烟碱预先给药对心肌缺血再灌注大鼠心功能的影响

目的 评价烟碱预先给药对心肌缺血再灌注大鼠心功能的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠60只,体重200 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=20)∶假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(IR组)和烟碱预先给药组(N组).S组丝线穿过冠状动脉前降支但不结扎；IR组采用丝线结扎左冠状动脉前降支30 min后再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注模型.N组结扎前30 min,经右颈静脉注射烟碱400μg/kg,余操作同IR组,S组和IR组右颈静脉注射等量生理盐水.各组随机取10只大鼠于缺血前(T0)、缺血30 min(T1)和再灌注30 min(T2)、120 min(T3)时经生物机能实验系统记录左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左室内压上升/下降最大变化速率(±dp/dtmax)、HR和MAP.各组其余10只大鼠于再灌注60 min时采集右颈动脉血样,采用ELISA法测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、心肌肌钙蛋白I(cTnI)和TNF-α浓度.结果 与S组比较,IR组T23时MAP和LVSP、T13时HR、LVDP和±dp/dtmax降低,血浆CK-MB活性、cTnI和TNF-α浓度升高,N组T1-2时LVDP、T1-3时HR和±dp/dtmax降低,血浆CK-MB活性、cTnI和TNF-α浓度升高(P＜0.05)；与IR组比较,N组T3时MAP、HR、LVSP、LVDP和±dp/dtmax升高,血浆CK-MB活性、cTnI和TNF-α浓度降低(P＜0.05).结论 烟碱预先给药通过激活胆碱能抗炎通路,抑制炎性反应,可显著减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,从而改善心功能.     

不同浓度神经生长因子β预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨不同浓度神经生长因子β(NGF-β)预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 健康SPF级雄性SD大鼠,8～ 10周龄,体重200 ～ 300 g,采用Langendorff装置制备离体心脏灌注模型.取模型制备成功的心脏32个,采用随机数字表法,将离体心脏随机分为4组(n=8):缺血再灌注组(I/R组)和不同浓度NGF-β组(N1组～N3组).I/R组用K-H液继续灌注30 min,停灌30 min,复灌120 min;N1组～N3组分别用含有0.1、0.2和0.4 ng/ml鼠源性NGF-β的K-H液继续灌注20 min,再用K-H液冲洗10 min,停灌30 min,复灌120 min.于平衡灌注末(T1)、停灌前即刻(T2)及再灌注5(T3)、30 (T4)、60(T5)、120 min(T6)时记录HR、左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左心室内压最大上升速率(+ dp/dtmax).于T1、T3～T6时收集冠状动脉流出液,测定CK-MB、LDH的活性;T6时取心肌组织,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,计算凋亡指数,并观察心肌病理学结果.结果 与T1时比较,各组T3～T6时LVDP、+dp/dtmax降低,LVEDP升高,LDH和CK-MB活性升高,I/R组、N2组和N3组HR降低,N1组HR升高(P＜0.05);与I/R组比较,N1组LVDP、+dp/dtmax 和HR升高,LVEDP降低,CK和LDH活性降低,凋亡指数降低,N2组HR、LVDP和+dp/dtmax 降低,CK和LDH活性升高(P＜0.05),LVEDP和凋亡指数差异无统计学意义(P＞0.05),N3组LVDP、HR和+dp/dtmax 降低,LVEDP、CK和LDH活性、凋亡指数升高(P＜0.05);与N1组比较,N2组和N3组LVDP、+dp/dtmax 和HR降低,LVEDP、CK和LDH活性、凋亡指数升高(P＜0.05);与N2组比较,N3组LVDP、+dp/dtmax 和HR降低,LVEDP、CK和LDH活性、凋亡指数升高(P＜0.05).N1组心肌病理学损伤较I/R组、N2组和N3组减轻.结论 适宜浓度的NGF-β预处理可减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤,而浓度过高则会加重损伤;NGF-β预处理心肌保护的机制与抑制心肌细胞凋亡有关.     

硫化氢后处理对大鼠心肌缺血再灌注时左心室收缩功能的影响

目的 探讨硫化氢后处理对大鼠心肌缺血再灌注时左心室收缩功能的影响.方法 实验一成年雄性SD大鼠,体重200～250 g,采用Langendorff装置建立离体心脏灌注模型.取离体灌注模型制备成功的心脏40个,随机分为5组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)和硫氢化钠1、10、100 μmol/L后处理组(SP1组、SP10组、SP100组).平衡灌注20 min后,C组继续灌注K-H液100 min;IR组灌注ST.Thomas停跳液10 ml/kg后停灌40 min,恢复K-H液灌注60 min;SP1组、SP10组、SP100组全心缺血40 min,于再灌注前灌注含1、10、100 μmol/L硫氢化钠的K-H液2 min,然后恢复K-H液灌注60 min.于平衡灌注末和再灌注60 min时,记录左室发展压(LVDP)、左心室发展压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室发展压最大下降速率(-dp/dtmax).实验二成年雄性SD大鼠,体重200～250 g,分离心肌细胞,加入培养皿中,放入95%O2-5%CO2培养箱中培养4 h.取64皿细胞,随机分为4组(n=16):对照组(C组)、缺氧复氧组(HR组)、硫化氢后处理组(SP组)和缺氧后处理组(HP组).C组继续于95%O2-5%CO2培养箱中培养2 h;HR组于95%N3-5%CO2培养箱中缺氧1 h,然后于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h;SP组于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧1 h,加入硫氢化钠10μmol/L孵育2 min,然后于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h;HP组于95%N2-5%CO2培养箱中缺氧1 h,然后复氧3 min,缺氧3 min,重复3次,再于95%O2-5%CO2培养箱中复氧1 h.测定线粒体膜电位和F-肌动蛋白的表达.结果 实验一与C组比较,再灌注60 min时IR组LVDP和±dp/dp/dtmax降低(P＜0.05),SP1组、SP10组和SP100组LVDP和±dp/dtmax差异无统计学意义(P＞0.05);与IR组比较,SP1组、SP10组和SP100组LVDP和±dp/dtmax升高(P＜0.05);SP1组、SP10组和SP100组间LVDP和±dp/dtmax比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验二与C组比较,HR组和HP组线粒体膜电位降低,HR组、SP组和HP组F-肌动蛋白表达上调(P＜0.05);与HR组比较,SP组和HP组线粒体膜电位升高,F-肌动蛋白表达上调(P＜0.05);SP组和HP组间线粒体膜电位和F-肌动蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论硫化氢后处理可改善大鼠心肌缺血再灌注时左心室收缩功能,与其稳定心肌细胞线粒体膜电位和促进F-肌动蛋白聚集有关.     

二氮嗪后处理对缺氧/复氧成年大鼠心肌细胞存活率及磷酸化糖原合成激酶-3β、Bcl-2和Bax表达的影响

目的 研究线粒体ATP-敏感性钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel,mitoKATP通道)开放剂二氮嗪(diazoxide,DZ)后处理对成年大鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)后细胞存活及对磷酸化糖原合成激酶-3β(phospho glycogen synthase kinase-3β,pGSK-3β),Bcl-2,Bax表达的影响. 方法 体外培养原代成年大鼠(30只)心肌细胞建立H/R损伤模型,按随机数字表法随机分为5组(每组6只):①Normal组:在二氧化碳(CO2)培养箱中持续培养6h组;②H/R组:缺氧3h复氧3h组;③DZ组:缺氧3h复氧3h,复氧5 min时给予100 μmol/L DZ组;④DZ+5-HD组:缺氧3h复氧3h,缺氧末给予100 μmol/L 5-羟葵酸盐(5-hydroxydecanoate,5-HD),复氧5 min时给予100μmol/L DZ组;⑤5-HD组:缺氧3h复氧3h,缺氧末给予100 μmol/L 5-HD组.复氧3h末通过计数细胞长杆率测定存活率,免疫印迹法测定心肌细胞内pGSK4β,Bcl-2和Bax的表达. 结果 复氧3h末,Normal组单个心肌细胞收缩幅度为(13.12±0.19)％,与Normal组比较,其他各组单个心肌细胞收缩幅度明显降低[H/R组为(7.97±0.22)％,DZ组为(10.48±0.20)％,DZ+5-HD组为(7.97±0.19)％,5-HD组为(8.22±0.22)％](P＞0.05),心肌细胞内Bcl-2表达水平降低,Bax表达水平升高(P＜0.05).DZ后处理组心肌细胞存活率为(64±5)％,与H/R组比较明显增高(P＜0.05),心肌细胞内Bcl-2、pGSK4β表达水平升高,Bax表达水平降低,而缺氧末即刻给予5-HD可以逆转DZ后处理的这些作用(P＜0.05);5-HD组与H/R组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 DZ后处理可能通过激活mitoKATP通道、上调pGSK-3β及Bcl-2,下调Bax的表达增加H/R后成年大鼠心肌细胞的存活.     

七氟醚预处理对大鼠心肌缺血再灌注时缝隙连接蛋白43的影响

目的 评价七氟醚预处理对大鼠心肌缺血再灌注时缝隙连接蛋白43的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠,体重220 ～ 250 g,采用改良Langendorff灌注装置制备离体心脏灌注模型.取离体心脏模型16个,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=8):缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚预处理组(SP组).平衡灌注30 min时,I/R组继续灌注K-H液20 min;SP组将2.4％七氟醚持续吹入K-H液中,用预充2.4％七氟醚的K-H液持续灌注15 min,然后用K-H液洗脱5 min.之后两组均行全心缺血40 min,再灌注60 min.分别于平衡灌注末、缺血前即刻、再灌注30和60 min时,记录HR、左室发展压(LVDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)及左心室内压最大下降速率(- dp/dtmax).于再灌注60 min时,取部分心尖组织,观察心肌病理学改变;取左室部分心肌,观察缝隙连接蛋白43的分布情况,测定缝隙连接蛋白43的表达.结果 与平衡灌注末比较,I/R组和SP组缺血前即刻+ dp/dtmax和- dp/dtmax降低,再灌注30和60 min时HR、LVDP、+dp/dtmax和- dp/dtmax降低(P＜0.01);与缺血前即刻比较,I/R组和SP组再灌注30和60 min时HR、LVDP、+dp/dtmax和- dp/dtmax降低(P ＜0.05或0.01);与I/R组比较,SP组缺血前即刻HR、LVDP、+dp/dtmax和- dp/dtmax降低,再灌注30和60 min时HR、LVDP、+dp/dtmax和- dp/dtmax升高(P＜0.01),病理学损伤减轻.缝隙连接蛋白43 I/R组分布不均,闰盘处少见;SP组分布规律呈条带状,主要位于闰盘处.两组缝隙连接蛋白43表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制可能与抑制缝隙连接蛋白43的再分布有关,而与缝隙连接蛋白43的表达无关.     

二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时NF-κB mRNA和fractalkine mRNA表达的影响

目的 探讨二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时NF-κB mRNA和fractalkine(FKN)mRNA表达的影响.方法 培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,以1×106个/ml的密度接种于96孔板(100μl/孔)或培养皿(2 ml/皿),随机分为4组(n=24).正常对照组(C组)不作任何处理,缺氧复氧组(H/R组)、二氮嗪预先给药组(DZ组)、二氮嗪预先给药+线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-羟葵酸组(DZ+5-HD组)均进行缺氧2 h、复氧2 h.DZ组和DZ+5-HD组在缺氧前2 h分别加入100 μmol/L二氮嗪、100 μmol/L二氮嗪+100μmol/L 5-羟葵酸.于复氧2 h时测定细胞活力、细胞凋亡率、NF-κB mRNA和FKN mRNA表达水平.结果 与C组比较,H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和FKN mRNA表达上调(P＜0.01);与H/R组比较,DZ组细胞活力升高,细胞凋亡率降低,NF-κB mRNA和FKN mRNA表达下调(P＜0.05);5-羟葵酸可抑制二氮嗪预先给药导致的上述改变(P＜0.05).结论 二氮嗪预先给药可下调NF-κB和FKN表达,从而减轻大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤,其机制与激活线粒体ATP敏感性钾通道有关.     

二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时PI3K mRNA和Akt mRNA表达的影响

目的 评价二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K) mRNA和蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt) mRNA表达的影响.方法 培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,以1×106个/ml密度接种于96孔培养板(100μl/孔)或培养皿(2 ml/皿),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=25).正常对照组(C组)不作任何处理;缺氧复氧组(H/R组)、二氮嗪预先给药组(DZ组)、二氮嗪预先给药+线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-羟葵酸组(DZ+ 5-HD组)均进行缺氧2h,复氧2h.DZ组和DZ+ 5-HD组在缺氧前2h分别加入100 μmol/L二氮嗪、100μnol/L二氮嗪+ 100 μmol/L 5-羟葵酸.于复氧2h时测定细胞活力、细胞凋亡率、PI3K mRNA和Akt mRNA表达.结果 与C组比较,H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,PI3K mRNA和Akt mRNA表达上调(P＜0.05或0.01);与H/R组比较,DZ组细胞活力升高,细胞凋亡率降低,PI3K mRNA和Akt mRNA表达上调(P ＜0.05或0.01);5-羟葵酸可逆转二氮嗪预先给药导致的上述改变(P＜0.05或0.01).结论 二氮嗪预先给药减轻大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制与激活线粒体ATP敏感性钾通道,促进PI3K和Akt基因的转录有关.     

大鼠离体心脏心肌胰岛素抵抗实验模型的建立

目的建立大鼠离体心脏缺血再灌注实验模型并明确其诱导心肌胰岛素抵抗的效果。方法 12只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠由贵州医科大学实验动物中心提供, 按随机数字表法分为两组, 正常对照(NC)组(6例)离体心脏持续灌注60 min, 缺血再灌注(I/R)组(6例)全心缺血30 min, 再灌注30 min, 记录心功能指标, 检测肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)含量, 苏木精-伊红染色观察心肌组织细胞形态, 蛋白质免疫印迹和组织免疫荧光检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达和转位情况。组间比较用独立样本t检验。结果 I/R组心功能指标[左心室发展压(LVDP)(50.8±5.5) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)(2 566.6±358.6) mmHg/s、左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax)(1 172.6±121.2) mmHg/s]明显低于NC组[LVDP(79.9±4.0) mmHg、+dp/dtmax(3 587.8±334.5) mmHg/s、-dp/dtmax(2 ...     

氯高铁血红素预先给药对感染性休克大鼠心肌损伤的影响

目的 探讨氯高铁血红素预先给药对感染性休克大鼠心肌损伤的影响.方法 健康清洁级SD大鼠20只,雌雄不拘,2～2.5月龄,体重160～185 g,随机分为2组(n=10),感染性休克组(S组)单次腹腔注射0.9%NaCl溶液1 ml,氯高铁血红素预先给药组(H组)单次腹腔注射氯高铁血红素100 mg/kg(1 ml).2组均于给药后24 h采用静脉注射脂多糖(LPS)10 mg/kg(0.5 ml)制备感染性休克模型.于静脉注射LPS前、注射LPS后30、60和90 min时,记录左心室收缩压(LVSP)和左心室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax).于静脉注射LPS后6 h经颈总动脉采集血标本,放血处死大鼠,取左心室心肌组织,测定血浆乳酸脱氢酶(DH)和肌酸激酶(CK)活性、全血一氧化碳血红蛋白(COHb)浓度及心肌血红素氧合酶(HO)-1 mRNA、HO-2 mRNA及其蛋白的表达.结果 与S组比较,H组静脉注射LPS前LVSP和±dp/dtmax差异无统计学意义(P＞0.05);注射LPS后各时点LVSP和±dp/dtmax升高,血浆LDH和CK活性降低,全血COHb浓度升高,心肌HO-1 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05),HO-2mRNA及其蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 氯高铁血红素100 mg/kg预先给药可通过诱导HO-1生成减轻感染性休克大鼠心肌损伤.     

心肌细胞缝隙连接蛋白43在线粒体敏感性钾通道介导七氟醚预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注中的作用

目的 评价心肌细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)在线粒体敏感性钾(mito-KATP)通道介导七氟醚预处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠40只,体重200～250 g,采用Langendorff灌注模型进行离体心脏灌注.采用随机数字表法,将心脏随机分为5组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚预处理组(S组)、七氟醚预处理+5-羟葵酸(5-HD)组(SH组)和5-HD组(H组).采用结扎左冠状动脉前降支(LAD) 30 min,恢复灌注120 min的方法制备心脏缺血再灌注模型.各组平衡灌注10 min;然后C组持续灌注,仅于LAD下穿线而不结扎;I/R组继续灌注30 min后结扎LAD;S组、S+H组和H组结扎LAD前30 min时分别用3％七氟醚预先饱和的K-H液、3％七氟醚预先饱和的K-H液+100 μmol/L 5-HD和K-H液+100 μmol/L 5-HD灌注15 min,然后用K-H液冲洗15 min.分别于给药前(T0)、给药结束即刻(T1)、缺血前即刻(T2)、缺血30 min(T3)和再灌注120 min(T4)时,记录HR、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)、左心室最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室最大下降速率(- dp/dtmax).再灌注结束后,取左心室心肌组织,测定心肌梗死体积,采用免疫组化法测定心肌细胞Cx43表达,采用Western Blot法测定心肌细胞Cx43和磷酸化Cx43(p-Cx43)表达.结果 与C组比较,I/R组、S+H组和H组HR、LVSP、+dp/dtmax和- dp/dtmax降低,LVDP升高,心肌细胞Cx43和p-Cx43表达下调(P＜0.05).与I/R组比较,S组HR、LVSP、+dp/dtmax和- dp/dtmax升高,LVDP和心肌梗死体积降低,心肌细胞Cx43和p-Cx43表达上调(P＜0.05),S+H组和H组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚预处理可能通过开放mito-KATP通道,促进心肌细胞Cx43磷酸化,减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤.     

异丙酚预先给药对BV-2细胞缺氧复氧时TLR4表达的影响

目的 评价异丙酚对BV-2细胞缺氧复氧时Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 小鼠小胶质细胞(BV-2细胞)于6孔培养板中培养4～6 d后随机分为4组(n=4),正常对照组(C组)不给予任何处理;缺氧复氧组(A/R组)缺氧3 h、复氧12 h;缺氧复氧+25μmol/L异丙酚组(P25组)和缺氧复氧+100μmol/L异丙酚组(P100组)于缺氧前30 min加入异丙酚,终浓度分别为25、100μmol/L.于复氧12 h时收集细胞,测定TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和TLR4蛋白水平;收集细胞上清液,测定TNF-α水平.结果 与C组比较,A/R组、P25组和P100组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、TLR4蛋白和TNF-α水平均升高(P<0.01);与MR组比较,P25组和P100组TLR4 mRNA、NF-κB mBNA、TLB4蛋白和TNF-α水平均下降(P<0.01);与P25组比较,P100组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、TLR4蛋白和TNF-α水平均降低(P<0.01).结论 异丙酚25、100 μmol/L预先给药可抑制BV-2细胞缺氧复氧时TLR4 mRNA表达上调.     

二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时缺氧诱导因子-1α mRNA和p53mRNA表达的影响

目的 探讨二氮嚓预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA和p53 mRNA表达的影响.方法 培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,以1×106/ml的密度接种于96孔板(100μl/孔)或培养皿(2 ml/皿),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=24):正常对照组(C组)不作任何处理,缺氧复氧组(H/R组)、二氮嗪预先给药组(DZ组)、二氮嗪预先给药+线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-羟葵酸组(DZ+5-HD组)均进行缺氧2 h复氧2 h.DZ组和DZ+5-HD组在缺氧前2 h分别加入100μmol/L二氮嗪、100μmol/L二氮嗪+100μmol/L 5-羟葵酸.于复氧2h时测定细胞活力、细胞凋亡率、HIF-1α mRNA和p53 mRNA表达水平.结果 与C组比较,H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,HIF-1αmRNA和p53 mRNA表达上调(P＜0.01);与H/R组比较,DZ组细胞活力升高,细胞凋亡率降低,HIF-1αmRNA表达上调,p53 mRNA表达下调(P＜0.05或0.01);5-羟葵酸可抑制二氮嗪预先给药导致的上述改变(P＜0.05).结论 二氮嗪预先给药可上调HIF-1和下调p53表达,从而减轻大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤,其机制与激活线粒体ATP敏感性钾通道有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of diazoxide pretreatment on the expression of hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) mRNA and p53 mRNA in rat myocardial microvascular endothelial cells exposed to hypoxia-reoxygenation (H/R).Methods The SD rat myocardial microvascular endothelial cells were cultured. The cells were seeded in 96-well plates ( 100 μl/hole) or in 6 cm diameter dishes (2 ml/dish) with the density of 1 ×106/ml and randomly divided into 4 groups ( n = 24 each): normal control group (group C), H/R group, H/R +diazoxide pretreatment group (group DZ) and H/R + diazoxide pretreatment + mitochondrial ATP-sensitive potassium channel blocker 5-hydroxydecanoate (5-HD) group (group DZ + 5-HD). The cells were exposed to 2 h hypoxia followed by 2 h reoxygenation. Diazoxide 100 μmol/L and diazoxide 100 μmol/L + 5-HD 100 μmol/L were added to the culture medium 2 h before hypoxia in DZ and DZ + 5-HD groups respectively. The cell vitality, apoptotic rate and expression of HIF-1α mRNA and p53 mRNA were detected at the end of reoxygenation. Results Compared with group C, the cell vitality was significantly decreased, apoptotic rate increased and the expression of HIF- 1α mRNA and p53 mRNA up-regulated in H/R group ( P ＜ 0.01). Compared with group H/R, the cell vitality was significantly increased, apoptotic rate decreased, the expression of HIF-1α mRNA up-regulated and the expression of p53 mRNA down-regulated in group DZ ( P ＜ 0.05 or 0.01 ). 5-HD could inhibit diazoxide pretreatment-induced changes mentioned above (P ＜ 0.05 ). Conclusion Diazoxide pretreatment can reduce H/R injury in rat myocardial microvascular endothelial cells through up-regulating the expression of HIF-1α and down-regulating the expression of p53, and the mechanism is related to activation of mitochondrial ATP-sensitive potassium channels.     

不同剂量左旋甲状腺素钠预处理对幼龄大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 评价不同剂量左旋甲状腺素钠预处理对幼龄大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雌性 Wistar大鼠48只,日龄35 d,体重120～140 g,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和不同剂量左旋甲状腺素钠预处理组(LS1-4组).C组和I/R组大鼠采用普通饲料喂养7 d;LS1-4组大鼠除了采用普通饲料喂养之外,每天胃内灌注左旋甲状腺素钠10、20、40和80 μg/100 g.第8天时,抽取外周静脉血样,测定血清甲状腺激素水平.采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型.C组K-H液持续灌注80 min;其余各组K-H液平衡灌注30 min,然后全心缺血20 min,恢复灌注30 min.于平衡灌注20 min和再灌注30 min时,记录HR、SP、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室内压最大下降速率(-dp/dtmax),计算再灌注30min时HR、SP、+dp/dtmax和-dp/dtmax的恢复率.于平衡灌注10 min和再灌注15 min时,收集冠状动脉流出液2 ml,测定CK-MB的活性.再灌注30 min时,取心室肌组织,采用Western blot法检测心肌热休克蛋白70(HSPT0)的表达,采用RT-PCR法测定甲状腺激素受体(TR)亚型(TRα1、TRα2和TRβ1)mRNA以及肌球蛋白重链α和β(MHCα和MHCβ)mRNA的表达.结果 与C组相比,I/R组HR、SP和±dp/dtmax的恢复率降低,冠脉流出液CK-MB活性升高,心肌MHCα mRNA表达下调,LS1-4组SP和±dp/dtmax的恢复率降低,冠脉流出液CK-MB活性升高,心肌HSP70和MHCα mRNA表达上调,LS2-4组血清甲状腺激素水平升高,心肌TRα1 mRNA表达上调(P＜0.05).与I/R组相比,LS1-4组HR和±dp/dtmax的恢复率升高,心肌HSP70表达上调,MHCa mRNA表达上调,MHCβ mRNA表达下调,LS1-3组冠脉流出液CK-MB活性降低,LS2-4组血清甲状腺激素水平升高,心肌TRα1 mRNA表达上调(P＜0.05).LS1组、LS2组、LS3组和LS4组的甲状腺激素血清水平随左旋甲状腺素钠剂量的增加逐渐升高(P＜0.05).与LS1组和LS2组相比,LS3组和LS4组冠脉流出液CK-MB活性升高,心肌HSP70表达下调(P＜0.05).结论 10 μg/100 g左旋甲状腺素钠胃内灌注预处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,且不会导致甲状腺激素水平升高,其机制可能与心肌HSP70和MHCα mRNA表达上调有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of preconditioning with different doses of levothyroxine sodium on myocardial ischemia-reperfusion (I/R) injury in immature rats. Methods Forty-eight female immature Wistar rats, aged 35 days, weighing 120-140 g, were randomly allocated into 6 groups ( n = 8 each): control group (group C), I/R group, and preconditioning with levothyroxine sodium 10, 20, 40 and 80 μg/100 g groups (groups LS1-4 ) . The rats received levothyroxine sodium 10, 20, 40 and 80 μg/100 g through a gastric tube every day for 7 days in groups LS1-4 , respectively. Venous blood samples were taken on 8th day for determination of serum thyroid hormone levels. The hearts were removed from the animals and perfused in a Langendorff apparatus with K-H solution saturated with 95% O2-5% CO2 at 37 ℃. The hearts were continuously perfused for 80 min in group C. After 30 min of equilibration, the isolated hearts were subjected to 20 min of ischemia followed by 30 min of reperfusion in I/R and LS1-4 groups. HR, SP and ± dp/dtmax were recorded at 20 min of perfusion and 30 min of reperfusion. The recovery rates of HR, SP and ± dp/dtmax were calculated at 30 min of reperfusion. The coronary effluent was collected at 10 min of perfusion and 15 min of reperfusion for determination of creatine kinase (CKMB) activity. The samples of ventricular myocardial tissues were taken at 30 min of reperfusion to detect the expression of heat shock protein 70 (HSP70), thyroid hormone receptor (TR) mRNA (TRa, , TRoj and TRft ) and myosin heavy chain (MHC) mRNA. Results Compared with group C, the recovery rates of HR, SP and. ± dp/dtmax were significantly decreased, the CK-MB activity was significantly increased, and MHCα mRNA expression was down-regulated in group I/R, the recovery rates of SP and ± dp/dtmax were significantly decreased, the CK-MB activity was significantly increased, and the expression of HSP70 and MHCα mRNA was up-regulated in groups LS1-4, and the serum thyroid hormone level was significantly increased and the expression of TRa, mRNA was up-regulated in groups LS2-4 ( P ＜ 0.05) . Compared with group I/R, the recovery rates of HR and ± dp/dtmax were significantly increased, the pression of HSP70 and MHCa mRNA was up-regulated, and the MHCJ3 mRNA expression was down-regulated in groups LS1-4 the CK-MB activity was significantly decreased in groups LS1-3, and the serum thyroid hormone level was significantly increased and the expression of TRα1, mRNA was up-regulated in groups LS2-4 ( P ＜ 0.05) . The serum thyroid hormone level increased gradually with the increase in the dose of levothyroxine sodium in groups LS1-4 ( P ＜ 0.05) . The CK-MB activity was significantly higher, while the HSP70 expression lower in groups LS3-4 than in groups LS1-2 (P ＜ 0.05). Conclusion Preconditioning with levothyroxine sodium 10 μg/100 g can alleviate the myocardial I/R injury in immature rats and does not lead to the increase in the level of thyroid hormone, and the up-regulation of HSP70 and MHCa mRNA expression may be involved in the mechanism.     

异丙酚预先给药对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨异丙酚预先给药对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠84只,体重230～280 g,随机分为7组(n=12),假手术组(Ⅰ组);Ⅱ组采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min制备心肌缺血再灌注模型;糖尿病大鼠假手术组(Ⅲ组)采用腹腔注射链脲左菌素(STZ)55 mg/kg制备糖尿病模型;糖尿病大鼠心肌缺血再灌注组(Ⅳ组)腹腔注射STZ 3周后制备心肌缺血再灌注模型;Ⅴ组、Ⅵ组和Ⅶ组糖尿病大鼠分别于缺血前10 min至再灌注120 min时静脉输注异丙酚3、6、12 mg·kg-1·h-1.记录再灌注120 min时心率(HR)、左心室收缩峰压、左心室舒张末压(LVDEP)及左心室内压上升,下降最大速率(±dp/dtmax),计算左心室发展压(LVDP);测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、心肌线粒体肿胀度、总ATP酶和谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;透射电镜观察心肌组织超微结构.结果 与Ⅲ组比较,Ⅳ组HR、LVDP和±dp/dtmax、心肌组织SOD活性、线粒体总ATP酶及GSH-Px活性降低,LVEDP、血清LDH、CK-MB活性、心肌组织MDA含量及线粒体肿胀度升高(P<0.05或0.01);与Ⅳ组比较,Ⅵ组和Ⅶ组HR、LVDP和±dp/dtmax、心肌组织SOD活性、线粒体总ATP酶及GSH-Px活性升高,LVEDP、血清LDH、CK-MB活性、心肌组织MDA含量和线粒体肿胀度降低,Ⅴ组+dp/dtmax及线粒体总ATP酶活性升高,血清CK-MB活性降低(P<0.05).Ⅵ组和Ⅷ组心肌组织超微结构损伤减轻.结论 异丙酚6、12 mg·kg-1·h-1预先给药可减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤,可能与其抑制心肌组织脂质过氧化反应,改善心肌细胞线粒体膜通透性有关.     

PI3K/Akt信号通路在异丙酚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在异丙酚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 体外培养SD乳鼠心肌细胞,接种于96孔板(细胞密度1×105/ml,200 μl/孔)或6孔板(细胞密度5×105/ml,2 ml/孔)中,采用随机数字表法,将细胞随机分为4组(n=24):常规培养组(C组)细胞常规培养6h;缺氧复氧组(H/R组)细胞行缺氧2h,复氧4h;缺氧复氧+异丙酚组(H/R+P组)于缺氧结束时行异丙酚(终浓度50 μmol/L)后处理;H/R+异丙酚+ PI3K抑制剂组(H/R+ P+W组)于缺氧结束时加入PI3K抑制剂渥曼青霉素(终浓度100nmol/L)和异丙酚(终浓度为50μmol/L).复氧结束时,采用MTT法测定细胞活力,应用生化自动分析仪测定培养液LDH活性;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot法检测心肌细胞磷酸化Akt(p-Akt)、Bcl-2及Bax表达水平.结果 与C组相比,H/R组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡率升高,p-Akt和Bax表达上调,Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax降低(P＜0.05).与H/R组比较,H/R+P组细胞活力升高,LDH活性和细胞凋亡率降低,p-Akt和Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax升高(P＜0.05).与H/R+P组比较,H/R+ P+W组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡率升高,p-Akt和Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax降低(P＜0.05).结论 异丙酚后处理减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的机制与激活PI3K/Akt信号通路有关.     

复氧方式对慢性缺氧幼年大鼠肺组织TNF-α、IL-1β和IL-10 mRNA表达的影响

目的观察不同复氧方式对慢性缺氧幼年大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-10(IL-10)mRNA的表达的影响。方法5周龄雄性SD大鼠54只,随机均分为三组Ⅰ和Ⅱ组大鼠分别在常压低氧(FiO2=10%)下持续缺氧2周后快速纯氧或21%O2复氧3h;Ⅲ组大鼠行间断缺氧(慢性缺氧同Ⅰ组,但每天暴露于空气中1h)2周后快速纯氧复氧3h。各组大鼠分别于复氧后0、1、3h留取肺组织标本。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织TNF-α、IL-1β、IL-10mRNA表达水平,光镜下观察肺组织病理改变。结果与复氧前相比,Ⅰ组大鼠肺组织TNF-α、IL-1βmRNA在复氧1、3h明显升高(P<0.01),IL-10mRNA表达在复氧3h后明显升高(P<0.01)。Ⅱ、Ⅲ组大鼠肺组织复氧1、3hTNF-α、IL-1βmRNA的表达和复氧3hIL-10mRNA表达均明显低于Ⅰ组(P<0.01)。肺组织病理检查见Ⅱ、Ⅲ组大鼠的肺损伤均较Ⅰ组明显减轻。结论慢性缺氧幼鼠肺组织复氧损伤早期存在炎症介质/抗炎介质失衡,21%O2复氧及复氧前间断吸入21%O2可明显减少复氧后炎性因子的表达和减轻复氧引起的肺损伤。     

川芎嗪预先给药对胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时c-fos和HSP70表达的影响

目的 探讨川芎嗪预先给药对胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时c-fos和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 胎鼠海马神经细胞培养鉴定后,随机分为5组(n=24):正常对照组(C组)、缺氧/复氧损伤组(A/R组)、不同浓度川芎嗪预先给药组(L组、M组和H组).C组不制备缺氧/复氧模型;A/R组、L组、M组和H组制备缺氧/复氧模型;L组、M组和H组加入川芎嗪,终浓度分别为60、200和800μg/ml,孵育1 h后制备缺氧/复氧模型.缺氧/复氧模型制备方法:海马神经细胞置入90%N2-10%CO2培养箱中孵育2 h诱导缺氧,然后放入37 ℃、5%CO2培养箱中复氧24 h.处理结束后测定海马神经细胞凋率、细胞活力、c-fos和HSP70的表达水平.结果 与C组比较,A/R组、L组和H组海马神经细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P＜0.01);与A/R组比较,L组、M组和H组海马神经细胞活力升高,细胞凋亡率降低,c-fos表达下调,HSP70表达上调(P＜0.05);与L组比较,M组和H组海马神经细胞活力升高,细胞凋亡率降低,c-fos表达下调,HSP70表达上调(P＜0.05);与M组比较,H组细胞活力下降,细胞凋亡率升高,c-fos表达上调,HSP70表达下调(P＜0.01).结论川芎嗪预先给药抑制胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时细胞凋亡的机制可能与下调c-fos表达,上调HSP70表达有关.     

托烷司琼对缺氧复氧心肌细胞焦亡的影响：与α7nAchR的关系

目的评价托烷司琼对缺氧复氧心肌细胞焦亡的影响及其与α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)的关系。方法正常培养的H9C2心肌细胞,采用随机数字表法分成4组(n=6):对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)、托烷司琼+缺氧复氧组(Tro+H/R组)和α7nAchR拮抗剂MLA+托烷司琼+缺氧复氧组(MLA+Tro+H/R组)。除C组外,其余3组均采用缺氧12 h,复氧6 h的方法制备心肌细胞缺氧复氧模型。Tro+H/R组缺氧前1 h时加入托烷司琼,终浓度10 nmol/L;MLA+Tro+H/R组缺氧前2 h时加入MLA,1 h后加入托烷司琼,终浓度均为10 nmol/L。于复氧6 h时,采用荧光免疫双染caspase-1-AlexaFluor 488/DAPI法确定心肌细胞焦亡率,ELISA法检测上清液IL-1β和IL-18浓度,2,4二硝基苯肼显色法检测上清液LDH活性,Western blot法检测心肌细胞α7nAchR、NOD样受体蛋白-3(NLRP3)和caspase-1表达。结果与C组比较,H/R组细胞焦亡率、上清液LDH活性、IL-1β和IL-18浓度升高,NLRP3和ca...     

TLR4介导大鼠肾脏缺氧复氧炎症反应依赖于MyD88

目的：探讨MyD88是否参与了TLR介导大鼠肾脏缺氧复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）引起的炎症反应.方法：体外分离获得Wistar大鼠原代肾小管上皮细胞（proximal tubule epithelial cells,PTECs）,建立H/R模型.采用TLR4siRNA干扰PTECs,检测白细胞介素8（interleukin-8,IL-8）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）的表达.之后,加入髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,MyD88）的抑制剂ST2825后,检测IL-8和TNF-α的表达.结果：TLR4表达沉默后,IL-8、TNF-α和MyD88的表达均显著下降（P〈0.05）;加入ST2825后,IL-8、TNF-α和MyD88的表达均显著下降（P〈0.05）,且抑制MyD88活性后显著降低细胞的凋亡水平（P〈0.05）.结论：MyD88参与了TLR4介导的大鼠肾脏缺氧复氧引起的炎症反应.     

大鼠烧伤后早期心肌组织核因子κB活化对细胞因子表达及心肌功能的影响

目的观察核因子(NF)κB活化在大鼠烧伤后早期心肌组织表达肿瘤坏死因子(TNF)α及心肌功能损害中的作用,进一步阐明烧伤后早期心肌功能损害的发生机制。方法将170只Wistar大鼠随机分为对照组(20只)、烧伤组(90只)、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组(60只)。后两组大鼠均于背部造成35％TBSAⅢ度烧伤后,立即腹腔注射等渗盐水,且PDTC组同时皮下注射PDTC 250 mg／kg。对照组除不烧伤外,其余处理同烧伤组。伤后3、6、12、24 h采用八导生理记录仪记录左心室收缩压(LVSP),左心室舒张末期压(LVEDP),室内压最大上升、下降速率( dp／dtmax、-dp／dtmax);逆转录聚合酶链反应和原位杂交法观察心肌组织TNF-αmRNA的表达。伤后1、3、6、12、24 h采用凝胶电泳迁移率变动分析法检测心肌组织NF-κB活性,以积分吸光度(A)值表示。对照组作相同检测。结果伤后3～24 h烧伤组大鼠LVSP、±dp／dtmax低于对照组(P<0．01),而LVEDP高于对照组(P<0．01)。伤后3 h烧伤组大鼠心肌组织TNF-αmRNA表达明显高于对照组, 6 h达峰值(P<0．01),它在心肌细胞中表达尤为明显。伤后1 h烧伤组大鼠心肌组织NF-κB活性迅速升高[积分A值为(20．3±3．4)×104],明显高于对照组积分A值(2．2±0．4)×104,3 h时达峰值,24 h时仍高于对照组(P<0．01)。与烧伤组比较,PDTC组上述指标有较明显的改善(P< 0．01)。结论大鼠严重烧伤后心肌组织NF-κB被活化,使其表达和释放促炎细胞因子,在心肌功能损害发生过程中起重要作用。