白塞病的证侯与单核细胞趋化蛋白-1基因多态性位点相关性的探讨

目的探讨白塞病的证侯与单核细胞趋化蛋白（MCP）-1基因多态性位点的关系。方法应用PCR限制性片段长度多态性技术检测MCP-1基因多态性住点基因类型。结果携带G型等位基因的白塞病证侯患者，伴有眼色素膜炎及胃肠炎较重临床症状的几率明显高于携带AA型等位基因的白塞病患者。GG患者与AA患者眼部损害比较差异有极其显著性（P〈0．05）。结论白塞病的证侯与MCP-1基因多态性位点有一定相关性。     

寻常性银屑病患者血清单核细胞趋化蛋白-1、巨噬细胞炎性蛋白-1α和巨噬细胞衍生的趋化因子水平测定

近年研究显示,免疫-炎症机制在银屑病发病中起着重要作用,其中β趋化因子家族(又称CC趋化因子)的研究日益受到重视,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)和巨噬细胞衍生的趋化因子(MDC)能够趋化或激活T细胞,同时也是T细胞分泌和表达的调节因子,了解其在银屑病患者血清中的水平有助于进一步认识疾病发生的机制.我们应用酶联免疫吸附(ELISA)法对寻常性银屑病患者血清MCP-1、MIP-1α以及MDC的水平进行测定,现将结果报道如下.     

亚油酸对角质形成细胞屏障相关蛋白表达的影响

目的：检测亚油酸对角质形成细胞屏障相关蛋白Filaggrin、keratin-14和claudin-1表达的影响。方法：选用不同浓度的亚油酸(2 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL)刺激人角质形成细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,并绘制细胞生存/抑制曲线;qRT-PCR和Western blot分别检测不同浓度亚油酸刺激后角质形成细胞Filaggrin、keratin-14和claudin-1的mRNA及蛋白水平的变化。结果：角质形成细胞生存率随亚油酸样品浓度升高而降低。角质形成细胞中Filaggrin和keratin-14的表达随着亚油酸样品浓度升高表达明显增加。claudin-1表达在2 ng/mL和10 ng/mL亚油酸作用下明显增加,而在20 ng/mL浓度下,claudin-1表达下降。结论：在2 ng/mL和10 ng/mL亚油酸作用下,Filaggrin、keratin-14和claudin-1表达随着亚油酸作用浓度升高而增加。     

阴道念珠菌病小鼠模型中单核细胞趋化蛋白-1的表达及其意义

目的检测阴道念珠菌病小鼠模型中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达,并对其在阴道念珠菌病发病中的作用进行探讨。方法建立阴道念珠菌病小鼠模型,以免疫组化染色SABC法检测小鼠阴道黏膜中MCP-1蛋白的表达,并应用HMIAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统对小鼠阴道黏膜MCP-1的表达进行半定量分析。结果与对照组及正常小鼠相比,感染组小鼠阴道黏膜MCP-1表达水平明显升高,且随时间延长逐渐升高,14天达到高峰,第21天略有下降。结论MCP-1可能在局部阴道黏膜内对白念珠菌的感染起一定的防御作用。     

P物质通过激活NF-κB诱导人角质形成细胞产生抗菌肽

目的:明确P物质和FK-506对人角质形成细胞产生抗菌肽(CAMP)和NF-κB信号活化的影响。方法:P物质单独或联合FK-506处理培养HaCaT细胞24h,用实时荧光定量PCR检测CAMP mRNA表达,免疫蛋白印迹法检测CAMP蛋白表达,免疫荧光染色观察CAMP蛋白原位表达及NF-κB/p65核转位。结果:P物质刺激HaCaT细胞CAMP mRNA及蛋白表达增加,其中1μM处理24 h效果最明显,与空白对照组比差异有统计学意义(P<0.05);此外,P物质处理30 min可诱导HaCaT细胞NF-κB/p65发生核转位,此后随处理时间延长核转位减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。FK-506抑制P物质诱导HaCaT细胞NF-κB/p65核转位并减低了P物质刺激的CAMP表达,P物质与FK-506联合处理组与P物质组比较,两组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:P物质通过激活NF-κB信号诱导角质形成细胞产生抗菌肽。针对抑制“P物质-NF-κB信号活化-抗菌肽”机制可能是治疗玫瑰痤疮的潜在新靶点。     

阿维A对寻常性银屑病患者外周血MCP-1及MIP-1α表达水平的影响

目的探讨阿维A治疗寻常性银屑病(PV)的疗效以及对PV患者血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)的影响,进一步阐明阿维A治疗PV的作用机制。方法 38例中、重度PV患者口服阿维A治疗8周,以银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分评价疗效;采用双抗体夹心法(ELISA)检测正常对照组以及PV患者阿维A治疗前后血清MCP-1及MIP-1α的表达水平,并与40例正常对照组比较。结果阿维A治疗中、重度PV疗效显著,治疗后PASI评分明显下降(P<0.01)。PV患者外周血MCP-1及MIP-1α表达水平分别为(267.95±16.87)pg/mL,(1319.47±165.25)pg/mL,明显高于正常对照组(87.36±9.63)pg/mL,(479.24±35.71)pg/mL(P<0.01);阿维A治疗后血清MCP-1(91.71±11.25)pg/mL,与治疗前相比明显降低(P<0.01),同正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后血清MIP-1α(956.58±87.39)pg/mL,较治疗前显著下降(P<0.01),仍显著高于正常对照组(P<0.01)。结论阿维A治疗中、重度银屑病疗效明显,可能通过调节外周血MCP-1及MIP-1α表达水平来发挥治疗银屑病的作用。     

阿维A对P物质诱导的HaCaT细胞NF-κB表达的影响

目的:明确阿维A对HaCaT细胞NF-κB表达的影响。方法:细胞共分5组:对照组、单纯P物质刺激组、P物质+小剂量阿维A组、P物质+中剂量阿维A组、P物质+大剂量阿维A组。应用免疫细胞化学法、Western-blot和RT-PCR法检测各组HaCaT细胞中NF-κB阳性细胞表达率、细胞蛋白和基因表达的变化。结果:单纯P物质刺激组较对照组阳性细胞表达率、细胞蛋白、mRNA表达均增强。各阿维A剂量组较P物质组阳性细胞表达率、蛋白和mRNA表达均降低(P0.05或P0.01)。结论:阿维A对人角质形成细胞NF-κB的调控是其治疗皮肤病的作用途径之一。     

加味桃红四物汤对角质形成细胞分泌内皮素-1和碱性成纤维细胞生长因子的影响

目的 研究加味桃红四物汤对角质形成细胞(KC)分泌内皮素-1和碱性成纤维细胞生长因子的影响。方法 以体外培养的人角质形成细胞为对象,加入不同浓度加味桃红四物汤后,用MTT法反映细胞增殖的变化。ELISA方法测定细胞上清液中内皮素-1和碱性成纤维细胞生长因子的分泌量。结果 加味桃红四物汤浓度4.27、5.49、6.1mg/mL时可促进KC的增殖。加味桃红四物汤浓度1.83mg/mL和5.49mg/mL可刺激KC分泌内皮素-1,而对KC分泌碱性成纤维细胞生长因子无影响。结论 高浓度的加味桃红四物汤可促进KC的增殖。不同浓度的加味桃红四物汤均能刺激KC分泌内皮素-1,提示加味桃红四物汤在体外可刺激KC分泌内皮素-1。     

MCP-1mRNA及其蛋白在尖锐湿疣表皮中的表达

目的：从mRNA和蛋白水平检测尖锐湿疣表皮中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达，探讨其在尖锐湿疣皮损局部免疫异常机制的作用。方法：采用原位杂交、免疫组化和Western免疫印迹的方法，检测30例尖锐湿疣表皮及20例正常包皮表皮中MCP-1mRNA及其蛋白的表达水平。结果：MCP-1mRNA及其蛋白表达部位主要在表皮基底层。MCP-1mRNA在尖锐湿疣皮损组和对照组中原位杂交染色阳性单位值分别为10．7±5．1和11．2±4．6，差异无统计学意义（t=-8．70，P〉0．05）；MCP-1蛋白在尖锐湿疣皮损组和对照组中免疫组化染色阳性单位值分别为10．9±5．1和11．5±4．9，差异无统计学意义（t=-0．981，P〉0．05）；Western免疫检测结果显示尖锐湿疣皮损组和对照组表达的结合珠蛋白平均光密度值分别为0．18±0．06和0．20±0．06，两者差异无统计学意义（t=-0．721，P〉0．05）。结论：尖锐湿疣患者皮损MCP-1无论是其mRNA水平还是蛋白水平均表达微弱，可能是导致尖锐湿疣免疫微环境异常的原因之-。     

活络化毒益气法对白塞病瘀毒络损证患者单核细胞趋化蛋白-1趋化因子水平的调控作用

目的探讨活络化毒益气法对白塞病（BD）瘀毒络损证的治疗效果。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测正常人、白塞病瘀毒络损证患者治疗前后及对照组单核细胞趋化蛋白（MCP）-1水平变化。结果BD组治疗前MCP-1水平高于正常组的3倍，活络化毒益气法能降低MCP—1水平，和对照组比较两者差异有显著性。临床疗效治疗组优于对照组。结论BD瘀毒络损病机患者MCP-1水平高于正常人，提示该病机与免疫功能失调相关：活络化毒益气法能降低BD患者MCP-1水平，临床有较好疗效，为中药治疗BD瘀毒络损证提供理论和试验依据。     

寻常性银屑病患者血清MCP-1和MIP-3α的检测及意义

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和巨噬细胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)与寻常性银屑病的关系。方法采用双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清MCP-1和MIP-3α水平。结果寻常性银屑病患者血清MCP-1和MIP-3α水平均明显高于正常人;进行期患者高于静止期(P<0.05)、退行期(P<0.05)及对照组(P<0.05)。结论寻常性银屑病患者血清MCP-1和MIP-3α水平升高,可能与其发病机理有关。     

扁平苔藓表皮中P物质的表达

目的检测神经肽P物质（SP）在扁平苔藓（LP）表皮中的表达，并探讨其在发病中的作用。方法采用免疫组化技术检测30例扁平苔藓皮损和30例正常人皮肤组织中SP的表达。结果扁平苔藓表皮中有SP表达，主要分布在表皮棘细胞层，部分颗粒层、角质层也有表达；正常皮肤中也有SP表达，主要分布于表皮基底层。扁：乎苔藓表皮细胞中SP的表达水平高于正常对照组，其差异有统计学意义（P〈0．05）。结论SP与扁平苔藓皮损的发生及发展有一定的关系。     

不同辨证分型寻常性银屑病表皮各层P物质表达特征

目的探讨不同辨证分型的银屑病表皮各层P物质表达特征。方法应用免疫组化方法检测不同证型寻常性银屑病皮损中P物质的表达,利用计算机成像分析系统检测银屑病皮损表皮各层P物质的平均光密度。结果与对照组相比,三种证型银屑病P物质表达均高于正常,其中血燥型表达最强,其次是血热型,最弱是血瘀型。三型均在角质层表达最强,其次是基底层,最弱是颗粒层和棘层。血热型在基底层、角质层表达最强,棘层次之,颗粒层最弱。血燥型以颗粒层和角质层强,基底层和棘层弱。血瘀型在基底、颗粒和角质层表达强。结论不同证型的银屑病表皮各层P物质表达存在差异。     

寻常型银屑病患者血管内皮生长因子及单核细胞趋化因子-1表达的研究

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)在银屑病患者皮肤中的表达及其意义。方法 用免疫组化法检测银屑病患者皮损、非皮损及正常人皮肤中VEGF、MCP-1的表达与分布。用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测患者血清中VEGF、MCP-1水平。结果 ①银屑病患者皮损及非皮损中VEGF表达较正常人皮肤明显增强(P<0.05).皮损中MCP-1表达较非皮损及正常人皮肤明显增强(P<0.05).②患者血清中VEGF水平明显高于正常人(P<0.05),MCP-1水平与正常人比较差异无显着性(P>0.05).③皮损角质形成细胞中VEGF、MCP-1的表达与PASI评分无显着相关性(P>0.05)。结论 VEGF、MCP-1的表达增强在银屑病的发病机制中可能起重要作用。     

Effect of Spa Spring Water on Cytokine Expression in Human Keratinocyte HaCaT Cells and on Differentiation of CD4+ T Cells

Background

Skin acts as the first line of defense against any foreign materials outside of our body. In inflammatory skin disease, the pathogenesis is due to an immune reaction in the keratinocytes, immune cells and soluble mediators. Balneotherapy is widely used for the treatment of inflammatory skin disease, but the mechanisms are only partly understood by immune regulation. Balneotherapy in dermatologic disease can affect the secretion of pro-inflammatory cytokines, IL-1α and tumor necrosis factor from keratinocytes, and possibly affect the T cell differentiation.

Objective

In this study, we evaluated the effect of spa spring water from Yong-gung oncheon on the cells, and investigated the skin immune reaction.

Methods

We investigated the immunomodulatory or anti-inflammatory effect of thermal spring water on the expression of pro-inflammatory cytokines in the HaCaT cells under Toll-like receptor (TLR) stimulation, as well as the effect on the differentiation of CD4⁺ T cells under spring water.

Results

The treatment of spa spring water from Yong-gung oncheon decreased the expression of proinflammatory cytokines under TLR stimulation to the HaCaT cells and antigen presenting cells. In addition, spa spring water attenuated the differentiation process of subsets of CD4⁺ T cells, i.e., Th1, Th2 and Th17 cells. All these immune parameters can be used to evaluate the efficacy of spa spring water in Korea, in terms of the immune modulatory effect.

Conclusion

Spa spring water treatment suppressed the inflammatory cytokines production and also modulated the differentiation of CD4⁺ T cells into Th1, Th2, and Th17 cells, but not the T_regs cells.     

TRP-1 B细胞表位区在酵母中的表达纯化及生物学活性研究

目的　为进一步探索酪氨酸酶相关蛋白 -1(TRP 1)人源B细胞表位 ,利用甲醇营养型酵母Pichiapas toris表达系统表达TRP 1的B细胞表位区。方法　将本实验室已构建好的质粒 pUC19/TRP 1进行双酶切 ,将目的片段亚克隆至带有 6His标签的 pRSETA载体 ,将 6His融合的TRP 1整体PCR扩增出来 ,克隆到酵母表达载体pPIC3 .5K上 ,构建成重组质粒 pPIC3 .5K/6His TRP1。该质粒转化酵母菌GS115 ,经G418筛选得到高拷贝转化子。转化菌体经Mut表型鉴定后 ,用含 0 .5 %甲醇的培养基诱导表达 ,表达产物利用Ni NTAagarose柱通过金属螯合亲和层析进行纯化后 ,测定其生物学活性。结果　通过 4天的诱导 ,该系统成功表达了 6His TRP1蛋白 ,经亲和层析纯化后扫描分析重组蛋白分子量约为 18kD ,纯度可达 96%。Westernblotting及ELISA实验证实 ,表达产物具有良好的抗原性和特异性。生物学活性检测证实其具有结合白癜风病人IgG的能力。 结论　在Pichiapastoris表达系统中 ,获得了具有生物学活性的可溶性重组TRP 1的B细胞表位肽段 ,为深入研究TRP -1人源表位及白癜风的发病机制、免疫治疗及恶性黑素瘤的免疫治疗奠定了基础。     

姜黄素对HaCaT增殖的抑制作用及对Notch-1,Bax和Bak表达的影响

目的研究姜黄素对HaCaT细胞抑制增殖的作用及其作用机制。方法倒置显微镜下观察不同浓度姜黄素作用后HaCaT细胞的形态学改变;MTT法检测不同浓度姜黄素对HaCaT细胞抑制增殖的作用;Western blot法检测Notch-1,Bax和Bak蛋白的表达情况。结果 0.01μmol/L姜黄素处理HaCaT细胞后的细胞活性与正常组的差异无统计学意义(P>0.05),>0.1μmol/L的姜黄素处理HaCaT细胞后,其增殖受到抑制,且均与姜黄素有浓度依赖关系(P均<0.05)。Western bolt法检测结果显示,Notch-1的表达逐渐降低,Bak和Bax的表达逐渐升高。结论姜黄素对HaCaT细胞的增殖具有抑制作用,并可诱导细胞凋亡。推测姜黄素可能通过下调Notch-1受体的表达而改变细胞凋亡蛋白的表达,从而发挥抑制角质形成细胞增殖的作用.     

重楼总皂苷对HaCaT细胞增殖和分泌IL-8的影响

目的研究重楼总皂苷对人永生化角质形成细胞株(HaCaT细胞)增殖和分泌白介素8(IL-8)的影响。方法采用MTT法进行细胞增殖实验,采用ELISA法测定重楼总皂苷对HaCaT细胞分泌IL-8的情况。结果在所选浓度范围内(60μg/mL,90μg/mL,120μg/mL和150μg/mL),重楼总皂苷对HaCaT细胞的增殖有抑制作用;其中120μg/mL和150μg/mL浓度组重楼总皂苷可抑制HaCaT细胞自分泌IL-8,90μg/mL,120μg/mL和150μg/mL浓度组重楼总皂苷能抑制TNF-α(浓度为100U/mL),刺激HaCaT细胞分泌IL-8。结论重楼总皂苷能抑制HaCaT细胞增殖和IL-8的分泌。     

TNF-α和IL-1β对HaCaT细胞诱生型一氧化氮合酶表达的影响

目的　探讨炎症性细胞因子肿瘤坏死因子 α(tumornecrosisfactor α ,TNF α)协同白细胞介素 1β(inter leukin 1β ,IL 1β)对体外培养角质形成细胞 (keratinocye ,KC)株HaCaT细胞诱生型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesyn thase ,iNOS)mRNA和蛋白表达的调节作用 ,以及地塞米松对TNF α和IL 1β作用的影响。 方法　用RT PCR、Westernblotting和免疫组织化学 (SP)方法检测HaCaT细胞iNOSmRNA和蛋白表达情况。结果　正常培养HaCaT细胞iNOS微弱表达或不表达 ,TNF α协同IL 1β显著上调HaCaT细胞iNOSmRNA和蛋白表达 ,地塞米松可显著抑制TNF α和IL 1β的作用。结论　推测TNF α和IL 1β可能通过上调角质形成细胞表达iNOS合成释放的一氧化氮 (niricoxide ,NO)参与皮肤免疫和炎症反应 ;地塞米松的治疗效应可能部分与其能抑制iNOS表达有关。