突触核蛋白-γ对乳腺癌雌激素受体表达的影响

目的探讨突触核蛋白-γ(SNCG)表达对乳腺癌雌激素受体(ER)表达的影响。方法构建慢病毒SNCG过表达及干扰载体,分别转染人乳腺癌T47D(SNCG+/ER+)细胞株。在SNCG过表达和SNCG干扰细胞组中,RT-PCR方法检测SNCG和ER的mRNA表达水平,Westernblot法检测SNCG和ER的蛋白表达水平,并做Pearson法相关统计分析。结果在mRNA水平,SNCG过表达组中ER基因的mRNA表达量显著增高,两者呈正相关(r=0.81,P=0.03);SNCG干扰组中ER基因的mRNA表达量显著降低,两者呈正相关(r=0.82,P=0.01)。在蛋白表达水平,SNCG过表达组ER表达显著增强,两者呈正相关(r=0.85,P=0.03);SNCG干扰组ER表达显著降低,两者呈正相关(r=0.83,P=0.04)。结论 SNCG对ER表达有正向调节作用,为进一步研究SNCG与ER的相互作用机制及SNCG与乳腺癌内分泌治疗之间的关系奠定实验基础。     

γ-神经突触核蛋白在电针改善大脑中动脉闭塞模型大鼠认知功能中的作用

目的:观察电针神庭、百会穴对大脑中动脉闭塞模型(MCAO)大鼠神经功能及海马中γ-神经突触核蛋白(SNCG) mRNA表达的影响,探讨SNCG与记忆认知能力之间的关系。方法:将18只SD大鼠平均随机分为电针组、模型组、假手术组。采用Longa改良线栓法制作MCAO大鼠模型,造模后24h后电针组每日电针神庭、百会穴20min,连续7d,模型组、假手术组予同等条件抓取。通过平衡木实验判断大鼠神经功能缺损状况;实时定量荧光PCR(q-PCR)检测脑组织SNCG mRNA表达。结果:电针组神经功能缺损评分大于假手术组,小于模型组;电针组海马中SNCG mRNA的表达大于假手术组,模型组海马中SNCG mRNA的表达小于假手术组,差异均有统计学意义。结论:电针能改善MCAO大鼠的神经功能状况,SNCG可能与认知功能神经系统之间存在相互作用。     

神经突触核蛋白-γ质粒转染胶质瘤细胞及其过表达对紫杉醇耐药性的影响

目的探讨胶质瘤细胞U87中神经突触核蛋白-γ(synuclein-γ,SNGG)过度表达对紫杉醇耐药的影响。方法 U87/SNCG组采用pIRES2-EGFP-SNCG真核表达载体转染U87胶质瘤细胞,构建稳定转染SNCG的U87/SNCG细胞系,U87/neo对照组采用pIRES2-EGFP空载质粒转染U87胶质瘤细胞,构建U87/neo细胞系。采用G418选择培养稳定转染的U87/neo和U87/SNCG细胞系,采用反转录实时定量聚合酶链反应和免疫荧光染色技术鉴定成功后,2组分别于紫杉醇作用6、12、18、24h时检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡细胞比例,采用免疫荧光染色法观察细胞形态学变化。结果成功构建U87/SNCG细胞系;U87/SNCG组SNCG mRNA表达较U87/neo对照组上调9.06倍;紫杉醇作用24h时,U87U/SNCG组细胞增殖抑制率[(25.49±2.44)%]和凋亡细胞比例[(7.02±0.26)%]明显低于U87/neo对照组[(34.36±2.95)%、(14.93±1.53)%](P<0.05);紫杉醇作用6h时,U87/SNCG组细胞G2/M期比例[(22.87±0.60)%]低于U87/neo对照组[(26.75±2.70)%](P<0.01);随着紫杉醇作用时间延长,与U87/SNCG组比较,U87/neo对照组细胞总数减少,细胞散落浮于培养液中,出现透明空泡、崩解细胞,并可见大量核固缩、核碎裂之凋亡现象。结论 SNCG过表达可降低抗微管药物诱导的U87细胞有丝分裂期阻滞,增强胶质瘤细胞的增殖能力和抗凋亡能力。     

锰对大鼠大脑α-突触核蛋白表达的影响

目的:探讨锰染毒大鼠大脑α-突触核蛋白的表达规律.方法:健康2月龄雄性SD大鼠50只,按体重随机分为A组(生理盐水组)、B组(Mn2+ 2.5 mg/kg)、C组(Mn2+ 5 mg/kg)、D组(Mn2+ 10 mg/kg)、E组(Mn2+ 20mg/kg).染毒30 d后,取脑测定大鼠大脑中α-突触核蛋白的表达情况.实时荧光定量PCR(QT-PCR)检测大鼠脑组织中α-突触核蛋白mRNA的相时表达水平,Western-blot检测α-突触核蛋白蛋白的表达.结果:B组、C组、D组和E组大鼠脑组织α-突触核蛋白mRNA的相对表达分别是A组的1.18、0.54、0.49和0.35倍.α-突触核蛋白表达用α-syn/GAPDH灰度值表示,结果显示α-突触核蛋白相对表达量,A、B、C、D和E组α-syn/GAPDH灰度值分别为0.32、1.33、0.71、0.54和0.57.与A组相比,B组α-突触核蛋白相对表达明显增加(P＜0.01).结论:锰在低剂量的时候可以促进α-突触核蛋白的表达聚集.     

神经细胞凋亡机制的研究进展：α-突触核蛋白与线粒体

目的：在帕金森病的病理结构中常常存在反常聚集的α-突触核蛋白和线粒体功能失常，就神经退行性病变中α-突触核蛋白和线粒体功能失常的关系做一综述。 资料来源：应用计算机检索Pubmed 2000-01／2005-09的相关文章。检索词为“α-synuclein，mitochondria and Parkinson＇s disease”并限定语种为“English”。 资料选择：对资料进行初审，查找全文的文献。纳入标准为：①与α-突触核蛋白的作用有关。②与线粒体和神经细胞凋亡有关。排除标准为较陈旧和重复研究的文章。 资料提炼：共收集到349篇文章，其中30篇文献符合纳入标准。 资料综合：在30篇文献中，15篇与α-突触核蛋白的作用有关；12篇与线粒体和神经细胞凋亡有关；3篇与α-突触核蛋白和线粒体的关系有关。以往的研究证明α-突触核蛋白是一种在神经退行性病变中起关键作用的毒性蛋白。但是近期研究表明，α-突触核蛋白可能具有双重作用。α-突触核蛋白与线粒体之间的相互作用可能是此种作用的关键。 结论：α-突触核蛋白与线粒体之间存在复杂的相互作用。未来集中于α-突触核蛋白与线粒体之间的关系的研究可能对帕金森病的病因学研究提供一种新的探索。     

脑脊液α-突触核蛋白水平与颅脑损伤患者预后的关系

目的：探讨重型颅脑损伤患者脑脊液中α-突触核蛋白（α-Synuclein）的变化及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测60名健康人和92例颅脑损伤患者损伤后1 d、3 d、5 d、7 d的脑脊液α-Synuclein和血清S-100B水平,分析其与格拉斯哥昏迷评分（GCS）及格拉斯哥预后评分（GOS）的关系。结果观察组各时间点脑脊液α-Synuclein和血清S-100B水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义（t分别=2.18、2.50、2.84、3.97、2.33、2.94、3.41、4.52, P均＜0.05）;观察组内中、重型亚组各时间点脑脊液α-Synuclein水平均明显高于轻型亚组,差异均有统计学意义（t分别=1.97、2.04、3.32、3.71、2.16、2.47、2.87、3.67, P均＜0.05）;重型亚组各时间点脑脊液α-Synuclein水平均明显高于中型亚组,差异均有统计学意义（t分别=2.37、2.62、3.79、4.14,P均＜0.05）;颅脑损伤后1 d的脑脊液α-Synuclein水平与1d的GCS及6个月后GOS呈负相关（r分别=-0.82、-0.61, P均＜0.05）。结论脑脊液α-Synuclein检测可作为判断颅脑损伤早期病情的指标之一。     

α-突触核蛋白在帕金森病发病机制和 治疗中的研究进展

路易小体(LB)是帕金森病(PD)的典型病理改变,而α-突触核蛋白(α-Syn)是LB的主要成分。α-Syn在各种因素影响下的异常折叠、聚集、扩散等在PD发病过程中起重要作用。本文概述了α-Syn在PD发病过程中的作用机制,并阐述针对α-Syn的靶向治疗策略。     

Paraquat联合Maneb暴露对C57BL/6小鼠黑质酪氨酸羟化酶与α-突触核蛋白的影响

目的探讨PQ（paraquat）联合Mn（maneb）暴露对C57BL/6小鼠黑质酪氨酸羟化酶与α-突触核蛋白的影响。方法运用PQ联合Mn腹腔注射建立小鼠模型,观察小鼠行为学改变,检测小鼠黑质TH阳性神经元数量及α-突触核蛋白的表达。结果与正常对照组相比,PQ联合Mn腹腔注射组小鼠的运动能力显著降低,黑质TH阳性神经元数量显著降低,α-突触核蛋白的表达水平显著增高。结论 PQ联合Mn能够建立稳定可靠的PD模型,可能是通过增加α-突触核蛋白的表达引起神经毒性。     

膀胱上皮特异性重组腺病毒的构建及其对膀胱癌细胞的抑制作用

目的构建特异作用于尿路上皮细胞的重组腺病毒并研究其对膀胱癌细胞株的抑制作用。方法 RT-PCR测定人类uroplakinⅡ（hUPⅡ）基因的表达模式以及柯萨奇病毒腺病毒联合受体（CAR）对多重细胞系的影响。瞬时转染和荧光素酶检测分析技术测定hUPⅡ启动子的组织特异性。构建重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A和Ad-UPⅡ-Null,限制性内切酶酶切分析和PCR技术检测其构建的正确性。Western blot分析细胞感染重组腺病毒后腺病毒E1A蛋白在膀胱癌细胞株BIU-87中的表达。测定重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对于膀胱癌细胞系BIU-87细胞的抑制作用。结果膀胱癌细胞系BIU-87细胞表达hUPⅡ和CAR,其中hUPⅡ启动子具有高活性。在细菌技术上使用同源重组,将hUPⅡ启动子和E1A基因插入到5型的重组腺病毒的基因组中。在BIU-87细胞感染重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A后,E1A蛋白的表达呈强阳性。MTT分析证实重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A抑制了膀胱癌BIU-87细胞的生长。结论 hUPⅡ启动子有高组织特异性。重组腺病毒Ad-UPⅡ-E1A对膀胱癌细胞系BIU-87细胞有抑制作用。     

红细胞来源α-突触核蛋白作为早发型帕金森病生物标记物的研究

目的:研究早发型(发病年龄<50岁)帕金森病(PD)患者红细胞中是否存在α-突触核蛋白(α-Syn)异常沉积,以及红细胞来源α-Syn能否作为早发型PD的生物标志物。方法:早发型PD患者26例纳入早发型PD组,30例年龄、性别匹配的健康对照受试者纳入对照组;收集所有入组受试者的人口学及临床资料。对早发型PD组的患者进行国际运动障碍协会统一帕金森病评价量表(MDS-UPDRS)和Hoehn&Yahr(H-Y)量表、简易精神状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)测评。应用电化学发光免疫测定法检测2组红细胞中的α-Syn单体和α-Syn聚集体浓度,并分析早发型PD患者红细胞来源α-Syn单体和α-Syn聚集体浓度与临床指标的相关性。结果:早发型PD患者的α-Syn单体和α-Syn聚集体的水平显著高于健康对照(P=0.009、P<0.0001)。在诊断效力方面,红细胞α-Syn聚集体优于α-Syn单体,红细胞α-Syn聚集体诊断早发型PD的AUC为0.887(95%CI 0.794-0.981),敏感度为73.3%,特异度为96.2%。早发型PD组红细胞来源α-Syn单体和α-Syn聚集体浓度与患者年龄、病程、H-Y分期、MDS-UPDRS-Ⅲ评分、MMSE评分、MOCA评分等指标均无显著相关性(P>0.05)。结论:早发型PD患者红细胞中存在α-Syn异常沉积,红细胞来源α-Syn特别是α-Syn聚集体可作为早发型PD的生物标志物。     

异常增加的α-突触核蛋白对帕金森病模型小鼠黑质及结肠多巴胺受体D1的表达影响

目的 探讨异常增加的α-突触核蛋白(α-Syn)对小鼠脑及结肠多巴胺受体D1(D1DR)表达的影响.方法 将C57BL/6J小鼠随机分为对照及模型组,纹状体立体定位注射α-Syn预成型纤维(PFF)制备小鼠帕金森病(PD)模型,对照组注射等体积PBS;术后6个月进行平衡杆、爬杆及旷场实验检测小鼠行为学差异;通过West...     

揭示α-突触核蛋白与帕金森病的关系：α-突触核蛋白单克隆抗体的研究

目的：α-突触核蛋白(α-Synuclein，α-Syn)是与帕金森病的发病密切相关的蛋白质。关于这种蛋白质在脑内神经元的亚细胞分布迄今尚无定论。制备α-Syn抗体探讨α-Syn在亚细胞的定位。方法：实验于2004—01／05在北京老年医学研究所神经生物研究室完成。采用重组的人α-Syn免疫小鼠，并将其脾细胞与骨髓瘤融合制备出杂交瘤，利用免疫组化和Western blot法筛选阳性克隆，获得一特异性抗α-Syn单克隆抗体。结果：噬菌体多肽展示分析表明，该抗体识别人α-Syn C-末端的一段特异序列，但该序列与大鼠和小鼠的相应序列差一个氨基酸。免疫印记分析表明，该抗体能够检测人、大鼠与小鼠脑组织中的α-Syn。用该抗体进行免疫组化染色结果显示，α-Syn免疫阳性物质主要存在于神经元末梢与核中。结论：所制备的单克隆抗体对α-Syn具有特异性，可用于人、大鼠和小鼠的α-Syn研究。     

重组α-突触核蛋白对SD大鼠黑质多巴胺能神经元的作用

目的：研究重组人全长α-突触核蛋白对大鼠黑质多巴胺能神经元的霉性作用。方法：原核表达、鉴定α-突触核蛋白；雄性SD大鼠30只，随机分为α-突触核蛋白注射组、六羟多巴注射组及α-突触核蛋白和六羟多巴联合注射组。用立体定位的方法分别右侧黑质注射α-突触核蛋白，六羟多巴及α-突触核蛋白 六羟多巴，左侧黑质注射等量的生理盐水，测定大鼠纹状体多巴胺含量和黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元数目。结果：六羟多巴和α-突触核蛋白 六羟多巴注射使注射侧多巴胺分别减少到对照侧的36．98％和21．79％，多巴胺能神经元数减少到30．81％和28．05％。而α-突触核蛋白注射对纹状体多巴胺和黑质多巴胺能神经元数目无显著影响。结论：没有发现重组α-突触核蛋白对大鼠黑质多巴胺能神经元有明显的毒性作用。     

揭示α-突触核蛋白与帕金森病的关系:α-突触核蛋白单克隆抗体的研究

目的:α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)是与帕金森病的发病密切相关的蛋白质。关于这种蛋白质在脑内神经元的亚细胞分布迄今尚无定论。制备α-Syn抗体探讨α-Syn在亚细胞的定位。方法:实验于2004-01/05在北京老年医学研究所神经生物研究室完成。采用重组的人α-Syn免疫小鼠,并将其脾细胞与骨髓瘤融合制备出杂交瘤,利用免疫组化和Westernblot法筛选阳性克隆,获得一特异性抗α-Syn单克隆抗体。结果:噬菌体多肽展示分析表明,该抗体识别人α-SynC-末端的一段特异序列,但该序列与大鼠和小鼠的相应序列差一个氨基酸。免疫印记分析表明,该抗体能够检测人、大鼠与小鼠脑组织中的α-Syn。用该抗体进行免疫组化染色结果显示,α-Syn免疫阳性物质主要存在于神经元末梢与核中。结论:所制备的单克隆抗体对α-Syn具有特异性,可用于人、大鼠和小鼠的α-Syn研究。     

miR-26抑制帕金森患者泛素-蛋白酶体系统对含α突触核蛋白降解作用研究

目的 探讨miR-26抑制帕金森患者泛素-蛋白酶体系统(UPS)对含α突触核蛋白(α-Syn)降解作用.方法 将120只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组与模型组,每组各60只.通过1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)法建立帕金森病小鼠模型,采用反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测模型...     

α-突触核蛋白寡聚体经氧化应激途径致帕金森病小鼠模型多巴胺能神经元损伤

目的:通过鱼藤酮持续灌胃构建的帕金森病小鼠模型研究α-突触核蛋白寡聚体(α-Syn)的毒性作用机制。方法:48只老年雄性C57小鼠随机分为鱼藤酮组和对照组,每组24只,鱼藤酮组灌注0.01 mL/g鱼藤酮氯仿溶液,对照组灌注0.01 m L/g氯仿溶液,均连续灌胃12周。于灌胃后取脑,行蛋白质印迹实验检测α-Syn表达水平、透射电镜观察中脑黑质神经元超微结构;于灌胃前、后取脑,免疫组化染色观察黑质部位酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞密度,并检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)水平。结果:灌胃12周后,Western blot显示鱼藤酮组中脑α-Syn的表达较对照组明显增多(P0.05)。免疫组化染色显示鱼藤酮组中TH阳性细胞数量较对照组明显减少(P0.05)。透射电镜显示鱼藤酮组小鼠黑质部可见线粒体、高尔基体不规则肿胀。鱼藤酮组SOD、GSH-PX水平较对照组明显下降(P0.05),MDA水平较对照组显著增多(P0.05)。结论:鱼藤酮小剂量持续灌胃可在脑内诱发形成α-Syn寡聚体,α-Syn寡聚体可能经氧化应激途径导致多巴胺神经元损伤。     

慢传输型便秘患者α-突触核蛋白硝基化的意义

目的探讨α-突触核蛋白(α-Syn)在结肠慢传输型便秘(STC)中的变化及病理学意义。方法应用免疫荧光双染技术和病理显微分析图像系统,在中倍光镜下比较22例STC患者(STC组)和20例健康志愿者(对照组)结肠黏膜α-Syn及硝基化α-Syn。结果两组结肠黏膜神经元及胶质细胞均有α-Syn及硝基化α-Syn表达。STC组结肠黏膜α-Syn及硝基化α-Syn较对照组明显增加,α-Syn黏膜层1101.1±26.34 vs.1431.3±30.36;黏膜下1023.1±31.42vs.1332.7±26.3;硝基化α-Syn(黏膜层396±14.16 vs.688.5±28.34;黏膜下129.7±3.78 vs.220.9±8.55),差异有显著性(P<0.05)。结论结肠黏膜神经α-Syn的硝基化参与STC的发病。     

老年神经变性疾病蛋白基因研究：3种α-突触核蛋白提取纯化方法的比较

目的：用经济、简便、快捷的方法得到大量、高纯度的α-突触核蛋白。方法：将重组的proEXNACP，pGEXNACPH和pTYBNACP质粒分别转入大肠杆菌DH5α，BL21和ER2566细胞进行培养增菌，IFYG诱导产生α-突触核蛋白；超声破碎、离心粗提取得到融合的α-突触核蛋白；分别经Ni-NTAresin，Glutathione Sepharose4B和Chitin Beads纯化，得到α-突触核蛋白。用SDS-PAGE电泳观察纯度、Western杂交检测正确性、用BCA蛋白定量法测定蛋白含量。结果：3种方法均能得到较高纯度的α-突触核蛋白，其中用Ni-NTA resin提取纯化的α-突触核蛋白的纯度最高；蛋白收获量分别是10mg／L，5mg／L和5mg／L；经济耗费和实验的繁简程度没有较大差异。结论：3种方法均可作为α-突触核蛋白的提取方法。     

老年神经变性疾病机制研究的基础：人α—突触核蛋白基因在原核细胞中的蛋白表达

目的：为提供人α—突触核蛋白(α—synuclein)抗原，制备抗体以研究其自身聚集在老年神经变性疾病病理机制中所起作用，重组质粒载体、进行DNA测序，以用于α—突触核蛋白基因在原核细胞中的蛋白表达。方法：将质粒pcDNA3NACO(pcDNA3α-svnuclein cDNA)和质粒载体proEXMTHT1分别进行酶切，取α—突触核蛋白cDNA片段，重组于proEX MTHT1质粒载体上；酶切鉴定后测序；再将重组质粒proEXNACP转染进入DH5α大肠杆菌体内；用IPTG诱导α—突触核蛋白基因产生蛋白；将α突触核蛋白纯化后行Western杂交。结果：质粒pnoEX MTHT1和pcDNA3NACP经限制性内切酶消化分别得到4750bp和550bp DNA片段。α—突触核蛋白基因在原核细胞中蛋白表达量为10mg／L。表达蛋白经Western杂交证实为α—突触核蛋白。结论：α—突触核蛋白基因在原核细胞的蛋白表达可作为体内外研究老年神经变性疾病病理机制的基础研究。     

唾液 α- 突触核蛋白 (SNCA) 与嗅觉评估在帕金森病早期筛查中的应用研究

目的　研究唾液 α- 突触核蛋白 (α-synuclein, SNCA) 与嗅觉评估在帕金森病 (parkinson’s disease, PD) 早期筛查中的应用。方法　选取宝鸡市康复医院 2018 年 2 月 ~2020 年 2 月 45 例 PD 患者为观察组,另选取同期 45 例体检健康者为对照组。比较两组的 16 种气味识别 (SS-16) 评分和唾液 SNCA。参照改良 H-Y 临床分级量表,将观察组 45 例 PD患者进一步分为早、中和晚期,分别比较不同分期患者的 SS-16 评分和唾液 SNCA。探究 PD 病情发展程度与 SS-16 评分和唾液 SNCA 的关系,采用受试者工作曲线 (ROC) 分析 SS-16 评分与唾液 SNCA 在 PD 早筛中的价值。结果　观察组的 SS-16 评分为 8.51±3.79 分,嗅觉障碍共 34 例,嗅觉障碍率为 75.56%,唾液 SNCA 为 1 272.13±38.52pg/ml。对照组的 SS-16 评分为 11.04±3.96 分,嗅觉障碍 11 例,嗅觉障碍率为 24.44%,唾液 SNCA 为 1 235.16±23.46pg/ml。两组的 SS-16 评分（t=3.096）、嗅觉障碍率（χ 2 =23.511）和唾液 SNCA（t=5.499）差异均具有统计学意义 ( 均 P <0.05)。不同程度 PD 患者 SS-16 评分（H=7.456）和唾液 SNCA（F=5.130）差异有统计学意义 ( P <0.05)。经 Spearman 秩相关分析显示 PD 病情发展程度与 SS-16 评分呈显著负相关关系 (r=-0.351, P =0.000),其与唾液 SNCA 呈显著正相关关系(r=0.426, P =0.000)。ROC 分析结果显示 SS-16 评分和唾液 SNCA 联合检测概率判断早期 PD 的 AUC 为 0.807,显著高于 SS-16 评分（ P <0.05）和唾液 SNCA（ P <0.05）单项检测。结论　SS-16 评分和唾液 SNCA 与 PD 发生发展密切相关,联合检测 SS-16 评分和唾液 SNCA 有助于 PD 的早期筛查。