血小板54kD钙结合蛋白诱导嗜铬颗粒聚集的特性研究

猪血小板分子量为9.0×10~(-23)kg钙结合蛋白(简称54kD钙结合蛋白)具有诱导猪肾上腺髓质嗜铬颗粒聚集的活性。嗜铬颗粒聚集与蛋白浓度呈正相关。溶液中游离钙浓度在10~(-6)～10~(-3)mol/L范围内,该蛋白的活性与游离钙浓度成正比,显示该蛋白活性呈显著钙依赖性。镁离子对之有拮抗作用,而钡离子则呈正协同效应,但镁、钡离子并不引起54kD钙结合蛋白(以下简称54kD蛋白)诱导嗜铬颗粒聚集,因此该蛋白诱导嗜铬颗粒聚集的活性是钙特异性的。以上性质提示54kD蛋白与Annexin家族钙结合蛋白的性质非常相似,它可能作为血小板胞内的一种钙受体,介导血小板颗粒之间的相互融合以及颗粒与胞膜的相互作用,在血小板分泌时起重要作用。     

细胞核内的钙及钙结合蛋白

<正>众所周知,钙离子是细胞浆中的第二信使,在细胞的信息传导中起着重要的作用。但对钙离子以及钙结合蛋白(Calcium binding proteins)在细胞核的信息传导和在核内活动的调节中所起的作用知之甚少。近年来,已有一些研究揭示了跨膜核内钙离子梯度的存在和核内钙结合蛋白的多样性,从而引导对钙及钙结合蛋白参与核内活动研究的深入。     

大鼠海马中56KD、83KD蛋白诱导神经干细胞向神经元分化的协同作用研究

目的:探讨切割海马伞大鼠海马中56KD、83KD蛋白在诱导神经干细胞向神经元分化方面是否具有协同作用.方法:切割海马伞后的海马进行非变件聚丙烯酰胺凝胶电泳,墩低分子量区的56KD、65KD和83KD 3条差异蛋白条带电洗脱后以不同的组合加入鼠胚神经干细胞的分化培养液中诱导神经干细胞分化,12天后行MAP-2免疫荧光染色,记数其中MAP-2阳性神经元数,胞体面积和细胞周长.用STATA7.0软件进行方差分析和两两比较.结果:56KD 65KD 83KD组和56KD 83KD组MAP-2神经元的数量是47.1±9.64,43.7±8.41,胞体大,突起丰富:65KD 83KD组、56KD 65KD组、56KD组和83KD组MAP-2神经元的胞体较小,突起较矩:65KD组和对照组的神经元胞体最小,突起最短.MAP-2神经元的数量、面积和周长统计分析结果显示:56KD 65KD 83KD组和56KD 83KD组与其他6组均有显著性差异.56KD 65KD 83KD组和56KD 83KD组之间没有显著性差异:65KD 83KD组、56KD 65KD组、56KD组和83KD组四组之间没有显著性差异,但是它们与65KD组和对照组均有显著性差异,65KD组和对照组之间没有显著性差异.结论:56KD、83KD蛋白在诱导神经干细胞向神经元分化方面具有协同作用.     

可溶性耐药相关钙结合蛋白

可溶性耐药相关钙结合蛋白(sorcin),是一种22ku的胞浆蛋白,具有典型的"E-F hand"钙结合位点.sorcin可在多种耐药细胞株中高表达,推测可能是通过影响细胞内Ca2+浓度而参与耐药表型的维持,但sorcin表达的量与耐药程度之间的关系还不明了.在多种正常组织中也发现sorcin的表达,在心肌细胞中,sorcin通过影响Ca2+通道的活性而在兴奋-收缩偶联循环中发挥重要作用.     

钙调节蛋白

生物作用广泛的细胞信使主要是Ca~(2+)和cAMP。Ca~(2+)在生物体内通过其受体蛋白,即钙调节蛋白发挥功能。钙调节蛋白可分为两类:一类主要在胞外起作用,如与凝血有关的钙蛋白;另一类在胞内起作用,如多功能的钙媒介蛋白。后者具有特殊的、但非专一的钙结合区,正常生理条件下能与Ca~(2+)可逆性结合。形成的钙媒介蛋白·Ca~(2+)络合物可直接激活靶蛋白或酶,也可通过靶蛋白间接调节磷酸化和去磷酸化,从而发挥多种生物功能。     

钙结合蛋白与皮质发育不良

皮质发育不良(cortical dysplasia,CD)是各类脑发育畸形的总称,包括神经元异位(结节状异位、双皮质)、无脑回、巨脑回、多微脑回和脑穿通畸形、胼胝体发育不良或缺失等多种类型.其发病机制复杂,从胚胎期至成年期以前大脑发育过程中受到内外环境中有害因素的干扰或损害都可引起大脑皮质发育紊乱,临床以癫痫发作、发育迟缓、智力障碍等为主要表现[1-3].     

钙和钙结合蛋白与皮肤分化和损伤修复

皮肤是机体抵御脱水、损伤和感染的第一道防线。哺乳动物皮肤由表皮、真皮和皮下结缔组织及皮肤附件等构成^[1]。钙离子和钙结合蛋白在皮肤分化和损伤修复中发挥了重要作用。     

运动神经元190KD蛋白的免疫细胞化学研究

采用ＳＤＳ凝胶电泳方法从人脊神经前根中分离出运动神经元特有的蛋白组份１９０ＫＤ。将该蛋白作为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，经杂交瘤技术，获得抗１９０ＫＤ蛋白的单克隆抗体。     

维生素D结合蛋白在重症急性胰腺炎患者血清中水平变化及意义

目的:探讨维生素D结合蛋白(VDBP)在重症急性胰腺炎(SAP)患者血清中的水平变化及意义.方法:以酶联免疫吸附法检测24例SAP患者及15例正常人血清中VDBP含量.其中SAP患者分别于入院第1,7,14天采集血清,正常对照组采血1次.结果:入院后第1及第7天,SAP患者血清VDBP水平均显著低于正常对照组(P＜0.05);在SAP组中,发生器官功能不全者血清VDBP水平显著低于未发生者(P＜0.05).结论:VDBP在SAP患者血清中含量明显降低,且与较差预后相关,提示VDBP可能作为判断SAP患者预后的有效指标.     

生长激素结合蛋白在特发性中枢性性早熟女孩生长的调控作用

本文对41例青春期女孩及30例特发性中特发性中枢性性早熟（ICPP）女孩，观察其身高、体重、身高增长速度、骨龄与生长激素结合蛋白（GHBP），雌二醇（E2）的相关关系，结果示GHBP在青春各期间无显著差异（P＞00.05）;GHBP与身高生长速度（GV）、身高标准差分（HtsDS）、体重指数（BMI）呈正相关，相关系数（r）分别为0.38（P＜0.05）、0.31（P＜0.05）、0.31（P＜0.05）;GHBP与E2、年龄（CA）骨龄（BA）无相关关系。正常青春少女与ICPP女孩相应青春期血清GHBP无明显差异（P＞0.05），ICPP女孩GHBP与HtSDS及BMI呈正相关关系，厂分别为0.40及0.55，与E2、CA及BA亦无相关关系。提示正常青春少女及ICPP女孩的生长，在CH轴调控途径上，至少在生长激素受体（GHR）／GHBP水平是相同的。GHBP受营养的正性影响，不受年龄、骨龄影响。     

慢性间歇低氧对大鼠认知功能及大脑环磷酸腺苷反应单元结合蛋白表达的影响

目的:探讨慢性间歇低氧对大鼠认知功能及大脑环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(CREB)表达的影响.方法:通过常压低氧仓建立间歇低氧大鼠模型,即对成年大鼠每90 s交替给予10%氧和21%氧.每天8 h,连续处理14 d后,以Morris水迷宫观察大鼠空间学习记忆的变化,并采用RT-PCR法观察大鼠皮层区及海马氏环磷酸腺苷反应...     

脂蛋白（a）对血小板蛋白激酶C作用的实验研究

目的：研究脂蛋白（ａ）［Ｌｐ（ａ）］对血小板血栓形成的作用及其机理。方法：制备健康成人血小板，观察施加不同浓度Ｌｐ（ａ）、作用不同时间后，血小板（ＰＬＴ）膜、浆蛋白激酶Ｃ（Ｍ－ＰＫＣ、Ｐ－ＰＫＣ）的变化，同时设凝血酶阳性对照组和不加Ｌｐ（ａ）及凝血酶的阴性对照组，并对检测结果做统计学分析。结果：血小板Ｐ－ＰＫＣ活性随着Ｌｐ（ａ）浓度的增高而逐渐降低，当Ｌｐ（ａ）浓度为０．５５ｍｇ／ｍｌ时，Ｐ－ＰＫＣ下降最为明显，与阴性对照组相比下降约为４３％，有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）；Ｍ－ＰＫＣ活性随着Ｌｐ（ａ）浓度的增高而逐渐增高，在Ｌｐ（ａ）浓度为０．０８３ｍｇ／ｍｌ时，Ｍ－ＰＫＣ开始明显增高，与阴性对照组相比增高近２倍，随着Ｌｐ（ａ）浓度的进一步升高，Ｍ－ＰＫＣ增高更为明显，差异非常显著（Ｐ＜０．０１）。另外，随着Ｌｐ（ａ）与ＰＬＴ作用时间的延长，Ｐ－ＰＫＣ逐渐下降，Ｍ—ＰＫＣ逐渐上升，与空白对照组相比其时相差异均非常显著（Ｐ＜０．０１）。结论：Ｌｐ（ａ）能激活ＰＬＴ，使其Ｍ—ＰＫＣ增高，Ｐ－ＰＫＣ下降，且随着浓度增高和作用时间的延长该作用增强，故Ｌｐ（ａ）在血栓形成早期起重要作用，对血栓性疾病的发生有重要意     

钙离子浓度变化在敌敌畏致大鼠迟发性神经病变中的作用和机制

目的 观察钙离子浓度在敌敌畏致大鼠迟发神经病变中的动态变化,初步研究有机磷中毒迟发性神经病(organophosphate induced delayed neuropathy,OPIDN)的可能机制.方法 清洁级成年雄性SD大鼠168只,采用抽签法随机分为7组:正常组、对照组(空白对照组、二甲苯对照组)、治疗组(葡萄糖酸钙治疗组、尼莫地平治疗组、葡萄糖酸钙联合尼莫地平治疗组)、染毒模型组.染毒模型组又分为6、12、24、48h,8、14、28天时间点的7个亚组.对照组、治疗组均分为12、24、48、28天不同时间点亚组.正常组、余组28天组于造模前、造模后48h、造模28天检测坐骨神经转导速度,并于造模后12、14、16、18、20、22、24、26、28天对大鼠行为学评分.检测各时间点血浆、坐骨神经、肌肉组织中NTE、CANP的活性和钙离子浓度.结果 行为学评分:治疗组均优于染毒组且联合治疗组优于单独治疗组;坐骨神经转导速度:染毒组于染毒28天时明显下降,治疗组优于染毒组并具有明显差别(P＜0.05).NTE、CANP活性及钙离子浓度:染毒组与染毒的12、24、48h均有明显的下降或上升,治疗组优于染毒组并具有明显差别(P＜0.05).结论 敌敌畏染毒大鼠后应用葡萄糖酸钙、尼莫地平、葡萄糖酸钙联合尼莫地平均有预防或减轻OPIDN的作用,且联合应用较单独使用效果更优,并且钙离子浓度变化在OPIDN发挥着关键作用.     

多壁碳纳米管对小鼠肝和肺细胞蛋白质氧化损伤作用研究

目的 探索多壁碳纳米管对机体蛋白质的氧化损伤作用.方法 将20只老鼠随机分成4组,3个染尘组,1个对照组,用腹腔注射法进行1次性染尘,3个染尘组分别注入0.1、0.2、0.4 mg/ml的多壁碳纳米管(粒径20～40nm)颗粒悬浮液1ml.对照组注入等体积的生理盐水,染毒5天后测定肝脏和肺组织中的蛋白质羰基含量,比较不同浓度的多壁碳纳米管对肝和肺部蛋白质的氧化损伤作用.结果 不同浓度的碳纳米管染尘组小鼠与对照组相比较,肝脏组织蛋白质羰基含量在0.2mg/ml和0.4mg/ml染毒条件下都有显著性差异(P＜0.05).肺组织羰基含量在0.4mg/ml染毒条件下有极显著差异(P＜0.01).在其他浓度条件下都没有统计学意义(P＞0.05).结论 多壁碳纳米管对小鼠肝脏和肺部组织有一定的氧化损伤毒性作用.     

瘦素与绿色荧光蛋白融合基因的合成及其高效表达

目的: 为了便于追踪瘦素(Leptin)在体内的去向,对其进行体内定位,设计合成Leptin荧光分子蛋白探针.方法:用PCR技术将Leptin cDNA与绿色荧光蛋白cDNA构建成融合基因LG,然后将其克隆进原核表达载体pET3c中,构建成原核表达工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG.用Western-blot杂交检测重组蛋白的免疫原性,用荧光显微镜观察融合蛋白及其诱导菌休的发光活性.结果:DNA测序结果证实设计合成的融合基因与预期一致;构建的工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG获得了表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%以上;Western-blot杂交检测表明重组蛋白具有Leptin的免疫原性;经IPTG诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到其能发射出强烈的绿色荧光.结论:融合基因在大肠杆菌中实现了高效表达,表达的融合蛋白具Leptin的免疫原性和GFP的发光特性.为利用绿色荧光蛋白标记Leptin在动物体内的药物治疗的研究提供了一种新的途径.     

液相色谱-离子阱质谱联用法建立留坝西洋参药材特征图谱研究

目的建立留坝西洋参药材皂苷成分的特征图谱。方法通过固相萃取小柱预处理样品,电喷雾质谱正离子模式全扫描法检测。结果从西洋参药材总提物的正离子全扫描总离子流图中选择了3个具有代表性的强峰,建立了西洋参药材皂苷成分的特征对应图谱。结论该方法有较好的重现性,能准确分析、鉴别西洋参药材。     

制备脐血LAK细胞的一种简单有效的方法

以健康脐带血为来源，采用３％明胶沉降法分离获取ＬＡＫ前体细胞，并在培养体系中增加植物血凝素诱导因子．结果：该法与常规淋巴细胞分层液分离法均能从脐带血中获取大量的ＬＡＫ前体细胞，且两者体外增殖情况及杀瘤活性并无明显差异（Ｐ＞０．０５）．提示新法简单快速，能从脐带血中制备出大量高抗肿瘤活性的ＬＡＫ细胞．     

P_(16)蛋白和增殖细胞核抗原在子宫内膜癌中的表达及意义

目的 :探讨 P1 6 蛋白在子宫内膜癌发生中的作用及与细胞增殖的关系。方法 :采用免疫组化方法对 33例子宫内膜癌 P1 6 蛋白和增细胞核抗原 (PCNA)进行检测。结果 :P1 6 蛋白在子宫内膜癌的阳性率为 6 0 .6 % ,显著低于正常子宫内膜 (10 0 % ,P<0 .0 1) ,且随组织学分级增加而逐渐降低。 PCNA在子宫内膜癌中阳性率为 81.8%。结论 :P1 6蛋白与子宫内癌的发生发展相关 ,测定子宫内膜癌 P1 6 蛋白的表达有助于确定肿瘤的分化程度。