基于NF-κB通路探讨六神胶囊对脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响

目的探讨六神胶囊的抗炎作用及机制。方法 RAW264.7细胞分为六神胶囊组和地塞米松组,六神胶囊按9.76、4.88、2.44、1.22、0.61、0.31、0.15μg/ml梯度稀释;地塞米松按250、125、62.5、31.25、15.63、7.81、3.91μg/ml梯度稀释,选择细胞存活率大于90%的最大3个六神胶囊浓度和最大无毒剂量的地塞米松进行后续实验。RAW264.7细胞分为空白组,地塞米松组,模型组及六神胶囊高、中、低剂量组。除空白组外,其余各组采用脂多糖诱导建立炎症模型。造模后六神胶囊高、中、低剂量组分别加入筛选浓度的高、中、低浓度六神胶囊溶液各1 ml;地塞米松组加入筛选浓度的地塞米松溶液1 ml;模型组和空白组加入1 ml培养液。24 h后收集细胞上清液检测一氧化氮(NO)的浓度,ELISA法检测细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的含量,实时荧光定量PCR法检测细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6和诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达,蛋白印迹实验检测核因子κB p65 (NF-κB p65)、磷酸...     

四逆散对脂多糖诱导的RAW264.7细胞极化的影响

目的:探讨四逆散(Sinisan,SNS)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264. 7巨噬细胞极化的调控作用。方法:RAW264. 7分为5组,分别为空白组,模型组,SNS低、中、高质量浓度组(10,20,40 mg·L~(-1));以LPS(100μg·L~(-1))刺激的RAW264. 7细胞为体外模型,使用不同质量浓度的SNS提前干预细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测不同质量浓度SNS对RAW264. 7细胞增殖的影响;光学显微镜下观察各组细胞分化程度;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养基上清中M1极化因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β)以及M2极化因子白细胞介素-10(IL-10)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测RAW264. 7细胞M1极化因子TNF-α,IL-6以及M2极化因子IL-10,精氨酸酶-1(Arg~(-1))的mRNA水平。结果:与空白组比较,模型组促进细胞增殖(P 0. 05),刺激M1极化因子TNF-α,IL-6,IL-1β的释放和上调TNF-α,IL-6的mRNA含量(P 0. 01),减少M2极化因子IL-10释放和IL-10,Arg~(-1)的mRNA水平(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,SNS对RAW264. 7细胞的活性没有影响。与模型组比较,SNS可抑制LPS诱导的细胞增殖(P 0. 05),减少LPS刺激的细胞分化,减少M1极化因子TNF-α,IL-6,IL-1β的释放和TNF-α,IL-6的mRNA含量(P 0. 05,P 0. 01),并增加M2极化因子IL-10释放和IL-10,Arg~(-1)的mRNA水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:SNS可抑制LPS诱导的RAW264. 7细胞炎症,其机制可能与调控巨噬细胞M1/M2表型极化平衡相关。     

基于JAK2/STAT3的龙胆苦苷通路调控溃疡性结肠炎小鼠巨噬细胞极化机制研究

目的 基于酪氨酸激酶2/信号转导及转录激活因子3（JAK2/STAT3）通路,探讨龙胆苦苷对硫酸葡聚糖（DSS）诱导的溃疡性结肠炎小鼠的保护作用及对巨噬细胞极化的调控。方法 BALB/c雄性小鼠按体质量随机分成对照组、模型组及龙胆苦苷低、中、高剂量（25、50、100 mg·kg^–1）组,每组各12只。采用DSS诱导结肠炎小鼠模型;检测并记录给予龙胆苦苷后小鼠体质量、稀便、血便、结肠长度、结肠厚度和小鼠死亡情况;通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠结肠中炎症因子白细胞介素-4（IL-4）、IL-10、IL-6、IL-12水平;流式细胞术分析小鼠结肠中M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞的比例;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、巨噬细胞甘露糖受体CD206蛋白及巨噬细胞极化上游通路JAK2、3STAT3等蛋白的表达。结果 DSS诱导的溃疡性结肠炎模型小鼠出现严重的体质量下降和稀便、血便现象,疾病活动指数（DAI）评分明显升高（P<0.05）。与对照组比较,模型组小鼠结肠发生明显的缩短和肿胀（P<0.05）,IL-4、IL-10、iNOS、CD206、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达水平明显上调（P<0.05）,IL-6和IL-12表达水平明显下调（P<0.05）。与模型组比较,龙胆苦苷给药组小鼠DAI评分显著降低（P<0.05）,结肠缩短和肿胀得到明显的改善（P<0.05）,IL-4、IL-10、CD206表达水平显著升高（P<0.05）,IL-6、IL-12、iNOS、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达显著降低（P<0.05）。结论 龙胆苦苷能通过下调JAK2/STAT3通路的磷酸化表达,调节结肠巨噬细胞极化趋向于M2型巨噬细胞,从而改善DSS诱导急性结肠炎小鼠的结肠损伤。     

木瓜三萜对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的影响

目的:研究木瓜三萜对脂多糖诱导下RAW264.7细胞炎症模型细胞因子的影响。方法:用脂多糖诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症模型。MTT法检测不同浓度木瓜三萜对RAW264.7细胞增殖的影响,用Griess法和ELISA法检测上清液中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-4、IL-10含量,实时定量PCR检测RAW264.7细胞中i NOS、TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-4、IL-10 mRNA表达,Western blot检测RAW264.7细胞中磷酸化核因子抑制蛋白-κB(p IκB-α)和核转录因子κB(NF-κB)p65和磷酸化NF-κBp65(p-NF-κBp65)蛋白表达。结果:当木瓜三萜浓度低于25μg/ml时,无论单用木瓜三萜还是与LPS联用均对RAW264.7细胞的生长无明显的影响;但是当木瓜三萜浓度大于50μg/ml时,单用和联用均对RAW264.7细胞生长呈现生长抑制效应;木瓜三萜可显著降低上清液中促炎因子NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量和细胞中i NOS、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,升高上清液中抗炎因子IL-4、IL-6含量和细胞中IL-4、IL-10 mRNA表达,抑制p IκB-α和p-NF-κBp65蛋白表达。结论:木瓜三萜可通过抑制RAW264.7细胞分泌i NOS、TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子,促进其分泌IL-4、IL-10抗炎因子来发挥抗炎作用,其作用机制与抑制IκB-α和NF-κBp65的磷酸化,进而恢复促炎因子和抗炎因子之间的平衡有关。     

桑枝提取部位及其组合对巨噬细胞炎症介质的影响

目的 研究桑枝不同提取部位及其配比对脂多糖(LPS)协同γ-干扰素(IFN-γ)刺激的巨噬细胞RAW264.7中炎症介质的影响.方法 采用有机溶剂萃取和大孔树脂富集的方法制备桑枝乙醇提取物不同萃取部位Ⅰ～Ⅳ.各提取部位及不同部位组合分别作用于细胞后,Griess法测定RAW264.7细胞亚硝酸盐的量;MTT法检测细胞活力;三价铁还原抗氧化能力测试(FRAP)法测定细胞抗氧化能力;半定量PCR法测定炎症介质基因的表达;Western blotting法测定炎症介质蛋白的表达.结果 桑枝4个提取部位中,Ⅰ和Ⅱ以剂量相关方式抑制细胞悬液中亚硝酸盐的量,IC50分别为145.23、152.14 mg/L.在Ⅰ与Ⅱ 3种配比(1:1、1:4、4:1)组合中,1:1配比时抑制细胞上清液中亚硝酸盐量的IC50值最低,为110.31 mg/L,且对细胞活力具有保护作用.与模型组相比,Ⅰ和Ⅱ在200 mg/L时显著下调白细胞介素-1β (IL-1β)、IL-6、诱生型NO合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)、核因子-κB (NF-κB)基因表达水平(P＜0.05、0.01),同时上调血红素加氧酶(HO-1)和过氧化物酶增殖体受体(PPAR-γ)基因表达水平(P＜0.05),提高细胞抗氧化能力(P＜0.05),且抑制ERK蛋白的磷酸化(P＜0.05).Ⅰ和Ⅱ(1:1)组合对COX-2、IL-1β、HO-1、NF-κB、PPAR-γ的表达有一定的协同调控效果.结论 提取部位Ⅰ和Ⅱ是桑枝抗炎的活性部位,其部分通过NF-κB和ERK/MAPK信号转导通路调控炎症介质的表达,其1:1配比组合对炎症中某些靶点均有较好的协同调控作用,抗炎效果更佳.     

蘘荷根茎乙醇提取物对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响北大核心CSCD

目的:探究蘘荷根茎乙醇提取物的抗炎活性及作用机制。方法:以70%乙醇为溶剂对蘘荷根茎回流提取制得提取物,测定其总酚酸和总黄酮含量,采用超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap MS)鉴定其化学成分;MTT法测定蘘荷根茎乙醇提取物对RAW264.7细胞和L929细胞存活率的影响;用脂多糖(LPS)对RAW264.7细胞进行诱导建立体外炎症模型,通过NO检测试剂盒、ROS检测试剂盒、ELISA、免疫印迹法检测其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和核转录因子κB(NF-κB)信号通路中一氧化氮(NO)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放量、活性氧(ROS)水平及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探究蘘荷根茎乙醇提取物的抗炎作用及可能的作用机理。结果:蘘荷根茎乙醇提取物富含酚类成分[(15.07±0.13)mg GAE/g],鉴定出酚类化合物为L-酪氨酸、原儿茶酸、原儿茶醛、4-甲基水杨酸、对羟基安息香醛、咖啡酸、香兰素、对羟基肉桂酸、白果新酸;蘘荷根茎乙醇提取物在31.3、62.5、125、250μg/mL时对RAW264.7和L929细胞的存活率无显著影响;与空白对照组比较,模型对照组NO、IL-6、TNF-α和ROS含量显著升高(P<0.01),iNOS表达、P38、JNK、ERK、IκBα的磷酸化表达以及细胞核NF-κB p65表达明显上调(P<0.05或P<0.01),IκBα和细胞质NF-κB p65的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,蘘荷根茎乙醇提取物31.3、62.5、125、250μg/mL组NO、IL-6的释放量明显降低(P<0.05或P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物62.5、125、250μg/mL组ROS水平显著降低,iNOS表达、JNK、ERK、IκBα的磷酸化表达以及细胞核NF-κB p65表达显著下调,细胞质NF-κB p65表达显著上调(P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物125、250μg/mL组IκBα表达明显上调(P<0.05或P<0.01);蘘荷根茎乙醇提取物250μg/mL组TNF-α的释放量明显降低和P38的磷酸化表达明显下调(P<0.05)。结论:蘘荷根茎乙醇提取物具有良好的抗炎作用,其抗炎机制可能与抑制LPS诱导的MAPK和NF-κB通路的活化有关。     

指压法对肥胖模型大鼠脂肪组织巨噬细胞极化状态的影响

目的 观察指压法对肥胖大鼠脂肪组织巨噬细胞极化状态的影响,探讨指压法对肥胖模型大鼠脂肪组织免疫炎症反应的作用。方法 将35只SD雄性大鼠造模后,随机分为正常组、模型组、指压组,每组10只。予指压法进行推拿干预,10 min/次,共6周,并记录每周体质量。治疗结束后,检测肥胖指标(体质量、Lee′s指数),脂代谢指标(TC、TG、HDL-C、LDL-C);免疫组化法检测脂肪组织中的M1、M2型巨噬细胞特异性抗体CD11c、CD206;采用蛋白质免疫印迹(Western Blot)技术检测各组大鼠脂肪组织中M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible NOS,iNOS)及IL-6蛋白的表达。结果 与正常组相比,模型组体质量、Lee′s指数、血清TC、TG、LDL-C含量均显著升高、M1型巨噬细胞CD11c浸润升高、M2型巨噬细胞CD206浸润减少、M1与M2比值明显增大、iNOS及IL-6蛋白的表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,指压组大鼠体质量、Lee′s指数、血清TC、TG、LDL-C含量均显著下降、M1型巨噬细胞CD11c浸润表达量...     

黄芩汤对LPS诱导的RAW264.7炎症细胞的抗炎作用

目的：以RAW264.7细胞为炎症模型,探究黄芩汤的抗炎作用机制。方法：制备黄芩汤,筛选对RAW264.7细胞的安全剂量;将RAW264.7细胞接种于24孔板中,先后加入黄芩汤和脂多糖（LPS）,分别采用Griess法和酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定一氧化氮（NO）和白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)的含量;将RAW264.7细胞接种于6孔板中,设空白组、LPS组、LPS+黄芩汤组、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)抑制剂（PDTC）组、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）抑制剂（SB203580）组、细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂（PD98059）组、c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂（SP600125）组、Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）抑制剂（AG490）组,先后加入相应的抑制剂和黄芩汤,并经LPS刺激后,提取RNA和蛋白,分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测NF-κB p65、p38MAPK、ERK、JNK和JAK m...     

防己茯苓汤对心肌纤维化小鼠巨噬细胞极化和氧化应激的影响

目的：探讨防己茯苓汤对心肌纤维化小鼠巨噬细胞极化和氧化应激的影响。方法：通过皮下注射异丙肾上腺素(5 mg·kg^-1·d^-1)构建心肌纤维化小鼠模型。将50只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、防己茯苓汤低、高剂量组、酒石酸美托洛尔(Meto)组,每组10只。假手术组、模型给予相应体积生理盐水灌胃,防己茯苓汤低、高剂量组分别予以防己茯苓汤低、高剂量灌胃(3.315、13.26 g·kg^-1·d^-1),Meto组予以酒石酸Meto灌胃(15 mg·kg^-1·d^-1)。2周后,观察小鼠心脏形态,计算平均细胞横截面积、心脏质量指数和心胫比,组织病理学方法观察心肌胶原沉积,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、炎症因子指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10]和氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)]的表达...     

新风胶囊通过调控巨噬细胞极化改善活动期类风湿关节炎患者炎症反应及生活质量的研究

目的：观察新风胶囊(xinfeng capsule, XFC)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者炎症反应及生活质量的影响。方法：采用随机数字表法将60例RA患者随机分为对照组和治疗组各30例,对照组患者给予甲氨蝶呤治疗,治疗组在对照组基础上联合XFC治疗,4周后检测2组患者治疗前后中医证候积分及生活质量评价量表(the short form-36 health survey, SF-36)评分,收集2组患者治疗前后血液样本,流式细胞术检测巨噬细胞极化标志物,Elisa检测血清炎症因子,Western blot法检测核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路相关蛋白的表达水平。结果：与治疗前比较,2组患者治疗后中医证候积分、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α、白细胞介素(interleukin, IL)-1β、CD80、CD86、 NF-κB P65明显降低(P<0.05,P<0.01),SF-36评分、IL-4、IL-10、CD163、CD206、核转录因子κB抑制蛋白...     

血府逐瘀胶囊对动脉粥样硬化小鼠巨噬细胞极化的影响

目的 以果蝇双翅边缘缺刻同源基因1（Notch1）/锯齿典型Notch配体1（Jagged1）/Hes家族BHLH转录因子1（Hes1）信号通路为切入点,探讨血府逐瘀胶囊调控巨噬细胞极化抗动脉粥样硬化的作用机制。方法 载脂蛋白E敲除（ApoE^-/-）小鼠高脂饮食4周制备动脉粥样硬化小鼠模型,随机分为模型组、血府逐瘀胶囊组、阿托伐他汀组,以C57BL/6小鼠常规饲养作为正常组。血府逐瘀胶囊组给予血府逐瘀胶囊（0.728 g·kg^-1·d^-1）灌胃,阿托伐他汀组给予阿托伐他汀片（6.07 mg·kg^-1·d^-1）灌胃,正常组、模型组给予等体积去离子水灌胃,连续干预12周。采用苏木素-伊红（HE）染色观察主动脉斑块形态,油红O染色观察主动脉斑块面积及脂质沉积情况,免疫组化法检测主动脉组织CD86、CD206阳性表达,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、转化生长因子（TGF）-β₁、IL-10表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测主动脉组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶-1（Arg-1）、Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA相对表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测主动脉组织iNOS、Arg-1、Notch1、Jagged1、Hes1蛋白相对表达。结果 与正常组比较,模型组有明显的主动脉斑块和脂质沉积,促炎因子TNF-α、IL-1β表达显著升高（P<0.01）,抗炎因子TGF-β₁表达有下降趋势,但差异无统计学意义;巨噬细胞标志物CD86、CD206出现阳性表达;iNOS mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）,Arg-1蛋白表达显著下降（P<0.01）;相关通路分子Jagged1 mRNA及Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,血府逐瘀胶囊组斑块面积与脂质沉积有下降趋势,TNF-α、IL-1β表达有下降趋势;TGF-β₁表达明显升高（P<0.05）,巨噬细胞标志物CD86表达下降,CD206表达显著升高（P<0.01）;iNOS mRNA及蛋白表达显著下降（P<0.01）Arg-1 mRNA及蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;相关通路分子Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA及蛋白表达显著下降（P<0.01）。结论 血府逐瘀胶囊可减少动脉粥样硬化小鼠主动脉斑块面积和脂质沉积,减轻炎症,抑制M1型巨噬细胞、促进M2型巨噬细胞的表达,其机制可能与调控Notch1/Jagged1/Hes1信号通路有关。     

藏药十八味党参丸提取物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞Akt/p38MAPK信号通路及M1/M2极化影响的探究

目的探究藏药十八味党参丸(TEP)的提取物调控脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7的炎性反应及M1/M2极化分型的探究。方法 Alarmarblue法评价RAW 264.7活力;荧光酶标定量分析细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Griess法检测上清液中细胞一氧化氮(NO)的分泌情况;流式细胞术检测表面标志物CD206和CCR7蛋白的表达;RT-qPCR法检测细胞白介素(IL)-1β、IL-6、趋化因子2(CCL2)、一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶(ARG)-1和肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的情况;Western blot法检测TEP调控细胞合成iNOS、蛋白激酶B(Akt)和p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)信号通路相关蛋白的表达情况。结果与模型组相比,TEP组一定程度上提高了RAW 264.7的细胞活性,同时抑制了LPS诱导的细胞内ROS水平的升高。经过LPS刺激后,模型组NO表达量显著升高,在24 h后表达量达到最高,而TEP组NO表达显著降低。模型组的CCR7表达升高,CD206表达下降,TEP干预后CCR7表达下降,CD206表达升高,且趋势呈现浓度依赖。与模型组相比,TEP组的IL-1β、IL-6、CCL2、iNOS、ARG和TNF-α基因表达以及iNOS、Akt和p38MAPK蛋白表达水平均显著降低。结论 TEP能够抑制细胞内ROS水平,降低NO分泌和炎性基因的表达水平,抑制细胞的M1表型,促进M2表型,其机制可能与细胞内iNOS、Akt和p38MAPK信号通路蛋白表达被抑制有关。     

藏药十八味党参丸提取物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞Akt/p38MAPK信号通路及M1/M2极化影响的探究

目的探究藏药十八味党参丸(TEP)的提取物调控脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7的炎性反应及M1/M2极化分型的探究。方法 Alarmarblue法评价RAW 264.7活力;荧光酶标定量分析细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Griess法检测上清液中细胞一氧化氮(NO)的分泌情况;流式细胞术检测表面标志物CD206和CCR7蛋白的表达;RT-qPCR法检测细胞白介素(IL)-1β、IL-6、趋化因子2(CCL2)、一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶(ARG)-1和肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的情况;Western blot法检测TEP调控细胞合成iNOS、蛋白激酶B(Akt)和p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)信号通路相关蛋白的表达情况。结果与模型组相比,TEP组一定程度上提高了RAW 264.7的细胞活性,同时抑制了LPS诱导的细胞内ROS水平的升高。经过LPS刺激后,模型组NO表达量显著升高,在24 h后表达量达到最高,而TEP组NO表达显著降低。模型组的CCR7表达升高,CD206表达下降,TEP干预后CCR7表达下降,CD206表达升高,且趋势呈现浓度依赖。与模型组相比,TEP组的IL-1β、IL-6、CCL2、iNOS、ARG和TNF-α基因表达以及iNOS、Akt和p38MAPK蛋白表达水平均显著降低。结论 TEP能够抑制细胞内ROS水平,降低NO分泌和炎性基因的表达水平,抑制细胞的M1表型,促进M2表型,其机制可能与细胞内iNOS、Akt和p38MAPK信号通路蛋白表达被抑制有关。     

Effects of taraxasterol on inflammatory responses in lipopolysaccharide-induced RAW 264.7 macrophages

Aim of the study

Taraxasterol, a pentacyclic-triterpene, was isolated from the Chinese medicinal herb Taraxacum officinale. In the present study, we investigated the in vitro anti-inflammatory activity of taraxasterol in lipopolysaccharide (LPS)-induced RAW 264.7 murine macrophages.

Materials and methods

RAW 264.7 cells were pretreated with 2.5, 5, or 12.5 μg/ml of taraxasterol 1 h prior to treatment with 1 μg/ml of LPS. Nitric oxide (NO) level in supernatants from cells was examined by Griess reaction, the concentrations of prostaglandin E₂ (PGE₂), tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β) and interleukin-6 (IL-6) were measured by ELISA. Nuclear factor kappa B (NF-κB) activation was evaluated by immunocytochemical analysis.

Results

We found that taraxasterol inhibited NO, PGE₂, TNF-α, IL-1β and IL-6 production in LPS-induced RAW 264.7 macrophages in a dose-dependent manner. Further studies revealed that taraxasterol prevented the LPS-induced NF-κB translocation from cytoplasm into nuclear.

Conclusions

These results indicate that taraxasterol has anti-inflammatory effect by blocking NF-κB pathway.     

Shikonin derivatives inhibited LPS-induced NOS in RAW 264.7 cells via downregulation of MAPK/NF-kappaB signaling

AIM OF THE STUDY: Shikonin/alkannin (SA) derivatives, analogs of naphthoquinone pigments, are the major components of root extracts of the Chinese medicinal herb (Lithospermum erythrorhizon; LE) and widely distributed in several folk medicines. In the present study, the effect and the underline molecular mechanism of shikonin derivatives isolated from root extracts of Lithospermum euchroma on lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammatory response were investigated. MATERIALS AND METHODS: Effects of five SA derivatives, including SA, acetylshikonin, beta,beta-dimethylacrylshikonin, 5,8-dihydroxy-1.4-naphthoquinone, and 1,4-naphthoquinone on LPS-induced nitric oxide (NO) and prostaglandin E2 (PGE2) production in mouse macrophage RAW264.7 cells were examined. RESULTS: Data suggested that SA derivatives inhibited LPS-induced NO and PGE(2) production, and iNOS protein expression. RT-PCR analysis showed that SA derivatives diminished LPS-induced iNOS mRNA expression. Moreover, the phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase (ERK)1/2 in LPS-stimulated RAW 264.7 cells was concentration-dependently suppressed by SA derivatives. SA inhibited NF-kappaB activation by prevention of the degradation of inhibitory factor-kappaB and p65 level in nuclear fractions induced by LPS. CONCLUSIONS: Taken together, these results suggest that the anti-inflammatory properties of SA derivatives might result from inhibition of iNOS protein expression through the downregulation of NF-kappaB activation via suppression of phosphorylation of ERK, in LPS-stimulated RAW 264.7 cells.     

从巨噬细胞角度探讨复方五凤草液干预结核性溃疡的机制

目的 探讨复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效及对巨噬细胞极化的影响。方法 ①临床实验。将南京市中西医结合医院145例结核性溃疡患者按随机数字表法分为观察组、对照Ⅰ组和对照Ⅱ组。3组均予以基础抗结核化学治疗的同时,观察组予以复方五凤草液,对照Ⅰ组予以康复新液,对照Ⅱ组予以异烟肼液局部外用治疗,疗程4周。分别观察3组患者创面愈合总有效率、中医证候积分、创面组织病理学形态及创面组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶-1（Arg-1）的表达水平。②细胞实验。RAW264.7细胞在完全培养基DMEM（10%的胎牛血清,1%青-链酶素溶液）于37 ℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。经佛波酯（PMA）诱导后向巨噬细胞分化,分别用脂多糖（LPS）诱导成M1巨噬细胞、白细胞介素-4（IL-4）诱导成M2巨噬细胞,分别予康复新溶液、异烟肼液、复方五凤草液处理以上细胞模型36 h,收集细胞上清液并离心,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β）、iNOS和Arg-1的蛋白量的表达,流式细胞术（FCM）检测药物对CD86、CD206表达的影响。结果 ①临床实验。与对照Ⅰ组［87.5%（42/48）,χ²=3.962,P<0.05］和对照Ⅱ组［83.3%（40/48）,χ²=6.162,P<0.05］比较,复方五凤草液组的总有效率［98.0%（48/49）］明显较高;治疗28 d后,与对照Ⅰ组、对照Ⅱ组比较,复方五凤草液组的中医证候积分明显降低（P<0.05）,复方五凤草液组创面组织病理学形态改善更为明显;免疫组化结果显示,治疗28 d后,与对照Ⅰ组、对照Ⅱ组比较,复方五凤草液组局部病灶组织样本中的iNOS表达量明显降低（P<0.05）,Arg-1表达量显著升高（P<0.05,P<0.01）。②细胞实验。Western blot实验结果显示,与M0组比较,LPS组中iNOS、TNF-α表达升高（P<0.01）。与LPS组比较,LPS+异烟肼组、LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中iNOS、TNF-α表达下降（P<0.05）;与LPS+异烟肼组比较,LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中iNOS表达下降（P<0.05,P<0.01）,LPS+复方五凤草液组TNF-α水平显著下降（P<0.01）;与LPS+康复新液组比较,LPS+复方五凤草液组中TNF-α表达下降（P<0.05）。与M0组比较,IL-4组中Arg-1、TGF-β表达升高（P<0.01）。与IL-4组比较,IL-4+异烟肼组、IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高（P<0.05,P<0.01）。与IL-4+异烟肼组比较,IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高（P<0.05,P<0.01）;与IL-4+康复新液组比较,IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高（P<0.05,P<0.01）。流式细胞术结果显示,与M0组比较,LPS组CD86表达升高,IL-4组中CD206表达升高（P<0.01）。与LPS组比较,LPS+异烟肼组、LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降（P<0.01）;与LPS+异烟肼组比较,LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降（P<0.01）;与LPS+康复新液组比较,LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降（P<0.01）。与IL-4组比较,IL-4+异烟肼组、IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高（P<0.01）;与IL-4+异烟肼组比较,IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高（P<0.01）;与IL-4+康复新液组比较,IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高（P<0.05）。结论 复方五凤草液能有效促进结核性溃疡愈合,其作用机制可能是通过抑制iNOS、TNF-α、CD86的表达并促进Arg-1、TGF-β、CD206的表达,从而调控M1/M2巨噬细胞极化平衡来完成。     

羧甲基茯苓多糖对巨噬细胞极化的影响

目的:探讨羧甲基茯苓多糖(carboxymethylpachymaran,CMP)对巨噬细胞活化、吞噬、分泌、一氧化氮(nitric oxide,NO)和炎症因子的影响。方法:体内实验,将Balb/c小鼠分为生理盐水组和CMP组,生理盐水组腹腔注射生理盐水,CMP组腹腔注射CMP溶液100 mg·kg~(-1),5 d后收集小鼠腹腔巨噬细胞,采用流式细胞术检测细胞吞噬功能。体外实验,将巨噬细胞RAW264.7分为空白组、脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组和CMP低、中、高剂量组,并分别加入培养基,LPS(0.1 mg·L-1)和CMP(400,800,1 600 mg·L-1)共孵育48 h。流式细胞术检测巨噬细胞的活化标志分子CD86表达水平和吞噬功能,荧光显微镜观察巨噬细胞吞噬荧光微球情况。收集细胞上清液,Griess法检测NO分泌水平,流式细胞微珠阵列法(cytometric bead array,CBA)检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10),单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)的分泌水平。结果:体内实验结果显示,与生理盐水组比较,CMP组巨噬细胞吞噬率和吞噬指数均显著升高(P0.05)。体外实验结果显示,与空白组比较,CMP各剂量组和LPS组巨噬细胞表达CD86分子水平显著升高(P0.05);荧光显微镜下观察到CMP各剂量组和LPS组巨噬细胞吞噬2个以上荧光微球的数量明显增加,流式检测结果也表明CMP各剂量组和LPS组巨噬细胞吞噬率和吞噬指数显著升高(P0.05);LPS诱导巨噬细胞分泌NO,IL-6,IL-10,MCP-1和TNF,然而CMP未见此效应,且NO,MCP-1和TNF分泌水平均低于空白组。结论:CMP可以刺激巨噬细胞活化,增强其吞噬功能,但不能促进巨噬细胞释放NO和炎症因子,因此推测其促进巨噬细胞向M2型极化。     

桑梅止咳颗粒对咳嗽变异性哮喘大鼠气道炎症反应的作用及机制

目的:观察桑梅止咳颗粒对咳嗽变异性哮喘(CVA)大鼠炎症反应的调节作用及机制.方法:6周龄雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组(桑梅止咳颗粒2.48 g·kg-1灌胃);模型组、中药组分别在第1,8天腹腔注射10％卵蛋白(OVA),氢氧化铝混合液+第15天开始1％OVA溶液雾化激发建立CVA模型;第15天各组连续...