白,以EIJSA法和Western blot分析不同基因型重组蛋白与已知抗-HCV阳性血清的抗原反应性。结果HCV1型和6型NS3重组蛋白氨基酸序列的同源性为83.2%;85份抗-HCV阳性血清以此不同基因型HCV NS3单片段抗原检测,阳性检出率分别为61.2%(1型)和58.8%(6型),其中有7份标本以NS3-1型抗原检测阴性,但可被NS3-6型抗原检出,反之,有9份血清以NS3-6型重组蛋白检测为阴性,而NS3.1型检测阳性;54份大学生体检血清和39份阴性质控血清以此两种抗原检测均为阴性。结论HCV1型和6型NS3重组蛋白存在抗原异质性,在发展HCV抗体检测试剂时需考虑加入不同基因型的NS3抗原。  相似文献   

12.
目的 研制抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3的人源噬菌体单链抗体,并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法 以重组的丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3为固相抗原,利用亲和筛选的原理,从噬菌体抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点免疫杂交试验和DNA序列分析,获得HCV NS3的人源单链抗体;用该抗体与不同来源的HCV NS3抗原进行反应;对10例石蜡包埋的丙型肝炎患者肝组织进行免疫组化鉴定。结果 ELISA结果表明,所制备的HCV NS3人源单链抗体能与不同来源的HCV NS3抗原特异性结合(吸光度A值为1.38);免疫组化结果表明,该抗体能够特异性识别丙型肝炎患者肝组织HCV NS3抗原,与正常肝组织及乙型肝炎病毒(HBV)的表面抗原均无交叉反应。结论 此法制备的单链抗体亲和性好,特异性强,且制备方法简便,周期短,可用于HCV NS3病原的检测。  相似文献   

13.
A double-antigen sandwich ELISA was developed a detection of HCV antibodies by a recombinant multi-epitope HCV antigen and a biotin-streptavidin amplification system. Three plasma specimens from 1708 individuals who were suspected previously to be HCV-positive using an HCV antibody diagnostic kit (Chuangxin, Xiamen, China) displayed negative results when using the ELISA. These results were validated by a recombinant immunoblotting assay (two were negative, and one was indeterminate). Among 889 blood specimens donated for clinical evaluation, 246 were positive and 630 were negative using the ELISA. The sensitivity and specificity of the ELISA were 98.7% and 100%, respectively. In 43 donors and 14 patients with chronic hepatitis C, the detectable rates for HCV IgM by both ELISA and the HCV anti-IgM detection reagents (Huimin, Shenyang, China) were 100%, and the detectable rate for HCV IgG using an indirect HCV-antibody detection kit (GWK, Beijing, China) was 98.3%. Thus, the double-antigen sandwich ELISA exhibits strong specificity and sensitivity and has been approved by the China State Food and Drug Administration (SFDA). The performance of the double-antigen sandwich ELISA was similar to the Ortho ELISA 3.0. It did not give false-negative results otherwise IgM was undetectable using an indirect HCV-antibody detection kit. This ELISA provides another method for the detection of HCV antibodies.  相似文献   

14.
丙型肝炎病毒核心抗原C33的测定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探索丙型肝炎病毒(HCV)C33抗原在正常人群及各类临床病人血清及肝组织中分布状况。方法用人工合成的HCV核心抗原C33肽(含33个氨基酸)与小鼠血清白蛋白,经异型双功能交联剂SPDP连接后免疫Balb/C小鼠,制成2株C33肽单克隆抗体(McAb),分别用作包被抗体和酶标抗体,建立检测血清中C33肽抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA),共检测了1236例各类病人。并用免疫荧光及固相免疫酶法检测肝活检组织中的HCVC33肽抗原。结果急性丙型肝炎(HC)患者,C33肽的阳性检出率为14.0%(6/43);仅抗-HCVIgG阳性患者C33肽的阳性检出率为8.8%(35/396);慢性丙型肝炎患者为6.5%(4/62);白血病患者为4.3%(1/23);血透病人为3.3%(19/576);普通住院病人为1.5%(2/136);正常供血员为1.4%(6/438)。肝活检免疫荧光、固相免疫酶检测显示HCVC33肽在细胞核、细胞质、细胞膜上均有表达,在胞质中或集中于全胞质一侧或弥散分布于胞质中。结论HCVC33抗原测定,可以作为HCV感染的标志物之一。  相似文献   

15.
自庚型肝炎病毒(HGV)被报道以来,许多国家、地区相继分离出该病毒的基因序列,并发现HGV基因序列存在一定变异,HGV不同基因区以5′非编码区(5′-uTR)变异较小,有学者根据该区序列的变异,认为HGV至少存在三种基因型,以最初报道的美国株HGV(...  相似文献   

16.
目的探讨固相酶联免疫测定(ELISA)法检测NS1抗原在登革病毒感染早期诊断中的应用价值。方法选取登革病毒感染早期患者血清171份,非登革病毒感染发热患者血清11份,正常人血清10份,采用ELISA法检测全部192份血清的登革病毒NS1抗原和IgM抗体;采用逆转录-聚合酶链反应-限制性内切酶酶切片段长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)技术对发病5 d内的125份血清进行扩增和鉴定分型;并采用C6/36细胞微量培养法对发病第1、2天的41份血清进行登革病毒分离培养。结果登革病毒感染患者发病2 d内、3~5 d以及6~10 d血清NS1抗原的检出率分别是92.7%(38/41)、83.3%(70/84)、10.9%(5/46);IgM抗体的检出率分别是2.4%(1/41)、51.2%(43/84)、97.8%(45/46);非登革病毒感染的发热患者及正常人血清中,有1例疟疾患者血清登革病毒IgM抗体呈阳性,NS1抗原无一例阳性。RT-PCR在登革病毒感染患者发病第1、2天和3~5天的检出率分别是85.4%(35/41)、83.3%(70/84);登革病毒感染患者发病第1、2天血清的病毒分离培养阳性率分别是80.0%(16/20)、38.1%(8/21),总分离率58.5%(24/41);RT-PCR-RFLP分型鉴定技术及间接免疫荧光法(IFA)均证实2006年广州流行株为登革Ⅰ型病毒。结论ELISA法检测登革病毒NS1抗原操作技术成熟,且具有敏感性高、特异性好的特点,对登革病毒感染的早期诊断和疫情的早期控制具有重要意义,适合于基层医疗机构常规应用。  相似文献   

17.
The long-term histological and virological outcomes of spontaneous circulating hepatitis C virus (HCV) clearance were studied in chronic liver disease. Between 1979 and 1984, three patients underwent laparoscopy for chronic non-A, non-B liver disease, and two were found to have cirrhosis and one with chronic active hepatitis. After HCV assays became available in 1990, they were positive persistently for HCV antibody without serum HCV RNA. Reductions of antibody levels to HCV core and/or nonstructural proteins were observed, and liver biopsies were undertaken between 1995 and 2000. Liver biopsies at 11-19 years after laparoscopy disclosed marked alleviation of liver inflammation and fibrosis in each case although a low grade of inflammation remained. The two patients with cirrhosis no longer showed histological features of cirrhosis, and the poor liver function in one patient had been ameliorated. Liver specimens from two patients were subjected to polymerase chain reaction to detect positive and negative HCV RNA strands and hepatitis B virus DNA. Only the positive HCV RNA strand was detected for one patient who had previously cirrhosis. Liver specimens were examined from another six nonviremic HCV-seropositive individuals without chronic liver disease. Five patients displayed low-grade liver inflammation without evident fibrosis, but none had any viral genome in the liver. These findings suggest that spontaneous circulating HCV clearance in chronic liver disease confers favorable liver histological outcome, although occult HCV infection persists. J. Med. Virol. 69:41-49, 2003.  相似文献   

18.
丙型肝炎病毒感染者中抗病毒IgM检测的意义   总被引:1,自引:0,他引:1  
建立了抗HCVIgM间接ELISA方法,并用之检测HCV不同感染人群。抗HCVIgM在不同感染人群中的检出率变化很大。急性输血后丙型肝炎患者检出率可高达93.8%,而正常献血员中可低至0.68%。比较抗HCVIgM和抗LgG阳性中HCVRNA的检测结果发现,抗IgM阳性者中,不同HCV感染人群的HCVRNA检出率很高(93.0%~100%);而IgG阳性者中HCVRNA的检出率变化很大(37.5%~93.8%)。在43例血液透析者中抗IgM与HCVRNA检测的一致性为83.7%;抗IgM与抗IgG检测的一致性为88.4%,结果提示:(1)抗HCVIgM与HCV活跃复制有关,(2)抗HCVIgM与抗HCVIgG检出不完全一致。因此,临床检测抗HCVIgM有其特殊意义。  相似文献   

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