一种快速提取小鼠基因组DNA的方法

本文建立一套简易、快速从小鼠肝(肾)组织中提取高分子量DNA的方法，此法产组高、比较经济．其纯度可直接应用于PCR进行小鼠遗传监测。     

卡介苗基因组DNA对哮喘小鼠模型过敏性气道炎症的影响

目的探讨腹腔注射卡介苗基因组DNA(BCGDNA)对哮喘小鼠模型的影响。方法BALB/c小鼠经鸡卵蛋白(OVA)免疫建立哮喘模型,分别于致敏前、激发时腹腔注射100μgBCGDNA,观察哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和嗜酸性粒细胞数(EOS),ELISA检测脾单核细胞(SMNC)培养上清和BALF中白细胞介素4(IL4)、IL5、IL12及γ干扰素(IFNγ)的含量变化,常规病理切片观察肺内炎症情况,ABPAS染色观察杯状细胞增生和黏液分泌情况。结果哮喘小鼠OVA致敏前及激发时腹腔注射BCGDNA后可明显增加BALF和脾单核细胞培养上清中IL12和IFNγ的产生,使IL4和IL5的产生减少,BALF中嗜酸性粒细胞减少,黏液过度分泌明显减轻。结论哮喘小鼠腹腔注射BCGDNA可诱导IL12和IFNγ产生,抑制Th2型细胞反应,减轻哮喘气道炎症。     

一种快速高效提取全血基因组DNA的实验方法

目的 建立一种快速的从少量全血中高效提取基因组DNA的实验方法 .方法 首先低渗处理红细胞,收集白细胞,然后裂解白细胞释放核蛋白,在去污剂及乙酸钾的作用下使核酸与蛋白分离,最后沉淀、纯化DNA.扩增管家基因(β-globin)观察提取效果.结果 该法收集的DNA纯度(OD360/OD280)为(1.82±0.4);每毫升外用血可得DNA19.0～37.0μg,片段大小10～13kb;β-giobin基因扩增电泳带清晰.结论 该法提取DNA简便、高效和经济,易于各级分子生物学实验室使用.     

一种快速微量外周血基因组DNA的提取方法

目的建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法.方法采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核,用氯仿:异戊醇(24:1)直接提取基因组DNA.结果该方法提取外周血基因组DNA的纯度高A260 nm/A280 nm=(1.87±0.11),提取效率每毫升外周血可得DNA(31±3.12)μg.结论该法简便、快速、有效,适应于批量临床标本的处理.     

从血细胞快速抽提DNA的方法探讨

在提取白细胞ＤＮＡ经典方法的基础上，改进从血细胞快速抽提ＤＮＡ的方法．应用２０％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００为溶血剂，以酚／氯仿／异戊醇混合液为抽提剂，能从３ｍＬ的全血中提取６０～９０μｇ的优质ＤＮＡ，具有快速、经济、在常温下操作等优点     

卡介苗基因组的克隆

以质粒ｐＧＣ１９为载体克隆了卡介苗（即卡介菌，ＢＣＧ）ＤＮＡ。Ｓａｕ３Ａ１部分酶解ＢＣＧ ＤＮＡ，通过琼脂糖电泳分离２￣９ｋｂＤＮＡ片段。ＢａｍＨ１酶切质粒ｐＵＣ１９，碱性磷酸酶去磷酸化，２￣９ｋｂＤＮＡ片段与ｐＵＣ１９载体用Ｔ４连接酶连接转化大肠杆菌ＨＢ１０１，在含氨苄青霉素（Ａｍｐ）、５－溴－４－氯－３－吲哚－β－Ｄ－半乳糖苷的ＬＢ平板上获得Ａｍｐ白色转化子。随机挑选１２个转化子快速提取重组子     

一种有效的寄蝇基因组DNA的提取方法

目的提出了一种有效的酒精浸泡的双翅目寄蝇科昆虫基因组DNA的提取方法,通过对实验结果的分析,表明该方法可行。     

卡介苗基因组的克隆

以质粒pUC19为载体克隆了卡介苗(即卡介菌,BCG)DNA.Sau3Al部分酶解BCG DNA,通过琼脂糖电泳分离2～9Kb DNA片段.BamHl酶切质粒pUC19,碱性磷酸酶去磷酸化.2～9kb DNA片段与pUC19载体用T4连接酶连接转化大肠杆菌HB101,在含氨苄青霉素(Amp)、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷的LB平板上获得抗Amp白色转化子.随机挑选12个转化子快速提取重组子、电泳检查结果:其中8个分子量扩大.选择5个分子量扩大重组子经BamHl酶切,电泳分析表明DNA插入片段约在2～7kb之间.     

全血基因组DNA的快速纯化

目的 探讨全血基因组DNA的快速纯化方法。方法 微量全血通过红细胞裂解后,得到白细胞,再通过白细胞裂解,高盐离子去除蛋白,异丙醇沉淀即可得到高纯完整的全血基因组DNA。结果 该方法简单快速,得到的产品产率高(6.94μg/300μl全血),纯高度(A_(260)/A_(280)=1.82,A_(260)/A_(230)=2.08),完整性好(单一条带)。结论 该方法快速、高效,不仅缩短了实验时间,而且还提高了产品质量,可完全满足实验室快速分析的要求。     

一种快速简便初步筛选酵母基因组文库的方法

目的 建立一种快速，简便，灵敏的筛选酵母基因组文库的方法。方法 利用同源重组技术，将酵母基因组文库中发生突变的菌株通过LacZ报告基因进行检测，从而检测出酵母突变株。结果 在X-gal培养基上出现蓝色菌落，即为所需的阳性菌落。结论 运用同源重组技术，初步筛选了所需的酵母突变株，为新的功能性基因组的研究和发展构建平台。     

日本血吸虫基因组DNA的提纯与鉴定

本研究采用酚─氯仿法提纯了日本血吸虫基因组ＤＮＡ，并对基因组ＤＮＡ进行了定量分析及微电泳鉴定。结果表明，１００ｍｇ日本血吸虫成虫（湿重）可提纯出约８０μｇ的ＤＮＡ，其基因组ＤＮＡ的大小＞３１Ｋｂ。该法提取的血吸虫基因组ＤＮＡ较纯，适合于以后进行ＤＮＡ限制性核酸内切酶谱分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析。     

嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA快速提取方法

目的　建立一种快速简便提取嗜麦芽黄单胞菌 (X anthomonas maltophilia)基因组 DNA的方法。方法　用去污剂 SDS和 CTAB破坏细胞膜结构 ,使胞内核酸释放 ,用酚 /氯仿 /异戊醇去除蛋白质 ,异丙醇沉淀DNA,TE溶解 DNA。结果　提取的 DNA琼脂糖电泳图谱与 Hauben及 Dufresne方法提取的 DNA图谱相同 ,DNA含量为 34 2～ 388μg/ m l,OD2 60 / OD2 80 为 1.88～ 1.90。 DNA能被 Eco R 酶切消化。结论　本方法能快速简便提取 X.maltophilia DNA,提取的 DNA含量较高、纯度较好 ,可用于酶切分析、构建文库及 PCR操作。     

介绍一种快速提取胎鼠基因组DNA进行基因型分析的改良方法

目的 建立一种快速提取胎鼠基因组DNA进行基因型分析的简便方法.方法 先对胎鼠组织进行碱裂解,然后通过盐析纯化DNA,经琼脂糖凝胶电泳判断DNA大小,检测A260/A280的比值判断其纯度,最后将抽提的DNA进行PCR扩增和基因型分析,检测其作为PCR模板的稳定性.结果 在2h内能分离到胎鼠基因组DNA,片段完整没有明显的降解现象,A260/A280比值＞1.77,能稳定用于PCR基因型鉴定分析.结论 该方法简便、快速、经济,能得到PCR级的高质量胎鼠基因组DNA,为准确和快速地进行胎鼠的基因型分析提供保证,具有很好的稳定性、可靠性和实用性.     

一种快速,简便的提取细菌DNA的方法

细菌分子遗传学研究都涉及到细菌染色体DNA的提取与纯化。过去常采用的方法是Marmur和Brenner的方法。近年来则为苯酚-氯仿方法来纯化细菌DNA。本文介绍一种使用阳离子去垢剂:溴代十六烷基三甲胺cetyl-trimethyl ammonium bromide, CTAB)纯化细菌DNA的方法。其优点是快速、简便且安全。通过此法纯化的DNA可很容易地被限制性内切酶酶解。 1 材料与方法 1.1 菌株:埃尔托生物型霍乱弧菌为1984年地方流行株,由蚌埠巾防疫站赠给。副溶血弧菌由上海市食品卫生监督检验所夏     

全血基因组DNA快速提取法

目的　建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法。方法　采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核 ,用氯仿∶异戊醇 ( 2 4∶1 )直接提取基因组DNA。结果　该方法提取外周血基因组DNA的纯度高 ,A2 60nm/A2 80nm=1 .83± 0 .1 3,每毫升外周血可得DNA 33± 3.5 2 μg。结论　本法简便、快速、有效 ,适用于批量临床标本的处理。     

全血基因组DNA快速提取法

目的　建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法。方法　采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核,用氯仿:异戊醇(2 4 :1)直接提取基因组DNA。结果　该方法提取外周血基因组DNA的纯度高,提取效率每毫升外周血可得DNA 33±3.5 2 μg。结论　本法简便、快速、有效,适应于批量临床标本的处理。     

嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA快速提取方法

目的 建立一种快速简便提取嗜麦芽单胞菌（Xanthomonas maltophilia)基因组DNA的方法。方法 用去污剂SDS和CTAB破坏细胞膜结构，使胞内核酸释放，用酚/氯仿/异戊醇去除蛋白质，异丙醇沉淀DNA，TE溶解DNA。结果 提取的DNA琼脂糖电泳图谱与Hauben及Dufresne方法提取的DNA图谱相同，DNA含量为342-388μg/ml，OD240/OD280为1.88-1.90。DNA能被EorI酶切消化。结论 本方法能快速简便提取X.maltophilia DNA，提取的DNA含量较高、纯度较好，可用于酶切分析、构建文库及PCR操作。