通脉汤含药血清对缺氧心肌细胞的保护作用

目的　观察通脉汤含药血清对缺氧状态下心肌细胞的保护作用。方法　提取通脉汤含药血清并干预经缺氧处理的心肌细胞 ,测定细胞培养液中的LDH、肌钙蛋白I(CTnI)的含量。结果　缺氧心肌细胞组的LDH( 7 2 2 5± 1 12 8U/L)和肌钙蛋白I( 0 85 1± 0 14 9ng/ml)的水平显著升高 ,而通脉汤含药血清组细胞培养液中的LDH( 4 175± 0 90U/l)、肌钙蛋白浓度 ( 0 5 48± 0 0 92ng/ml)明显低于损伤组 (P <0 0 1)。结论　通脉汤可以保护缺氧心肌细胞。     

锰对皮层神经元胞浆游离钙离子浓度的影响

目的探讨皮层神经元胞浆游离钙离子浓度在锰(Mn)神经毒性作用中的变化。方法分离新生Wistar乳大鼠的皮层神经细胞进行体外培养,细胞生长至最佳状态时,予以分组处理。实验分染锰组和未处理组,染锰组分别与含低、中、高浓度氯化锰(MnCl_2·4H_2O)的培养液共培养,氯化锰的浓度分别为0．2、0．6、1．0mmol/L。未处理组则为正常培养的皮层神经细胞。各组处理24h后终止培养,钙离子荧光探针Fluo-3/AM标记后上激光扫描共聚焦显微镜检测荧光强度,以表示游离钙离子浓度,并用图像分析技术进行处理。结果氯化锰处理后引起皮层神经元胞浆游离钙离子不同程度的超载,中、高浓度锰组神经元的胞浆游离钙离子浓度明显高于低浓度锰组及未处理组,细胞钙离子荧光像素荧光强度增高且呈剂量依赖性,中、高浓度锰组分别为(131．1±16．7)、(183．2±22．9)；低浓度锰组为(84．6±10．2),差异有统计学意义(P＜0．05)。结论钙离子超载与锰的神经毒性有关,且钙离子超载与锰浓度呈剂量-反应关系。     

骨髓间充质干细胞心肌移植对大鼠心梗后心功能的影响

目的　探讨骨髓间充质干细胞心肌移植对大鼠心梗后心功能及钙泵的影响。方法　取大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养、增殖和标记 ,同时以液氮冷冻左室游离壁建立心梗模型。 4周后分别将 2× 10 6个细胞悬液或冷D -Hanks液注入实验组和对照组心梗区数个不同部位。另取 5只大鼠作为正常组 ,仅行两次开胸手术。 4周后行心功能测定及取标本 ,RT -PCR检测SERCA2基因mRNA的表达。结果　骨髓间充质干细胞于移植后 1周、2周和 4周后均可存活并具有分化成熟倾向。Buxco系统行有创动态心功能测定 ,发现SLVP、+dp/dt以正常组为最高 ,实验组次之 ,对照组最低。而LVEDP则相反以正常组最低 ,实验组次之 ,对照组为最高。心梗后SERCA2基因mRNA表达水平对照组较正常组明显降低 ( 0 988± 0 0 0 4对 1 82 4± 0 0 0 9,P <0 0 1)。骨髓间充质干细胞心肌移植后 ,虽然SERCA2基因mRNA表达水平实验组也较正常组有所降低 ( 1 5 83± 0 0 12对 1 82 4± 0 0 0 9,P <0 0 1) ,但与对照组相比明显升高 ( 1 5 83± 0 0 12对 0 988± 0 0 0 4,P <0 0 1)。结论　骨髓间充质干细胞心肌移植可促进SER CA2mRNA表达 ,并使大鼠心梗后受损的心功能改善。     

微波辐照致大鼠心肌细胞凋亡机制的研究

目的探讨微波辐照诱导心肌细胞凋亡的分子病理机制。方法本实验以峰值功率密度950mW/cm2(9500W/m2)的脉冲微波辐照大鼠心肌细胞0、30、60、120s后,观察心肌细胞形态变化,检测心肌细胞凋亡率和多种凋亡相关基因的表达,以及心肌细胞内外Ca2 、钙调蛋白、钙通道蛋白的变化。结果辐照后心肌细胞呈现出典型的细胞凋亡形态。辐照60s后6、24h,心肌细胞凋亡率分别为(36.76±5.31)%和(26.44±3.94)%,与对照组(2.36±0.87)%相比较差异有显著性(P<0.01),心肌细胞凋亡率与辐照剂量呈正相关。Bax、p53、c-myc表达显著增强(P<0.01),Bcl-2表达一过性增强,随后明显降低(P<0.01)。细胞内Ca2 明显降低,同时细胞外Ca2 显著升高。与对照组相比,钙调蛋白、钙通道蛋白的表达呈有规律下降性变化(P<0.01),并与辐照时间呈正相关。结论心肌细胞是微波辐照损伤的敏感细胞,微波辐照可诱导心肌细胞凋亡,并存在剂量-效应关系。钙离子、钙调蛋白、钙通道蛋白以及多种基因参与微波辐照引起的心肌细胞凋亡,并发挥重要调控作用。     

VEGF165在哺乳动物细胞中的稳定表达

目的探讨pcDNA3．1-VEGF165质粒对哺乳动物细胞的表达和转染。方法将pcDNA3．1-VEGF165质粒用电转的方法导入CHO细胞中，C418筛选细胞克隆。通过RT—PCR、ELISA、Westen—blot在转录水平和蛋白质水平上检测VEGF165在转基因CHO细胞中的表达。通过内皮细胞增殖实验和血管通透性实验检测所表达的VEGF165的生物学活性。结果获得有C418抗性的CHO细胞克隆。RT—PCR扩增出一条大小约600bp的特异性泳带，测序结果与VEGF165mRNA一致。ELISA显示细胞培养上清的VEGF浓度约为10-20ng／ml。WESTEN—BLOT检测到大小为23KD的特异性蛋白质条带。内皮细胞增殖实验显示细胞培养上清具有促内皮细胞增殖作用。血管通透性实验显示细胞培养上清明显增加毛细血管通透性。结论pcDNA3．1-VEGF165质粒真核表达系统能在哺乳动物细胞中表达具有良好生物学活性的VEGF165蛋白。     

硒钴对培养鼠心肌细胞电生理的影响

目的 :进一步研究微量元素硒 (Se)钴 (Co)对心肌细胞的协同性影响。方法 :用细胞内微电极技术分别测定了正常对照、高Co、高Se伴高Co条件下培养的大鼠心肌细胞生物电活动的变化。结果 :高Co状态下培养的心肌细胞 ,其RP、APA降低 ,APD50 缩短 ;而高Co伴高Se条件下培养的心肌细胞 ,RP、APA、APD50 与对照组相比差异无显著性意义。提示 :高Co对培养的心肌细胞有损害作用 ,补Se可以对抗高Co对心肌细胞产生的这种损害     

骨髓间充质干细胞心肌移植对大鼠心梗后血管新生和细胞因子分泌的作用

目的　探讨骨髓间充质干细胞心肌移植对大鼠心梗区血管新生和细胞因子VEGF、TGF的影响。方法　取大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养、增殖和标记 ,同时以液氮冷冻左室游离壁建立心梗模型。 4周后分别将 2× 10 6个细胞悬液或冷D -Hanks液注入心梗区数个不同部位。于移植后 1、2、4周依次获取心梗区标本 ,进行细胞形态学观察 ,毛细血管密度测定和RT -PCR检测细胞因子VEGF、TGF -βmRNA的表达。 结果　骨髓间充质干细胞于移植后 1、2、4周后均可存活并具有分化成熟倾向。移植后第 1、2及 4周心梗区单位面积 ( 0 1mm2 )毛细血管数实验组较对照组均明显增加 (P <0 0 1) ,但毛细血管数有随时间推移而逐步减少的趋势 (P <0 0 1)。VEGFmRNA术后第 1、2及 4周的表达水平实验组与对照组相比均增加 (P <0 0 1) ,且随着时间的推移其表达量两组均呈迅速降低的趋势 (P <0 0 1)。TGF -βmRNA在术后第 1、2及 4周的表达水平实验组与对照组相比均降低 ( P <0 0 1)。结论　骨髓间充质干细胞心梗区移植后可促进大鼠心梗后血管新生 ,并可使VEGF生成增加 ,TGF -β合成减少     

细胞外低钙对培养心肌细胞内游离钙和膜脂流动性的影响

Ca2 与心肌细胞损伤的关系已被确认 ,细胞内Ca2 超负荷是细胞发生不可逆损伤的共同途径。肝细胞培养模型证实细胞外钙同样影响细胞死亡过程 [1] ,向培养基中加入 Ca2 ,可减少培养细胞死亡率 [2 ] ,高钙培养的细胞比低钙培养的活力强[3 ] 。本研究利用原代培养心肌细胞 ,观察不同浓度的钙水平对心肌细胞膜流动性等影响 ,探讨低钙对心肌细胞的损伤机制。1　材　料　与　方　法1 .1　试剂　　 Ca Cl2 (北京化学试剂厂 ) ;MEM培养基( Sigma) ;荧光探针 1 ,6-二苯基己三烯 ( DPH,Sigma) ;Fura- 2 /AM( Sigma) ;胰蛋白酶 ( Sigma)。1…     

混配农药对家兔诱发电位及脑组织ATP酶的影响

目的研究混配农药对家兔中枢神经系统功能的影响及其机制。方法将家兔随机分为混配农药染毒A组（丙溴磷与氰戊菊酯混配染毒组）、混配农药染毒B组（丙溴磷与灭多威？昆配染毒组）和1个对照组，每组6只。3个染毒组分别给予3种染毒剂量进行染毒，于染毒前后进行家兔体感染诱发电位（SEP）及染毒后大脑组织三磷酸腺苷（ATP）酶活力的测定。结果与对照组比较，2个混配农药染毒组的高剂量组染毒后SEP的N1、P1、N2波潜伏时均显著延长（P〈0．01），2个混配农药染毒组的高中剂量组染毒后的Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶的活力明显下降（P〈0．05。P〈0．01）。结论一定剂量的混配农药可导致家兔中枢神经系统功能的的改变，这种改变可能与大脑组织中N^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2^＋-ATP酶活力的下降有关．     

镉对大鼠Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase影响的实验研究

目的 研究不同剂量镉对大鼠钠钾ATP酶(Na^ -K^ -ATPase)和钙ATP酶(Ca^ -ATPase)的影响,以探讨镉中毒的细胞分子学机制。方法 大鼠按体重随机分成4组,第1组为对照组,皮下注射0．9％氯化钠,第2～4组为镉染毒组,分别皮下注射3,5,7μmol／kg的氯化镉溶液,注射容量均为2ml／kg。染毒6周后,测定尿中乳酸脱氢酶(LDH)、尿蛋白、尿镉和肝、肾组织中Na^ -K^ -ATPase及Ca^2 -ATPase的活力。结果 随着镉染毒剂量的增加,各组大鼠尿LDH、尿蛋白和尿镉含量均逐渐递增,呈现明显的剂量-效应关系;同时,肝、肾组织中的：Na^ -K^ -ATPase和Ca^2 -ATPase活力也随之增加。结论 随着镉染毒剂量的增加,大鼠肝、肾组织损伤逐渐加重,同时伴随着细胞膜上Na^ -K^ -ATPase和Ca^2 -ATPase的变化,这可能与细胞内钙稳态的破坏有关。