涎腺腺样囊性癌间质成分的电镜组织化学及免疫组…

采用Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白的免疫组织化学技术研究２２例涎腺腺样囊性癌，同时采用电镜组织化学技术研究４例筛孔型腺样囊性癌。结果表明，腺样囊性癌筛状结构中分布有复层基板，蛋白多糖和胶原原纤维。免疫组化显示，筛孔中的间质成分富含Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白。     

生存素小干扰RNA对人腺样囊性癌ACC-2细胞移植瘤体生长的抑制作用

目的观察生存素（Survivin）小干扰RNA（siRNA）在体内是否能抑制腺样囊性癌移植瘤体的生长。方法裸鼠体内注射稳定转染靶向Survivin基因的shRNA真核表达载体pGenesil-shRNA-Survivin后的人腺样囊性癌细胞株ACC-2,观察移植肿瘤生长情况,以空白对照组及阴性质粒对照组作为对照。处死裸鼠后测量移植瘤体积;采用苏木精-伊红染色病理证实移植瘤后,免疫组织化学法检测移植瘤的Survivin蛋白表达情况,半定量RT-PCR检测Survivin mRNA表达情况。结果处死裸鼠后测量移植瘤体积表明,pGenesil-shRNA-Survivin组移植瘤体积明显减小;其Survivin mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论siRNA能在体内明显抑制腺样囊性癌Survivin的表达,Survivin siRNA能有效抑制腺样囊性癌裸鼠体内移植瘤的生长。     

裸鼠体内人腺样囊性癌细胞凋亡的研究

目的　在人涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma,SACC)裸鼠移植瘤模型上 ,观察重组人肿瘤坏死因子α(recombinedhumantumornecrosisfactor α ,rhTNF α)诱导凋亡的形态学特征及bax、bcl 2蛋白的表达情况。方法　将 6× 10 10 /L的SACC细胞悬液接种于裸鼠皮下建立动物模型后 ,按rhTNF α 10 0× 10 4IU /kg或 10× 10 4IU /kg瘤体内直接注射给药。采用光镜、电镜、流式细胞术及原位凋亡试剂检测盒观察凋亡的形态学变化 ;采用免疫组织化学观察bax、bcl 2的表达情况。结果　移植瘤细胞凋亡率明显高于对照组 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。凋亡细胞核消失后出现钙盐沉积 ,形成砂粒小体。凋亡细胞对bax、bcl 2蛋白的表达明显上升 (P <0 .0 5 )。结论　砂粒体钙化是TNF α诱导的SACC裸鼠移植瘤细胞凋亡的特征和归宿 ;TNF α诱导的细胞凋亡能够特异性增强bax、bcl 2基因蛋白的表达     

涎腺疾病

腮腺肿瘤手术中冰冻活检的意义；腮腺多形性腺瘤113例临床分析；抑癌基因PTEN、p27及Ki-67在涎腺黏液表皮样癌中的表达；人涎腺腺样囊性癌神经侵袭动物模型的建立；内镜辅助诊断慢性阻塞性腮腺炎的临床应用；腮腺淋巴结炎继发化脓性腮腺炎的CT及声像图特点；微血管密度和涎腺腺样囊性癌远处转移及预后的关系；     

涎腺腺样囊性癌组织中层粘连蛋白及血管内皮生长因子表达的研究

目的 :探讨涎腺腺样囊性癌层粘连蛋白 (LN)与血管内皮生长因子 (VEGF)表达的意义。方法 :采用免疫组织化学SP法检测 3 4例涎腺腺样囊性癌LN和VEGF的表达。结果 :LN表达与病理分型、淋巴结转移有关 ,与临床分期、发病部位、肿瘤大小无关 ;VEGF表达与病理分型、淋巴结转移、临床分期有关 ,与发病部位、肿瘤大小无关。结论 :LN和VEGF的表达可作为判断涎腺腺样囊性癌生物学行为的指标。     

中期因子在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及意义

目的探讨中期因子(midkine,MK)在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其与发生嗜神经侵袭的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测35例涎腺腺样囊性癌组织和20例正常涎腺组织中MK蛋白的表达情况,并分析其与嗜神经侵袭的关系。结果 MK在涎腺腺样囊性癌组织中高表达,阳性表达率为82.9%(29/35),在正常涎腺组织中低表达,阳性表达率为10.0%(2/20),二者间差异有统计学意义(P<0.01);MK的表达与患者的年龄、性别以及病理分型无关(P>0.05);与肿瘤是否发生嗜神经侵袭有关(P<0.05)。结论 MK蛋白可能参与涎腺腺样囊性癌的发生,其表达水平的升高可能与涎腺腺样囊性癌发生嗜神经侵袭有关。     

涎腺腺样囊性癌神经内分泌性探讨

目的 探讨涎腺腺样囊性癌具有神经内分泌性的可能性,方法 采用神经内分泌细胞及肿瘤细胞所特有及相关的抗体Ｓ－１００蛋白,神经特异性烯醇酶,嗜铬素Ａ和突触素４种标记物对其在该肿瘤的表达进行免疫组织化学研究。结果 ５０例涎腺腺样囊癌中Ｓ－１００蛋白阳性表达４２例（８４％）神经特异性烯醇酶阳性表达３２例（６４％）。嗜铬素Ａ阳性表达８例（１６％）,突触素阳性表达７例（１４％）,结论：涎腺腺样囊性癌部分细胞具     

2489例涎腺上皮性肿瘤临床病理分析

目的:了解涎腺上皮性肿瘤的临床病理特点。方法:对2489例涎腺上皮性肿瘤临床病理资料进行统计分析。结果:涎腺恶性上皮性肿瘤840例,腺样囊性癌、黏液表皮样癌、癌在多形性腺瘤中居其前3位;涎腺良性上皮性肿瘤1649例,多形性腺瘤、Warthin瘤、基底细胞腺瘤居其前3位。涎腺恶性、良性上皮性肿瘤男女之比为1.13∶1和0.99∶1;平均发病年龄47.86岁和44.86岁;腮腺和腭部为好发部位。结论:腺样囊性癌和多形性腺瘤是最常见的涎腺恶性、良性上皮性肿瘤。     

涎腺腺样囊性癌 Acc-2和 Acc-3细胞系的建立及其形态学观察

本文报道了小涎腺源性腺样囊性癌 Acc-2细胞系和大涎腺(腮腺)源性腺样囊性癌 Acc-3细胞系的建立经过。作者着重对两株细胞系细胞的形态学用普通光镜、相差显微镜、微分干涉相差显微镜、扫描电镜、透射电镜、组织化学和 Keratin 免疫荧光染色等方法作了较全面的观察。作者根据观察结果认为涎腺腺样囊性癌起源于一种多能干细胞,而肌上皮细胞是一种分化的表现,癌细胞经体外培养后,在分化程度低下时,可不出现肌上皮细胞。对此本文作了较详细的讨论。Acc-2和 Acc-3细胞系的建立,为进一步研究涎腺腺样囊性癌的组织发生及其他各种特性提供了良好的模型。     

口腔涎腺腺样囊性癌组织中RKIP和NPRL2的表达及其意义

应用免疫组织化学方法检测RKIP蛋白和NPRL2蛋白在52例口腔涎腺腺样囊性癌组织、26例癌旁腺样囊性癌组织及15例正常涎腺组织中的表达,并分析RKIP和NPRL2的表达与腺样囊性癌临床病理学特征的关系。结果:免疫组化结果显示腺样囊性癌组织、癌旁及正常涎腺组织中RKIP和NPRL2的阳性率分别为48.08%、76.92%、93.33%和46.15%、80.77%、93.33%;腺样囊性癌组织中RKIP和NPRL2的表达显著低于癌旁及正常涎腺组织,差异有统计学意义     

人口腔鳞癌手术标本组织块裸鼠移植瘤模型的建立

目的：口腔鳞癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一，建立与人类口腔癌相似的动物模型，对进一步探讨口腔癌的发生、发展、治疗和预后具有重要意义。方法：选取新鲜的口腔鳞癌手术标本，制备成1mm^3组织块，植入BALB／cnu—nu裸鼠皮下．观察其成瘤情况．并对移植瘤的生长特性、组织形态和对化疗药物的反应进行检测。结果：收集了27例临床标本，成功建立了15个裸鼠皮下移植瘤模型，成瘤率为56％。所建立的口腔鳞癌移植瘤模型能够在裸鼠体内连续成瘤。与细胞系建立的移植瘤模型相比，其组织学特征与人口腔鳞癌标本极为相似。其中，20％（2／10）的移植瘤模型对传统化疗药物顺铂敏感。结论：成功建立了人口腔鳞癌手术标本组织块移植瘤模型。该模型为进一步研究口腔鳞癌提供了基础。     

人成釉细胞瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人成釉细胞瘤的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用组织块直接贴壁法将新鲜成釉细胞瘤组织进行原代细胞培养,反复贴壁法和胰酶消化法使之纯化。然后将纯化的成釉细胞瘤细胞接种于裸鼠颈背部皮下。观察接种成瘤后瘤组织大体生长情况以及常规病理切片观察瘤细胞的侵袭生长情况。结果成釉细胞瘤细胞可以在裸鼠皮下存活,接种后第23天见有移植瘤形成,成瘤率为25%。病理切片显示瘤细胞可向裸鼠肌间生长,保持了其侵袭性生长的特性。结论初步建立了人成釉细胞瘤的裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究成釉细胞瘤的侵袭生长特性奠定了基础。     

高迁移率族蛋白N2对人舌癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用研究

目的 研究高迁移率族蛋白N2（HMGN2）对人舌癌裸鼠移植瘤生长的抑瘤作用。方法 裸鼠腋下注射接种舌鳞癌细胞 Tca8113以建立裸鼠移植瘤模型,接种 7d成瘤后,设立阴性对照组、 HMGN2蛋白组和阳性对照组,在瘤体周边分别注射含 washingbufferⅡ、 HMGN2蛋白和顺铂的细胞培养基。观察各组裸鼠肿瘤的生长情况,经过4次给药后处死裸鼠,取出瘤块,称其质量计算抑瘤率,并行苏木精-伊红（HE）染色观察形态学变化。结果 成功建立舌癌裸鼠移植瘤模型。HMGN2蛋白组和阳性对照组肿瘤体积明显小于阴性对照组。裸鼠体重在整个实验过程中并没有明显的变化。阴性对照组、HMGN2蛋白组、阳性对照组的肿瘤质量平均值分别为（0.38±0.19）、（ 0.21±0.15）、（0.23±0.16）g,3组间的差异无统计学意义。HMGN2蛋白组和阳性对照组的抑瘤率分别为45.71%和39.44%。肿瘤经肉眼观察可见阴性对照组瘤块较大,HE染色可见 HMGN2蛋白组和阳性对照组细胞坏死明显。结论 HMGN2蛋白可以明显抑制人舌癌裸鼠移植瘤的生长。     

16型人乳头状瘤病毒E6、E7诱导的人永生化口腔上皮细胞系的建立

目的：建立16型人乳头状瘤病毒（human papiloavirus,HPV16)E6,E7诱导的永生化口腔上皮细胞系，方法：正常口腔上皮细胞转染pLXSNHPV16E6,E7,G418筛选阳性细胞，连续培养建系；Western blot检测细胞HPV16E6，E7蛋白表达；生物学特性检测。集落实验；成瘤实验，结果：细胞连续培养达18个月余，命名为永生化口腔上皮细胞（human immortalized oral epithelial cell,HIOEC) ,HIOEC表达HPV16E6，E7蛋白，角蛋白阳性，透射电镜观察细胞有丰富的张力原纤维，细胞之间形成桥粒，克隆形成率0．77％，裸鼠未成瘤。结论：成功建立了HPV16E6，E7诱导的人永生化口腔上皮细胞系。     

A cervical lymph node metastatic model of human tongue carcinoma: Serial and orthotopic transplantation of histologically intact patient specimens in nude mice.

PURPOSE: A lymph node metastatic model of human tongue carcinoma using orthotopic and serial transplantation was established in nude mice to study the invasive and metastatic properties of human tongue cancer. Materials and Methods: Lymph node metastatic specimens of human tongue carcinoma were transplanted into nude mice orthotopically. Tumors dissected from the metastatic lymph nodes of the nude mice were serially transplanted into tongues of disease-free nude mice at 4-week intervals. RESULTS: All mice developed aggressive and diffuse well-differentiated squamous cell carcinoma at tongue recipient sites. Tumor cells invaded to lymphatic vessels. In addition, increased cervical lymph node metastasis was noted in the first (3 of 14, or 21%), second (4 of 11, or 36%), third (6 of 10, or 60%), or fourth (11 of 14, or 79%) transplantation. In mice, 2 of 14 lung metastases were found in the fourth round of transplantation. CONCLUSION: After surgical specimens of the lymph node metastasis for human tongue cancer were transplanted into the tongue of nude mice, the clinical characteristics of human tongue carcinoma, especially invasion and metastasis, were observed. This metastatic model involving orthotopic and serial transplantation should be useful for studies on the mechanisms, treatment, and prevention of human carcinoma of tongue.     

腺病毒介导HSV-TK/GCV与IL-2基因对人涎腺腺样囊性癌的抑制作用

目的探讨腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶（Herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir,HSV-TK/GCV）与白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）基因联合应用对涎腺腺样囊性癌的抑制和杀伤作用。方法将0.2 ml细胞浓度为2×107/ml的涎腺腺样囊性癌高转移细胞株（salivary adenoid cystic carcinoma cell line withhigh tendency of lung metastasis,ACC-M）的细胞悬液接种于20只裸鼠皮下,建立涎腺腺样囊性癌裸鼠移植瘤模型。随机将20只荷瘤裸鼠分为A组：HSV-TK/GCV和IL-2联合基因治疗组（TK（IL-2组）;B组：HSV-TK/GCV组（TK组）;C组：空病毒组（EGFP组）;D组：ACC-M组;每组5只。分别于瘤体内注射TK（IL-2;TK;EGFP和无菌生理盐水。注射48小时后,对A、B、C组裸鼠每日腹腔注射GCV,D组每日腹腔注射生理盐水,连续10天。最后一次给药后第二天处死裸鼠,观察各组裸鼠的肿瘤体积和瘤重的变化,计算肿瘤生长抑制率;对移植瘤进行组织病理学观察;应用流式细胞仪检测移植瘤的细胞凋亡情况。结果在A组和B组中,ACC-M的生长均受到显著抑制。治疗后体积数减少,与ACC-M组比较差别有极显著性（P〈0.01）。A组和B组抑瘤率分别为91%和76%;光镜下观察A组和B组均出现了明显的细胞凋亡;流式细胞仪检测A组和B组有明显的凋亡峰出现,凋亡率分别为30.55±0.23和13.53±0.32;C组凋亡率为10.07±0.31,D组凋亡率为8.34±0.41%。除C、D组之间差别无明显性外,其余各组之间差别均有极显著性（P〈0.01）。A组和B组的细胞S期比例明显增加,G2/M期比例明显降低。结论 HSV-TK/GCV联合IL-2基因对ACC-M移植瘤有明显抑制作用,抑瘤效果优于单独应用HSV-TK/GCV系统。     

放射诱导启动子介导双自杀基因治疗舌鳞癌的实验研究

目的探讨放射诱导启动子介导双融合自杀基因CDglyTK靶向治疗人舌鳞癌裸鼠移植瘤的疗效。方法构建人舌鳞癌裸鼠移植瘤模型．以脂质体为载体介导携放射诱导启动子调控双融合自杀基因的真核表达质粒pcDNA3．1（＋）／E-CDglyTK瘤内转染,辅以3Gy放疗,腹腔注射5-氟胞嘧啶和丙氧鸟苷．描绘肿瘤生长曲线,RT—PCR检测CDglyTK的mRNA水平．免疫组化检测细胞核增殖抗原的表达．原位末端标记法检测肿瘤细胞凋亡。结果放射诱导启动子介导的CDglyTK对肿瘤生长有明显抑制作用．RT—PCR可检测到转染后肿瘤细胞CDglyTK的mRNA表达,诱导放疗增强了其表达水平．电泳条带灰度值从0．213±0．023上调至0．279±0．038（P〈0．01）;诱导放疗显著提高疗效,凋亡指数从21．52％上升为32．23％（P〈0．01）,增殖指数由28．36％下降至20．07％fP〈0．01）。结论放射诱导启动子可作为基因治疗分子开关调节CDglyTK基因在人舌鳞癌裸鼠移植瘤中靶向表达．低剂量放射性照射可显著提高其疗效。     

裸鼠皮下种植性人头颈鳞癌模型的建立

目的：建立稳定的皮下种植性裸鼠人头颈鳞癌模型。方法：取10^9个对数期的PCI-37B细胞,种植于BALB／c裸鼠皮下。待成瘤后,从裸鼠体重、大体形态,肿瘤生长情况,病理学特征等方面进行研究。采用SPSS13．0软件包对数据进行统计学分析。结果：肿瘤形成的潜伏期约15d,实验组14只裸鼠成瘤13只,肿瘤成功率为92．8％。种植肿瘤组裸鼠体重较正常对照裸鼠明显减轻．肿瘤生长迅速．病理学检查有明显的细胞异形性。结论：成功建立了裸鼠皮下种植性头颈鳞癌模型。本模型具有在短期内易建立、稳定、重复性好、成癌率高等特点,为人头颈鳞癌的生物学、治疗学研究提供了良好的动物模型。     

The effect of chemotherapeutic agents on human oral squamous cell carcinoma transplanted to nude mice: a histologic study

Clearly differentiated squamous cell carcinomas were transplanted to the backs of nude mice; tumor cells of a human tongue carcinoma cell line were used. Animals bearing tumors that measured at least 4 mm in diameter were treated with either methotrexate (MTX), cis-diamminedichloroplatinum II (CDDP) or bleomycin intraperitoneally for 5 days. Histologic evaluation of tumors obtained 24 hours after the last injection revealed degenerative and necrotic morphology in all treatment groups. The histologic alterations were observed prior to any clinical evidence of tumor shrinkage. The most impressive changes were found in CDDP-treated tumors, with creation of large pseudocysts containing necrotic material and cell debris. Pseudocyst formation was less obvious in MTX-treated animals and was absent in bleomycin-treated tumors. Drug treatment had no obvious influence on the keratinization in tumors. The findings suggest that the nude mouse model may be useful for the histologic determination of drug-induced effects on tumors in human beings.     

口腔癌肿瘤浸润淋巴细胞对人舌癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的探讨在体外具有强大细胞毒活性的口腔癌浸润淋巴细胞在体内的抑瘤效果以及化疗药物环磷酰胺（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，Ｃｙ）与肿瘤浸润淋巴细胞（ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＴＩＬ）联合应用治疗口腔癌的可能性。方法将舌鳞癌细胞系Ｔｃａ８１１３注入裸鼠背部皮下建立移植瘤模型，取培养４周的ＴＩＬ联合低剂量Ｃｙ局部注射，观察肿瘤体积变化及肿瘤生长情况。结果①ＴＩＬ＋ｒＩＬ２和ＴＩＬ＋ｒＩＬ２＋Ｃｙ组在３周内抑瘤率较高（分别为：８６１％±０４％和９７７％±０６％），３周后抑瘤作用减弱；②ＴＩＬ＋ｒＩＬ２＋Ｃｙ组抑瘤率较ＴＩＬ＋ｒＩＬ２组高（第８周抑瘤率分别为：２００％±１４％和７５５％±２５％，Ｐ＜００１）。结论口腔癌ＴＩＬ在应用后３周内具较强抑瘤作用，３周后减弱；联合应用Ｃｙ可获得更佳抑瘤效果