雌二醇对人脐静脉内皮细胞一氧化氮生成的作用

目的：观察17β－雌二醇（17β－E2）对原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）一氧化氮（NO）生成的影响,探讨雌激素影响体内NO水平的机制。方法：采用胰蛋白酶平铺消化法培养原代HUVEC,不同浓度17β－E2作用HUVEC不同时间,采用重氮法测定NO含量。结果：10^-6mol/L,10^-8mol/L 17β-E2作用1h,NO即明显增高（P＜0．001）,10^-6mol/L,17β－E2作用30min,NO即明显增高（P＜0．05）,10^-10mol/L,10^-8mol/L 17β－E2作用30min,NO与对照组无统计学差异。结论：一定剂量17β－E2可促进HUVEC生成NO,可能为降低血管阻力,抑制动脉粥样硬化（AS）形成的重要机制之一。     

性激素对人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮的影响

目的 :探讨性激素单独应用或联合应用对人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮 (NitricOxide ,NO)的影响。方法 :取健康产妇分娩后 6h内的脐带内皮细胞进行培养 ,以Griess测定培养液中NO2 含量间接反映NO生成量 ,分别测定加入 0 .0 0 1μmol/L ,0 .1μmol/L和 10 μmol/L的 17β E2 ,P、T刺激细胞 10min、30min、6 0min时NO2 含量 ,以 1ml无钙镁盐液作对照。结果 :与对照组相比 ,17β 雌二醇浓度为 0 .0 0 1μmol/L、0 .1μmol/L、10 μmol /L单独作用于内皮细胞 10min和 30min时 ,培养液中NO含量明显增加 (P <0 .0 5 ) ,但刺激 6 0min时无明显作用 (P >0 .0 5 ) ;与孕激素 (0 .0 0 1μmol/L、0 .10 μmol/L、10 μmol /L)分别联合应用 ,作用于内皮细胞 10min、30min和 6 0min ,都能显著抑制雌激素刺激内皮细胞释放NO(P <0 .0 5 )。不同浓度和作用时间下 ,孕激素和雄激素对内皮细胞释放NO的作用不同。结论 :雌激素能够通过NO途径产生血管舒张作用 ,孕激素可能通过抑制NO的释放而抑制雌激素舒张血管的作用。     

雌二醇对兔髁突软骨细胞增殖与分化的影响

采用机械分离及胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化的方法，获得兔髁突软骨细胞。应用MTT四唑盐比色法，同位素掺入法检测不同剂量71-β雌二醇（E2）（10^-12～10^-6mol/L）对兔髁突软骨细胞生长、DNA、胶原及蛋白多糖合成的影响，旨在观察雌二醇对外体培养的兔髁突软骨细胞增生与分化的影响。结果表明：10^-10～10^-8mol/L及10^-1～10^-8mol/L17β-E2对体外培养的兔髁突软骨细胞生长及DNA合成具有刺激作用，且呈剂量依赖性，最大效应浓度分别为10^-8mol/L及10^-9mol/L。但进一步增加E2浓度则刺激作用减弱。10^-6mol/L具有明显抑制性。E2对蛋白多糖合成具有相似的作用，最大刺激效应浓度为10^-8mol/L。而10^-6mol/L E2具有显著抑制作用。E2对胶原蛋白的合成无明显作用。结果显示：17β-E2对外培养的兔髁突软骨细胞增殖及分化具有双向性作用。随其剂量不同，既具有促进效应又具有抑制效应。表明雌激素对维持关节的正常功能具有重要意义，可能在颞下颌关节某些疾患的发生及进展中起一定作用。     

性激素对人脐动脉环的作用

目的 :探讨性激素单独或联合应用对人脐动脉环张力的影响。方法 :制备人脐动脉环 ,观察 17β -雌二醇 (17β-E2 )、右旋 -孕 - 4烯 3,2 0二酮 (P)、17β -羟雄甾 - 4烯 - 3酮 (T)单独应用 ,17β -E2 与P联合应用 ,17β -E2 、P、T预处理对 5 -HT缩血管作用 ,17β -E2 和P联合预处理对 5 -HT缩血管作用的影响。结果 :与对照组相比 ,17β -雌二醇浓度为 10 -9mol /L、10 -8mol /L、10 -7mol /L、10 -6mol /L时均可舒张由 5 -羟色胺 (10 -6mol /L )预收缩的血管环 (P <0 .0 5 ) ,但在 10 -5mol/L时对脐动脉环无明显作用 (P >0 .0 5 ) ;孕激素和雄激素在上述浓度下均无舒张血管作用 (P >0 .0 5 )。当 10 -9mol /L 17β -雌二醇与 10 -5mol/L孕激素联合应用 ,或者 17β -雌二醇浓度为 10 -7mol /L、10 -5mol /L时与孕激素 (10 -9mol/L、10 -7mol/L、10 -5mol /L )分别联合应用时 ,孕激素均抑制 17β -雌二醇的舒张血管环作用 (P <0 .0 5 )。上述 3种性激素无论是单独或联合预处理对 5 -羟色胺 (10 -6mol /L)收缩血管环的作用都无影响。结论 :雌激素能够舒张人脐动脉环 ,但孕激素和雄激素无此作用。雌、孕激素联合应用时 ,孕激素可抑制雌激素的舒张血管作用 ,提示在绝经后妇女雌激素和孕激素替代治疗中应注意     

血管紧张素Ⅱ调控人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体

目的：研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX－1）基因转录和蛋白表达的影响。方法：将不同浓AngⅡ(10^-5mol/L－10^－5mol/L）与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）共孵育24h，将10^-6mol/LAngⅡ与HUVECs作用不同时间（0、3、6、12、24、36、48h）后，用细胞酶联免疫法和半定量RT－PCR分别检测LOX－1蛋白和mRNA表达。结果：10^-5mol/L－－10^-10mol/LAngⅡ作用24h，使内皮细胞LOX－1蛋白一达的OD值与对照组相比显著增加（P＜0．001），其中AngⅡ浓度为10^-5mol/L－10^-9mol/L时，LOX－1表达增加呈浓度依赖性。10^-10mol/LAngⅡ的作用结果与10^-9mol/LAngⅡ的作用结果差异无显著性；10^-5mol/L－10^-8mol/LAngⅡ可以使内皮细胞LOX－1mRNA的表达增加，分别为对照组的4．43、4．25、2．71和1．84倍。10^-9mol/L,10^-10mol/AngⅡ作用24h,LOX－1mRNA表达与对照组相比无显著变化（P＞0．05）。用 10^-6mol/LAngⅡ作用HUVECs不同时间，发现共孵育3h后，内皮细胞LOX－1mRNA的表达和LOX－1蛋白表达的OD值与对照组相比都有显著增加（P＜0．001），随着时间延长，LOX－1mRNA的表达至24h左右达最高峰；LOX－1蛋白表达至24－36h达到最高峰之后表达量逐渐减低，结论：AngⅡ能明显增加强HUVECs表达LOX－1，并随着AngⅡ浓度的增加和作用时间的延长，LOX－1表达增加。     

雌二醇对兔髁突软骨细胞增殖与分化的影响

采用机械分离及胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化的方法,获得兔髁突软骨细胞。应用MTT四唑盐比色法,同位素掺入法检测不同剂量17-β雌二醇（E2）（10-12～10-6mol/L）对兔髁突软骨细胞生长、DNA、胶原及蛋白多糖合成的影响,旨在观察雌二醇对体外培养的兔髁突软骨细胞增生与分化的影响。结果表明10-10～10-8mol/L及10-11～10-8mol/L17β-E2对体外培养的兔髁突软骨细胞生长及DNA合成具有刺激作用,且呈剂量依赖性,最大效应浓度分别为10-8mol/L及10-9mol/L。但进一步增加E2浓度则刺激作用减弱。10-6mol/L具有明显抑制性。E2对蛋白多糖合成具有相似的作用,最大刺激效应浓度为10-8mol/L。而10-6mol/LE2具有显著抑制作用。E2对胶原蛋白的合成无明显作用。结果提示17β-E2对体外培养的兔髁突软骨细胞增殖及分化具有双向性作用。随其剂量不同,既具有促进效应又具有抑制效应。表明雌激素对维持关节的正常功能具有重要意义,可能在颞下颌关节某些疾患的发生及进展中起一定作用。     

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞孤儿受体ERRα的调控作用

目的:探讨孤儿受体ERRα与雌激素(E)、孕激素(P)之间的相互关系及其在子宫内膜癌发病中的作用.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测不同浓度(10-10,10-8,10-6mol/L)17β-雌二醇(17β-E2)作用于Ishikawa细胞系不同时间(0 min,15 rmin,30 min和24 h)后ERRα mRNA的变化,并应用ER拮抗剂ICI182780同时作用细胞,观察是否可阻断E2对ERRα的调控作用;检测不同浓度孕酮(10-8,10-7,10-6,10-5mol/L)作用于Ishikawa细胞系24 h后ERRα mRNA的变化.结果:10-10mol/L 17β-E2作用于Ishikawa细胞系15 min,30 min及24 h后ERRα mRNA水平与未加E2相比均稍有增加,而10-8,10-6mol/L 17β-E2作用于细胞系15 min,30 min及24 h后ERRα mRNA明显减小,以10-8mol/L作用后减少最明显.同时加入E2和ICI182780作用于细胞系后,E2对ERRα mRNA的减小作用被阻断.10-8mol/L孕酮作用于细胞系24 h后,ERRα mRNA与对照组相比无明显变化,但加入10-7,10-6和10-5mol/L孕酮后,ERRα mRNA表达均出现明显增加.结论:17β-E2可减少子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞ERRα mRNA的表达,此减少作用是通过ER介导完成的.孕酮可增加ERRα mRNA的表达.     

不同浓度雌激素对卵巢癌细胞VEGF-C和TGF-β_1表达的影响

目的观察在不同浓度的雌激素作用下,卵巢癌细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）、血管内皮细胞生长因子C（VEGF-C）表达的变化。方法在体外不同浓度（10-11、10-10、10-9、10-8mol/L 17β-E2）的17-β雌二醇（E2）作用下,用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及ELISA方法,检测卵巢癌SKOV3细胞株VEGF-CmRNA的表达及TGF-β1分泌量水平的变化。结果 SKOV3细胞在E2的作用下,TGF-β1的分泌量呈剂量浓度反应,随着10-11~10-8mol/L17-βE2浓度的增加,TGF-β1的分泌量明显增加;随着雌激素浓度的增加,SKOV3细胞VEGF-C mRNA的PCR产物表达也呈递增趋势。10-11、10-10、10-9和10-8mol/L 17β-E2组与对照组比较,VEGF-C,TGF-β1的表达有显著性差异（P〈0.05）。结论雌激素可上调SKOV3细胞的VEGF-C mRNA表达、TGF-β1分泌水平,两者均呈浓度递增趋势。     

姜黄素对血管内皮细胞过氧化氢损伤的保护作用及其机制研究

目的研究不同浓度姜黄素（Cur）对正常血管内皮细胞活力的影响,及Cur对血管内皮细胞过氧化氢（H2O2）损伤的保护作用及机制。方法用不同浓度Cur（12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）处理体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）8 h,MTT法检测不同浓度Cur对HUVECs存活率的影响;H2O2（250μmol/L）孵育建立HUVECs损伤模型,不同浓度Cur（12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）与H2O2共同处理HUVECs 4 h,检测细胞存活率,黏附能力和培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放量;Griess法测定培养液中NO2-浓度,反映内皮细胞释放一氧化氮（NO）量。结果不同浓度Cur处理内皮细胞8 h后,内皮细胞的存活率无统计学差异（P〉0.05）;Cur能明显提高H2O2损伤的内皮细胞存活率和黏附能力（P〈0.01）,降低内皮细胞LDH的释放（P〈0.01）;增加H2O2损伤后HUVECs培养液中NO含量（P〈0.01）。其中Cur浓度为25μmol/L时效果最明显。结论不同浓度Cur（12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）对内皮细胞的存活率均无影响;Cur对血管内皮细胞氧化损伤具有保护作用,机制可能与其促进NO的合成有关。     

雌孕激素对宫颈癌细胞体外生长的影响

目的研究17-β雌二醇（E2）和孕酮（P）对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响。方法采用MTT法检测不同浓度的E2、P和E2＋P作用24h、48h、72h后对Hela细胞的影响。结果24h、48h和72h E2浓度为10^-5mol／L时刺激Hela细胞增殖;4hP浓度为10^-6～10^-5mol／L时,以及48h和72hP浓度为10^-7～10^-5mol／L时出现抑制作用;24h E2＋P浓度为10^5mol／L时,以及48h和72h E2＋P浓度为10^-7～10^-5mol／L时均抑制细胞增殖。结论E2促进Hela细胞增殖,P则是抑制作用,E2＋P联合也出现抑制作用。     

性激素对血管作用的研究

目的　探讨性激素对血管保护作用的机制,为绝经后妇女应用激素替代疗法的最佳方案提供实验参考。方法　采用人脐动脉环及原代培养脐静脉内皮细胞,观察不同浓度的１７β雌二醇（Ｅ２）、孕酮（Ｐ）、睾酮（Ｔ）单独应用及Ｅ２ 与Ｐ联合应用时对脐动脉环舒张张力和内皮细胞释放一氧化氮（ＮＯ）的影响。结果　１０－ ９ ～１０－ ６ ｍ ｏｌ／ＬＥ２ 对人脐动脉环（ＵＡＲ）呈舒张作用,而１０－ ５ ｍ ｏｌ／ＬＥ２ 作用不明显。单独应用Ｐ或Ｔ,ＵＡＲ舒张张力未见明显改变。当Ｅ２ 和Ｐ联合应用时,１０－ ５ ｍ ｏｌ／Ｌ的Ｐ可抑制１０－ ７～１０－ ５ ｍ ｏｌ／ＬＥ２ 的舒张ＵＡＲ作用。以１０－ ９、１０－ ７、１０－ ５ ｍ ｏｌ／ＬＥ２ 刺激内皮细胞１０ 和３０ ｍ ｉｎ,可见ＮＯ释放明显增多;但Ｅ２ 刺激６０ ｍ ｉｎ 时则无显著作用。以不同浓度Ｐ、Ｔ对内皮细胞作用不同时间,其释放ＮＯ的水平亦不同。当上述不同浓度的Ｅ２ 与Ｐ联合应用时,Ｐ均可抑制Ｅ２ 的促进ＮＯ释放作用。结论　上述结果表明,Ｐ确实具有抑制Ｅ２ 的舒张血管和促进ＮＯ释放作用,尤其是在Ｅ２、Ｐ浓度较高时作用更明显。提示对绝经后妇女应用雌激素替代疗法时,Ｅ２ 和Ｐ均应以小剂量为宜     

Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的脐静脉内皮细胞 氧化应激和内皮功能损伤的影响

目的：探讨促生长激素释放肽（ghrelin）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ, Ang Ⅱ）诱导的离体培养的脐静脉内皮细胞（human umbilicus vein endothelial cell-12,HUVEC-12）损伤的保护作用。方法：(1)在培养的人脐静脉内皮细胞中加入10-9~10-6mol/L AngⅡ共培养24 h,或用10-9~10-6mol/L ghrelin预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h。用MTT法测量内皮细胞活力和用AnnexinV-FITC凋亡试剂盒在流式细胞仪下测量内皮细胞凋亡率。(2)HUVEC用10-9,10-8,10-7,10-6mol/L AngⅡ分别培养3,6,12或24 h,10-9,10-8,10-7或10-6 mol/L ghrelin预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h。生长激素促分泌剂受体1a(growth hormone secretagogue receptor 1a,GHSR1a)受体阻断剂 ［D-Lys3］GHRP-6加入 10-6 mol/L ghrelin预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h组,DCF荧光探针法测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）。(3)HUVEC分别与 10-9,10-8,10-7或10-6mol/L AngⅡ和 ghrelin共培养24 h,与10-6mol/L AngⅡ孵育3,6,12或24 h,或10-9,10-8,10-7或10-6mol/L ghrelin预处理30 min,1 h或2 h后与10-6mol/LAngⅡ培养24 h,加入丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路（mitogen-activated protein kinase /extracullar signal regulated kinase 1/2,MAPK/ERK1/2）信号通路抑制剂PD98058、磷脂酰肌醇3-激酶/丝-苏氨酸激酶（phosphoinositide-3-kinase/serine threonine kinase,PI3K/Akt ）阻断剂 wortmannin和［D-Lys3］GHRP-6 共培养24 h,与用AngⅡ和ghrelin孵育的HUVEC 比较上清液中NO产量,HUVEC用ghrelin,PD98059, wortmannin, ［D-Lys3］GHRP-6预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h,或用ghrelin加上PD98059,wortmannin及［D-Lys3］GHRP-6预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h。内皮细胞上清中的一氧化氮（nitric oxide, NO）用Griess法测量。(4)HUVEC用空白对照或AngⅡ在有或没有用ghrelin或ghrelin和wortmannin 一起预处理的情况下孵育,用免疫印迹法（Western blot ）测量内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）的蛋白表达及丝苏氨酸激酶（serine threonine kinase,Akt）磷酸化蛋白表达。结果：AngⅡ引起内皮细胞损伤,增加HUVEC细胞凋亡率,减少培养的HUVEC细胞上清中NO含量,而ghrelin保护HUVEC免受AngⅡ损伤;Ghrelin减少与AngⅡ共同孵育的HUVEC ROS的产生。这种作用被［D-Lys3］GHRP-6消除。PD98059能阻止AngⅡ导致的HUVEC分泌NO减少,Wortmannin和［D-Lys3］GHRP-6消除Ghrelin保护HUVEC释放NO的作用;AngⅡ减少eNOS 的表达,但ghrelin能增加eNOS表达,Wortmannin消除Ghrelin的这种作用;Ghrelin 能刺激p-Akt的表达并在10~20 min达到高峰。结论：Ghrelin在AngⅡ导致的HUVEC损伤中起保护作用,其机制与通过GHSR1a受体减少氧化应激、增加eNOS蛋白表达和激活PI3K/Akt信号通路有关。     

Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的脐静脉内皮细胞氧化应激和内皮功能损伤的影响（英文）

目的：探讨促生长激素释放肽（ghrelin）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的离体培养的脐静脉内皮细胞（human umbilicus vein endothelial cell-12,HUVEC-12）损伤的保护作用。方法：（1）在培养的人脐静脉内皮细胞中加入10-9～10-6mol/L AngⅡ共培养24h,或用10-9～10-6mol/Lghrelin预处理2h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24h。用MTT法测量内皮细胞活力和用AnnexinV-FITC凋亡试剂盒在流式细胞仪下测量内皮细胞凋亡率。（2）HUVEC用10-9,10-8,10-7,10-6mol/L AngⅡ分别培养3,6,12或24h,10-9,10-8,10-7或10-6mol/L ghrelin预处理2h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24h。生长激素促分泌剂受体1a（growth hormone secretagogue receptor1a,GHSR1a）受体阻断剂[D-Lys3]GHRP-6加入10-6mol/L ghrelin预处理2h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24h组,DCF荧光探针法测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）。（3）HUVEC分别与10-9,10-8,10-7或10-6mol/L AngⅡ和ghrelin共培养24h,与10-6mol/L AngⅡ孵育3,6,12或24h,或10-9,10-8,10-7或10-6mol/L ghrelin预处理30min,1h或2h后与10-6mol/LAngⅡ培养24h,加入丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路（mitogen-activated protein kinase/extracullar signal regulated kinase1/2,MAPK/ERK1/2）信号通路抑制剂PD98058、磷脂酰肌醇3-激酶/丝-苏氨酸激酶（phosphoinositide-3-kinase/serine threonine kinase,PI3K/Akt）阻断剂wortmannin和[D-Lys3]GHRP-6共培养24h,与用AngⅡ和ghrelin孵育的HUVEC比较上清液中NO产量,HUVEC用ghrelin,PD98059,wortmannin,[D-Lys3]GHRP-6预处理2h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24h,或用ghrelin加上PD98059,wortmannin及[D-Lys3]GHRP-6预处理2h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24h。内皮细胞上清中的一氧化氮（nitric oxide,NO）用Griess法测量。（4）HUVEC用空白对照或AngⅡ在有或没有用ghrelin或ghrelin和wortmannin一起预处理的情况下孵育,用免疫印迹法（Western blot）测量内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）的蛋白表达及丝苏氨酸激酶（serine threonine kinase,Akt）磷酸化蛋白表达。结果：AngⅡ引起内皮细胞损伤,增加HUVEC细胞凋亡率,减少培养的HUVEC细胞上清中NO含量,而ghrelin保护HUVEC免受AngⅡ损伤;Ghrelin减少与AngⅡ共同孵育的HUVEC ROS的产生。这种作用被[D-Lys3]GHRP-6消除。PD98059能阻止AngⅡ导致的HUVEC分泌NO减少,Wortmannin和[D-Lys3]GHRP-6消除Ghrelin保护HUVEC释放NO的作用;AngⅡ减少eNOS的表达,但ghrelin能增加eNOS表达,Wortmannin消除Ghrelin的这种作用;Ghrelin能刺激p-Akt的表达并在10～20min达到高峰。结论：Ghrelin在AngⅡ导致的HUVEC损伤中起保护作用,其机制与通过GHSR1a受体减少氧化应激、增加eNOS蛋白表达和激活PI3K/Akt信号通路有关。     

睾酮对胰岛素敏感细胞胰岛素受体底物1和葡萄糖转运载体4表达的影响

目的探讨雄激素对胰岛素敏感性影响的可能的分子机制。方法诱导3T3-L1前脂肪细胞系和C2C12成肌细胞系分别分化为3T3-L1脂肪细胞和C2C12骨骼肌细胞,然后对这两种细胞分别以10-9mol/L睾酮处理4、8、12、24及48h,并以不同浓度(10-12~10-5mol/L)的睾酮处理24h,用Western印迹的方法检测两种细胞在以两种方法处理后胰岛素受体底物1(IRS-1)和葡萄糖转运载体4(GLUT4)表达的变化。结果随着10-9mol/L浓度的睾酮处理时间的延长,IRS-1和GLUT4在两种细胞的表达逐渐增加,IRS-1于12h达峰后下降。3T3-L1脂肪细胞及C2C12骨骼肌细胞中12h峰值分别是0h对照的(1·42±0·42)倍和(1·53±0·14)倍,均P<0·05;GLUT4于24h达峰后表达下降[3T3-L1脂肪细胞及C2C12骨骼肌细胞中24h峰值分别是0h的(3·22±0·10)倍和(5·17±1·06)倍,均P<0·05]。当睾酮处理浓度从10-12mol/L逐渐增加时,IRS-1在两种细胞的表达逐渐增加,于10-9mol/L达峰值后表达逐渐下降[在3T3-L1脂肪细胞和C2C12骨骼肌细胞,10-9mol/L睾酮处理后的峰值较空白对照分别增加(4·23±0·27)倍和(3·16±0·15)倍,均P<0·05]。GLUT4在C2C12骨骼肌细胞的表达随着睾酮浓度的升高有增加的趋势[经10-7mol/L睾酮处理后的表达量是空白对照的(2·99±0·15)倍,P<0·05,于10-7mol/L后增加趋势不明显。在3T3-L1脂肪细胞中,GLUT4的表达于10-11mol/L达峰值[较空白对照增加(2·58±0·02)倍,P<0·05],然后随着睾酮浓度的升高表达下降。结论睾酮影响胰岛素信号转导分子的表达存在剂量和时间上的双向作用。     

同型半胱氨酸对胰岛β细胞胰岛素分泌及凋亡的影响

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对克隆的胰岛β细胞NIT-1细胞株胰岛素分泌、细胞生存率及细胞凋亡的影响.方法 将Hcy作用于NIT-1细胞后,用放射免疫分析法检测不同浓度Hcy作用不同时间后对细胞胰岛素分泌的影响;用溴化(4,5二甲基2噻唑基)2,5二苯基四氮唑分析法检测细胞生存率;流式细胞仪磷脂结合蛋白V/PI双染色法和琼脂糖凝胶电泳检测不同浓度的Hcy作用不同时间对NIT-1细胞凋亡的影响.结果 50 μmol/L的Hcy作用24 h以及100 μmol/L的Hcy作用12 h后,细胞胰岛素的分泌量较正常对照组分别下降了17.1%和10.8%,差异有统计学意义(均P＜0.01).100 μmol/L的Hcy作用12、24 h后细胞存活率分别降至95%、88%,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);50 μmol/L的Hcy作用48、72 h后,细胞存活率分别降至91%、87%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).当100 μmol/L Hcy作用24 h,NIT-1细胞凋亡率为7.2%(P＜0.01);250 μmol/L的Hcy作用12 h,NIT-1细胞凋亡率为12.9%(P＜0.05).琼脂糖凝胶电泳显示随着Hcy浓度增加,凋亡NIT-1细胞的DNA电泳条带呈现为明显的梯形条带.结论 Hcy对胰岛β细胞胰岛素分泌的抑制作用呈时间、剂量依赖性.Hcy对细胞的生存率具有抑制作用,且以时间和浓度依赖性的方式诱导胰岛β细胞凋亡.     

糖尿病及其视网膜病变患者对蛋氨酸负荷试验的异常反应

目的　探讨 2型糖尿病 (DM)及其视网膜病变 (DR)患者对蛋氨酸负荷 (PML)试验的反应 ;并探讨PML试验对高同型半胱氨酸血症 (Hhcy)的诊断价值及同型半胱氨酸 (Hcy)致血管损害的可能机制。方法　对 17例DR患者、15例单纯DM患者 (NDC)及 2 8例正常对照 (CON)进行了PML试验 ,荧光偏振免疫分析法测定空腹Hcy (Fhcy)及PML后 4h血浆Hcy浓度 (Phcy) ,测空腹血浆叶酸、维生素B12 ,并以PCR RFLP技术检测亚甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)C6 6 7T突变 ,测定空腹血糖、餐后血糖、尿素、肌酐、胆固醇、甘油三酯以及HbA1c等生化指标 ,以Griess法测定空腹PML后 4hNO代谢终产物。结果　DM各组体重指数、HbA1c及PBG高于CON组 (P <0 0 5 ) ;DR组和NDC组Fhcy分别为 13 9± 1 4和 11 6± 1 3μmol/L ,高于CON组的 8 8± 1 4 μmol/L。DR组Phcy(37 3μmol/L)、PML前后Hcy差值 (2 4 4 μmol/L)和MTHFRBB基因型 (9/ 17)均高于CON组的 2 2 7μmol/L、15 1μmol/L和 5 /2 8以及NDC组的 2 5 0 μmol/L、14 3μmol/L和 2 / 15。以Fhcy为标准确定的Hhcy发病数为 9例 ,而以PML后的Phcy为标准发病数则为 15例 ;结合两者计算Hhcy发病率 ,DR组高于NDC组 ,两者又高于CON组 (P <0 0 0 1)。餐后NO代谢产物浓度明显高于空腹 ,而且血浆Hcy与     

17-β-雌二醇影响人脐静脉内皮细胞的纤溶因子活性及其基因表达

目的观察１７－β－雌二醇对人脐静脉内皮细胞纤溶因子活性、基因表达以及胞内钙离子渡度（［Ｃａ（２＋）］i）的影响。方法应用发色底物法、细胞原位杂交技术和激光共聚焦扫描显微镜。结果组织型纤溶酶原激活物活性及其基因表达随１７－β－雌二醇浓度的增加而呈剂量依赖性增加;单个内皮细胞胞内钙离子浓度在高浓度雌二醇作用下先上升后下降,生理浓度时降低。结论雌激素可以提高纤溶能力、拮抗胞内Ｃａ(２＋)浓度升高,为雌激素保护心血管作用机制研究提供了部分实验依据。     

Dysfunction of endothelial NO system originated from homocysteine-induced aberrant methylation pattern in promoter region of DDAH2 gene

Background  Hyperhomocysteinemia (HHcy)-mediated dysfunction of endothelial NO system is an important mechanism for atherosclerotic pathogenesis. Dimethylarginine dimethylaminohydrolase (DDAH) is the key enzyme for degrading asymmetric dimethylarginine (ADMA), which is an endogenous inhibitor of endothelial nitric oxide (NO) synthase (eNOS). This study was designed to investigate whether the dysfunction of endothelial NO system originates from HHcy-mediated aberrant methylation modification in promotor region of DDAH2 gene.
Methods  Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were cultured to the third generation and treated with homocysteine (Hcy) at different concentrations (0, 10, 30, 100, and 300 µmol/L) for 72 hours. The methylation pattern in promoter region CpG island of DDAH2 gene was analyzed by nested methylation-specific PCR (nMSP). The mRNA expression of eNOS gene and DDAH2 gene was detected by semi-quantitative RT-PCR. The activity of DDAH2 and eNOS in cells, and the concentrations of ADMA and NO in culture medium were assayed respectively.
Results  Mild increased concentration of Hcy (10 and 30 µmol/L) induced hypomethylation, while high concentration of Hcy (100 and 300 µmol/L) induced hypermethylation in the promoter CpG island of DDAH2 gene. The mRNA expression of DDAH2 increased in mild enhanced concentration of Hcy, and decreased in high concentration of Hcy correspondingly. The inhibition of DDAH2 activity, the increase of ADMA concentration, the reduction of eNOS activity and the decrease of NO production were all consistently relevant to the alteration of Hcy concentration.
Conclusion  The increased concentration of Hcy induced aberrant methylation pattern in promotor region of DDAH2 gene and the successive alterations in DDAH/ADMA/NOS/NO pathway, which showed highly relevant and dose-effect relationship. The results suggested that the dysfunction of endothelial NO system induced by HHcy could be partially originated from Hcy-mediated aberrant methylation in DDAH2 gene.

     

Apelin通过Akt/eNOS机制促进肺血管内皮细胞一氧化氮释放

 目的 探讨Apelin对肺血管内皮细胞释放一氧化氮（NO)的影响及其机制。方法 培养新生鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）。 (1) 以1 x 10⁵ 个/孔密度接种至24孔板,80%融合后,无血清培养24 h。分为2组：Apelin组,加入Apelin至终浓度为10^-8 mol/L;对照组,加入等量无血清DMEM培养液。每组设立4个复孔。继续培养,并分别在0 min、2 min、5 min、15 min 、30 min时间点取培养液测NO浓度。(2) 以5 x 10⁵ 个/孔密度接种至6孔板,80%融合后,无血清培养24 h分为3组：Apelin组,加入Apelin至终浓度为10^-8 mol/L。Apelin + Akt抑制剂（Akt inhibitor）组,加入Apelin前用5 μmol/L浓度的Akt抑制剂预处理30 min。对照组加入等量DMEM培液。每组设立3复孔。继续培养5 min后立即提取总蛋白,用于Western blot检测磷酸化Akt和磷酸化内皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达。结果 与0 min时间点比较,培养液中NO浓度分别在2 min、5 min、15 min时间点增加（P<0.01或P<0.05）,其中在5 min时间点达到高峰。与对照组比较,Apelin组磷酸化Akt和磷酸化eNOS表达增加（P<0.01）,与Apelin组比较,Apelin + Akt inhibitor组磷酸化eNOS表达降低（P<0.01）。结论 Apelin促进PMVECs释放NO,Akt/eNOS磷酸化参与Apelin促进NO释放机制。     

GENISTEIN INHIBITS PROLIFERATION OF HUMAN ENDOMETRIAL ENDOTHELIAL CELL IN VITRO

Objective To explore the effect of genistein on proliferation of human endometrial endothelial cells （HEECs） and glandular epithelium. Methods In vitro HEECs and human endometrial cancer-1B cell （HEC-1B ） were cultured with 0, 1, 10, 50, 100, and 200 μmol/L of genistein alone or indicated concentrations of genistein combined with 0.2 or 1 nmol/L 17β- estradiol （ 17β-E2）. Cell proliferation was determined by [ 3H ] -thymidine incorporation and cell cycle was measured by flow cytometry. Results After 96 hours of treatment, genistein inhibited the proliferation of HEECs in a dose-dependent manner. The stimulation index reduced from 100% （ without genistein treatment ） to about 1% （ 200 μmol/L genistein ）. HEECs were arrested at G1/0 and G2/M phase when treated with genistein for 96 hours. When the concentration of genistein was 200 μmol/L, the percentages of HEECs at G1/0, G2/M, and S phase were 96. 0%, 2.1%, and 1.9%, respectively. However, when HEECs were treated without genistein, the percentages of HEECs at G1/0, G2/M, and S phase were 76. 7%, 8.5%, and 14. 7%, respectively. 1713-E2 could not influence the effects of genistein on the proliferation of HEECs. Meanwhile, genistein could suppress the proliferation of HEC-1B. If the stimulation index of HEC-IB was defined as 100% when HEC-1B was treated with different doses of 1713-E2 （without genistein）, it was 67%, 19%, as well as 32% when cell was supplemented with 200 μmol/L genistein combined with 0, 0. 2, or 1 nmol/L 17β-E2, respectively. Conclusion Genistein at the concentration of 200 μmol/L can sufficiently inhibit the proliferation of HEECs and endometrial glandular epithelium simultaneously in vitro.