癫痫电压门控性钙通道辅助亚基的研究进展

电压门控性钙通道结构和功能的变化引发外钙内流,而过度的钙内流引起神经元异常放电。因此,电压门控性钙通道作为神经元兴奋性的关键因素,在癫痫这种神经元异常放电疾病中发挥重要作用。β、α_2δ和γ作为其辅助亚基,可调节癫痫中神经元电压门控性钙通道的活性、靶向定位、表达密度等通道特性。本文对于电压门控性钙通道辅助亚基β、α_2δ在癫痫发病中的作用作一概述。     

内源性雌激素调控脓毒症小鼠心肌L型钙离子通道α1C亚基的表达

目的　探讨内源性雌激素对脓毒症小鼠心肌钙离子通道α1C亚基（CACNA1C）的影响。 方法　雌性昆明小鼠行双侧卵巢摘除术,术后30 d利用盲肠结扎穿刺术（CLP）建立脓毒症小鼠模型,分为5组：脓毒症组（S组）,去卵巢+脓毒症组（QS组）,假手术组（C组）,去卵巢+假手术组（QC组）,去卵巢+苯甲酸雌二醇（QE组）。荧光定量PCR和Western blot检测造模后3 h,6 h,12 h,24 h左心室CACNA1C表达水平,免疫组化检测造模后12 h左心室CACNA1C表达及分布情况。 结果　（1）QC组CACNA1C的表达水平显著高于C组,QE组CACNA1C的表达水平显著低于QC组。（2）CLP后3 h,S组CACNA1C表达显著高于对照组和其它时间点。（3）CLP后3 h、6 h、12 h和24 h,QS组CACNA1C表达均显著低于对照组,且各时间点之间无差异。 结论　（1）双侧卵巢摘除后CACNA1C表达显著升高,双侧卵巢摘除后补给苯甲酸雌二醇可以逆转CACNA1C的升高。（2）正常小鼠CLP后3 h CACNA1C的表达出现短暂的升高,而双侧卵巢摘除的小鼠CLP后各时间点CACNA1C的表达均显著低于对照组。     

内源性雌激素调控脓毒症小鼠心肌L型钙离子通道α1C亚基的表达

目的　探讨内源性雌激素对脓毒症小鼠心肌钙离子通道α1C亚基（CACNA1C）的影响。 方法　雌性昆明小鼠行双侧卵巢摘除术,术后30 d利用盲肠结扎穿刺术（CLP）建立脓毒症小鼠模型,分为5组：脓毒症组（S组）,去卵巢+脓毒症组（QS组）,假手术组（C组）,去卵巢+假手术组（QC组）,去卵巢+苯甲酸雌二醇（QE组）。荧光定量PCR和Western blot检测造模后3 h,6 h,12 h,24 h左心室CACNA1C表达水平,免疫组化检测造模后12 h左心室CACNA1C表达及分布情况。 结果　（1）QC组CACNA1C的表达水平显著高于C组,QE组CACNA1C的表达水平显著低于QC组。（2）CLP后3 h,S组CACNA1C表达显著高于对照组和其它时间点。（3）CLP后3 h、6 h、12 h和24 h,QS组CACNA1C表达均显著低于对照组,且各时间点之间无差异。 结论　（1）双侧卵巢摘除后CACNA1C表达显著升高,双侧卵巢摘除后补给苯甲酸雌二醇可以逆转CACNA1C的升高。（2）正常小鼠CLP后3 h CACNA1C的表达出现短暂的升高,而双侧卵巢摘除的小鼠CLP后各时间点CACNA1C的表达均显著低于对照组。     

电压门控氯通道C1C蛋白突变体及相关疾病研究进展

CIC是一组介导氯离子跨膜转运的蛋白质,参与细胞多种生理及病理过程.基因突变形成的异常C1C蛋白影响离子通道门控特性,从而扰乱氯离子的正常跨膜转运,可导致先天性肌强直、先天性癫痫、Bartter综合征、Dent's病、视网膜退化病及骨硬化病等多种疾病.     

α1E钙通道在小鼠脑缺血性损伤中的保护作用

细胞内钙超载在脑缺血性损伤的病理变化进程中有十分重要的作用[1 ] ,缺血后细胞内钙超载既有细胞外钙内流 ,又有细胞内贮存钙释放的参与[2 ] 。作为外钙内流的重要途径 ,电压依赖性钙通道在脑缺血性损伤的病理生理变化过程中 ,必然发挥重要作用。根据通道的电生理特征及药理学特性可将中枢神经系统的电压依赖性钙通道分为L型、N型、P型、Q型、R型和T型钙通道。现有研究资料表明[3] ,L型、N型、P型和Q型钙通道的激活在脑缺血过程中起加剧和促进缺血性病理变化的作用。脑缺血后的病理生理变化是一个复杂的过程 ,兴奋性神经递质释放是重要…     

miR-1和miR-133a对大鼠肥大心肌细胞L-型钙通道Cavβ_2和α1C亚基的调控作用

目的研究miR-1和miR-133a在大鼠心肌细胞肥大中对L-型钙通道β2亚基(Cavβ2)和α1C亚基的调控作用。方法异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌细胞肥大;在线数据库micro Cosm和Targetscan预测miR-1和miR-133a的靶基因;分别构建含有Cavβ23'UTR或α1C 3'UTR的重组质粒,与miR-1或miR-133a共转染HEK293细胞,验证Cavβ2亚基是miR-1的靶基因,α1C亚基是miR-133a的靶基因;用Western blot法检测心肌细胞内Cavβ2和α1C蛋白表达;用siRNA干扰Cavβ2和α1C表达,明确Cavβ2和α1C在心肌细胞肥大中的作用。结果 1)Cavβ2为miR-1的潜在靶基因,α1C为miR-133a的潜在靶基因。2)分别将miR-1和Cavβ23'UTR,miR-133a和α1C 3'UTR共转染HEK293细胞,荧光素酶荧光值均显著降低(P0.05,P0.01)。3)分别转染miR-1 mimic、miR-133a mimic上调miR-1、miR-133a的表达后,心肌细胞内Cavβ2和α1C蛋白表达均明显下降(P0.01,P0.05)。4)用RNAi下调Cavβ2和α1C表达可明显抑制心肌细胞表面积(P0.01),ANP和β-MHC mRNA表达增加(P0.05)。结论Cavβ2亚基是miR-1的靶基因,α1C亚基是miR-133a的靶基因。miR-1和miR-133a可能通过负性调控L-型钙通道Cavβ2和α1C蛋白表达,抑制心肌细胞肥大。     

激活α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAchR)增加小鼠海马组织M2型小胶质细胞数量并减轻脓毒症脑病

目的检测α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAchR)对M2型小胶质细胞的影响,探索其减轻脓毒症脑病(SAE)的机制。方法采用盲肠结扎穿刺术(CLP)于2月龄雄性C57BL/6小鼠构建SAE模型,比较两组小鼠学习记忆能力的改变。采用Western blot法检测海马组织中α7nAchR的表达变化。给予腹腔注射α7nAchR的激动剂二甲氧基苯亚胺基假木贼碱(GTS-21),观察给予激动剂后海马组织中α7nAchR的表达变化,同时探索GTS-21是否能减轻SAE小鼠的学习记忆障碍。通过免疫荧光细胞化学染色法检测精氨酸酶1(ARG1)、离子钙结合接头蛋白1(Iba-1)的表达确定SAE小鼠M2型小胶质细胞数量的变化,以及GTS-21对M2型小胶质细胞数量的影响。结果 SAE小鼠的新物体识别及恐惧记忆能力显著下降,小鼠海马组织中α7nAchR表达显著降低。GTS-21可改善SAE小鼠的学习记忆障碍,增加脑组织中α7nAchR的表达。同时,脓毒症小鼠海马组织中M2型小胶质细胞显著减少,而GTS-21可显著增加M2型小胶质细胞的数量。结论 SAE小鼠海马组织中α7nAchR表达降低,使抑制炎症反应的M2型小胶质细胞减少, GTS-21可显著增加M2型小胶质细胞数量,减轻SAE小鼠的学习记忆障碍。     

α_1肾上腺素受体中仅α_(1a)亚型参与对心肌DNA合成的促进作用

目前普遍认为儿茶酚胺引起心肌蛋白质合成与心肌肥大的作用是通过激动α_1肾上腺素受体(α_1受体)来达到的。本工作的目的是确定α_1受体的两种亚型——α_(1a)与α_(1b)是否都参与上述作用。取1-3d乳鼠心脏,经胰酶消化后差速贴壁1.5h,取悬浮细胞以0.6-1.0×10~6/ml密度植入24孔培养板,在常规DMEM液中培养48h后加药,分为     

白藜芦醇通过下调缺氧诱导因子1α(HIF-1α)减少小鼠RAW264.7巨噬细胞的凋亡

目的研究白藜芦醇(Res)对氯化钴(CoCl_2)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞损伤的保护作用及其分子机制。方法巨噬细胞分为对照组、 CoCl_2组和Res预处理组, CoCl_2组给予500μmol/L CoCl_2干预8 h, Res预处理组先用40μmol/L Res预处理2 h,再给予500μmol/L的CoCl_2干预8 h。采用CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡比例;免疫荧光细胞化学染色法观察胱天蛋白酶3(caspase-3)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的分布及CoCl_2和Res对其表达的影响;相应试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量; Western blot法检测各组细胞Bcl2、 BAX、裂解型caspase-3(c-caspase-3)及HIF-1α蛋白水平。结果与CoCl_2组相比, Res预处理能提高细胞活力,减少细胞凋亡并增加SOD活性、降低MDA含量; caspase-3主要分布在细胞质中,而HIF-1α主要分布在细胞核;与CoCl_2组相比, Res能上调Bcl2的表达,下调BAX、 c-caspase-3及HIF-1α的蛋白水平。结论 Res可减少巨噬细胞凋亡,其机制可能与Res可减少细胞内氧自由基的堆积、增强细胞抗氧化能力以及下调细胞上HIF-1α的表达有关。     

PPARα/PGC-1α在阿霉素扩张型心肌病小鼠心肌组织中的表达及作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptorsα,PPARα)及过氧化物酶体增殖物活化受体协同刺激因子1α(peroxisome proliferator activated receptor coactivator 1 alpha,PGC-1α)在阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导扩张型心肌病小鼠心肌中的变化及其对心肌能量代谢及心功能的影响。方法:选取小鼠40只,分为正常对照组、单纯阿霉素模型组、PPARα抑制剂组和PPARα激动剂组。除正常对照组外,其余小鼠采用阿霉素诱导建立扩张型心肌病模型,检测其中PPARα及PGC-1α蛋白的表达,PPARα抑制剂组和PPARα激动剂组在造模前分别采用PPARα抑制剂及激动剂对小鼠预处理2周,高效液相层析法(high-performance liquid chromatography,HPLC)测量线粒体内腺苷酸含量,[3H]-ADP(氚标记二磷酸腺苷)掺入法检测线粒体膜腺苷酸转运体(adenine nucleotide translocator,ANT)转运活性,并利用超声心动图检测各组心脏结构及心功能。结果:成功建立阿霉素诱导的扩张型心肌病模型,PPARα及PGC-1α蛋白在模型组中表达明显低于正常组(P0.05),线粒体内高能磷酸盐含量和线粒体转运活性明显降低(P0.05),心功能显著下降,血流动力学指标紊乱(P0.05);与模型组比较,PPARα抑制剂预处理2周后,可显著降低PPARα/PGC-1α表达,线粒体内高能磷酸盐含量及线粒体ANT转运活性显著降低(P0.05),心功能恶化;而予PPARα激动剂预处理干预2周,上调PPARα/PGC-1α蛋白表达同时,虽然线粒体内高能磷酸盐含量未发现有显著变化,但其可改善阿霉素心肌病大鼠线粒体ANT转运活性,超声心动图显示对心腔大小及心功能有改善作用(P0.05)。结论:在阿霉素诱导扩张性心肌病中,PPARα/PGC-1α对ANT的活性起重要调控作用,激活PPARα/PGC-1α可减轻阿霉素心肌损伤。     

整合素亚基α6、α4、αv、β1、β3在小鼠心脏发育过程中的作用

目的：观察小鼠胚胎发育过程中整合素亚基α6、α4、αv、β1、β3在心脏中的表达，探讨整合素亚基(α6、α4、αv、β1、β3在小鼠心脏发育过程中的作用。方法：取孕9—16天的ICR小鼠胚心脏，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，用免疫组化的方法观察整合素亚基α6、α4、αv、β1、β3的蛋白表达情况，     

内毒素休克小鼠心肌胆碱酯酶(AChE)活力的变化

我们曾在内毒素休克小鼠动态地观察了心肌Ach含量的变化,发现注射内毒素后3、6、7小时心肌Ach含量的增高有统计学显意,为进一步了解胆碱能神经系统在休克心衰中的作用,我们进行了心肌AchE活性的测定。     

YAP通过增加HIF-1α转录活性进而促进小鼠下肢缺血后动脉生成

目的探讨内皮细胞Yes相关蛋白（YAP）在小鼠下肢缺血后动脉生成过程中的作用与机制。方法缺氧处理人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,并使用Westernblot检测YAP第127位丝氨酸的磷酸化水平,采用免疫荧光染色检测YAP的细胞亚定位情况;免疫共沉淀实验检测HUVECs中YAP与缺氧诱导因子1α（HIF-1α）结合的情况;萤光素酶报告基因实验检测YAP野生型（YAP-WT）质粒以及YAP丝氨酸位点突变（YAP-5SA）质粒对HIF-1α转录活性的调节;构建内皮细胞特异性YAP过表达（EC-YAP^tg）小鼠,于结扎股动脉手术后1、8、15和22d使用激光多普勒血流仪检测小鼠下肢血流恢复情况;免疫荧光染色检测小鼠腓肠肌CD31、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及巨噬细胞分化抗原3（Mac3）的表达情况。结果缺氧可以时间依赖性地下调YAP第127位丝氨酸的磷酸化,同时促进YAP在细胞核定位;免疫共沉淀实验证实,YAP可以与HIF-1α在缺氧条件下相互结合;YAP-WT或者YAP-5SA均可以显著增加HIF-1α的转录活性;与对照（YAP^flox）小鼠相比,EC-YAP^tg小鼠下肢缺血后血流恢复情况更好,腓肠肌组织染色显示新生血管的数量显著增加。结论YAP可以与HIF-1α相互结合并增加其转录活性;内皮细胞过表达YAP可以促进缺血后的动脉生成。     

α(1)-antitrypsin deficiency and inflammation

α(1)-antitrypsin deficiency is an autosomal recessive disorder that results from point mutations in the SERPINA1 gene. The Z mutation (Glu342Lys) accounts for the majority of cases of severe α(1)-antitrypsin deficiency. It causes the protein to misfold into ordered polymers that accumulate within the endoplasmic reticulum of hepatocytes. It is these polymers that form the periodic acid Schiff positive inclusions that are characteristic of this condition. These inclusions are associated with neonatal hepatitis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The lack of circulating α(1)-antitrypsin exposes the lungs to uncontrolled proteolytic attack and so can predispose the Z α(1)-antitrypsin homozygote to early-onset emphysema. α(1)-antitrypsin polymers can also form in extracellular tissues where they activate and sustain inflammatory cascades. This may provide an explanation for both progressive emphysema in individuals who receive adequate replacement therapy and the selective advantage associated with α(1)-antitrypsin deficiency. Therapeutic strategies are now being developed to block the aberrant conformational transitions of mutant α(1)-antitrypsin and so treat the associated disease.     

敲低细胞色素C氧化酶亚基4(COX4)通过增加CXCR4表达促进人肝癌细胞侵袭和迁移

目的探讨细胞色素C氧化酶亚基4 (COX4)表达下调对肝癌侵袭的影响及其机制。方法免疫组织化学染色法检测肝癌及癌旁组织中COX4的表达,结合临床病理资料分析肝癌组织中COX4表达水平与肝癌临床病理指标的相关性。利用小干涉RNA(siRNA)敲低SNU-739及SNU-368肝癌细胞COX4的水平, Transwell~(TM)检测细胞的侵袭能力,免疫荧光细胞化学染色检测肝癌细胞CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达, Western blot法检测癌细胞CXCR4蛋白水平, Mitosox染色检测线粒体活性氧(ROS)水平。利用还原剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)降低细胞内ROS水平, Western blot法检测肝癌细胞CXCR4蛋白水平的改变。利用AMD3100抑制CXCR4作用, Transwell~(TM)法检测敲低COX4后肝癌细胞的侵袭能力。结果与癌旁组织相比,肝癌组织中COX4表达水平显著降低, COX4低表达与肝癌TNM分期晚,分化程度差显著正相关, COX4表达水平越低的患者预后越差,复发率越高。敲低肝癌细胞COX4水平后,肝癌SNU-739细胞及SNU-368细胞的侵袭能力显著增强,同时细胞内线粒体ROS水平及细胞CXCR4水平均显著升高。还原剂NAC可显著降低COX4干涉所诱导的CXCR4表达上调。抑制剂AMD3100可显著抑制COX4干涉所介导的侵袭能力增强。结论敲低COX4水平上调线粒体ROS水平增强CXCR4表达促进肝癌细胞的侵袭。     

α_1(Ⅰ)、α_2和α_1(Ⅲ)三股胶原肽链顺序的比较分析

含有α_1(Ⅰ)和α_2链的Ⅰ型胶原以及由α_1(Ⅲ)链组成的Ⅲ型胶原,其氨基酸顺序已经明了,其中α_1(Ⅰ)与α_2链之比为2:1。作肽链内部分析,α链分为四个D单位,每个D单位具有234个氨基酸残基的长度。除D单位之外,还可观察到其它周期,有D/3(78个残基)、D/6(39个残基)、D/11(21个残基)和D/13(18个残基),这些周期在α_1(Ⅰ)和α_1(Ⅲ)中尤其突出。D单位为功能性重复单位,由能相互作用的极性残基与疏     

mitoKATP通道经FOXO1-PGC1α通路调节后负荷过载小鼠心肌线粒体的代谢功能

目的：通过ATP依赖的钾离子通道(KATP)亚基-Kir6.2基因敲除小鼠(Kir6.2KO)模型,研究线粒体ATP敏感钾离子通道mitoKATP对心肌线粒体和代谢酶的调控机制。方法:分别将野生型小鼠（WT平行对照组）和Kir6.2KO小鼠（实验组）分为假手术、主动脉横断缩窄（TAC）2周和4周各3个亚组。检测并比较各组心功能、心肌能量代谢酶基因表达水平、信号转导通路中叉头框O1（FOXO1）和转录因子PGC1α水平、线粒体比面积和嵴间距。结果:与平行WT组相比较,TAC前Kir6.2KO小鼠心肌PGC1α表达水平有所降低、FOXO1略提高,能量代谢酶中链乙酰辅酶A脱氢酶（MCAD）、肉碱软脂酰基转移酶1（CPT1）和细胞色素C氧化酶亚单位III（COXIII）明显负表达,线粒体比面积和线粒体嵴间距有所增加（8.45%和3.11%）,表现为有氧代谢能力降低,线粒体代偿增生。TAC后2周时,Kir6.2KO组的心肌线粒体比面积没有变化（8.75%vs0.14%）,而嵴间距增加幅度低于WT组（18.27%vs11.65%）,线粒体失代偿。TAC后4周时,Kir6.2KO组FOXO1和PGC1α的蛋白或mRNA水平均显著降低,下游能量代谢酶mRNA和蛋白显著负调表达,心肌线粒体比面积降低幅度更大（-8.45%vs-23.6%）,嵴间距变化与WT组相同（6.60%vs7.17%）,心功能障碍更为明显,有氧代谢功能衰竭。结论:阻断mitoKATP降低了心肌线粒体对负荷增加时的增生和正调能量代谢酶的反应能力,这与FOXO1-PGC1α信号通路的弱化有关。说明mitoKATP通过FOXO1-PGC1α信号通路调节负荷过载小鼠心肌线粒体增殖和能量代谢功能。     

用单克隆抗体作探针研究大肠杆菌RNA多聚酶α亚基的排布(文摘)

本文用3株抗大肠杆菌RNA多聚酶α亚基的单克隆抗体(McAb 124D1,126 C6,129C4)研究了大肠杆菌RNA多聚酶α亚基性质。采用~(125)I标记McAb双抗体夹心检测与RNA聚合酶的结合能力。研究发现:3株单克隆抗体都不能抑制d(A-T)n引导的r(A-U)n合成;McAb 129 C4和McAb 126 C6株可以抑制RNA多聚核心酶体外重新构建,McAb 124 D1株则无作用;     

临产孕妇血浆,羊水PGE2,6—Keto—F1α,雌二醇,孕酮水平探讨

本文通过对临产前后孕妇血浆及羊水中PGE2、6-Keto-F1α、雌二醇、孕酮的RIA,分析其在妊娠、分娩发动和进展中的作用。 对象和方法 一、对象: (一)实验组:足月临产无妊娠并发症之产妇50例,年龄20～33岁,宫口开全破膜后取羊水2ml,同时抽职静脉血2ml(抗凝),待测。 (二)对照组:足月尚未临产选择性剖腹产产