SNC73基因在结肠癌细胞中的表达及重组的研究

目的 观察上皮来源的肿瘤细胞SNC73（IgHα1）基因的表达,探讨其在上皮细胞中的重组机理。方法 采用逆转录聚合酶链分反（RT-PCR）和Western印迹杂交方法,分析经无血清培养基培养的大肠癌细胞系SW480中SNC73和重组激活基因（RAG1和RAG2）的表达,并对RT-PCR产物进行序列分析;利用免疫组织化学方法检测IgHα1、Igλ和Igκ在SW480中的表达。结果 SNC73、序列进行分析,发现SW480中表达的SNC73基因的恒定区序列与免疫球蛋白A1完全一致。对RAG1和RAG2RT-PCR产物的序列进行分析仪以及Western印迹杂交检测,表明其与前B淋巴细胞表达的完全相同。结论 上皮来源的肿瘤细胞表达免疫球蛋白A1,且轻链为κ：RAG1和RAG2在上皮来源的肿瘤细胞中的表达,提示上皮细胞中的免疫球蛋白A1的重组方式可能与淋巴细胞相同或相似。     

两个大肠癌负相关新基因的研究

目的：在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素，研究两个大肠癌负相关基因的结构与功能。结果：已完成两个新基因的全长cDNA序列分析及染色体定位等结构研究，并进行了两基因的核酸与蛋白表达研究及功能研究，SNC6基因全长3168pb，定位于染色体22q13区带，共有12个外显子及11个内含子。SNC19全长3152bp，定位于染色体11q24区带，两个基因于1998年被国际命名委员会分别命名为ST13、ST14基因，并被列入人类基因组图谱中。对比二个新基因在正常大肠粘膜及癌组织核酸水平表达情况，癌组织低于正常粘膜，在不同肿瘤细胞及组织中表达不一。两基因均已获得了表达蛋白。ST13已制备了单抗，经免疫组化检测表达与核酸表达结果相似，经体内外研究ST13基因有抑制大肠癌细胞系生长的作用。ST14已明确为丝氨酸蛋白酸家族成员，结论：SNC6与SNC19基因作为新的大肠癌相关基因加以研究，利用。目前仍需继续深入研究该两基因的功能。     

两个大肠癌负相关新基因的研究

目的在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素,研究两个大肠癌负相关基因的结构与功能。结果已完成两个新基因的全长cDNA序列分析及染色体定位等结构研究,并进行了两基因的核酸与蛋白表达研究及功能研究。SNC6基因全长3168pb,定位于染色体22q13区带,共有12个外显子及11个内含子。SNC19全长3152bp,定位于染色体11q24区带。两个基因于1998年被国际命名委员会分别命名为ST13、ST14基因,并被列入人类基因组图谱中。对比二个新基因在正常大肠粘膜及癌组织核酸水平表达情况,癌组织低于正常粘膜,在不同肿瘤细胞系及组织中表达不一。两基因均已获得了表达蛋白。ST13已制备了单抗,经免疫组化检测表达与核酸表达结果相似,经体内外研究ST13基因有抑制大肠癌细胞系生长的作用。ST14已明确为丝氨酸蛋白酶家族成员。结论 SNC6与SNC19基因可作为新的大肠癌相关基因加以研究,利用。目前仍需继续深入研究该两基因的功能。     

用原位RT—PCR技术检测大肠癌组织中相关新基因SNC66的表达

目的：探讨在肿瘤组织石蜡切片标本中原位检测内源性基因表达产物的灵敏方法，研究大肠癌相关新基因SNC66在大肠癌组织中的表达情况以及与大肠癌的相关性。方法：经原位逆转录后进行原位PCR扩增，在扩增过程中掺入地高辛标记的核苷酸（Dig-UTP)并加以检测。比较SNC66在大肠粘膜和大肠癌组织中的表达情况。结果：25个循环时，37例大肠癌组织标本有10例阴性不表达，27例强阳性表达。10个循环时，则14例呈阴性，18例弱阳性，5例强阳性。配对的37例大肠粘膜标本则都呈强阳性表达。结论：原位RT－PCR是一种检测内源性基因低拷贝转录产物mRNA的较灵敏的方法。SNC66基因在大肠癌组织中存在明显的表达降低或缺陷，可作为侯选的抑癌基因加以进一步研究。     

细胞周期相关蛋白DCT1染色体及细胞定位与其组织表达的研究

 目的对候选抑癌基因DOC-1R((Deleted in oral cancer-1 related,CDK2AP2)相关基因DCT1(DOC-1Rterminal1)进行染色体定位分析并观察其细胞内定位,检测该基因在人类组织中的表达。方法通过辐射杂交细胞系对其进行染色体定位分析,同时构建EGFP-DCT1质粒并转染HeLa细胞,荧光显微镜观察DCT1蛋白在细胞内的定位。此外,应用荧光定量PCR的方法检测该基因在16个正常人类组织中的表达。结果DCT1基因定位于5q31,其编码产物在HeLa细胞中定位于核膜,该基因在正常人类的16个组织中均有表达,其中在脾中表达水平较高。结论DCT1可能为细胞周期调控相关基因,在人类组织中普遍表达。     

原位杂交检测人肿瘤组织中大肠癌相关新基因SNC66的表达△

目的探讨大肠癌相关新基因SNC66在大肠癌、胃癌、肝癌、肺癌和乳腺癌中的表达以及该基因与肿瘤发生的相互关系.方法采用cRNA/mRNA原位杂交的方法,用体外转录制备的地高辛标记的cRNA探针对上述5种肿瘤组织及同一患者的相应正常组织作表达情况的配对研究.结果 SNC66基因只在上皮细胞及淋巴细胞表达,且在胃肠道上皮细胞中呈现从隐窝到绒毛顶端的梯度降低表达,淋巴小结内淋巴细胞的表达高于间质离散的淋巴细胞.SNC66基因在不同的肿瘤组织中表达差异很大,其中在大肠癌和胃癌组织中存在明显的表达缺陷.结论 SNC66基因不仅结构上同源于IgAl基因,而且表达行为亦类似于IgAl基因.它在不同肿瘤组织以及肿瘤组织与正常组织之间的表达有差异,且在消化道肿瘤中低表达,可能为一新的肿瘤标记物.     

原位杂交检测人肿瘤组织中大肠癌相关新基因SNC66的表达

目的：探讨大肠癌相关新基因SNC66在大肠癌，胃癌，肝癌，肺癌和乳腺癌中的表达以及该基因与肿瘤发生的相互关系。方法：采用cRNA/mRNA原位杂交的方法，用体外转录制备的地高辛标记的cRNA探针对上述3种肿瘤组织及同一患者的相应正常组织作表面情况的配对研究。结果：SNC66基因只在上皮细胞及淋巴细胞表达，且在胃肠道上皮细胞中呈现从隐窝到绒毛顶端的梯度降低表达，淋巴小结内淋巴细胞的表达高于间质离散的淋巴细胞。SNC66基因在不同的肿瘤组织中表达差异很大，其中在大肠癌和胃癌组织中存在明显的表达缺陷。结论：SNC66基因不仅结构上同源于IgAl基因，而且表达行为亦类似于IgAl基因，它在不同肿瘤组织以及肿瘤组织与正常组织之间的表达有差异，且在消化道肿瘤中低表达，可能为一新的肿瘤标记物。     

同时进行原位杂交及染色体分带的基因定位新方法

作者报道一种同时进行染色体原位杂交及染色体分带的基因定位新方法。它具有简单、快速、准确以及结果稳定、易重复等优点。细胞经常规培养制成染色体玻片后，进行染色体原位杂交。杂交信号经抗体检测放大后，染色体依次用色霉素Ａ３以及甲处理进行荧光反带分带。玻片在荧光显微镜下观察，只要调换滤片即可分别观察杂交点及染色体Ｒ带。两者互不干扰，结果清晰、直观，杂交点及Ｒ带持久而稳定。此方法尤其适用于做基因定位，及检测有     

减式杂交筛检大肠癌负相关基因的研究

目的在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素。方法采用减式杂交技术筛选大肠癌下调基因。结果共获得４６个在正常肠粘膜中表达、而在大肠癌中低表达或不表达的克隆。其中２个（ＳＮＣ６和ＳＮＣ１９）已被ＮＣＢＩ作为新基因录入，编号分别为Ｕ１７７１４（ＳＮＣ６）和Ｕ２０４２８（ＳＮＣ１９）。其中ＳＮＣ６已完成全序列测定，为２９３２ｂｐ，推测其为编码２７１个氨基酸的蛋白，分子量为３００００。与蛋白数据库比较，最高同源性仅３０％，染色体定位于２２ｑ１３。ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ显示：ＳＮＣ６的表达在大肠癌中低于在相应的正常肠粘膜中，在乳癌中亦有此现象。ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ发现其在肝、肺、前列腺、睾丸、卵巢及Ｋ５６２细胞中的表达高于其它组织。结论ＳＮＣ６可作为新的大肠癌负相关基因加以研究、利用。     

同时进行原位杂交及染色体分带的基因定位新方法

作者报道一种同时进行染色休原位杂交及染色休分带的基因定位新方法。它具有简单、快速、准确以及结果稳定、易重复等优点。细胞经常规培养制成染色体玻片后，进行染色体原位杂交。杂交信号经抗体检测放大后，染色体依次用色霉素Ａ３以及甲绿处理进行荧光反带分带（Ｒ带）。玻片在荧光显微镜下观察，只要调换滤片即可分别观察杂交点及染色体Ｒ带。两者互不干扰，结果清晰、直观，杂交点及Ｒ带持久而稳定。此方法尤其适用于做基因定位，及检测有关病毒基因在受感染细胞染色体上的插入部位。     

A novel serine protease SNC19 associated with human colorectal cancer

Objective To study the structure and function of a novel serine protease gene associated w ith human colorectal cancer SNC19.Methods The cDNA sequence was determined by both manual and automatic sequencing techniq ues. The full length cDNA sequence was obtained by the 5’-Rapid Amplification of cDNA Ends technique and web-based analysis. Open reading frame analysis and protein function prediction were also performed. Northern blot was used to det ect the expression of SNC19 in various human normal tissues and tumor cell lines . Fluorescent in situ hybridization combined with fluorescent R-banding techni que was employed to map the SNC19 gene on human chromosome.Results Full length SNC19 cDNA, size 3152 bp, encodes a protein highly homologous to a m ouse serine protease epithin. In normal human tissues, high SNC19 expression le vels were observed in the kidney, pancreas, prostate, small intestine and colon; moderate SNC19 expression levels were observed in the placenta, lung, liver, sp leen thymus, testis and peripheral blood lymphocytes; and extremely low expressi on levels were observed in the heart, brain, skeletal muscle and ovary. In tumo r cell lines, colorectal cancer cells SW480, SW620, SW1116 and Colo205, breast c ancer cell Bcap37 and gastric cancer cells MKN28 and SGC7901 showed high levels of SNC19 expression; cervical cancer cell HeLa-S3, lung cancer PAA, oral epithe lial cancer cell KB and lymphoma cell Raji showed moderate levels of SNC19 expre ssion; and tongue squamous cancer cell Tca8113, leukemia cells HL-60, K562, MOL T-4, lung cancer cell A549 and melanoma cell G361 showed very low levels of SNC 19 expression. SNC19 was mapped to human chromosome 11q24-25. Conclusion SNC19 encodes a novel human serine protease with 855 amino acid residues. As a novel serine protease associated with human colorectal cancer, the expression of SNC19 in various tissues and cell lines may have very important impact on their phenotypes and biological behaviors.     

HSF1基因表达升高与大肠癌

目的:探讨散发性人结直肠癌发生发展中可能的信号转导通路.方法:应用8条信号通路基因芯片筛选结直肠癌组织与正常粘膜组织表达差异基因;提取35例结直肠癌患者配对的癌组织及正常粘膜组织(阴性切缘组织,距肿瘤10 cm以上)总RNA,以RT-PCR的方法对有差异的基因进行表达差异比较.结果:结直肠癌组织中hsf1、hsp27及inos的表达明显高于正常组织.经35例结直肠癌患者癌组织与正常大肠粘膜组织对比,癌组织中hsf1、hsp27、inos表达增高,其中hsf1为86%(30/35),inos为63%(22/35).结论:在结直肠癌组织中hsf1、hsp27及inos基因被激活,其中可能存在热刺激应激信号转导通路激活的通道.     

胃腺癌组织中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体-4的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-4(TRAIL-R4)在诱导胃癌细胞凋亡过程中的作用.方法:应用Western blot、RT-PCR、原位杂交和免疫组织化学技术,检测31例正常胃黏膜和胃腺癌组织中TRAIL-附蛋白和mRNA的表达.结果:Western blot结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4蛋白的阳性表达率80.65%,高于其在胃腺癌组织中的阳性表达率6.45%(P＜0.05);免疫组织化学结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4蛋白均有强染色,在胃腺癌组织中染色均为阴性(P＜0.05);RT-PCR结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4 mRNA表达高于胃腺癌组织中的表达(P＜0.05);原位杂交结果显示,正常胃黏膜组织中TRAIL-R4 mRNA染色均为阳性,而在胃腺癌组织中阳性表达率为3.23%(P＜0.05).结论:TRAIL-R4在胃癌组织中的表达缺失是TRAIL特异性诱导肿瘤细胞凋亡的原因之一.     

PKD2基因在正常人和2型常染色体显性遗传性多囊肾病患者肾组织中的表达

目的 :观察 PK D2基因在正常人和 2型常染色体显性遗传性多囊肾病 (ADPKD)患者肾组织中的不同表达 ,探讨多囊肾病的发病机制。 方法 :抽提正常人肾组织细胞总 RNA ,通过 RT- PCR法获得 PK D 2基因第 12～ 13外显子 c DNA片段 ,以此为探针 ,用地高辛标记 ,对正常人和 2型 ADPKD患者肾组织分别进行原位杂交 ,并结合图像分析系统观察 PK D2基因表达情况。 结果 :正常人肾组织中 PK D2基因在 Henle襻的厚升支、远曲小管和皮质集合管有较强的表达 (平均光密度为 1.2 3± 0 .0 4 ) ;而 2型ADPKD患者肾组织中 PKD2基因仅在部分囊壁中有少量表达 (平均光密度为 0 .5 6± 0 .0 3)。 结论 :正常人肾组织中 PK D2基因表达量明显高于 2型 ADPKD患者 ,提示 PK D2基因表达降低在 2型 ADPKD的发生和发展中起着一定的作用     

CCN2及APC蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨CCN2及APC蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP技术检测正常结直肠黏膜组织、癌旁组织、结直肠腺瘤、非转移性结直肠癌、转移性结直肠癌(metastatic colorectalcancer,mCRC)及远处转移癌组织各30例中CCN2蛋白及APC蛋白的表达情况;结合结直肠癌患者的临床病理参数进行分析。结果非转移性结直肠癌、mCRC及远处转移组织中CCN2蛋白的表达率分别为76.67%、73.33%和70.00%;而在癌旁组织、结直肠腺瘤和正常结直肠黏膜组织中的表达率分别为6.67%、23.33%和0.00%,差异有统计学意义(2=74.263,P=0.000);APC蛋白在非转移性结直肠癌、mCRC及远处转移组织中均表现为低表达(表达率分别为26.67%、23.33%和16.67%),在癌旁组织、结直肠腺瘤、正常结直肠黏膜组织中均表现为高表达,分别为86.67%、76.67%和90.00%,差异有统计学意义(2=70.00,P=0.000);CCN2表达与结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤最大径和肿瘤组织病理分型无明显关系(P>0.05),而与肿瘤的TNM分期及5年生存率相关(分别为2=4.689,P=0.03;2=4.13,P=0.042);APC蛋白表达与CCN2表达呈明显负相关(rs=-0.467,P=0.001)。结论 CCN2基因是一种癌基因,CCN2在结直肠癌中表达与结直肠癌临床病理指标有关系,CCN2可考虑作为诊断结直肠癌或判断结直肠癌预后的指标;CCN2在结直肠癌中表达与APC有关,且可能受Wnt信号通路的调节。     

IL-17和STAT3在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的检测IL-17和STAT3在结直肠癌组织中的表达,探讨其与结直肠癌临床病理特征和肿瘤血管生成的关系。方法应用免疫组织化学S-P法检测94例结直肠癌组织和31例正常肠黏膜组织中IL-17、STAT3蛋白的表达,并应用CD34标记微血管计算MVD。结果免疫组化结果显示IL-17主要表达在结直肠癌组织中的肿瘤细胞和肠黏膜固有层淋巴细胞胞浆内,阳性表达率明显高于正常肠黏膜(P<0.01);IL-17的表达与结直肠癌分化程度和Dukes分期有关(P<0.05)。STAT3在结直肠癌组织中的表达显著高于其在正常肠黏膜中的表达(P<0.01),且与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移和Dukes分期有关(P<0.05)。IL-17和STAT3在结直肠癌组织中的表达与MVD有关(P<0.05)。Spearman等级相关分析表明IL-17和STAT3在结直肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.251,P=0.015)。结论 IL-17和STAT3在结直肠癌组织中高表达,可能在结直肠癌的血管生成和肿瘤的发生、发展中起重要的作用。