HPLC-MS法测定知母盐炙前后8种成分量变化

目的建立HPLC-MS法同时测定知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷E_1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷Ⅰ、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ 8种化学成分量的方法,分析炮制前后各成分量的变化。方法色谱柱为Agilent SB-C_(18)柱(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温30℃,进样量10μL。质谱采用大气压电喷雾离子源,选择性负离子模式监测。结果所测定的8种成分在各自的线性范围内均具有良好的线性关系(r≥0.999 7);平均回收率在97.55%~103.01%,RSD2.80%。不同产地知母8种成分的量差异较大,其中芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷AⅢ的量较高。知母盐炙后新芒果苷、芒果苷、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ量变化不明显,知母皂苷E_1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷Ⅰ量下降,知母皂苷BⅢ量上升。结论该方法简单、灵敏、准确,知母盐炙前后多种成分量发生变化。     

UPLC-ELSD法同时测定不同产地知母中7个成分的含量

目的建立超高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(UPLC-ELSD)测定不同产地知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷B-Ⅲ、宝藿苷Ⅰ、知母皂苷A-Ⅲ、菝葜皂苷元等7个成分的含量。方法采用UPLC-ELSD法,ACQUITY BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相为乙腈(A)-0.2%冰醋酸(B),梯度洗脱;蒸发光散射检测器(ELSD)雾化器(氮气)流量为2.5 L·min~(-1);蒸发温度80℃;载气压力3.14 bar;进样体积10μL。结果 7个化合物分离度良好,呈现较好的线性关系(r0.999 0),平均加样回收率均在96.98%~102.60%,RSD≤2.80%。结果显示7个被测成分在不同产地之间含量差异较大。结论该方法简单准确,省时高效,可为不同产地知母药材质量控制提供科学依据。     

LC-MS-MS测定配伍黄柏对知母中4种有效成分含量的影响

目的:建立高效液相色谱串联质谱法(LC-MS-MS)测定知母黄柏药对中芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量,研究不同配伍比例对4种成分含量的影响。方法:采用ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,3.5μm),柱温30℃,流动相0.1%甲酸水-乙腈,流速0.25 m L·min~(-1),梯度洗脱;质谱条件为电喷雾(ESI)离子源,负离子多反应离子监测(MRM)用于定量测定。结果:芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ分别在5.05~404,5.3~424,5.05~404,20.8~1 664μg·L~(-1)线性关系良好(r≥0.999);平均回收率分别为100.6%,99.2%,99.1%,98.5%。知母单煎时芒果苷、知母皂苷AⅢ含量最高;新芒果苷在知柏配伍比例1∶1时含量最高;知母皂苷BⅡ的含量各配伍比例没有明显差异。结论:该方法快速、准确,适用于知母黄柏中4种成分的含量测定。知母与黄柏配伍比例不同,芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ的含量不同,配伍黄柏时对知母成分含量有影响。     

不同产地知母药材中芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量测定

目的:测定不同产地知母中芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量。方法:分别采用HPLC和HPLC-ELSD法测定芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量。测定芒果苷的流动相为乙腈:0.85%磷酸水溶液(12∶88),流速为1.0 mL.min-1,柱温35℃;测定知母皂苷BⅡ的流动相为乙腈:水(25∶75),流速为1.0 mL.min-1,柱温25℃,蒸发光检测器漂移管温度105℃,载气流速3.0 L.min-1。结果:不同产地知母药材中芒果苷含量为0.99%～1.68%,知母皂苷BⅡ含量为3.90%～10.25%。结论:本实验方法用以测定知母中的芒果苷和知母皂苷BⅡ含量准确、适合、重复性好,方法学考察均符合要求,可以用来控制知母药材质量。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定知母主根和须根中18种成分

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法分析知母主根和须根中螺甾皂苷类(知母皂苷AⅠ,知母皂苷AⅡ,知母皂苷AⅢ,知母皂苷Ⅲ,菝葜皂苷元),呋甾皂苷(新知母皂苷BⅡ,知母皂苷BⅡ,知母皂苷BⅢ,知母皂苷Ⅰa,知母皂苷Ⅰ,知母皂苷C,知母皂苷E),黄酮(淫羊藿次苷Ⅰ,宝藿苷Ⅰ),双苯吡酮(新芒果苷、芒果苷、异芒果苷),氢醌糖苷(β-熊果苷)5类共18种成分的方法,从而分析不同来源知母主根和须根差异性,为知母资源可持续发展提供参考。方法:取样品0.25 g用稀乙醇25 mL回流提取30 min,色谱分离采用Waters ACQUITY UPLC?BEH HILIC C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相0.1%甲酸水-乙腈,梯度洗脱,体积流量0.2 mL·min~(-1)。采用电喷雾离子源(ESI+,ESI-),多反应离子监测(MRM)进行检测,利用外标法计算知母样品中所测成分的含量,通过SMICA14.1软件对知母主根和须根样品间的差异进行分析。结果:所测成分在各自的线性范围内呈良好的线性关系,精密度、重复性、稳定性良好,加样回收率在95.22%～101.42%,RSD均4%。实验结果表明,以18种成分为主成分进行多元统计分析时,知母主根与须根有较大差异。结论:该研究为知母须根资源再利用和知母质量控制提供了实验依据。     

UPLC-MS/MS法同时测定百合知母汤中10种成分的含量

目的 建立UPLC-MS/MS法同时测定百合知母汤中菝契皂苷元、王百合苷C、知母皂苷AⅢ、芒果苷、新芒果苷、王百合苷A、王百合苷B、知母皂苷BⅢ、异芒果苷、知母皂苷BⅡ的含量。方法 分析采用Agilent Poroshell 120 EC-C₁₈色谱柱(3.0 mm×150 mm, 2.7μm);流动相水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源;正负离子扫描;多反应监测模式。结果 10种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.998 1),平均加样回收率95.65%～106.5%,RSD 1.2%～5.5%。结论 该方法准确、灵敏、快速,可用于百合知母汤的质量控制。     

HPLC-DAD-ELSD同时测定知母中黄酮和皂苷类成分的含量

建立HPLC-DAD-ELSD同时测定知母中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷AⅢ 5个黄酮及皂苷类成分含量的方法。采用Merck Purospher STAR色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸溶液(B),梯度洗脱;流速1.0 mL·min^-1;柱温35 ℃;检测波长为254 nm;ELSD检测器雾化气流速2.0 L·min^-1;漂移管温度105 ℃;进样量10 μL。该条件下5个成分的分离度良好,标准曲线在检测范围内呈良好线性。加样回收率平均值为102.0%~104.0%,RSD为0.53%~1.8%。该方法快速、准确、重复性好,为知母药材的全面质量控制奠定了基础。     

盐知母HPLC-PDA-CAD指纹图谱研究

目的:建立盐知母的HPLC-PDA-CAD指纹图谱,并测定7种主要成分含量,为科学评价和控制其质量提供可靠依据。方法:采用Thermo Hypersil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水为流动相,梯度洗脱,Corona参数:氮气压力为35 psi(约241.3 k Pa),Filter:High,Range:200 p A。结果:建立了盐知母HPLC-PDA-CAD特征指纹图谱共有模式,标定了12个电雾式检测共有指纹峰和5个紫外检测共有指纹峰,指认了知母皂苷BⅡ、知母皂苷E、知母皂苷BⅢ、知母皂苷AⅢ、新芒果苷、芒果苷和宝藿苷-1的峰位,并测定这7种成分的含量。结论:建立了盐知母HPLC-PDA-CAD指纹图谱检测方法,可为盐知母的质量控制提供依据。     

HPLC法测定生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元

目的 建立测定生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的方法.方法 分别采用HPLC-UV法和HPLC-ELSD法测定芒果苷和菝葜皂苷元.测定芒果苷的色谱条件:Kromasil柱(250 mm×4.6 mm,5μm);水-乙腈-0.85%磷酸(100:25:5)为流动相;体积流量为0.6 mL/min;柱温为30℃;检测波长为258 nm.测定菝葜皂苷元的色谱条件:Kromasil柱(250 mm× 4.6 mm,5μm);甲醇-水(95:5)为流动相;体积流量为1.0 mL/min;柱温30℃;用蒸发光散射检测器检测,漂移管温度85℃.结果 盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的量均有所升高.结论 本方法可用于生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的测定,并为其全面质量控制提供参考.     

河北不同产地知母药材中芒果苷及菝葜皂苷元的含量测定

目的:考察河北不同产地知母药材中芒果苷及菝葜皂苷元的含量。方法:分别采用HPLC法和HPLC-ELSD法测定芒果苷和菝葜皂苷元的含量。测定芒果苷以水∶乙腈∶0.85%磷酸(100∶25∶5)为流动相;流速为0.6mL/min;柱温30℃;检测波长为258nm。测定菝葜皂苷元以甲醇∶水(95∶5)为流动相;流速为1.0mL/min;柱温30℃;用蒸发光散色检测器检测,漂移管温度85℃。结果:河北不同产地知母药材中菝葜皂苷元含量为1.51%～1.73%,芒果苷含量为0.11%～0.73%。结论:本法测定知母药材中菝葜皂苷元及芒果苷含量,方法简单、快速、准确、重现性好,方法学考察符合含量测定的要求,可以用来控制知母药材质量。     

不同部位和不同产地加工方法的知母质量评价研究

目的 采用UPLC-QQQ-MS/MS法同时测定不同部位和不同产地加工方法知母Anemarrhenae Rhizoma中9个成分的含量,并比较其差异。方法 采用Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）,流动相为0.01%甲酸溶液（A）-乙腈（B）,梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,进样量2μL,柱温30℃;质谱采用电喷雾离子源、负离子模式（ESI^-）,多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）。结果 知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、知母皂苷AII、知母皂苷AIII、知母皂苷BII、知母皂苷BIII、知母皂苷E₁、知母皂苷I 9个成分在各自范围内呈良好的线性关系,加样回收率97.23%~100.76%。知母的5个不同部位中知母须根中芒果苷、异芒果苷的含量最高;知母肉中知母皂苷E₁、知母皂苷BII、知母皂苷I含量最高;知母头与知母片、知母肉成分差异较小。比较知母的不同产地加工方法,趁鲜切片新芒果苷和知母皂苷BII的含量较高,润切片芒果苷和知母皂苷AIII的含量较高。结论 知母须根具有一定的开发利用价值,知母肉具有其存在的合理性;知母产地加工,可不切去知母头,以减少工序,提高知母根茎的综合利用率;趁鲜切片可加速干燥,降低饮片霉变风险。     

基于UFLC-Triple-TOF-MS/MS技术的白虎加桂枝汤化学物质基础

目的:采用超快速高效液相色谱串联四级飞行时间质谱(UFLC-Triple-TOF-MS/MS)对白虎加桂枝汤的化学成分进行研究。方法:采用Phenomenex C_(18)色谱柱(3. 0 mm×100 mm,2. 6μm),以0. 1%甲酸乙腈溶液和0. 1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,柱温40℃,流速0. 3 m L·min~(-1),进样量5μL;采用高分辨三重四级杆飞行时间质谱,分别在正、负离子模式下进行检测;借助Peakview软件中Formula Finder功能计算化合物的元素组成,调用软件中IDA explore功能,获得该质量数的二级碎片离子,结合文献数据和对照品数据比对进行化合物结果鉴定。结果:通过精确相对分子质量的质谱裂解规律,定性白虎加桂枝汤的35个化合物,包括甾体皂苷类16个、三萜皂苷类6个、黄酮类7个、有机酸类4个和其他类2个,其中10个成分(知母皂苷AⅢ,知母皂苷Ⅰ,知母皂苷BⅢ,知母皂苷BⅡ,新芒果苷,芒果苷,芹糖甘草苷,甘草苷,甘草酸和肉桂酸)通过与对照品比对确认,并对化合物的药材来源进行归属。结论:UFLC-Triple-TOF-MS/MS可以简便、快速地对白虎加桂枝汤中化学成分进行定性。相关研究为该方的药效物质基础研究、质量控制以及作用原理阐释提供了参考。     

百合知母汤有效部位质量控制方法研究

目的:建立百合知母汤中知母黄酮类成分芒果苷、皂苷类成分知母皂苷A3,百合酚类成分咖啡酰基甘油酯、皂苷类成分麦冬皂苷D’质量控制方法.方法:采用HPLC-DAD分析方法,依利特Hypersil ODS色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5 μm),以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1 mL·min-1,检测波长芒果苷为258 nm,知母皂苷A3为191 nm,咖啡酰基甘油酯为310 nm,麦冬皂苷D’为200 nm,柱温25℃.结果:芒果苷,咖啡酰基甘油酯,知母皂苷A3,麦冬皂苷D’分别在0.228 ～ 1.14,0.072～0.576,0.069 25 ～0.554,0.1010.505 g·L-1线性关系良好;平均回收率分别为98.97％,99.32％,97.65％,96.67％.芒果苷的定量限为0.912 mg·L-1,检测限为0.456 mg·L-1;咖啡酰基甘油酯的定量限为1.44 mg·L-1,检测限为0.36 mg·L-1;知母皂苷A3的定量限为5.54 mg·L-1,检测限为1.85 mg·L-1;麦冬皂苷D’定量限为3.16 mg·L-1,检测限为1.06 mg·L-1.结论:3批样品含量测定结果表明,该方法简便、准确,可用于百合知母汤中芒果苷、咖啡酰基甘油酯、知母皂苷A3和麦冬皂苷D’的含量测定,亦可作为百合知母汤质量控制方法之一.     

UPLC-QQQ-MS/MS法同时测定不同产地知母中10种成分

目的建立UPLC-QQQ-MS/MS法同时测定知母中10种成分的含有量。方法知母50%甲醇提取物的分析采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 7μm);流动相0. 01%甲酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量0. 4 m L/min;柱温30℃。质谱采用电喷雾电离源;多反应监测;正负离子交替扫描。结果 10种成分在各自范围内线性关系良好(r>0. 999 6),平均加样回收率97. 1%~101. 3%,RSD 1. 19%~2. 59%。不同产区知母整体质量相对稳定,知母皂苷BⅡ、芒果苷、知母皂苷AⅢ可作为评价知母质量的指标成分。结论该方法简单、灵敏、准确,可用于知母的质量控制。     

HPLC-ELSD 法测定滋肾通关胶囊中2种知母皂苷类成分

目的：采用HPLC-ELSD法测定滋肾通关胶囊中知母皂苷BⅡ、AⅢ的含量,为其质量标准的建立提供依据。方法：采用KromasilC18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速为1.0mL/min,漂移管温度为115℃,载气流速为3L/min。结果：知母皂苷BⅡ和AⅢ进样量分别在0.53～21.28μg和0.54～21.36μg范围内呈良好的线性关系,精密度、重复性、稳定性的RSD均低于3%,加样回收率为103.9%和98.7%,滋肾通关胶囊中知母皂苷BⅡ和AⅢ的含量分别为0.44%和0.32%,知母药材中这两种成分的含量分别为1.19%和0.59%。结论：本研究建立了同时测定滋肾通关胶囊及知母药材中知母皂苷BⅡ和AⅢ含量的方法,为滋肾通关胶囊及知母药材质量标准的建立和完善提供了参考。     

白虎汤单煎、合煎化学成分差异研究

目的 考察白虎汤单煎、合煎化学成分差异。方法 该药物冻干粉的超高效液相色谱-四极杆-飞行时间高分辨质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)分析采用Waters UPLC BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm);流动相乙腈(含0.1%甲酸)-水(含0.1%甲酸),梯度洗脱；体积流量0.25 mL/min;柱温40℃;电喷雾离子源；负离子模式。建立化学成分数据库，采用主成分分析、正交偏最小二乘判别分析鉴定差异性成分。结果 合煎、单煎化学成分组成相同，但含量存在差异，新芒果苷、芒果苷、甘草苷、薤白苷J、异甘草苷、知母皂苷BⅡ、甘草皂苷A3、22-乙酰氧基-甘草皂苷、甘草皂苷G2、羟基甘草酸、甘草酸异构体是差异性成分。结论 该方法可用于评价白虎汤传统汤剂、配方颗粒汤剂的化学一致性，为其临床合理应用提供参考依据。     

HPLC-ELSD法同时测定知母药材中2种皂苷含量

目的:用HPLC-ELSD同时测定知母药材中2种皂苷的含量.方法:采用Kromasil C12柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水梯度洗脱,流速1 mL·min-1,柱温为30℃.蒸发光散射检测器漂移管温度50℃,蒸发温度70℃,以氮气为雾化气,压力为1.03×105Pa.结果:知母皂苷C在0.310～3.10 μg,知母皂苷AⅢ在0.323～3.23μg,进样质量的对数值与峰面积的对数值呈良好的线性关系.知母皂苷C回归方程为lgA=1.25421gM+5.734.7,r=0.9995,测定的平均回收率(n=6)98.1%,RSD2.0%;知母皂苷AⅢ回归方程为lgA=1.32841gM+5.937,r=0.9996,测定的平均回收率(n=6)97.3%,RSD1.5%.结论:建立的含量测定方法准确、快速,是控制知母药材质量较理想的方法.对我国北方主要知母产地药材中两种皂苷含量测定和比较表明不同产地野生知母质量差异较大.     

HPLC-ELSD法测定知母药材中知母皂苷BⅡ的含量

目的:建立知母药材中知母皂苷BⅡ的含量测定方法。方法:HPLC-ELSD法;C8柱(4.6×150mm,5μm),流动相:乙腈-水(25:75),流速为1.0 ml/min;检测器:蒸发光散射检测器;漂移管温度:105℃;气体流速为3.0 L/min。结果:HPLC-ELSD法测得知母皂苷BⅡ的平均回收率为96.8%,RSD为1.5%。结论:该法准确可靠,简便快速,可用于知母药材的质量控制。     

不同产地的知母中芒果苷和多糖的含量测定

目的 考察不同产地知母中芒果苷、多糖的含量.方法采用HPLC法测定不同产地知母中芒果苷的含量;采用硫酸蒽酮法测定不同产地知母中多糖的含量,色谱柱迪马C18柱 250 mm×4.6 mm.流动相为甲醇-3%醋酸溶液(45:55),流速为1.0 ml·min-1,柱温为室温.结果河北、安徽、广东知母中芒果苷的含量为0.50%～1.18%,回收率为101.54%,RSD为2.33%(n= 6);芒果苷的线性范围为1.29～7.74 μg (r=0.999 5);河北、安徽、广东知母中的多糖含量为0.52%～1.91%,回收率为99.15%,RSD为1.94%(n = 6).结论各产地知母中芒果苷及多糖含量间变异较大;以河北知母中芒果苷最高,以广东知母多糖含量最高.     

知母中4种成分及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的比较了不同产地知母中黄酮类成分、皂苷类成分的含有量及其对α-葡萄糖苷酶抑制作用,并在此基础上提出知母质量标志物。方法采用PNPG法测抑制率,UPLC法测定知母中新芒果苷、芒果苷的含有量,相关性分析筛选其药效成分。结果芒果苷、总皂苷与抑制率的相关性较大,新芒果苷与抑制率无显著相关性。结论知母药材中起α-葡萄糖苷酶抑制作用的主要成分可能为芒果苷,芒果苷可作为知母质量标志物。