胡椒碱对人肝癌HepG2细胞抗肿瘤活性的体外实验研究

目的 探讨胡椒碱(piperine)对人HpeG2肝癌细胞株的增殖、杀伤和细胞凋亡的影响,为肝癌的治疗提供理论依据.方法 体外培养的HpeG2细胞,采用MTT比色法检测不同浓度胡椒碱对体外培养的HepG2细胞和新分离的外周血白细胞的增殖抑制作用.Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态,采用流式细胞术测定胡椒碱对HepG2细胞的凋亡.结果 胡椒碱对HepG2细胞增殖的抑制率随着浓度的升高而增加,半量抑制浓度(IC50)为15.13±3.21 μmol/L,低于其对外周血白细胞的抑制率(64.52±5.32 μmol/L).Hoechst 33258染色后,胡椒碱处理癌细胞组表现出典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测20 μmol/L的胡椒碱处理HepG2细胞24 h后,细胞凋亡率由对照组的2.89%上升到了21.76%.结论 胡椒碱具有抑制HepG2细胞增殖和诱导凋亡的抗肿瘤活性,有应用于肝癌治疗的潜在价值.     

3''-甲异靛玉红对C57BL/6小鼠脾细胞和胸腺细胞功能的作用

背景:中药3'-甲异靛玉红及,靛玉红衍生物在抗肿瘤的同时对机体正常免疫细胞影响的报道查及较少.目的:观察3'-甲异靛玉红对C57BL/6小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖的影响.设计、时间及地点:随机分组细胞病理学观察实验,于2007-08/2008-01在南方医科大学珠江医院完成.材料:实验动物为C57BL/6小鼠,雄性,6～8周龄,体质量(20±2)g.方法:取C57BL/6小鼠胸腺、脾组织研磨过滤为单细胞悬液,应用5,10,15,20,25 μmol/L甲异靛玉红处理C57BL/6小鼠胸腺和脾细胞.以未经仟何药物处理的C57BL/6小鼠作为空白对照,以给予刀豆蛋白A处理的C57BL/6小鼠为阳性对照.主要观察指标:①MTT法测定C57BL/6小鼠脾和胸腺淋巴细胞的增殖.②ELISA法测定培养上清『{I白细胞介素12活性.⑨流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及死亡率,细胞内活性氧浓度.④RT.PCR法检测细胞bcl-2和cdk2 mRNA水平.⑤荧光显微镜检测细胞Bcl.2、Bax和CDK2蛋白表达率.结果:15,20,25 μmol/L甲异靛玉红作用24h均町明显抑制C57BL/6小鼠胸腺、脾淋巴细胞增殖(P<0.05),J{:呈量效、时效依赖性.各浓度的甲异靛玉红对C57BI.J6小鼠胸腺和脾细胞各时间点分泌[J细胞介素12的功能较对照组明显减低(P<0.05).15 la mol/L的3'一甲异靛玉红可导致C57BL拍小鼠胸腺、脾淋巴细胞凋亡相关蛋白bcl-2和细胞周期蛋白cdk2 mRNA表达水平均减低,Bcl-2的蛋白表达水平降低,CDK蛋白表达减低,Bax表达水平升高,Bcl-2/Bax比例明显下降,肩动细胞凋亡.15 μmol/L的3'-甲异靛玉红将C57BL/6小鼠胸腺、脾淋巴细胞阻遏于G2/M期,细胞内活性氧水平呈量效、时效依赖性升高.结论:一定浓度范围甲异靛玉红可逆性抑制C57BL/6小鼠体外培养的脾及胸腺淋巴细胞增殖,同时抑制白细胞介素12的分泌,并启动细胞凋亡.     

雷公藤内酯醇对人淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察雷公藤内酯醇对人淋巴瘤细胞系Raji细胞体外增殖和细胞凋亡的影响。方法:实验于2005-04/11在华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所实验室完成。①人淋巴瘤细胞系Raji(中国科学院上海生物细胞研究所)。雷公藤内酯醇(Sigma公司)分子式C20H24O6,相对分子量360.4,纯度99%,用二甲基亚砜稀释,微孔滤膜(0.22μm)除菌,等量分装,-20℃保存,使用前解冻。②将Raji细胞放入RPMI-1640培养基中常规培养,每48h换液传代1次。实验前24h半量换液,取处于对数生长期、细胞活性大于98%的细胞进行实验。③采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测雷公藤内酯醇对Raji细胞增殖的影响。将Raji细胞按2×108L-1接种于96孔培养板,200μL/孔。实验共分5组:雷公藤内酯醇12.5,25,50,100nmol/L浓度组分别加入适量雷公藤内酯醇使其终浓度为12.5,25,50,100nmol/L,空白对照组未加入雷公藤内酯醇,5个平行孔/组。分别于培养12,24,48,72h后每孔加入5g/L的四甲基偶氮唑蓝20μL继续培养。用全自动酶标仪测定490nm波长处吸光度值。细胞增殖抑制率(%)=(1-雷公藤内酯醇各浓度组吸光度值/空白对照组吸光度值)×100%。④采用AnnexinV/PI双标流式细胞术检测雷公藤内酯醇对Raji细胞凋亡的影响。将Raji细胞按2×108L-1接种于6孔培养板,实验分组同上,分别于孵育24,48h后收集细胞,调整各组细胞数为2×108L-1。取195μL细胞悬液,加入异硫氰酸荧光素标记的AnnexinV室温孵育,洗涤后加入碘化丙锭5μL,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:①雷公藤内酯醇对Raji细胞增殖的影响:不同浓度的雷公藤内酯醇对人淋巴瘤细胞系Raji的增殖均具有抑制作用,且呈时效和量效关系。与空白对照组比较,培养12,24,48,72h后雷公藤内酯醇12.5,25,50,100nmol/L浓度组的细胞增殖抑制率均明显升高(t=18.314～77.366,P均<0.01),培养24h时的半数抑制浓度为43.06nmol/L。②雷公藤内酯醇对Raji细胞凋亡的影响:经雷公藤内酯醇作用后,随着药物浓度的增加和作用时间的延长,Raji细胞凋亡率逐渐增高,且呈时效和量效关系。与空白对照组比较,培养24,48h后雷公藤内酯醇12.5,25,50,100nmol/L浓度组的细胞凋亡率均明显升高(t=-23.657～-37.895,P均<0.05)。结论:雷公藤内酯醇对人淋巴瘤细胞系Raji细胞具有明显的生长抑制作用及诱导凋亡发生,且存在浓度和时间依赖关系。提示雷公藤内酯醇可能通过诱导细胞凋亡来有效抑制人淋巴瘤细胞的增殖,从而有望为治疗淋巴瘤提供新的策略。     

姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:脂肪细胞分化障碍是肥胖引发胰岛素抵抗的途径之一,观察中药姜黄提取物姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响,在细胞水平分析姜黄素防治糖尿病可能的机制。方法:实验于2005-12/2006-03在哈尔滨医科大学营养与食品卫生学教研室完成。以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,在常规培养时,分别加入0,5,10,15,20,25,30,35,40,50,80和100μmol/L浓度的姜黄素(购自美国Sigma公司),每个剂量设12个平行孔,培养3d,在此期间,分别在24,48,72h时,于姜黄素各剂量组中分别选取4个平行孔,以MTT法测定其增殖情况。在诱导分化时,设一组空白对照,实验组与诱导液同步加入0,2.5,5,10,15和20μmol/L的姜黄素,于诱导分化的第6天,采用油红O染色方法测定3T3-L1前脂肪细胞分化程度。结果:①姜黄素作用3T3-L1前脂肪细胞48h,5,10μmol/L剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加(0.67±0.01,0.69±0.02,0.57±0.01,P<0.01),15μmol/L剂量组细胞吸光度值与空白对照相比差异无显著性意义(0.54±0.01,P>0.05),其余剂量组(20,25,30,35,40,50,80和100μmol/L)细胞吸光度值显著降低(0.53±0.01,0.47±0.01,0.42±0.03,0.45±0.03,0.18±0.01,0.2±0.01,0.16±0.04,0.44±0.05,P<0.01)。②姜黄素作用细胞48h时,促进或抑制细胞增殖的作用最强,40μmol/L以上浓度的姜黄素出现细胞毒性作用,大部分细胞成片脱落死亡。72h时,15～35μmol/L姜黄素组细胞的生长率有所增加,而40μmol/L以下姜黄素处理组细胞生长率仍维持在较低水平。③脂肪细胞油红O染色分光光度法结果显示2.5,5,10,15和20μmol/L姜黄素剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加(0.38±0.05,0.49±0.04,0.56±0.06,0.75±0.06,0.77±0.1,0.83±0.06,0.38±0.05,P<0.05～0.01)。结论:不同浓度姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞具有促进增殖和抑制增殖双重作用,低浓度姜黄素促进细胞增殖,高浓度姜黄素抑制细胞增殖。姜黄素通过促进3T3-L1前脂肪细胞的分化,从而增加脂肪细胞对胰岛素的敏感性,这可能是其防治糖尿病的机制之一。     

薏苡仁酯对人喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用

目的:观察不同浓度薏苡仁酯对人喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的作用。方法:实验于2005-12/2006-04在锦州医学院药理教研室完成。选用人喉癌细胞株Hep-2(北京同仁耳鼻喉研究所),培养于含体积分数为0.1的胎牛血清的RPMI1640培养基中,置37℃,体积分数为0.05的CO2孵箱中培养并传代。实验分4组,每8孔细胞为1组。对照组(加入等体积的无菌蒸馏水),5,10,20μmol/L薏苡仁酯(商品名:康莱特注射液,浙江康莱特药业有限公司,规格100g/L)组。应用四甲基偶氮唑蓝法观察不同浓度薏苡仁酯对Hep-2细胞增殖的抑制情况,测定其吸光度值;采用流式细胞术方法观察不同浓度薏苡仁酯对Hep-2细胞凋亡率的改变。结果:①四甲基偶氮唑蓝法测定:5,10,20μmol/L薏苡仁酯组作用48h后吸光度值(A540)明显低于对照组(分别为1.673±0.015,1.362±0.148,1.019±0.036,1.807±0.042,t=1.10,P<0.01),且呈现一定的浓度依赖性,各个剂量组之间的差异也存在显著性。②流式细胞仪测定:5,10,20μmol/L薏苡仁酯组作用48h后抑制Hep-2细胞的细胞凋亡率高于对照组,并能诱导Hep-2细胞凋亡,且呈浓度依赖性[(6.49±0.27)%,(11.33±0.12)%,(13.56±0.47)%,(0.08±0.06)%,t=16.27,P<0.05]。结论:薏苡仁酯可促进喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡,并呈浓度依赖性,为薏苡仁酯用于喉癌临床治疗提供了部分依据。     

白藜芦醇对人胰腺癌细胞Capan-1增殖和细胞周期的影响

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人胰腺癌细胞Capan-1增殖和细胞周期的影响及变化规律.方法:通过不同浓度(0.128 ～ 500 000 nmol/L)Res作用于增殖期的Capan-1,检测5 d各组细胞增殖率和细胞生长状态;通过增殖率曲线获得其半数生长抑制浓度(IC50)和杀伤浓度(killing concentration),并以此浓度再次作用细胞5 d,检测并分析其细胞周期和细胞凋亡情况.结果:Res在16 nmol/L时增殖率显著升高,而在15 000 nmol/L开始呈现抑制增长表现.Res对Capan-1的IC50为48.33 μmol/L,细胞杀伤浓度为87.40 μmol/L.流式细胞检测结果表明,Res浓度为48.33 μmol/L时,G0/G1期细胞比例显著增高于空白对照组(P ＜ 0.01).当Res浓度为87.40 μmol/L时,G2/M期细胞比例显著低于空白对照组和48.33 μmol/L组(P ＜ 0.01),且细胞凋亡率显著高于其他两组(P ＜ 0.01).结论:Res对Capan-1的增殖影响存在浓度依赖性,分别表现为促进增殖、抑制增殖、促进凋亡3个阶段浓度,其中Res抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用与其对细胞周期的阻断作用有关.     

雷公藤内酯醇对人淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察雷公藤内酯醇对入淋巴瘤细胞系Raji细胞体外增殖和细胞凋亡的影响。方法：实验于2005—04／11在华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所实验室完成。①入淋巴瘤细胞系Raji（中国科学院上海生物细胞研究所）。雷公藤内酯醇（Sigma公司）分子式C20H25O6，相对分子量360．4，纯度99％，用二甲基亚砜稀释，微孔滤膜（0．22μm）除菌，等量分装，-20℃保存，使用前解冻。②将Raji细胞放入RPMI—1640培养基中常规培养，每48h换液传代1次。实验前24h半量换液，取处于对数生长期、细胞活性大于98％的细胞进行实验。③采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测雷公藤内酯醇对Raji细胞增殖的影响。将Raji细胞按2&;#215;10。L“接种于96孔培养板，200μl／孔。实验共分5组：雷公藤内酯醇12．5，25，50，100nmol/L浓度组分别加入适量雷公藤内酯醇使其终浓度为12．5，25，50，100nmol/L，空白对照组未加入雷公藤内酯醇，5个平行孔／组。分别于培养12，24，48，72h后每孔加入5g／L的四甲基偶氮唑蓝20μL继续培养。用全自动酶标仪测定490nm波长处吸光度值。细胞增殖抑制率（％）=（1-雷公藤内酯醇各浓度组吸光度值／空白对照组吸光度值）&;#215;100％。④采用Annexin V／PI双标流式细胞术检测雷公藤内酯醇对Rafi细胞凋亡的影响。将Rajj细胞按2&;#215;10^8L^-1接种于6孔培养板，实验分组同上，分别于孵育24，48h后收集细胞，调整各组细胞数为2&;#215;10^8L^-1。取195μL细胞悬液，加入异硫氰酸荧光素标记的Annexin V室温孵育，洗涤后加入碘化丙锭5μL，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：①雷公藤内酯醇对Raji细胞增殖的影响：不同浓度的雷公藤内酯醇对人淋巴瘤细胞系Raji的增殖均具有抑制作用，且呈时效和量效关系。与空白对照组比较，培养12，24，48，72h后雷公藤内酯醇12．5，25，50，100nmol／L浓度组的细胞增殖抑制率均明显升高（f=18．314～77．366，P均〈0．01），培养24h时的半数抑制浓度为43．06nmol／L。②雷公藤内酯醇对Raji细胞凋亡的影响：经雷公藤内酯醇作用后，随着药物浓度的增加和作用时间的延长，Raji细胞凋亡率逐渐增高，且呈时效和量效关系。与空白对照组比较，培养24，48h后雷公藤内酯醇12．5，25，50，100nmol／L浓度组的细胞凋亡率均明显升高（f=-23．657～-37．895，P均〈0．05）。结论：雷公藤内酯醇对人淋巴瘤细胞系Raji细胞具有明显的生长抑制作用及诱导凋亡发生，且存在浓度和时间依赖关系。提示雷公藤内酯醇可能通过诱导细胞凋亡来有效抑制人淋巴瘤细胞的增殖，从而有望为治疗淋巴瘤提供新的策略。     

红色发光二极管照射对C2C12细胞增殖的光生物调节作用

目的:采用小鼠成肌细胞C2C12作为模型,观察光生物调节作用对他汀类药物引起的肌病的作用。方法:实验于2004-09/2005-01在华南师范大学激光运动医学实验室完成。C2C12细胞用浓度分别为2.0×10-5,2.0×10-6,2.0×10-7,2.0×10-8mol/L的辛伐他汀培养,然后用强度分别为0,0.229,0.506,0.848,1.401,1.670mW/cm2的红色发光二极管[波长(640±15)nm]照射2d,15min/d。用甲基噻唑基四唑比色法评价细胞增殖。结果:浓度为2.0×10-6,2.0×10-7,2.0×10-8mol/L的辛伐他汀对C2C12的增殖没有影响,无光生物调节作用;浓度为2.0×10-5mol/L的辛伐他汀抑制C2C12的增殖,发光二极管强度为0,0.229,0.506,0.848,1.401,1.670mW/cm2时C2C12细胞增殖吸光度百分率分别降为(37.2±8.4)%,(58.4±24.9)%,(37.0±8.6)%,(63.0±8.8)%,(59.2±12.6)%,(28.9±20.3)%。强度为0.848mW/cm2的红色发光二极管照射2d,15min/d可促进被抑制的C2C12增殖效应。结论:红色发光二极管可以促进被辛伐他汀抑制的C2C12细胞的增殖作用,对服用他汀类药物引起的肌病可能有光生物调节作用。     

3''-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾细胞增殖、凋亡及生物功能的调节

背景:靛玉红及其衍生物具有抗炎、抗肿瘤作用.可用于自身免疫性疾病的治疗,但其对正常免疫细胞的作用尚鲜见报道.目的:观察3'-甲异靛玉红对不同种系小鼠脾淋巴细胞增殖及生物功能影响的调节.设计、时间及地点:随机对照实验,于2007-07/2008-02在南方医科大学珠江医院血液科实验室完成.材料:清洁级BAL,B/c,C57BL/6以及F1代杂交鼠,均雄性,6～8周龄,体质量(20±2)g,由第一军医大学实验动物中心提供.3'-甲异靛玉红由美国Sigma公司提供.方法:取BALB/c,C57BL/6以及F1代杂交鼠脾组织研磨过滤为单个核细胞悬液,以5、10、15、20和25 μmol/L3'-甲异靛玉红处理各种系小鼠脾细胞,以未处理的为空白对照,以刀豆蛋白A处理组为阳性对照.主要观察指标:MTT法测定各种系小鼠脾淋巴细胞增殖情况:ELISA法测定淋巴细胞培养上清白细胞介素12活性;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及死亡率、细胞内活性氧浓度变化;RT-PCR检测细胞Bcl-2和CDK2基因mRNA水平;荧光显微检镜测细胞Bcl-2、Bax和CDK2蛋白表达率.结果:MTT检测显示,15、20和25 μmol/L3'-甲异靛玉红作用24h便可明显抑制3种小鼠脾淋巴细胞增殖(P＜0.05),此效应呈量效、时效依赖性.将25 μ mol/L3'-甲异靛玉红处理72 h后的细胞离心后撤除3'-甲异靛玉红干预继续培养,椎虫蓝记数发现细胞恢复增殖.ELISA检测显示,各浓度3'-甲异靛玉红抑制各种系小鼠脾细胞分泌白细胞介素12,各种系间差异不显著.RT-PCR检测显示,15 μ mol/L3'-甲异靛玉红处理12 h后脾细胞Bcl-2和CDK2的mRNA水平明显降低.流式细胞仪检测细胞凋亡率及死亡率表明,15 μ mol/L,的3'-甲异靛玉红可降低各种系小鼠脾淋巴细胞凋亡相关蛋白Bcl-2水平,升高Bax蛋白水平,下调Bcl-2/Bax比例,降低CDK2表达.不同种系小鼠脾细胞均有部分凋亡现象,但死亡率无明显升高.各种系小鼠脾淋巴细胞阻遏于G2/M期,细胞内活性氧水平呈量效、时效依赖性升高,种系间差异不显著.结论:15-25μmolR3'-甲异靛玉红可逆性抑制不同种系小鼠脾细胞的增殖及分泌功能,此效应呈量效、时效依赖性,并启动细胞凋亡程序.     

17-DMAG体外对结肠癌HT-29细胞的影响及细胞内活性氧的研究

目的 观察17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-DMAG）对人结肠癌HT-29细胞增殖、细胞凋亡的影响及其细胞内活性氧（ROS）的变化.方法 用CCK-8检测17-DMAG对结肠癌HT-29细胞增殖影响;AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞检测细胞凋亡率;酶标仪检测细胞内ROS的变化.结果 17-DMAG呈时间-剂量依赖性抑制HT-29细胞增殖.0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、2.5μmol/L作用于HT-29细胞24h后,细胞增殖抑制率分别为（22.17±1.15）％、（28.45±1.16）％、（35.04±1.58）％和（46.85±2.44）％,作用48 h后,细胞增殖抑制率分别为（27.55±0.65）％、（33.33±1.23）％、（46.20±4.76）％和（55.45±4.47）％,作用72h,细胞增殖抑制率分别为（39.19±1.74）％、（44.29±2.00）％、（50.66±2.17）％和（58.84±3.18）％.正常对照组HT-29细胞24h的自然总凋亡率（早期＋晚期）为（2.72±0.57）％,0.25 μmol/L、0.5μmol/L、1.0 μmol/L和2.5μmol/L 17-DMAG干预24h后细胞总凋亡率分别为（5.38±0.46）％、（6.88±0.52）％、（10.44±0.32）％与（17.87 ±4.66）％,17-DMAG作用HT-29细胞24h的凋亡率与对照组细胞凋亡率相比差异有统计学意义（P＜0.05）.0.25 μmoL/L、0.5μmol/L、1.0 μmol/L和2.5 μmol/L 17-DMAG作用HT-29细胞12 h与24h,其活性氧水平均较对照组有不同程度的上升,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 17-DMAG体外呈时间-剂量依赖性抑制HT-29细胞增殖,诱导其凋亡,可能部分与细胞内的ROS升高有关.     

Hepatitis C

Hepatitis C virus infection is responsible for significant morbidity and mortality worldwide. Advances in detection and monitoring of hepatitis C virus infection, as well as treatment protocols, have contributed to the medical focus on this high profile disease. Presence of risk factors should increase the clinicians index of suspicion for this symptomatically nonspecific disease.     

FLUID PHASE DESTRUCTION OF C2hu BY C1hu : II. UNMASKING BY C4ihuOF C1hu SPECIFICITY FOR C2hu

It has been demonstrated that C1 isolated in the unactivated form fails to inactivate C4 or C2 in the fluid phase, while the activated molecule, C1 rapidly converts C4 to hemolytically inactive C4i, but does not efficiently inactivate C2. The production and presence of C4i now confers on C1 the ability to rapidly inactivate C2. After heating at 56°C, so as to destroy the hemolytic activity, heat inactivated C1 is still capable of inactivating C4 but the presence of C4i no longer confers an ability to inactivate C2. Studies with the subunits of C1–C1q, C1r, C1s, indicate that the action of C1s on C2 can be inhibited by C1r and that this inhibition is reversed by the presence of homologous C4. These studies indicate that the interaction of C4i with a heat labile receptor conformation in C1 uncovers a masked specificity for C2.