TLR2/4配体增强的非特异性肝脏炎症对BALB/c小鼠自身免疫性肝炎的影响

目的:探索非特异性肝脏炎症诱导BALB/c小鼠产生自身免疫性肝炎(AIH)的原因。方法:尾静脉注射质粒pCYP2D6、pcDNA3.1和psTLR2/4,腹腔重复注射四氯化碳(CCl_4)。ELISA检测抗CYP2D6抗体和自身抗体水平;HE染色检测肝脏炎症情况;天狼星红染色检测肝脏纤维化情况。结果:CCl_4引发BALB/c小鼠产生非特异性肝脏炎症,TLR2/4配体增强了这种炎症。停止注射CCl_4后,非特异性肝脏炎症消失,但是却促进模拟抗原人CYP2D6诱导产生自身免疫应答、自身免疫性肝炎和肝纤维化,且TLR2/4配体增强了这些变化。结论:TLR2/4增强的肝脏非特异性炎症在BALB/c小鼠自身免疫性肝炎的启动和发展中可能发挥了重要作用。     

四氢大麻酚对C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎的保护作用

为研究大麻素成分[四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol, THC)]对C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis, AIH)的影响,尾静脉注射质粒pCYP2D6和pcDNA3.1,腹腔重复注射四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl_4)和THC,ELISA检测自身免疫应答程度,微板法检测血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)活性,HE染色检测肝脏炎症反应程度,天狼猩红染色检测肝脏纤维化程度。结果显示,THC对由CCl_4/CYP2D6引起的AIH造成的肝损伤有显著改善,而且对自身免疫应答有显著抑制作用,自身抗体和抗CYP2D6抗体水平显著降低,对于单独由CYP2D6引起的抗CYP2D6抗体能够完全抑制。THC对AIH和肝纤维化也有显著的抑制作用,且THC的抑制作用与其浓度有关。由此THC对由CCl_4/CYP2D6引起的C57BL/6小鼠的AIH有显著抑制作用,并且呈剂量依赖性。由此大麻素类药物THC对AIH可能有保护作用。     

影响空弯菌抗原诱导自身免疫应答的因素

利用慢性粘膜免疫应答小鼠模型,研究在空弯菌抗原(CJ-S131菌苗)诱导下,不同品系、性别的小鼠的自身免疫应答。经肠道,持续用CJ-S131菌苗免疫16周后,用ELISA或CELISA检测小鼠体内的抗ds-DNA,ss-DNA,组蛋白,ENA和胸腺细胞抗体。在五个品系小鼠中,四个品系小鼠(BALB/C,ICR,KM和SMMC/B)均有一种或多种被测的自身抗体升高。其中SMMC/B和KM小鼠的EI值较高,BALB/C和ICR小鼠次之。C57BL/6和对照组无显著性差异,提示对空弯菌抗原诱导的自身免疫应答不敏感。在遗传背景的制约下,性别也影响自身抗体的产生,有三种可能:(1)自身抗体升高主要见于雌性小鼠,如雌性KM小鼠被测的各种自身抗体均有升高;(2)雌性,雄性小鼠均有一种以上自身抗体升高,如SMMC/B和BALB/C小鼠;(3)雌、雄性小鼠的自身抗体均无升高,如C 57BL/6。本文结果表明,空弯菌苗诱导的自身抗体种类和水平,受小鼠的遗传背景和性别两个因素的相互制约和影响。     

普鲁卡因酰胺等诱导BALB／c小鼠产生抗核抗体

为了建立药物诱导狼疮（DIL）的动物模型,用普鲁卡因酰胺（Pca)、盐酸肼苯哒嗪（Hyd)和2,2-偶氮-双（3-乙苯基-噻唑啉-6-硫酸）（ABTS）对不同品系小鼠腹腔给药,用ELISA和间接免疫荧光法检测抗核抗体。三种药物都能够诱导小鼠产生抗核抗体,Pca诱导小鼠产生核抗体的阳性率为25%,而Hyd、ABTS诱导的阳性率均为12.5%。Pca、Hyd和ABTS都能诱导BALB/c小鼠而不是C57BL/6小鼠产生抗核抗体,其中DNA特异的抗体主要是IgG,而对组蛋白特异的抗体主要是IgM。结果表明在人体导致DIL的药物Pca、Hyd和ABTS能诱导昆明鼠及BALB/c小鼠产生抗核抗体,提示DIL的发生受遗传背景的影响。     

抗独特型抗体对小鼠心肌移植耐受的诱导作用

目的探讨抗独特型抗体对小鼠移植耐受的诱导作用.方法以C57BL/6小鼠脾细胞免疫Balb/c小鼠制备抗同种异品系抗体(Ab1),Ab1交联KLH后,免疫Balb/c小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体(Ab2),以之为移植受体,观察Ab2对小鼠心肌移植耐受的诱导作用.结果Ab1交联KLH和弗氏佐剂免疫可以有效诱导抗独特型抗体(Ab2),和对照组相比,Ab2诱导组的小鼠移植物的存活时间明显延长.结论移植前在受体体内诱导产生以移植物抗原为模拟抗原的抗独特型的抗体,可以对小鼠特异性低免疫反应状态起到有效的诱导作用.     

移植前诱导抗独特型抗体对小鼠皮肤排斥反应的抑制作用

目的 探讨抗独特型抗体诱导对异品系小鼠皮肤移植排斥反应的影响。方法 以C57BL／6小鼠脾细胞免疫Balb/c小鼠制备抗同种异品系抗体（Ab1),将Ab1与KLH交联后，免疫Balb/c小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体（Ab2),并以之为受体，观察Ab2对小鼠皮肤移植排斥反应的影响。结果Ab1交联KLH加弗氏佐剂免疫可有效地诱导抗独特型抗体（Ab2)产生。与对照组相比较，Ab2诱导组小鼠移植物存活时间明显延长。结论 移要有在受体体内诱导产生以移植物抗原为模拟抗原的抗独特型抗体，可对移植排斥反应产生有效的抑制作用。     

白介素10可保持蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞低水平并有利于妊娠成功

为探讨白介素10(IL-10)及其受体IL-10R相互作用并调节妊娠耐受的可能机制.在孕E4.5、E6.5和E8.5给BALB/c×C57BL/6孕鼠腹腔注射抗IL-10R抗体.而给NOD×C57BL/6孕鼠腹腔注射莺组小鼠IL-10.在E10.5检测小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞构成比和胚胎吸收率.研究发现...     

临床分离2型登革病毒突变株E蛋白N端158氨基酸基序免疫原性初探

目的:Ⅱ型登革病毒临床分离突变株(B株)E基因区部分序列的原核表达载体构建,蛋白表达、复性和纯化,及其免疫原性的初探。方法:将B株E基因1～476bp序列克隆入原核表达载体pET28a(+),经酶切、测序鉴定正确后转入表达菌,IPTG诱导后将包涵体变性,复性,纯化后的蛋白免疫C57BL/6和BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并通过Western blot和ELISA进行抗体鉴定。结果:成功构建了pET28a(+)-B-E原核表达载体,在表达菌中以包涵体形式稳定高表达,分子量为20kD。利用蛋白的His标签进行Western blot鉴定确定该蛋白为重组B-E蛋白,得到的可溶蛋白纯度大于90%。B-E蛋白免疫BALB/c和C57BL/6小鼠均可以得到有效的多克隆抗体。结论:B-E蛋白对BALB/c和C57BL/6小鼠具有免疫原性,其中ELISA鉴定免疫C57BL/6小鼠抗体的滴度为1∶12800,Western blot鉴定免疫BALB/c小鼠抗体滴度为1∶500。     

人乳头瘤病毒18型E6、E7蛋白T细胞表位筛选

目的 筛选人乳头瘤病毒18型E6、E7蛋白在小鼠中的T细胞表位.方法 以重组痘苗病毒rVVJ18 E7、E6分别免疫C57BL/6和BALB/c小鼠,利用覆盖E6和E7蛋白全长序列的肽库或截短的多肽,用酶联免疫斑点方法 （ELISPOT）和细胞内因子染色检测其所诱发的细胞免疫反应.结果 重组痘苗病毒rVVJ18 E7、E6免疫的两种品系小鼠均可检测到E6肽库刺激产生的特异性细胞免疫反应,经筛选确定E667-75（KCIDFYSRI）为C57BL/6小鼠、E660-68（IPHAAGHKC）为BALB/c小鼠识别的CD8＋的T细胞表位.两种小鼠中均未检测到E7蛋白诱发的细胞免疫反应.结论 筛选到分别被BALB/c和C57BL/6小鼠识别的两条针对E6蛋白的不同T细胞表位,为今后评价HPV18疫苗中E6蛋白的细胞免疫效果提供了实验依据.     

灭活SARS冠状病毒疫苗对小鼠脏器影响的实验研究

目的:探讨灭活SARS冠状病毒疫苗对小鼠是否有损伤作用。方法:用灭活SARS冠状病毒分别免疫BALB/c和C57BL/6小鼠;ELISA法检测小鼠血清中抗SARS冠状病毒抗体水平;免疫8周后取小鼠各脏器,观察其病理形态学改变。结果:免疫8 d后,小鼠血清中就可检测到特异的IgM、IgG抗体;组织切片染色观察,可见少数小鼠肺及肝组织出现轻度损伤,其他脏器未见病变。结论:SARS冠状病毒灭活疫苗可诱导小鼠产生特异性抗体,同时没有造成严重的器官损伤。这将为SARS疫苗进入临床研究打下基础。     

牛MBP诱导BALB/c和C57BL/6小鼠实验性变态性脑脊髓炎样反应的研究

为了进一步研究实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)动物模型,采用从新鲜牛脊髓中提取的MBP免疫诱导非敏感品系BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠,通过对实验动物的症状、中枢神经系统的病理改变及细胞因子水平变化的检测,较成功地建立了C57BL/6、BALB/c小鼠的EAE模型,实验方法稳定可靠。     

肿瘤细胞组蛋白的免疫原性研究

为了寻找肿瘤患者血清中多种抗核抗体 (antinuclearantibodies,ANA )生成的新的可能免疫原 ;进一步论证细胞活化是核抗原性发生改变并诱导抗体产生的根本因素。提取SP2 / 0瘤细胞组蛋白免疫同系BALB/c小鼠 ,用ELISA方法检测IgG类抗组蛋白、抗dsDNA抗体 ,免疫荧光法检测ANA核型 ,免疫印迹法测定可溶性核抗原 (ENA )抗体。结果 :SP2 / 0瘤细胞组蛋白诱导同系BALB/c小鼠产生了IgG类抗组蛋白、抗dsDNA、抗Sm、抗SS A/SS B等多种自身ANA ,其核型有周边型、均质型、颗粒型等。推测肿瘤细胞组蛋白是诱导ANA生成的免疫原之一。     

分子佐剂C3d3增强hCGβ3蛋白疫苗的体液免疫效应

目的：通过分子佐剂C3d3增强hCGβ避孕疫苗的免疫原性。方法：采用分子生物学技术以phCMV1为载体分别构建分泌型、带有6个组氨酸纯化标签的真核表达载体phCMV1-6His-hCGβ-C3d3和phCMV1-6His-hCGβ，在CHO细胞中获得重组蛋白的稳定、高效表达并用镍柱和凝胶过滤层析对其进行分离、纯化。分别用hCGβ-C3d3融合蛋白、hCGβ联合C3d3和单用hCGβ对BALB／c与C57BL／6小鼠进行免疫，共免疫两次，间隔4周，ELISA测定血清中的抗体滴度，比较各组的免疫效果。结果：无论是BALB／c小鼠还是C57BL／6小鼠，hCGβ-C3d3融合蛋白诱导产生的抗hCGβ抗体的出现时间都明显早于hCGβ与C3d3联合免疫和hCGβ单独免疫组。在BALB／c小鼠，初次和再次免疫结果显示，C3d3使hCGβ的免疫原性增强了1995倍。C57BL／6小鼠所显示出的体液免疫反应强度虽不如BALB／c小鼠，但C3d3也使hCGβ的免疫原性增强了1259倍。结论：通过分子佐剂C3d3可以大幅地提高hCGβ避孕疫苗的免疫原性，在个性差异很大的不同品系小鼠，C3d3均能增强机体对hCGβ的体液免疫应答能力。     

抗MHC-Ⅰ类分子单抗促进异基因小鼠皮肤移植耐受

目的通过静脉注射异基因脾细胞和抗H-2b单抗加腹腔注射环磷酰胺诱导成年B6小鼠对异基因皮肤移植物产生免疫耐受.方法经C57BL/6(H-2b,B6)小鼠尾静脉注射BALB/c小鼠(H-2d)脾细胞,2 d后腹腔注射环磷酰胺(CP),随后2次尾静脉注射抗小鼠的H-2b单克隆抗体,然后进行皮肤移植,并于耐受30d对受体B6小鼠作混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)、迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)等耐受状态检测.结果 BALB/c小鼠的皮肤移植物在耐受B6小鼠中存活期特异延长.MLR和DTH检验证明:B6小鼠对BALB/c小鼠的脾细胞产生特异性耐受,对无关第3者KM小鼠的脾细胞仍表现出强烈的免疫反应.结论抗MHC-Ⅰ类分子单克隆抗体可明显促进"细胞+CP"诱导的异基因皮肤移植耐受;克隆排除是诱导耐受的主要因素.     

表达hCGβ的重组乳酸杆菌经口接种小鼠产生抗hCGβ体液免疫应答

目的：用表达hCGβ的重组乳酸杆菌活疫苗经口接种不同品系小鼠产生抗hCGβ免疫应答。方法：用10^8、10^9、10^10个重组乳酸杆菌Lb．hCGβ灌服6～8周龄雌性BALB／c和C57BL／6小鼠。3周后用相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测初次免疫后2～8周血清和阴道灌洗液抗hCGβIsG和IgA抗体滴度。流式细胞仪分析B和T细胞的增殖情况，ELISpot计数抗hCGβIsG和IsA抗体分泌细胞克隆数。结果：不同品系小鼠经口腔接种10^9、10^10Lb．hCGβ可诱导相近的免疫应答；而10。诱导的抗体滴度较低。在加强免疫后，10^9和10^10Lb．hCGβ诱导的抗血清结合hCGβ抗原的能力〉100ng／n11。Lb．hCGβ口腔接种后，BALB／c小鼠子宫和阴道的B细胞增殖；C57BL／6小鼠子宫及阴道的抗体分泌细胞克隆数较脾脏明显增多（P〈0．05）。结论：重组乳酸杆菌活疫苗Lb．hCGβ可经口接种诱导有效的抗hCGβ免疫应答，产生的应答强度与免疫剂量呈正相关。     

不同遗传背景对C5aR 在银屑病病理中作用的影响

目的:建立咪喹莫特诱导的银屑病样动物模型,通过比较BALB/c和C57BL/6两种遗传背景的C5aR~(+/+)和C5aR~(-/-)小鼠的病理表现及相关指标的变化,探讨不同遗传背景对C5aR在银屑病病理发生中的作用。方法:小鼠分为4组:C5aR~(+/+)BALB/c、C5aR~(-/-)BALB/c、C5aR~(+/+) C57BL/6和C5aR~(-/-)C57BL/6小鼠组。咪喹莫特涂抹小鼠背部皮肤,诱导银屑病动物模型。依据PASI(psoriasis area severity index)评价各组小鼠的皮损程度;HE染色观察皮损组织的病理学变化;qRT-PCR检测皮损组织中IL-17A mRNA水平;流式细胞术分析引流淋巴结和皮损局部组织中分泌IL-17A的γδT细胞亚群的百分比。结果:与同背景C5aR~(+/+)小鼠相比,C5aR~(-/-)小鼠银屑病样表型显著减小;相比BALB/c背景的C5aR~(+/+)(或C5aR~(-/-))小鼠,C57BL/6背景的C5aR~(+/+)(或C5aR~(-/-))小鼠银屑病样皮损和相关指标明显减轻;皮损局部组织和引流淋巴结中分泌IL-17A的γδT细胞亚群百分比显著降低。结论:C5aR在咪喹莫特诱导的银屑病样炎症中发挥重要作用;但遗传背景不同,咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠表现也不同:BALB/c遗传背景的C5aR~(+/+)和C5aR~(-/-)小鼠比C57BL/6遗传背景的相应C5aR~(+/+)和C5aR~(-/-)小鼠更为敏感。     

异基因MHC Ⅰ修饰对骨髓细胞的免疫学特性的影响

目的：观察异基因MHC Ⅰ修饰对骨镑细胞的免疫学特性的影响，探讨MHC Ⅰ类分子在诱导免疫耐受中的作用机制。方法：由逆转录病毒载体pMSCV介导，将BALB/C小鼠的MHC Ⅰ类分子H—2D^d基因导入C57BL/6小鼠的骨骼细胞，流式细胞仪检测转染后基因的表达。MTT法检测混合淋巴细胞反应，乳酸脱氢酶释放法测定BALB/C小鼠NK细胞对H-2D^d修饰后C57BL/6小鼠骨髓细胞的杀伤活性。结果：重组逆转录病毒感染的C57BL/6小鼠骨髓细胞对BALB/C小鼠脾细胞的刺激强度或应答程度，与未转染和空载体病毒感染的C57BL/6小鼠骨髓细胞相比都显著减弱。BALB/C小鼠NK细胞对转染H-2D^d基因后的C57BL/6小鼠骨髓细胞的杀伤显著降低。结论：在骨髓移植中用受者MHC Ⅰ分子修饰供者骨髓细胞可能诱导免疫耐受。     

小鼠对雨蛙肽诱发急性胰腺炎易感性的品系差异

目的: 小鼠是常用于胰腺炎研究的模式动物。然而不同品系的小鼠似乎对胰腺炎有着不同的易感性,但缺乏系统的对比研究。我们因此比较了C57BL/6J、BALB/c和ICR 小鼠对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎易感性的差异。方法: 2月龄C57BL/6J、BALB/c和ICR雌鼠各12只,随机分为实验组(n=6)和对照组(n=6)。实验组予以腹腔注射雨蛙肽(50 μg/kg),每小时1次,共注射7次;对照组同法注射等量生理盐水。分别于第1次注射后的0、3、6、9、12、24 h取小鼠血浆,并于24 h处死小鼠取其胰腺组织。测定各组小鼠的血浆淀粉酶和脂肪酶活性;观察其胰腺组织的病理形态学改变程度及炎症因子表达水平。结果: 雨蛙肽诱导胰腺炎后,BALB/c和ICR小鼠的血浆淀粉酶和脂肪酶水平较C57BL/6J小鼠升高更为显著;C57BL/6J小鼠与其它2种品系的小鼠相比,其胰腺病理形态学改变程度较轻,胰腺组织炎症因子表达水平也较低。结论: BALB/c和ICR小鼠对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎的敏感性比C57BL/6J小鼠高。这一结果对急性胰腺炎研究中小鼠品系的合理选择具有指导意义。     

IL-2协同抗CD45RB抗体调节Treg/Th17细胞的比例并延长小鼠移植皮肤存活时间

目的:研究IL-2在抗CD45RB抗体诱导免疫耐受中对Treg/Th17细胞分化的影响,进一步阐明抗CD45RB抗体诱导免疫耐受的机制。方法:用免疫磁珠分选C57BL/6小鼠脾脏中的CD4+T细胞,在抗CD45RB抗体与IL-2的作用下培养72小时后,流式检测Treg/Th17细胞的变化。以BALB/c小鼠为供体,C57BL/6小鼠为受体建立同种异基因皮肤移植模型,分别给予抗CD45RB抗体及IL-2等治疗,术后1、3、5、7、9天取受体鼠脾细胞,动态检测Treg/Th17细胞的变化;术后第9天取移植皮肤HE染色观察炎性细胞的浸润情况;观察并记录移植皮肤的存活时间。结果:CD4+T细胞在IL-2联合抗CD45RB抗体的作用下培养72小时后,Treg比例升高,Th17细胞比例下降;IL-2联合抗CD45RB抗体治疗后明显延长小鼠移植皮肤的存活时间。结论:IL-2可以明显增强抗CD45RB抗体诱导免疫耐受的形成,使Treg细胞上调,下调Th17细胞,有利于免疫耐受的形成。     

登革病毒抗原肽免疫小鼠诱导特异性CD4^＋ T细胞反应

目的:探讨4条登革病毒抗原肽在不同遗传背景小鼠中的免疫原性.方法:4条登革病毒抗原肽(C45-57KLVMAFIAFLRFL,E396-408SSIGKMFEATARG,NS323-35YRILQRGLLGRSQ 和 NS3141-155NREGKIVGLYGNGVV) 中每条肽分别免疫BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠;3周后,处死小鼠并制备脾细胞悬液;不刺激或同样抗原肽刺激脾细胞后,采用细胞内细胞因子染色流式细胞术(ICS) 检测小鼠脾细胞CD4+ T细胞中肽特异性产生IFN-γ或IL-4的CD4+ T 细胞的百分比.结果:肽C45-57可诱导BALB/c小鼠产生特异性的IFN-γ+ CD4+ T细胞(0.72%±0.04% vs 0.04%±0.02%,P＜0.05)而肽E396-408 则诱导产生特异性的IL-4+ CD4+ T细胞(0.09%±0.01% vs 0.01%±0.01%,P＜0.05);肽E396-408、NS323-35和NS3141-155均可诱导C57BL/6小鼠产生特异性的IFN-γ+ CD4+ T细胞(分别为0.31%±0.03% vs 0.02%±0.01%,P＜0.05;0.21%±0.03% vs 0.04%±0.01%,P＜0.05;0.44%±0.04% vs 0.02%±0.01%,P＜0.05),而肽C45-57可诱导产生特异性的IL-4+ CD4+ T细胞(0.45%±0.05% vs 0.02%±0.02%,P＜0.05).结论:肽C45-57和E396-408在BALB/c小鼠中具有免疫原性而肽C45-57、E396-408、NS323-35和NS3141-155在C57BL/6小鼠中具有免疫原性.